WO2013144303A1 - Antibacterial active ingredients based on anthocyanidin-cyclodextrin complexes - Google Patents

Antibacterial active ingredients based on anthocyanidin-cyclodextrin complexes Download PDF

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WO2013144303A1
WO2013144303A1 PCT/EP2013/056722 EP2013056722W WO2013144303A1 WO 2013144303 A1 WO2013144303 A1 WO 2013144303A1 EP 2013056722 W EP2013056722 W EP 2013056722W WO 2013144303 A1 WO2013144303 A1 WO 2013144303A1
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complex
antibiotic
aqueous solution
staphylococcus aureus
group
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PCT/EP2013/056722
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Norbert Roewer
Jens Broscheit
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Sapiotec Gmbh
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    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/56—Compounds, absorbed onto or entrapped into a solid carrier, e.g. encapsulated perfumes, inclusion compounds, sustained release forms

Definitions

  • the invention relates to a composition or complex comprising at least one anthocyanidin or its salts for controlling antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria.
  • Anthocyanidins are zymochrome dyes that are found in the masters ⁇ th higher land plants.
  • Anthocyanidins are sugar-free (aglycones) and are closely related to the sugary anthocyanins (glycosides), both of which fall under the generic term anthocyanins.
  • Anthocyanidins are dyes and have antioxidant properties.
  • Antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria are often found where antibiotics are constantly being used. Antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus among the ge ⁇ most dangerous pathogens of hospital-acquired, so-called nosocomial infections, which are recorded both on the skin and mucous membranes, but also through contaminated Medical Resident ⁇ cal appliances or food.
  • the object of the present invention is to provide an effective means for the prophylaxis and treatment of bacterial infectious diseases.
  • the invention is based on the further object of providing an effective means for controlling antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus.
  • composition or a complex comprising at least one anthocyanidin or its salts according to claim 1, an aqueous solution or solid according to claim 8, a method according to claim 10 and the uses according to claims 16 and 17.
  • Advantageous embodiments of the invention are disclosed in the subclaims.
  • Antibiotics are drugs used to treat bacterial infectious diseases, and the group of antibiotics includes in particular the ⁇ -lactam antibiotics (including penicillin, cephalosporins, carbapenems and monobactams), quinolones, tetracyclines, aminoglycosides, erythromycin, sulfonamides and vancomycin.
  • Multi-resistant Staphylococcus aureus strains that are resistant to all currently available on the market .beta.-lactam antibiotics and usually resists ⁇ zen have over other classes of antibiotics, so to quinolones, tetracyclines, aminoglycosides, erythromycin and sulfonamides, are in use under the name "MRSA” (multi Therapy of MRSA patients is usually carried out with the reserve antibiotic vancomycin, in contrast to which resistance is already widespread (“VRSA” - vancomycin-resistant S_taphyloccocus aureus) and consequently an elevation ⁇ Licher need for alternative drugs for the treatment of bacterial infections exists.
  • MRSA multi Therapy of MRSA patients is usually carried out with the reserve antibiotic vancomycin, in contrast to which resistance is already widespread
  • VRSA vancomycin-resistant S_taphyloccocus aureus
  • the composition or complex according to any one of claims 1 to 7 or the aqueous solution or solid according to claim 8 is used for the treatment of an object or individual suspected of having bacteria selected from the group consisting of antibiotic-resistant Staphylococcus aureus to be contaminated and antibiotics ⁇ sensitive Staphylococcus aureus.
  • the purpose of this treatment is to at least partially Neutra ⁇ capitalization of the bacteria.
  • the neutralization encompassing any kind of neutralization including eg bacteriostatic
  • composition or complex comprising at least one anthocyanidin includes anthocyanidin, as such, without further components.
  • composition or complex according to the invention Nem of claims 1 to 7 or the aqueous solution or the solid according to claim 8 for use in the treatment or prophylaxis of humans or animals suspected of being infected with antibiotic-resistant or antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus.
  • the bacterial infection caused insbeson ⁇ particular diseases with symptoms such as skin infections, including boils and carbuncles, pyomyositis,
  • object includes live animals, equipment and / or facilities and / or equipment and / or equipment for medical applications, food processing, military, protective equipment, domestic objects
  • No live animals means, in particular, slaughtered animals slaughtered or parts thereof, such as the body of a bovine or a part thereof, the body of a pig or a part thereof, a poultry body or a part thereof and the body of a pig in the aquatic animal or part of it.
  • the "object” can in particular a food ⁇ and / or animal feed, such as a Fleischpro ⁇ domestic product, a processed meat product, a Molkereipro ⁇ domestic product, vegetables and fruits and their parts and their parts.
  • Neutralization in the sense of the present invention means the destruction or dissolution (lysis) or inactivation (eg the loss of the infection potential) or hindrance of the proliferation of a pathogen or the Verhinde ⁇ tion of pathogen-mediated biofilm formation, especially antibiotic-resistant or antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus.
  • Administration or application of the composition according to the invention or of the erfindunoniaen complex can be achieved such that a spraying, powdering, injection, by means of a coating of a gel, a bandage, patch or ähnli chem ⁇ takes place on the suspiciously infected area.
  • compositions according to the invention or of the complex according to the invention can take place.
  • Appropriate techniques for formulation and administration are known from the prior art, see for example "Remington's Pharmaceutical Sciences” (Mack Publishing Co, Easton Pa.).
  • a formulation in aqueous solution preferably in physiologically acceptable buffers (eg, Hanks solution, Ringer's solution, or physiologically buffered saline), is suitable.
  • physiologically acceptable buffers eg, Hanks solution, Ringer's solution, or physiologically buffered saline
  • parenteral administration also included is an aqueous or oily solution or solid formulation, including intravenous, subcutaneous, intramuscular and intraperitoneal administration.
  • Biofilm is a collection of microorganisms (eg, bacteria) embedded in an extracellular poly produced by the microorganisms saccharide or protein matrix on a surface.
  • microorganisms eg, bacteria
  • the organization of bacteria in a biofilm leads to a significantly increased resistance of the entire population to various influences.
  • Bacterial biofilms on teeth, gums, urinary tract, digestive tract, or medical devices such as catheters and prostheses often result in serious infections (Costerton et al., Annu Rev. Microbiol 1995; 49: 711-45).
  • Salt or “pharmaceutically acceptable salt” means any pharmaceutically acceptable salt of a compound of the present invention which can release the pharmaceutically active agent or its active metabolite after administration. Salts of the compositions and complexes of the present invention may be derived from inorganic or organic acids and bases.
  • the anthocyanidin can be used in “pure” or “purified”, which means that unwanted components have been removed.
  • Cyclodextrins which may be complexed with the anthocyanidin according to the invention are cyclic oligosaccharides of ⁇ -1, 4-glycosidically linked glucose molecules, ⁇ -cyclodextrin has seven glucose units.
  • a sulfoalkyl ether- ⁇ -cyclodextrin hydroxy groups of the glucose unit are etherified in a sulfoalkyl alcohol.
  • OF INVENTION ⁇ dung according usually only a part of hydroxyl groups of a 21 beta-cyclodextrin is etherified.
  • the Her ⁇ position of Sulfoalkyethercyclodextrinen is familiar to the expert and, for example, in US 5,134,127 or WO
  • Sulfoalkyl ethers are used in cyclodextrins in the prior art to increase the hydrophilicity or water solubility.
  • the invention has recognized that the sulfoalkyl ether groups contribute in particular to increasing the stability of the complex of anthocyanidins and correspondingly substituted .beta.-cyclodextrin and thus substantially improve the storage stability and formability of the particularly oxidation-sensitive anthocyanidins.
  • the complex according to the invention can be formulated as a storage-stable aqueous solution or solid, as will be shown in more detail below.
  • Complexation with a sulfobutyl ether- ⁇ -cyclodextrin (SEB- ⁇ -CD) is particularly preferred according to the invention.
  • a non-limiting example of this is that the negatively charged sulfobutyl moieties interact electrostatically with the positively charged anthocyanidins and, among the alkyl groups, the butyl group has the optimum length to sterically facilitate a corresponding interaction.
  • the degree of substitution of the cyclodextrin with sulfoalkyl ether groups is preferably 3-8, more preferably 4-8, further preferably 5 to 8, further preferably 6 to 7.
  • Suitable sulfobutyl ether- ⁇ -cyclodextrins having a mean degree of substitution of 6 to 7 are, for example, in the cited WO 2009/134347 A2 and commercially available under the trade name Captisol®.
  • Also useful are cyclodextrins corresponding to a sub ⁇ stitutionsgrad of 4-5, such as 4.2.
  • the anthocyanidins used according to the invention in pure, salted or complexed form are preferably selected from the group consisting of auridinidine, cyanidin, delphinidin, europinidine, luteolinidine, pelargonidin, malvidin, peonidin, petunidin and rosinidin.
  • the chemical structure corresponds to the formula I given above with the following substitution pattern
  • Delphinidin is particularly preferred in the context of the invention.
  • the invention further provides an aqueous solution of the composition or the complex according to the invention.
  • the complex of the invention and a corresponding aq ⁇ membered solution comprising the steps of:
  • an aqueous solution is preferred
  • Herge ⁇ represents containing 5 to 10 wt .-% of the cyclodextrin used. It is particularly preferred dung within the inventions, when the pH of the aqueous solution during or after, but preferably before the addition of the anthocyanidins, delphinidin preferably, to a pH value of 7 or Weni ⁇ ger, preferably 6 or less , more preferably 5 or less, more preferably 4 to 5, is set. It has been found that in this pH value ei ⁇ ne higher concentration of the complex can be adjusted in aqueous solution.
  • the concentration of the anthocyanidins calculated as chloride preferably at least 0.5 mg / ml, more preference ⁇ example at least 1.0 mg / ml, more preferably at least 1.5 mg / ml, more preferably is 2.0 mg / ml.
  • the ⁇ be Sonders preferred concentration range of at least 2.0 mg / ml can be set form in particular in an aqueous solution having a pH between 4 and 5 a preferred exemplary embodiment.
  • the mixing of the constituents of the aqueous solution can be effected by stirring, preferred time periods for the mixing are 2 to 20 h. It is preferred to work in the dark to avoid light-induced oxidation.
  • Another object of the invention is a solid containing a complex according to the invention, which is obtainable according ⁇ Invention by removing the solvent from an aqueous solution of the invention.
