WO2002008743A1

WO2002008743A1 - Biocapteur

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Publication number: WO2002008743A1
Application number: PCT/JP2001/006188
Authority: WO
Inventors: Yuko Taniike; Shin Ikeda; Shiro Nankai
Original assignee: Matsushita Electric Industrial Co., Ltd.
Priority date: 2000-07-24
Filing date: 2001-07-17
Publication date: 2002-01-31
Also published as: ES2331689T3; DE60140000D1; US20030032875A1; CN1522365A; US6885196B2; JP4177662B2; EP1304566A1; EP1304566B1; JPWO2002008743