  • the removal can preferably be carried out by freeze-drying (lyophilization).
  • Both the aqueous solution according to the invention and the solid have a high storage stability.
  • the column used was a Waters X Bridge TM C18.35 ⁇ , 150 mm x 4.6 mm.
  • the mobile phases were as follows:
  • Channel A water 950 ml, methanol 50 ml, formic acid 10 ml
  • Channel B water 50 ml, methanol 950 ml, formic acid 10 ml
  • UV-Vis detector 530 ⁇ for the assay, 275 ⁇ for the detection of impurities Integrator: area
  • Dilution Solution 1 Mixture of 100 ml of methanol and 2.6 ml of 1 M HCl
  • Calibration solution A reference solution of delphinidin was prepared by weighing 10 mg delphinidin chloride into a 10 ml flask and dissolving in dilution solution 1. After dissolution, about 10-fold dilution was carried out with dilution solution 2 to give an approximate concentration of 0.1 mg / ml.
  • control calibration solution was prepared in the same manner.
  • the calibration solutions were continued so-analyzed by HPLC, as delphinidin is unstable in Lö ⁇ solution.
  • Neutral aqueous solutions containing 10% by weight of the particular cyclodextrin were prepared.
  • a concentration of only 2% by weight was selected due to the lack of solubility.
  • the suspensions were stirred for 20 h at 30 ° C in the dark.
  • the mixture was then filtered through a Membranfil ⁇ ter 0.22 ym pore size.
  • Example 3 Preparation of a solid according to the invention
  • a complex of the invention is formulated as a solid.
  • a complex of the invention is formulated as a solid.
  • a complex of the invention is formulated as a solid.
  • Example 3.1 It was worked in the same manner as Example 3.1, but ⁇ a significant amount of material was filtered off ⁇ filtration, suggesting that the solubilization was significantly less effective than when using SBE-ß-CD according to Example 3.1 ,
  • Example 3.1 is according to the invention, examples 3.2 and 3.3 are comparative examples.
  • the delphinidine content of the solids (calculated as dolphinidinium chloride and reported in wt%) was determined by the HPLC method described above. The results are shown in Table 3 below.
  • Example 3.1 1.69 1.52 1.55 1.40 0.93
  • Example 3.2 1.30 1.20 1.14 1.03 0.68
  • the column used was a Waters X Bridge TM C18, 35 ⁇ , 150 mm x 4.6 mm.
  • the mobile phases were as follows:
  • UV-Vis detector 530 ym for assay, 275 ym for contaminant detection
  • Dilution solution 1 Mixture of 100 ml of methanol and 2.6 ml of 1 M HCl diluting solution 2: Mixture of 100 ml 50
  • Calibration solution A reference solution of delphinidin was prepared by weighing 10 mg delphinidin chloride into a 10 ml flask and dissolving in dilution solution 1. After dissolution, it was diluted approximately 10-fold with dilution solution 2 to make an approximate concentration of 0.1 mg / ml.
  • the control calibration solution was prepared in the same manner. The calibration solutions were analyzed immediately by HPLC, as delphinidin chloride is unstable in solution.
  • Figure 1 shows the results of a static Biofilmbil ⁇ dung after 48 hours for various strains of the species Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae, and MRSA and MSSA strains in two independent experiments. Growth and analysis of the biofilm was performed in a static model using the Crystal Violet Assay according to the Basic Protocol 1 in Current Protocols in Microbiology IB.1.2 -IB.1.4 "MICROTITER PLATE BIOFILM ASSAY" [published online August 2011 in Wiley Online Library (wileyonlinelib - rary.com) DOI: 10.1002 / 9780471729259. mcO lbO ls22].
  • FIG. 9 P. aeruginosa ATCC9027
  • FIG. 10 K. pneumoniae ATCC 700603
  • FIG. 11 MRSA2318
  • FIG. 12
  • delphinidin has an inhibitory effect on the growth as well as the biofilm formation of S.aurus (both MSSA and MRSA). This effect decreases in a dose-dependent manner.

Abstract

The invention relates to a composition or a complex comprising at least one anthocyanidin or salts thereof, which is aimed at bacteria selected from the group comprising antibiotic-resistant Staphylococcus aureus and antibiotic-sensitive Staphylococcus aureus and at least partially neutralizes said bacteria, and methods for treating objects with said composition according to the invention or said complex.

Description

ANTIBAKTERIELLE WIRKSTOFFE AUF DER BASIS ANTHOCYANIDIN- CYCLODEXTRIN- KOMPLEXEN  ANTIBACTERIAL ACTIVITIES BASED ON ANTHOCYANIDINE CYCLODEXTRIN COMPLEXES
Die Erfindung betrifft eine Zusammensetzung oder Komplex umfassend mindestens ein Anthocyanidin oder dessen Salze zur Bekämpfung von Antibiotika-resistenten und Antibiotikasensitiven Bakterien. The invention relates to a composition or complex comprising at least one anthocyanidin or its salts for controlling antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria.
Anthocyanidine sind zymochrome Farbstoffe, die in den meis¬ ten höheren Landpflanzen vorkommen. Anthocyanidine sind zuckerfrei (Aglycone) und eng verwandt mit den zuckerhaltigen Anthocyanen (Glycoside) , die beide unter den Oberbegriff der Anthocyane fallen. Anthocyanidine sind Farbstoffe und besitzen antioxidative Eigenschaften. Anthocyanidins are zymochrome dyes that are found in the masters ¬ th higher land plants. Anthocyanidins are sugar-free (aglycones) and are closely related to the sugary anthocyanins (glycosides), both of which fall under the generic term anthocyanins. Anthocyanidins are dyes and have antioxidant properties.
Antibiotika-resistente und Antibiotika-sensitive Bakterien finden sich häufig dort, wo ständig Antibiotika eingesetzt werden. Antibiotika-resistente und Antibiotika-sensitive Bakterien der Art Staphylococcus aureus zählen zu den ge¬ fährlichsten Erregern von im Krankenhaus erworbenen, sogenannten nosokomialen Infektionen, die sowohl über die Haut und Schleimhäute, aber auch durch kontaminierte medizini¬ sche Geräte oder Lebensmittel aufgenommen werden. Antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria are often found where antibiotics are constantly being used. Antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus among the ge ¬ most dangerous pathogens of hospital-acquired, so-called nosocomial infections, which are recorded both on the skin and mucous membranes, but also through contaminated Medical Resident ¬ cal appliances or food.
Insbesondere aufgrund des vermehrten Verbrauchs von Breit¬ bandspektrum-Antibiotika in der Behandlung von bakteriellen Infektionskrankheiten, ist eine Zunahme von multiresistenten Bakterien zu verzeichnen, so dass bei der Behandlung von mit diesen Bakterien infizierten Patienten oder Tieren kein wirksames Antibiotikum mehr zur Verfügung steht. Anti- biotika-resistente Bakterien können bei Mensch und Tier schwere Allgemeininfektionen auslösen. Dies trifft insbesondere bei immunsupprimierten Patienten zu. Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein wirksames Mittel zur Prophylaxe und Behandlung von bakteriellen Infektionskrankheiten zur Verfügung zu stellen. In particular, due to the increased consumption of broad ¬ band-spectrum antibiotics in the treatment of bacterial infectious diseases, an increase of multi-resistant bacteria can be observed, so that no effective antibiotic longer stands in treating infected with these bacteria patients or animals. anti- biotics-resistant bacteria can cause severe general infections in humans and animals. This is especially true in immunosuppressed patients. The object of the present invention is to provide an effective means for the prophylaxis and treatment of bacterial infectious diseases.
Der Erfindung liegt die weitere Aufgabe zu Grunde, ein wirksames Mittel zur Bekämpfung von Antibiotika-resistenten und Antibiotika-sensitiven Bakterien der Art Staphylococcus aureus zur Verfügung zu stellen. The invention is based on the further object of providing an effective means for controlling antibiotic-resistant and antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus.
Gelöst werden diese Aufgaben durch eine Zusammensetzung oder einen Komplex umfassend mindestens ein Anthocyanidin oder dessen Salze gemäß Anspruch 1, eine wässrige Lösung oder Feststoff gemäß Anspruch 8, ein Verfahren gemäß Anspruch 10 und den Verwendungen gemäß den Ansprüchen 16 und 17. Vorteilhafte Ausführungsformen der Erfindung sind in den Unteransprüchen offenbart. These objects are achieved by a composition or a complex comprising at least one anthocyanidin or its salts according to claim 1, an aqueous solution or solid according to claim 8, a method according to claim 10 and the uses according to claims 16 and 17. Advantageous embodiments of the invention are disclosed in the subclaims.
Zunächst seien einige im Rahmen der Erfindung verwendete Begriffe erläutert. „Antibiotika" sind Arzneistoffe zur Behandlung bakterieller Infektionskrankheiten. Die Gruppe der Antibiotika umfasst insbesondere die ß-Lactam Antibiotika (einschließlich Penicillin, Cephalosporine, Carbapeneme und Monobactame) , Chi- nolone, Tetracycline, Aminoglykoside, Erythromycin, Sulfo- namide und Vancomycin. „Antibiotika-resistentes Bakterium" und „Antibiotika-sensitives Bakterium" bedeutet, dass das Bakterium gegen mindestens ein Antibiotikum resistent bzw. gegenüber mindestens einem Antibiotikum nur noch verminder- te Empfindlichkeit aufweist. Multiresistente Staphylococcus aureus Stämme, die gegen alle derzeit marktverfügbaren ß- Lactam Antibiotika resistent sind und meist auch Resisten¬ zen gegenüber anderen Antibiotikaklassen verfügen, so gegen Chinolone, Tetracycline, Aminoglykoside, Erythromycin und Sulfonamide, werden im Gebrauch unter der Bezeichnung „MRSA" (multi-resistenter S_taphyloccocus aureus bzw. Methi- cillin-resistenter S_taphyloccocus aureus) zusammengefasst . Eine Therapie von MRSA Patienten erfolgt üblicherweise mit dem Reserveantibiotikum Vancomycin, wobei auch dagegen schon Resistenzen verbreitet sind („VRSA" - Vancomycin- resistenter S_taphyloccocus aureus) und folglich ein erheb¬ licher Bedarf an alternativen Arzneistoffen zur Behandlung bakterieller Infektionskrankheiten besteht. First, some terms used in the invention are explained. "Antibiotics" are drugs used to treat bacterial infectious diseases, and the group of antibiotics includes in particular the β-lactam antibiotics (including penicillin, cephalosporins, carbapenems and monobactams), quinolones, tetracyclines, aminoglycosides, erythromycin, sulfonamides and vancomycin. "Antibiotics -resistant bacterium "and" antibiotic-sensitive bacterium "means that the bacterium is resistant to at least one antibiotic or only minimizes it to at least one antibiotic. te sensitivity. Multi-resistant Staphylococcus aureus strains that are resistant to all currently available on the market .beta.-lactam antibiotics and usually resists ¬ zen have over other classes of antibiotics, so to quinolones, tetracyclines, aminoglycosides, erythromycin and sulfonamides, are in use under the name "MRSA" (multi Therapy of MRSA patients is usually carried out with the reserve antibiotic vancomycin, in contrast to which resistance is already widespread ("VRSA" - vancomycin-resistant S_taphyloccocus aureus) and consequently an elevation ¬ Licher need for alternative drugs for the treatment of bacterial infections exists.
Erfindungsgemäß wird die Zusammensetzung oder der Komplex nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder die wässrige Lösung oder der Feststoff nach Anspruch 8 zur Behandlung eines Objekts oder Individuums eingesetzt, das verdächtigt wird mit Bakterien ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Antibio- tika-resistenten Staphylococcus aureus und Antibiotika¬ sensitiven Staphylococcus aureus kontaminiert zu sein. Der Zweck dieser Behandlung ist die zumindest teilweise Neutra¬ lisierung der Bakterien. Die Neutralisierung umfassend je- der Art Neutralisierung umfassend z.B. bakteriostatischeAccording to the invention, the composition or complex according to any one of claims 1 to 7 or the aqueous solution or solid according to claim 8 is used for the treatment of an object or individual suspected of having bacteria selected from the group consisting of antibiotic-resistant Staphylococcus aureus to be contaminated and antibiotics ¬ sensitive Staphylococcus aureus. The purpose of this treatment is to at least partially Neutra ¬ capitalization of the bacteria. The neutralization encompassing any kind of neutralization including eg bacteriostatic
Neutralisierung, bakterizidische Neutralisierung, gemischte bakteriostatische-bakterizidische Neutralisierung. Der Beg¬ riff „Zusammensetzung oder Komplex umfassend mindestens ein Anthocyanidin" schließt ein Anthocyanidin als solches ohne weiteren Komponenten ein. Neutralization, bactericidal neutralization, mixed bacteriostatic-bactericidal neutralization. The Beg ¬ riff "composition or complex comprising at least one anthocyanidin" includes anthocyanidin, as such, without further components.
Mit Blick auf die Anwendung im Gesundheitssektor dient die erfindungsgemäße Zusammensetzung oder der Komplex nach ei- nem der Ansprüche 1 bis 7 oder die wässrige Lösung oder der Feststoff nach Anspruch 8 zur Verwendung in der Behandlung oder Prophylaxe von Menschen oder Tieren, die verdächtig sind, mit Antibiotika-resistenten oder Antibiotika- sensitiven Bakterien der Art Staphylococcus aureus infiziert zu sein. Die bakterielle Infektion bedingt insbeson¬ dere Krankheiten mit Symptomen wie Hautinfektionen, einschließlich Furunkel und Karbunkel, Pyomyositis, With regard to the application in the health sector, the composition or complex according to the invention Nem of claims 1 to 7 or the aqueous solution or the solid according to claim 8 for use in the treatment or prophylaxis of humans or animals suspected of being infected with antibiotic-resistant or antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus. The bacterial infection caused insbeson ¬ particular diseases with symptoms such as skin infections, including boils and carbuncles, pyomyositis,
Lungenentzündung, Endokarditis, Toxisches Schock-Syndrom, Sepsis und Mastitis. Vor allem bei immunsupprimierten Pati¬ enten können durch Antibiotika-resistente oder Antibiotika¬ sensitive Bakterien der Art Staphylococcus aureus schwere Allgemeininfektionen ausgelöst werden. Mit Blick auf den Nahrungs-, Futtermittel und Desinfekti¬ onssektor umfasst der Begriff „Objekt" keine lebenden Tiere, Vorrichtungen und/oder Einrichtungen und/oder Ausrüstungen und/oder Geräte für medizinische Anwendungen, die Lebensmittelverarbeitung, das Militär, Schutzausrüstungen, häusliche Objekte, Gebäudeeinrichtungen und Bauwerke. „Kei¬ ne lebenden Tiere" sind insbesondere getötete geschlachtete Tiere oder Teile dieser Tiere, beispielsweise der Körper eines Rindes oder ein Teil davon, der Körper eines Schweins oder ein Teil davon, ein Geflügelkörper oder ein Teil davon und der Körper eines im Wasser lebenden Tieres oder ein Teil davon. Das „Objekt" kann insbesondere ein Nahrungs¬ und/oder Futtermittel sein, beispielsweise ein Fleischpro¬ dukt, ein verarbeitetes Fleischprodukt, ein Molkereipro¬ dukt, Gemüse und deren Teile und Obst und deren Teile. Pneumonia, endocarditis, toxic shock syndrome, sepsis and mastitis. Especially in immunocompromised Pati ¬ ducks severe systemic infections can be caused by antibiotic-resistant or antibiotics ¬ sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus. Overlooking the food, feed and Desinfekti ¬ onssektor the term "object" includes live animals, equipment and / or facilities and / or equipment and / or equipment for medical applications, food processing, military, protective equipment, domestic objects, " No live animals" means, in particular, slaughtered animals slaughtered or parts thereof, such as the body of a bovine or a part thereof, the body of a pig or a part thereof, a poultry body or a part thereof and the body of a pig in the aquatic animal or part of it. The "object" can in particular a food ¬ and / or animal feed, such as a Fleischpro ¬ domestic product, a processed meat product, a Molkereipro ¬ domestic product, vegetables and fruits and their parts and their parts.
„Neutralisation" bedeutet im Sinne der vorliegenden Erfindung die Zerstörung oder Auflösung (Lysis) oder Inaktivie- rung (z.B. der Verlust des Infektionspotentials) oder Ver- hinderung der Vermehrung eines Pathogens oder die Verhinde¬ rung der Pathogen-vermittelten Biofilm-Bildung, insbesondere Antibiotika-resistenter oder Antibiotika-sensitiver Bakterien der Art Staphylococcus aureus. Die Verabreichung oder Applikation der erfindungsgemäßen Zusammensetzung oder des erfindungemäßen Komplexes kann derart erfolgen, dass ein Aufsprühen, Pudern, eine Injektion, eine Beschichtung mittels eines Gels, eines Verbandes, Pflasters oder ähnli¬ chem auf den verdächtigerweise infizierten Bereich erfolgt. Bei der Behandlung von Menschen oder Tieren kann in Abhängigkeit von dem Krankheitsbild eine systemische oder lokale Verabreichung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung oder des erfindungsgemäßen Komplexes erfolgen. Entsprechende Techniken für die Formulierung und Verabreichung sind aus dem Stand der Technik bekannt, siehe beispielsweise „Re- mington' s Pharmaceutical Sciences" (Mack Publishing Co, Easton Pa.) . Zum Beispiel können die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen und Komplexe einem Subjekt intravenös mit¬ tels eines pharmazeutisch akzeptablen Trägers (z.B. physio- logische Salzlösung) verabreicht werden. Für die Injektion bietet sich eine Formulierung in wässriger Lösung, vorzugsweise in physiologisch akzeptablen Puffern an (z.B. Hanks- Lösung, Ringer-Lösung oder physiologisch gepufferte Salzlösung) . Für die parenterale Verabreichung, einschließlich der intravenösen, subkutanen, intramuskulären und intraperitonealen Verabreichung, kommt ebenfalls eine wässrige oder ölige Lösung oder eine Feststoffformulierung in Betracht . „Biofilm" ist eine Ansammlung von Mikroorganismen (z.B. Bakterien) , eingebettet in einer von den Mikroorganismen produzierten extrazellulären Polysaccharid- oder Protein- Matrix auf einer Oberfläche. Die Organisation von Bakterien in einem Biofilm führt zu einer deutlich erhöhten Widerstandsfähigkeit der gesamten Population gegenüber verschiedensten Einflüssen. Durch Bakterien verursachte Biofilme auf Zähnen, dem Zahnfleisch, den Harnwegen, dem Verdauungs- trakt oder medizinischen Geräten wie Katheter und Prothesen führen häufig zu schwerwiegenden Infektionen (Costerton et al., Annu Rev. Microbiol 1995; 49: 711-45). "Neutralization" in the sense of the present invention means the destruction or dissolution (lysis) or inactivation (eg the loss of the infection potential) or hindrance of the proliferation of a pathogen or the Verhinde ¬ tion of pathogen-mediated biofilm formation, especially antibiotic-resistant or antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus. Administration or application of the composition according to the invention or of the erfindungemäßen complex can be achieved such that a spraying, powdering, injection, by means of a coating of a gel, a bandage, patch or ähnli chem ¬ takes place on the suspiciously infected area. In the treatment of humans or animals, depending on the clinical picture, a systemic or local administration of the composition according to the invention or of the complex according to the invention can take place. Appropriate techniques for formulation and administration are known from the prior art, see for example "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Mack Publishing Co, Easton Pa.). For example, the inventive compositions and complexes to a subject intravenously with ¬ means of For injection, a formulation in aqueous solution, preferably in physiologically acceptable buffers (eg, Hanks solution, Ringer's solution, or physiologically buffered saline), is suitable.) For parenteral administration Also included is an aqueous or oily solution or solid formulation, including intravenous, subcutaneous, intramuscular and intraperitoneal administration. "Biofilm" is a collection of microorganisms (eg, bacteria) embedded in an extracellular poly produced by the microorganisms saccharide or protein matrix on a surface. The organization of bacteria in a biofilm leads to a significantly increased resistance of the entire population to various influences. Bacterial biofilms on teeth, gums, urinary tract, digestive tract, or medical devices such as catheters and prostheses often result in serious infections (Costerton et al., Annu Rev. Microbiol 1995; 49: 711-45).
„Salz" oder „pharmazeutisch akzeptables Salz" steht für jegliches unter pharmazeutischen Gesichtspunkten akzeptables Salz einer Verbindung vorliegender Erfindung, welches den pharmazeutisch wirksamen Wirkstoff oder dessen aktives Metabolit nach der Verabreichung freigeben kann. Salze der Zusammensetzungen und Komplexe der vorliegenden Erfindung können von anorganischen oder organischen Säuren und Basen abgeleitet sein. "Salt" or "pharmaceutically acceptable salt" means any pharmaceutically acceptable salt of a compound of the present invention which can release the pharmaceutically active agent or its active metabolite after administration. Salts of the compositions and complexes of the present invention may be derived from inorganic or organic acids and bases.
Das Anthocyanidin, kann in „Reinform" oder „gereinigt" verwendet werden, was bedeutet, dass ungewünschte Komponenten entfernt wurden. The anthocyanidin, can be used in "pure" or "purified", which means that unwanted components have been removed.
„Anthocyanidine" weisen die nachfolgend wiedergegebene Grundstruktur auf. "Anthocyanidins" have the following basic structure.
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Die Substituenten in dieser Formel sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Hydroxygruppe und Metho- xygruppe . Cyclodextrine, die mit dem Anthocyanidin erfindungsgemäß komplexiert sein können, sind zyklische Oligosaccharide aus α-1 , 4-glykosidisch verknüpften Glukosemolekülen, ß- Cyclodextrin besitzt sieben Glukoseeinheiten. Bei einem Sulfoalkyether-ß-Cyclodextrin sind Hydroxygruppen der Glukoseeinheit in einem Sulfoalkylalkohol verethert. Erfin¬ dungsgemäß ist in der Regel lediglich ein Teil der 21 Hydroxygruppen eines ß-Cyclodextrins verethert. Die Her¬ stellung von Sulfoalkyethercyclodextrinen ist dem Fachmann geläufig und beispielsweise in US 5,134,127 oder WO The substituents in this formula are selected from the group consisting of hydrogen, hydroxy group and methoxy group. Cyclodextrins which may be complexed with the anthocyanidin according to the invention are cyclic oligosaccharides of α-1, 4-glycosidically linked glucose molecules, β-cyclodextrin has seven glucose units. In a sulfoalkyl ether-β-cyclodextrin, hydroxy groups of the glucose unit are etherified in a sulfoalkyl alcohol. OF INVENTION ¬ dung according usually only a part of hydroxyl groups of a 21 beta-cyclodextrin is etherified. The Her ¬ position of Sulfoalkyethercyclodextrinen is familiar to the expert and, for example, in US 5,134,127 or WO
2009/134347 A2 beschrieben. 2009/134347 A2.
Sulfoalkyethergruppen werden bei Cyclodextrinen im Stand der Technik zur Erhöhung der Hydrophilie beziehungsweise Wasserlöslichkeit eingesetzt. Die Erfindung hat erkannt, dass die Sulfoalkylethergruppen in besonderem Maße zur Erhöhung der Stabilität des Komplexes aus Anthocyanidinen und dementsprechend substituierten ß-Cyclodextrin beitragen und so die Lagerstabilität und Formulierbarkeit der besonders oxidationsempfindlichen Anthocyanidine wesentlich verbessern. Der erfindungsgemäße Komplex kann als lagerstabile wässrige Lösung oder Feststoff formuliert werden, wie unten noch näher gezeigt werden wird. Erfindungsgemäß besonders bevorzugt ist die Komplexierung mit einem Sulfobutylether-ß-Cyclodextrin (SEB-ß-CD) . Ein den Schutzbereich nicht beschränkender Erklärungsversuch hierfür ist, dass die negativ geladenen Sulfobutyleinheiten mit den positiv geladenen Anthocyanidinen elektrostatisch wechselwirken und unter den Alkylgruppen die Butylgruppe die optimale Länge besitzt, um sterisch eine entsprechende Wechselwirkung zu ermöglichen. Bevorzugt beträgt der Substitutionsgrad des Cyclodextrins mit Sulfoalkylethergruppen 3-8, weiter vorzugsweise 4-8, weiter vorzugsweise 5 bis 8, weiter vorzugsweise 6 bis 7. Geeignete Sulfobutylether-ß-Cyclodextrine mit einem mittle ren Substitutionsgrad von 6 bis 7 sind beispielsweise in der genannten WO 2009/134347 A2 beschrieben und unter dem Handelsnamen Captisol® kommerziell erhältlich. Ebenfalls verwendbar sind entsprechende Cyclodextrine mit einem Sub¬ stitutionsgrad von 4-5, beispielsweise 4,2. Sulfoalkyl ethers are used in cyclodextrins in the prior art to increase the hydrophilicity or water solubility. The invention has recognized that the sulfoalkyl ether groups contribute in particular to increasing the stability of the complex of anthocyanidins and correspondingly substituted .beta.-cyclodextrin and thus substantially improve the storage stability and formability of the particularly oxidation-sensitive anthocyanidins. The complex according to the invention can be formulated as a storage-stable aqueous solution or solid, as will be shown in more detail below. Complexation with a sulfobutyl ether-β-cyclodextrin (SEB-β-CD) is particularly preferred according to the invention. A non-limiting example of this is that the negatively charged sulfobutyl moieties interact electrostatically with the positively charged anthocyanidins and, among the alkyl groups, the butyl group has the optimum length to sterically facilitate a corresponding interaction. The degree of substitution of the cyclodextrin with sulfoalkyl ether groups is preferably 3-8, more preferably 4-8, further preferably 5 to 8, further preferably 6 to 7. Suitable sulfobutyl ether-β-cyclodextrins having a mean degree of substitution of 6 to 7 are, for example, in the cited WO 2009/134347 A2 and commercially available under the trade name Captisol®. Also useful are cyclodextrins corresponding to a sub ¬ stitutionsgrad of 4-5, such as 4.2.
Die erfindungsgemäß in reiner, Salz- oder komplexierten Form verwendeten Anthocyanidine sind bevorzugt ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Aurantinidin, Cyanidin, Delphinidin, Europinidin, Luteolinidin, Pelargonidin, Mal- vidin, Peonidin, Petunidin und Rosinidin. Die chemische Struktur entspricht der oben wiedergegebenen Formel I mit dem folgenden Substitutionsmuster The anthocyanidins used according to the invention in pure, salted or complexed form are preferably selected from the group consisting of auridinidine, cyanidin, delphinidin, europinidine, luteolinidine, pelargonidin, malvidin, peonidin, petunidin and rosinidin. The chemical structure corresponds to the formula I given above with the following substitution pattern
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Besonders bevorzugt ist im Rahmen der Erfindung Delphinidin . Gegenstand der Erfindung ist ferner eine wässrige Lösung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung oder des erfindungsgemäßen Komplexes. Der erfindungsgemäße Komplex sowie eine entsprechende wäss¬ rige Lösung umfasst die folgenden Schritte:
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Delphinidin is particularly preferred in the context of the invention. The invention further provides an aqueous solution of the composition or the complex according to the invention. The complex of the invention and a corresponding aq ¬ membered solution comprising the steps of:
a) Herstellen einer wässrigen Lösung des Sufoalkylether-ß- Cyclodextrins, a) preparing an aqueous solution of the sufoalkyl ether-β-cyclodextrin,
b) Zugabe des Anthocyanidins und Vermischen zur Herstel- lung des Komplexes. b) Addition of the anthocyanidin and mixing to produce the complex.
In Schritt a) wird bevorzugt eine wässrige Lösung herge¬ stellt, die 5 bis 10 Gew.-% des verwendeten Cyclodextrins enthält. Besonders bevorzugt ist es im Rahmen der Erfin- dung, wenn der pH-Wert der wässrigen Lösung während oder nach, bevorzugt jedoch vor der Zugabe des Anthocyanidins, bevorzugt Delphinidins , auf einen pH-Wert von 7 oder weni¬ ger, vorzugsweise 6 oder weniger, weiter vorzugsweise 5 oder weniger, weiter vorzugsweise 4 bis 5, eingestellt wird. Es hat sich gezeigt, dass bei diesem pH-Wert sich ei¬ ne höhere Konzentration des Komplexes in wässriger Lösung einstellen lässt. In step a) an aqueous solution is preferred Herge ¬ represents containing 5 to 10 wt .-% of the cyclodextrin used. It is particularly preferred dung within the inventions, when the pH of the aqueous solution during or after, but preferably before the addition of the anthocyanidins, delphinidin preferably, to a pH value of 7 or Weni ¬ ger, preferably 6 or less , more preferably 5 or less, more preferably 4 to 5, is set. It has been found that in this pH value ei ¬ ne higher concentration of the complex can be adjusted in aqueous solution.
Die Konzentration des Anthocyanidins berechnet als Chlorid, beträgt vorzugsweise wenigstens 0,5 mg/ml, weiter vorzugs¬ weise wenigstens 1,0 mg/ml, weiter vorzugsweise wenigstens 1,5 mg/ml, weiter vorzugsweise 2,0 mg/ml beträgt. Der be¬ sonders bevorzugte Konzentrationsbereich von wenigstens 2,0 mg/ml lässt sich im Rahmen einer bevorzugten Ausführungs- form insbesondere einstellen in einer wässrigen Lösung mit einem pH-Wert zwischen 4 und 5. Im Rahmen der erfindungsgemäßen Herstellung kann das Vermischen der Bestandteile der wässrigen Lösung durch Rühren geschehen, bevorzugte Zeiträume für das Vermischen sind 2 bis 20 h. Bevorzugt wird im Dunkeln gearbeitet, um eine lichtinduzierte Oxidation zu vermeiden. The concentration of the anthocyanidins calculated as chloride, preferably at least 0.5 mg / ml, more preference ¬ example at least 1.0 mg / ml, more preferably at least 1.5 mg / ml, more preferably is 2.0 mg / ml. The ¬ be Sonders preferred concentration range of at least 2.0 mg / ml can be set form in particular in an aqueous solution having a pH between 4 and 5 a preferred exemplary embodiment. In the context of the preparation according to the invention, the mixing of the constituents of the aqueous solution can be effected by stirring, preferred time periods for the mixing are 2 to 20 h. It is preferred to work in the dark to avoid light-induced oxidation.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Feststoff enthaltend einen erfindungsgemäßen Komplex, der erfindungs¬ gemäß erhältlich ist durch Entfernen des Lösungsmittels aus einer erfindungsgemäßen wässrigen Lösung. Das Entfernen kann bevorzugt durch Gefriertrocknung (Lyophilisation) erfolgen. Sowohl die erfindungsgemäße wässrige Lösung als auch der Feststoff besitzen eine hohe Lagerstabilität. Die Erfindung soll nun im Folgenden weiter in den Beispielen unter Bezug auf die beigefügten Figuren beschrieben werden, ohne auf diese beschränkt zu sein. Another object of the invention is a solid containing a complex according to the invention, which is obtainable according ¬ Invention by removing the solvent from an aqueous solution of the invention. The removal can preferably be carried out by freeze-drying (lyophilization). Both the aqueous solution according to the invention and the solid have a high storage stability. The invention will now be described further below in the examples with reference to the attached figures, without being limited thereto.
I. Herstellung eines Komplexes aus dem Anthocyanidin I. Preparation of a complex of the anthocyanidin
Delphinidin und Cyclodextrinen  Delphinidin and cyclodextrins
1. Eingesetzte Materialien: 1. Materials used:
Die nachfolgenden Cyclodextrine werden verwendet The following cyclodextrins are used
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Delphinidinchlorid wurde von der Firma Extrasynthese erwor¬ ben . 2. Bestimmung des Delphinidingehalts Delphinidin was erwor by the company Extrasynthese ¬ ben. 2. Determination of delphinidin content
Zur Bestimmung des Gehalts von Delphinidinchlorid in den delphinidinhaltigen Zusammensetzungen wurde ein Reversephase HPLC-Verfahren verwendet. Dabei wurden folgende Rea¬ genzien eingesetzt: To determine the level of delphinidin chloride in the delphinidinhaltigen compositions a reverse phase HPLC procedure was used. The following Rea ¬ genzien were used:
Gereinigtes Wasser Purified water
Methanol für die Chromatographie Methanol for chromatography
Armeisensäure, p. a. Formic acid, p. a.
1 M Salzsäure als volumetrische Lösung.  1 M hydrochloric acid as a volumetric solution.
Als Säule wurde eine Waters X Bridge™ C18,35 μΐ, 150 mm x 4,6 mm verwendet. The column used was a Waters X Bridge ™ C18.35 μΐ, 150 mm x 4.6 mm.
Die mobilen Phasen waren wie folgt: The mobile phases were as follows:
Kanal A: Wasser 950 ml, Methanol 50 ml, Ameisensäure 10 ml Kanal B: Wasser 50 ml, Methanol 950 ml, Ameisensäure 10 ml  Channel A: water 950 ml, methanol 50 ml, formic acid 10 ml Channel B: water 50 ml, methanol 950 ml, formic acid 10 ml
Folgendes Gradientenprogramm wurde verwendet: The following gradient program was used:
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Stoppzeit: 35 min Stop time: 35 min
Nachlaufzeit (posttime) : 8 min  Follow-up time (post-time): 8 min
Flussrate: 1 ml/min Flow rate: 1 ml / min
Injektionsvolumen: 20 μΐ Injection volume: 20 μΐ
Säulentemperatur: 30°C +/- 2°C Column temperature: 30 ° C +/- 2 ° C
UV-Vis Detektor: 530 μιη für den Assay, 275 μιη zur Detektion von Verunreinigungen Integrator: Fläche UV-Vis detector: 530 μιη for the assay, 275 μιη for the detection of impurities Integrator: area
Lösungen und Probenvorbereitung: Verdünnungslösung 1: Mischung aus 100 ml Methanol und 2,6 ml 1 M HCL Solutions and Sample Preparation: Dilution Solution 1: Mixture of 100 ml of methanol and 2.6 ml of 1 M HCl
Verdünnungslösung 2: Mischung aus 100 ml 40 prozentiger Dilution solution 2: mixture of 100 ml 40 percent
Methanol und 2,6 ml 1 M HCL  Methanol and 2.6 ml 1 M HCL
Kalibrierungslösung: Eine Referenzlösung von Delphinidin wurde durch Einwiegen von 10 mg Delphinidinchlorid in einen 10 ml Kolben und Lösen in Verdünnungslösung 1 hergestellt. Nach dem Lösen wurde ungefähr lOfach verdünnt mit Verdün- nungslösung 2 zur Herstellung einer ungefähren Konzentration von 0,1 mg/ml. Calibration solution: A reference solution of delphinidin was prepared by weighing 10 mg delphinidin chloride into a 10 ml flask and dissolving in dilution solution 1. After dissolution, about 10-fold dilution was carried out with dilution solution 2 to give an approximate concentration of 0.1 mg / ml.
Die Kontrollkalibrierungslösung wurde auf die gleiche Art und Weise hergestellt. Die Kalibrierungslösungen wurden so- fort mittels HPLC analysiert, da Delphinidinchlorid in Lö¬ sung instabil ist. The control calibration solution was prepared in the same manner. The calibration solutions were continued so-analyzed by HPLC, as delphinidin is unstable in Lö ¬ solution.
Herstellung der Prüflösungen : Zur Bestimmung des Delphinidingehalts erfindungsgemäß her¬ gestellter Feststoffe (Herstellung siehe weiter unten) wurde etwa 50 mg dieser Zusammensetzung in einem 10 ml Kolben eingewogen. Anschließend wurde in Verdünnungslösung 2 gelöst und mit der gleichen Verdünnungslösung 2 weiter ver- dünnt bis zur Einstellung einer ungefähren Delphinidinkon- zentration von 0,1 mg/ml. Die Bestimmung des Delphinidingehalts in den Proben wurde berechnet unter Zuhilfenahme der Agilent ChemStation Soft¬ ware unter Verwendung der Kalibrierung mit dem beschriebenen externen Standard. Preparation of the test solutions: For the determination of Delphinidingehalts invention forth ¬ asked solids (preparation see below) was approximately 50 mg of this composition was weighed in a 10 ml flask. It was then dissolved in dilution solution 2 and further diluted with the same dilution solution 2 until an approximate delphinidin concentration of 0.1 mg / ml was established. The determination of the Delphinidingehalts in the samples was calculated with the aid of the Agilent ChemStation software Soft ¬ using the calibration described with the external standard.
Beispiel 1: Komplexierung von Delphinidin mit SBE-ß-CD Example 1 Complexation of Delphinidin with SBE-β-CD
In diesem Beispiel wird die Komplexierung von Delphinidin durch verschiedene Cyclodextrine und die Löslichkeit des Komplexes in wässriger Lösung untersucht. In this example, the complexation of delphinidin by various cyclodextrins and the solubility of the complex in aqueous solution is investigated.
Es wurden neutrale wässrige Lösungen hergestellt, die 10 Gew.-% des jeweiligen Cyclodextrins enthalten. Bei ß-CD wurde auf Grund der mangelnden Löslichkeit eine Konzentra- tion von lediglich 2 Gew.-% gewählt. Neutral aqueous solutions containing 10% by weight of the particular cyclodextrin were prepared. In the case of β-CD, a concentration of only 2% by weight was selected due to the lack of solubility.
Je 5 ml der wässrigen Cyclodextrinlösungen und von reinem Wasser wurden in Glaskolben gefüllt. Anschließend wurde ein Überschuss Delphinidinchlorid zugegeben. Die erforderliche Überschussmenge war 10 mg für die Lösungen von a-, ß- und γ-Cyclodextrin und 15 mg für die Lösungen von HPBCD (2- Hydroxypropyl-ß-Cyclodextrin) und SBE-ß-CD. 5 ml each of the aqueous cyclodextrin solutions and of pure water were filled into glass flasks. Subsequently, an excess of delphinidin chloride was added. The required excess amount was 10 mg for the solutions of α-, β- and γ-cyclodextrin and 15 mg for the solutions of HPBCD (2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin) and SBE-β-CD.
Die Suspensionen wurden für 20 h bei 30° C im Dunkeln ge- rührt. Anschließend wurde filtriert durch einen Membranfil¬ ter mit 0,22 ym Porengröße. The suspensions were stirred for 20 h at 30 ° C in the dark. The mixture was then filtered through a Membranfil ¬ ter 0.22 ym pore size.
Die erzielbaren Löslichkeiten sind in der nachfolgenden Tabelle 1 wiedergegeben. The achievable solubilities are given in Table 1 below.
Cyclodextrin Cyclodextrin- Delphinidinchlorid Cyclodextrin cyclodextrin delphinidin chloride
Konzentration  concentration
- 0 0.07 mg/ml α-CD 10 % 0.14 mg/ml - 0 0.07 mg / ml α-CD 10% 0.14 mg / ml
ß-CD 2 % 0.05 mg/ml  β-CD 2% 0.05 mg / ml
γ-CD 10 % 0.21 mg/ml  γ-CD 10% 0.21 mg / ml
HPBCD 10 % 0.19 mg/ml  HPBCD 10% 0.19 mg / ml
SBE-ß-CD 10 % 0.66 mg/ml  SBE-β-CD 10% 0.66 mg / ml
Man erkennt, dass die Komplexierung und dadurch bewirkte Löslichkeitserhöhung für SBE-ß-CD weit besser ist als für die anderen Cyclodextrine . It can be seen that the complexation and thus caused solubility increase for SBE-ß-CD is far better than for the other cyclodextrins.
Beispiel 2: Einfluss des pH-Wertes Example 2: Influence of the pH
In diesem Beispiel wurde der Einfluss des pH-Wertes auf die Löslichkeit eines Delphinidin-SBE-ß-CD in wässriger Lösung untersucht. Nach der Vorschrift von Beispiel 1 wurden wäss- rige Lösungen von SEB-ß-CD hergestellt, diese Lösungen jedoch mit 1 M HCL auf die in Tabelle 2 genannten sauren pH- Werte eingestellt. Anschließend wurde Delphinidinchlorid nach der Vorschrift des Beispiels 1 zugegeben und weiterge- arbeitet, als einzige Abweichung wurde die Rührzeit auf 2,5 h begrenzt. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabel¬ le 2 wiedergegeben. In this example, the influence of pH on the solubility of a delphinidin-SBE-β-CD in aqueous solution was investigated. Following the instructions of Example 1, aqueous solutions of SEB-β-CD were prepared, but these solutions were adjusted to the acidic pH values indicated in Table 2 using 1 M HCl. Subsequently, delphinidin chloride was added according to the instructions of Example 1 and worked up, the only difference being that the stirring time was limited to 2.5 hours. The results are shown in the following Tabel ¬ le second
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Man erkennt, dass bei pH-Werten zwischen 4 und 5 die Lös lichkeit des komplexierten Delphinidinchlorids sich etwa den Faktor 3 gegenüber einem neutralen pH-Wert erhöht. It can be seen that at pH values between 4 and 5, the solubility of the complexed delphinidin chloride increases by about a factor of 3 compared to a neutral pH.
Beispiel 3 Herstellung eines erfindungsgemäßen Feststoffs In diesem Beispiel wird ein erfindungsgemäßer Komplex als Feststoff formuliert. Zu Vergleichszwecken werden ein Example 3 Preparation of a solid according to the invention In this example, a complex of the invention is formulated as a solid. For comparison purposes, a
Delphinidin/HPBCD Komplex sowie eine Delphini- din/Stärkeformulierung als Festsoff zubereitet. Delphinidin / HPBCD complex and a delphinidin / starch formulation prepared as Festoff.
Beispiel 3.1: Delphinidin/SBE-ß-CD Example 3.1: Delphinidin / SBE-β-CD
5 g SEB-ß-CD wurden in 40 ml destilliertem Wasser zu einer klaren Lösung gelöst. Der pH-Wert der Lösung wurde mittels 1 M HCL auf 4,8 eingestellt. Anschließend wurden 0,11 g Delphinidinchlorid hinzugefügt und 2 h bei 27°C im Dunkeln gerührt. Die homogene Flüssigkeit wurde durch einen Cellu- losenitratmembranfilter mit einer Porengröße von 0,45 ym vakuumfiltriert. Die Lösung wurde gefroren und anschließend gefriergetrocknet bei -48°C und einem Druck von etwa 10,3 Pa (77 mTorr) . Das Lyophilisat wurde gemahlen und durch ein Sieb von 0,3 mm Maschenweite gesiebt. Beispiel 3.2: Delphinidin/HPBCD 5 g of SEB-β-CD were dissolved in 40 ml of distilled water to a clear solution. The pH of the solution was adjusted to 4.8 by 1 M HCl. Subsequently, 0.11 g of delphinidin chloride was added and stirred for 2 h at 27 ° C in the dark. The homogeneous liquid was vacuum filtered through a cellulose nitrate membrane filter having a pore size of 0.45 μm. The solution was frozen and then freeze-dried at -48 ° C and a pressure of about 10.3 Pa (77 mTorr). The lyophilizate was ground and sieved through a sieve of 0.3 mm mesh size. Example 3.2: Delphinidin / HPBCD
Es wurde in gleicher Weise wie Beispiel 3.1 gearbeitet, je¬ doch wurde bei der Filtration eine signifikante Menge Mate¬ rial abfiltriert, was darauf hindeutet, dass die Solubili- sierung deutlich weniger effektiv war als bei Verwendung von SBE-ß-CD gemäß Beispiel 3.1. It was worked in the same manner as Example 3.1, but ¬ a significant amount of material was filtered off ¬ filtration, suggesting that the solubilization was significantly less effective than when using SBE-ß-CD according to Example 3.1 ,
Beispiel 3.3 Delphinidin/Stärkeformulierung 5 g Stärke wurde in 40 ml destilliertem Wasser suspendiert. Man erhielt eine weiße Suspension. Der pH der Lösung wurde mit 1 M HCL auf 4,6 eingestellt. Anschließend wurde 0,11 g Delphinidinchlorid zugegeben und für 2 h bei 27° C im Dun- kein gerührt. Die erhaltene homogene Flüssigkeit wurde wie in Beispiel 3.1 gefriergetrocknet, gemahlen und gesiebt. Example 3.3 Delphinidin / Starch Formulation 5 g of starch was suspended in 40 ml of distilled water. A white suspension was obtained. The pH of the solution was adjusted to 4.6 with 1 M HCl. Subsequently, 0.11 g of delphinidin chloride was added and incubated for 2 h at 27 ° C. in the dark. not stirred. The resulting homogeneous liquid was freeze-dried as in Example 3.1, ground and sieved.
Beispiel 3.1 ist erfindungsgemäß, bei den Beispielen 3.2 und 3.3 handelt es sich um Vergleichsbeispiele. Example 3.1 is according to the invention, examples 3.2 and 3.3 are comparative examples.
Beispiel 4: Stabilitätsversuche Example 4: Stability experiments
Die Feststoffe gemäß den Beispielen 3.1 bis 3.3 wurden un- ter folgenden Bedingungen gelagert: The solids according to Examples 3.1 to 3.3 were stored under the following conditions:
8 Tage bei Raumtemperatur in braunen, verschraubten Glasbehältern, 8 days at room temperature in brown, screwed glass containers,
- Anschließend 22 Tage bei Raumtemperatur in Glasbehäl- tern unter Sauerstoffatmosphäre im Dunkeln.  - Then at room temperature for 22 days in glass containers under an oxygen atmosphere in the dark.
Die letzen 22 Tage der oben beschriebenen Lagerung wurden in Glasviolen mit einem Volumen von 20 ml durchgeführt. Jeweils 250 mg der vorher bereits für 8 Tage gelagerten Pro- ben wurden dort eingefüllt, die Violen wurden mit einemThe last 22 days of the storage described above were carried out in glass vials with a volume of 20 ml. Each 250 mg of the previously stored for 8 days samples were filled there, the violas were with a
Gummistopfen verschlossen und abgedichtet. Mittels zwei Injektionsnadeln wurde der Kopfraum der Violen mit reinem Sauerstoff gespült. Die Proben wurden anschließend im Dun¬ keln gelagert. Rubber stopper closed and sealed. Using two hypodermic needles, the headroom of the violas was flushed with pure oxygen. The samples were then stored in Dun ¬ angles.
Der Delphinidingehalt der Feststoffe (berechnet als Delphi- nidinchlorid und angegeben in Gew.-%) wurde mittels der oben beschriebenen HPLC-Methode bestimmt. Die Ergebnisse finden sich in der nachfolgenden Tabelle 3. The delphinidine content of the solids (calculated as dolphinidinium chloride and reported in wt%) was determined by the HPLC method described above. The results are shown in Table 3 below.
Zeitablauf [Tage] Timing [days]
Start 2 8 19 30 Start 2 8 19 30
Beispiel 3.1 1.69 1.52 1.55 1.40 0.93 Beispiel 3.2 1.30 1.20 1.14 1.03 0.68Example 3.1 1.69 1.52 1.55 1.40 0.93 Example 3.2 1.30 1.20 1.14 1.03 0.68
Beispiel 3.3 1.60 1.59 1.56 1.53 1.15 Example 3.3 1.60 1.59 1.56 1.53 1.15
Die Ergebnisse zeigen, dass sich erfindungsgemäß ein Delpi- nidinkomplex herstellen lässt, der selbst unter reiner Sau¬ erstoffatmosphäre eine hohe Stabilität und damit gute La- gerfähigkeit besitzt. Der Komplex besitzt ferner eine gute Löslichkeit in wässrigen, insbesondere leicht sauren Lösun¬ gen, so dass sich Delphinidin erfindungsgemäß auf vielfäl¬ tige Art und Weise formulieren lässt. Die Stabilität des erfindungsgemäßen Feststoffes ist ähnlich gut wie eine For- mulierung mit Stärke (Beispiel 3.3), dieses Vergleichsbei¬ spiel lässt sich allerdings nicht in einer wässrigen Lösung formulieren . The results show that a Delpi- be produced nidinkomplex invention, which has gerfähigkeit high stability and good laser even under pure Sau ¬ erstoffatmosphäre. The complex also has a good solubility in aqueous, in particular slightly acidic Lösun ¬ gene so that delphinidin according to the invention can be formulated to vielfäl ¬ term manner. The stability of the solid according to the invention is as good as a formula- tion with starch (Example 3.3), but this comparative example ¬ play can not be formulated in an aqueous solution.
Beispiel 5: Stabilitätsversuche in wässriger Lösung Example 5 Stability Tests in Aqueous Solution
Zur Bestimmung des Gehalts von Delphinidinchlorid in den delphinidinhaltigen Lösungen wurde ein Reverse Phase HPLC- Verfahren ähnlich dem oben bereits beschriebenen verwendet. Dabei wurden folgende Reagenzien eingesetzt: To determine the level of delphinidin chloride in the delphinidinhaltigen solutions a reverse phase HPLC method similar to the one already described above was used. The following reagents were used:
Gereinigtes Wasser Purified water
Methanol für die Chromatographie  Methanol for chromatography
Armeisensäure, p. a.  Formic acid, p. a.
1 M Salzsäure als volumetrische Lösung.  1 M hydrochloric acid as a volumetric solution.
Als Säule wurde eine Waters X Bridge™ C18, 35 μΐ, 150 mm x 4,6 mm verwendet. The column used was a Waters X Bridge ™ C18, 35 μΐ, 150 mm x 4.6 mm.
Die mobilen Phasen waren wie folgt: The mobile phases were as follows:
Kanal A: Wasser 770 ml, Methanol 230 ml, Armeisensäure 10 ml Kanal B: Wasser 50 ml, Methanol 950 ml, Armeisensäure 10 ml Folgendes Gradientenprogramm wurde verwendet: Channel A: water 770 ml, methanol 230 ml, formic acid 10 ml Channel B: water 50 ml, methanol 950 ml, formic acid 10 ml The following gradient program was used:
Figure imgf000020_0001
Stoppzeit: 25 min
Figure imgf000020_0001
Stop time: 25 min
Nachlaufzeit (posttime) : 8 min  Follow-up time (post-time): 8 min
Flussrate: 1 ml/min Flow rate: 1 ml / min
Injektionsvolumen: 20 μΐ Injection volume: 20 μΐ
Säulentemperatur: 30°C +/- 2°C Column temperature: 30 ° C +/- 2 ° C
UV-Vis Detektor: 530 ym für den Assay, 275 ym zur Detektion von Verunreinigungen  UV-Vis detector: 530 ym for assay, 275 ym for contaminant detection
Integrator: Fläche Lösungen und Probenvorbereitung: Integrator: Area Solutions and Sample Preparation:
Verdünnungslösung 1: Mischung aus 100 ml Methanol und 2,6 ml 1 M HCL Verdünnungslösung 2: Mischung aus 100 ml 50 Dilution solution 1: Mixture of 100 ml of methanol and 2.6 ml of 1 M HCl diluting solution 2: Mixture of 100 ml 50
Methanol und 2,6 ml 1 M HCL  Methanol and 2.6 ml 1 M HCL
Kalibrierungslösung: Eine Referenzlösung von Delphinidin wurde durch Einwiegen von 10 mg Delphinidinchlorid in einen 10 ml Kolben und Lösen in Verdünnungslösung 1 hergestellt. Nach dem Lösen wurde ungefähr lOfach verdünnt mit Verdünnungslösung 2 zur Herstellung einer ungefähren Konzentration von 0,1 mg/ml. Die Kontrollkalibrierungslösung wurde auf die gleiche Art und Weise hergestellt. Die Kalibrierungslösungen wurden sofort mittels HPLC analysiert, da Delphinidinchlorid in Lö- sung instabil ist. Calibration solution: A reference solution of delphinidin was prepared by weighing 10 mg delphinidin chloride into a 10 ml flask and dissolving in dilution solution 1. After dissolution, it was diluted approximately 10-fold with dilution solution 2 to make an approximate concentration of 0.1 mg / ml. The control calibration solution was prepared in the same manner. The calibration solutions were analyzed immediately by HPLC, as delphinidin chloride is unstable in solution.
Herstellung der Prüflösungen : Preparation of the test solutions:
Zur Bestimmung des Delphinidingehalts einer erfindungsgemä- ßen wässrigen Lösung wurden Delphinidin/SBE-ß-CD des Beispiels 3.1 (erfindungsgemäß) und Delphinidin (Vergleichs¬ beispiel in 0,9 %iger NaCl-Lösung gelöst bis zur Einstel¬ lung einer Startkonzentration (bezogen auf das Delphinidin) von 1,584 mg/ml (erfindungsgemäßes Beispiel) bzw. 0,0216 mg/ml (Vergleichsbeispiel) . Die Lösungen wurden bei Raum¬ temperatur hergestellt und anschließend bei 37°C im Dunkeln in verschlossenen Violen gelagert. To determine the Delphinidingehalts a erfindungsgemä- SEN aqueous solution (Comparative example delphinidin ¬ / SBE-ß-CD of Example 3.1 (Invention) and delphinidin was dissolved in 0.9% NaCl solution to the SET lung ¬ a starting concentration (based on the delphinidin) of 1.584 mg / ml (inventive example) and 0.0216 mg / ml (Comparative example). the solutions were prepared at room temperature ¬ and then stored at 37 ° C in the dark in sealed vials.
Nach 1, 2, 3 und 4 h wurde der Delphinidingehalt bestimmt. Die nachfolgende Tabelle gibt den ermittelten Gehalt als Prozentanteil der oben genannten Startkonzentration an. After 1, 2, 3 and 4 h, the Delphinidingehalt was determined. The following table indicates the determined content as a percentage of the above-mentioned starting concentration.
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000021_0001
Die Bestimmung des Delphinidingehalts in den Proben wurde berechnet unter Zuhilfenahme der Agilent ChemStation Soft- wäre unter Verwendung der Kalibrierung mit den beschriebenen externen Standard. The determination of delphinidin content in the samples was calculated using the Agilent ChemStation software. would be using the calibration with the described external standard.
II. Wirkung des Anthocyanidin Delphinidin auf Bakterien II. Effect of anthocyanidin delphinidin on bacteria
1. Teststämme und Versuchsaufbau 1. Test strains and experimental setup
Es wurden die folgenden Stämme ausgewählt: The following strains were selected:
- Pseudomonas aeruginosa ATCC9027, Biofilm-positives klini- sches Isolat aus einer Außenohr-Infektion (Referenzstamm) ;  - Pseudomonas aeruginosa ATCC9027, biofilm positive clinical isolate from an external ear infection (reference strain);
- Klebsiella pneumoniae ATCC700603 Biofilm-positives klini¬ sches Isolat aus Urin von einem ESBL+ (Extended Spectrum Beta-Lactamase) -Krankenhauspatienten (Referenzstamm) ; - Staphylococcus aureus MRSA2318 Biofilm-positives klini¬ sches Isolat aus Trachealsekret vom 22.04.2009 (Uniklinik Würzburg, Neurochirurgische Klinik und Poliklinik I, Intensivstation) ; - Klebsiella pneumoniae ATCC700603 biofilm positive Klini ¬ ULTRASONIC isolate from the urine of a ESBL + (extended spectrum beta-lactamase) -Krankenhauspatienten (reference strain); - Staphylococcus aureus biofilm MRSA2318 positive Klini ¬ ULTRASONIC isolate from tracheal from 22.04.2009 (University Hospital Wurzburg, Neurosurgery Department of Surgery I, ICU);
- Staphylococcus aureus MRSA2855 Biofilm-positives klini- sches Isolat aus Blutkultur vom 22.04.2009 (Uniklinik - Staphylococcus aureus MRSA2855 Biofilm-positive clinical isolate from blood culture from 22.04.2009 (University Hospital
Würzburg, Medizinische Klinik und Poliklinik I, ITS) ;Würzburg, Department of Internal Medicine I, ITS);
- Staphylococcus aureus MSSA1155 Biofilm-positives klini¬ sches Isolat vom 27.04.2004 aus Bauchraumabstrich (Uniklinik Würzburg, Urologie, Station B) . - Staphylococcus aureus biofilm MSSA1155 positive Klini ¬ ULTRASONIC isolate from 27.04.2004 of the abdominal cavity swab (Würzburg University Hospital, Urology, Station B).
Die vorgenannten Stämme wurden aufgrund ihrer ausgeprägten Biofilmbildung als besonders geeignet für die Untersuchung der Wirkung der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen auf Bakterien ausgewählt, wie sich aus Figur 1 ergibt. Due to their pronounced biofilm formation, the abovementioned strains were selected to be particularly suitable for investigating the effect of the compositions according to the invention on bacteria, as is evident from FIG.
Figur 1 zeigt die Ergebnisse einer statischen Biofilmbil¬ dung nach 48 Stunden für verschiedene Stämme der Arten Pseudomonas aeruginosa und Klebsiella pneumoniae sowie MRSA- und MSSA-Stämme in zwei unabhängigen Experimenten. Das Wachstum und die Analyse des Biofilms wurde in einem statischen Modell mittels des Kristallviolett-Tests gemäß dem Basisprotokoll 1 in Current Protocols in Microbiology IB.1.2 -IB.1.4 „MICROTITER PLATE BIOFILM ASSAY" [publiziert online August 2011 in Wiley Online Library (wileyonlinelib- rary.com) DOI : 10.1002 / 9780471729259. mcO lbO ls22 ] bestimmt. Figure 1 shows the results of a static Biofilmbil ¬ dung after 48 hours for various strains of the species Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae, and MRSA and MSSA strains in two independent experiments. Growth and analysis of the biofilm was performed in a static model using the Crystal Violet Assay according to the Basic Protocol 1 in Current Protocols in Microbiology IB.1.2 -IB.1.4 "MICROTITER PLATE BIOFILM ASSAY" [published online August 2011 in Wiley Online Library (wileyonlinelib - rary.com) DOI: 10.1002 / 9780471729259. mcO lbO ls22].
2. Wirkstoffanalyse 2. Drug analysis
Die Untersuchung des Einflusses von Delphinidin auf das bakterielle Wachstum und die bakterielle Biofilmbildung er¬ folgte mittels The investigation of the influence of delphinidin on bacterial growth and bacterial biofilm formation he ¬ followed by
a) der visuellen Bewertung des bakteriellen Wachstums (sta- tisches Modell) , a) the visual assessment of bacterial growth (static model),
b) Vitalitätstest (Ausstrich auf Blutagarplatten) b) Vitality test (smear on blood agar plates)
c) Analyse des Biofilms in einem statischen Modell mittels des Kristallviolett-Tests wie oben unter Ziffer 1 be¬ schrieben . c ¬ written) analysis of the biofilm in a static model by means of the crystal violet assay as described above under point 1 be.
Zuerst wurden lxlO6 Bakterien/Well in 100 μΐ RPMI-1640 Zellmedium mit Phenolrot als Indikator für den pH-Wert (und damit als indirekter Indikator für das bakterielle Wachs¬ tum) in einer 96-Well-Polysterol-Zellkulturschale vorge- legt. Als Kontrolle diente steriles RPMI-1640. Anschließend wurde in RPMI-1640 gelöstes Delphinidin aus einer zuvor erstellten Verdünnungsreihe hinzugefügt und die Zellkultur¬ schale für 48 Stunden bei 37°C inkubiert, dessen visuelles Ergebnis in Figur 2 dargestellt ist. Der Farbumschlag von (Phenol-) Rot zu Gelb korreliert mit der Stärke des bakteri¬ ellen Wachstums. Ausstriche der Bakterien aus der Kulturschale sind in den Figuren 3 (P. aeruginosa ATCC9027), 4 (K. pneumoniae First, 1 × 10 6 bacteria / well in 100 μl RPMI-1640 cell medium with phenol red as an indicator of the pH (and thus as an indirect indicator of bacterial growth ) were presented in a 96-well polystyrene cell culture dish. The control was sterile RPMI-1640. Subsequently, delphinidin dissolved in RPMI-1640 was added from a previously prepared dilution series and the cell culture dish was incubated for 48 hours at 37 ° C., the visual result of which is shown in FIG. The color change of (phenol) red to yellow correlated with the strength of the bakteri ¬ economic growth. Coatings of the bacteria from the culture dish are shown in FIGS. 3 (P. aeruginosa ATCC9027), 4 (K. pneumoniae
ATCC700603), 5 (MRSA2318), 6 (MRSA2855) und 7 (MSSA1155) dargestellt. „ST_26.1.11" und „ST_28.1.11" bei den Aus- strichen auf den Agarplatten verweist auf das jeweilige Ausstrichdatum der duplizierten Versuche. ATCC700603), 5 (MRSA2318), 6 (MRSA2855) and 7 (MSSA1155). "ST_26.1.11" and "ST_28.1.11" for the slices on the agar plates refers to the respective smear date of the duplicated experiments.
Mit gleichem Versuchsaufbau erfolgte die Analyse des Bio¬ films mittels des Kristallviolett-Tests wie oben unter Zif- fer 1 beschrieben, dessen Ergebnis nach 48 Stunden Inkubation und Kristallviolett-Test in Figur 8 insgesamt, und in den Figuren 9-13 jeweils nach Messung der optischen Dichte graphisch aufbereitet für die jeweiligen Delphinidin- Konzentrationen bei den einzelnen Bakterienstämmen darge- stellt sind (Figur 9: P. aeruginosa ATCC9027, Figur 10: K. pneumoniae ATCC700603, Figur 11: MRSA2318, Figur 12: With the same experimental set-up the analysis of the Bio ¬ film was performed using the crystal violet assay as described above in 1 above described, the result after 48 hours of incubation and crystal violet assay in Figure 8 as a whole, and in Figures 9-13, respectively, after measuring the visual density prepared graphically for the respective delphinidin concentrations in the individual bacterial strains (FIG. 9: P. aeruginosa ATCC9027, FIG. 10: K. pneumoniae ATCC 700603, FIG. 11: MRSA2318, FIG. 12:
MRSA2855, Figur 13: MSSA1155) . MRSA2855, Figure 13: MSSA1155).
Die Versuchsergebnisse lassen sich wie folgt zusammenfas- sen: The test results can be summarized as follows:
- Delphinidin besitzt keinen hemmenden Einfluss auf das - Delphinidin has no inhibitory effect on the
Wachstum und die Biofilm-Bildung der gram-positiven Bakterien P. aeruginosa und K. pneumoniae . Die Biofilm- Bildung scheint im Fall von K. pneumoniae sogar noch sti¬ muliert zu werden. Growth and biofilm formation of gram-positive bacteria P. aeruginosa and K. pneumoniae. The biofilm formation appears even sti to be ¬ formulated in the case of K. pneumoniae.
- Dagegen besitzt Delphinidin einen hemmenden Effekt sowohl auf das Wachstum als auch die Biofilm-Bildung von S. au- reus (sowohl MSSA als auch MRSA) . Diese Wirkung nimmt dosisabhängig ab. In contrast, delphinidin has an inhibitory effect on the growth as well as the biofilm formation of S.aurus (both MSSA and MRSA). This effect decreases in a dose-dependent manner.

Claims

Patentansprüche  claims
Komplex umfassend mindestens ein Anthocyanidin oder dessen Salze zur zumindest teilweisen Neutralisation von Bakterien ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Antibiotika-resistenten Staphylococcus aureus und Antibiotika-sensitiven Staphylococcus aureus. A complex comprising at least one anthocyanidin or its salts for the at least partial neutralization of bacteria selected from the group consisting of antibiotic-resistant Staphylococcus aureus and antibiotic-sensitive Staphylococcus aureus.
Komplex nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Komplex Anthocyanidin und Sulfoalkylether—ß- Cyclodextrin umfasst. Complex according to claim 1, characterized in that the complex comprises anthocyanidin and sulfoalkylether-β-cyclodextrin.
Komplex nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Sulfoalkylether-ß-Cyclodextrin ein Sulfobuty- lether-ß-Cyclodextrin ist. Complex according to Claim 2, characterized in that the sulfoalkyl ether-β-cyclodextrin is a sulfobutyl-β-cyclodextrin.
Komplex nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass der Substitutionsgrad des Cyclodextrins mit Sulfoalkylethergruppen 3-8, vorzugsweise 4-8, weiter vorzugsweise 5 bis 8, weiter vorzugsweise 6 bis 7 be¬ trägt . Complex according to claim 2 or 3, characterized in that the degree of substitution of the cyclodextrin with Sulfoalkylethergruppen 3-8, preferably 4-8, more preferably 5 to 8, more preferably 6 to 7 be ¬ carries.
Komplex nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Anthocyanidine ausge¬ wählt sind aus der Gruppe bestehend aus Aurantinidin, Cyanidin, Delphinidin, Europinidin, Luteolinidin, Pelargonidin, Malvidin, Peonidin, Petunidin und Complex according to any of the preceding claims, characterized in that the anthocyanidins are oriented ¬ selected from the group consisting of aurantinidin, cyanidin, delphinidin, Europinidin, Luteolinidin, pelargonidin, malvidin, peonidin, petunidin and
Rosinidin . Rosinidine.
Komplex nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Anthocyanidin Delphinidin ist. Komplex nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Antibiotika ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Complex according to claim 5, characterized in that the anthocyanidin is delphinidin. Complex according to one of the preceding claims, characterized in that the antibiotics are selected from the group consisting of
- ß-Lactam Antibiotika, einschließlich Penicillin, Cephalosporine, Carbapeneme und Monobactame,  β-lactam antibiotics, including penicillin, cephalosporins, carbapenems and monobactams,
- Chinolone  - Quinolones
- Tetracycline,  - tetracyclines,
- Aminoglykoside,  - aminoglycosides,
- Erythromycin,  - erythromycin,
- Sulfonamide und  - sulfonamides and
- Vancomycin.  - vancomycin.
Wässrige Lösung eines Komplexes nach einem der voran gehenden Ansprüche oder Feststoff enthaltend einen Komplex nach einem der vorangehenden Ansprüche. Aqueous solution of a complex according to any one of the preceding claims or solid containing a complex according to any one of the preceding claims.
Wässerige Lösung oder Feststoff nach Anspruch 8, da¬ durch gekennzeichnet, dass die wässrige Lösung oder der Feststoff Bestandteil eines Arzneimittels, ein Zu satz von Werkstoffen oder einer Spüllösung sind. Aqueous solution or solid according to claim 8, since ¬ characterized by that the aqueous solution or the solid is a form part of a pharmaceutical composition to set of materials or a rinsing solution.
Verfahren zur Behandlung eines Objekts, wobei das Ob¬ jekt kein lebendes Tier ist, umfassend: A method for the treatment of an object, wherein the Whether ¬ ject is not a live animal, comprising:
a) die Bereitstellung  a) the provision
i) eines Komplexes nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder einer wässrigen Lösung oder Feststoffes nach Anspruch 8 oder 9 und ii) eines nicht lebenden Objekts, das verdächtig wird, mit Bakterien ausgewählt aus der Grup¬ pe bestehend aus Antibiotika-resistenten Staphylococcus aureus und Antibiotika¬ sensitiven Staphylococcus aureus kontami¬ niert zu sein, und b) die Behandlung des Objekts mit dem Komplex oder der wässrigen Lösung oder dem Feststoff unter solchen Bedingungen, dass die Bakterien, die verdächtigerweise das Objekt kontaminieren, zumin¬ dest teilweise neutralisiert werden. i) a complex according to any one of claims 1 to 7 or of an aqueous solution or solid according to claim 8 or 9, and ii) a non-living object that is suspected of having bacteria selected from the Grup ¬ pe consisting of antibiotic-resistant Staphylococcus aureus and antibiotics ¬ ¬ sensitive contami to be defined Staphylococcus aureus, and b) treating the object with the complex, or the aqueous solution or the solids under such conditions that the bacteria that are suspiciously contaminate the object are at least partially neutralized ¬.
Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Objekt ein Tierkörper oder ein Teil davon ist . A method according to claim 10, characterized in that the object is a carcass or a part thereof.
Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass die Tierkörper oder Teile davon ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus A method according to claim 11, characterized in that the carcasses or parts thereof are selected from the group consisting of
- Körper eines Rindes oder ein Teil davon,  - body of a bovine or part of it,
- Körper eines Schweins oder ein Teil davon,  - body of a pig or part of it,
- Geflügelkörper oder ein Teil davon und  - poultry carcass or part thereof and
- Körper eines im Wasser lebenden Tieres oder ein Teil davon .  - Body of an aquatic animal or part of it.
Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Objekt ein Nahrungs- und/oder Futtermittel ist . A method according to claim 10, characterized in that the object is a food and / or feed.
Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass das Nahrungs- und/oder Futtermittel ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus A method according to claim 13, characterized in that the food and / or feed is selected from the group consisting of
- einem Fleischprodukt,  a meat product,
- einem verarbeiteten Fleischprodukt,  a processed meat product,
- einem Molkereiprodukt,  - a dairy product,
- Gemüse und deren Teilen und  - vegetables and their parts and
- Obst und deren Teilen. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Objekte ausgewählt sind aus der Gruppe bes hend aus - fruits and their parts. A method according to claim 10, characterized in that the objects are selected from the group bes going from
a) Vorrichtungen und/oder Einrichtungen und/oder a) devices and / or facilities and / or
Ausrüstungen und/oder Geräten für  Equipment and / or Equipment for
medizinische Anwendungen,  medical applications,
die Lebensmittelverarbeitung,  the food processing,
das Militär,  the military,
b) Schutzausrüstungen, b) protective equipment,
c) häusliche Objekte, c) domestic objects,
d) Gebäudeeinrichtungen und d) building equipment and
e) Bauwerke. e) Structures.
Komplex nach einem der Ansprüche 1-7 oder wässrige Lö¬ sung oder Feststoff nach Anspruch 8 oder 9 zur Verwendung in der Behandlung eines Objekts das verdächtigt wird, mit Antibiotika-resistenten oder Antibiotikasensitiven Bakterien der Art Staphylococcus aureus infiziert zu sein. A complex according to any of claims 1-7 or aqueous Lö ¬ solution or solid according to claim 8 or 9 which is suspected to be used in the treatment of an object to be infected with antibiotic-resistant or antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus.
Komplex nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder wässrige Lösung oder Feststoff nach Anspruch 8 oder 9 zur Verwendung in der Behandlung oder Prophylaxe von Menschen oder Tieren, die verdächtig sind, mit Antibiotika- resistenten oder Antibiotika-sensitiven Bakterien der Art Staphylococcus aureus infiziert zu sein. A complex according to any one of claims 1 to 7 or aqueous solution or solid according to claim 8 or 9 for use in the treatment or prophylaxis of humans or animals suspected of being infected with antibiotic-resistant or antibiotic-sensitive bacteria of the species Staphylococcus aureus ,
Komplex oder wässrige Lösung oder Feststoff zur Ver¬ wendung nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, das die Infektion Krankheiten mit Symptomen bedingt, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus: Complex or aqueous solution or solid to Ver ¬ application according to claim 17, characterized in that the infectious diseases with symptoms due selected from the group consisting of:
- Hautinfektionen, einschließlich Furunkel und Karbun kel, - Pyomyositis , - skin infections, including boils and carbons, - pyomyositis,
- Lungenentzündung,  - Lung infection,
- Endokarditis,  - endocarditis,
- Toxisches Schock-Syndrom, - Sepsis und  - Toxic shock syndrome, - Sepsis and
- Mastitis . - Mastitis.
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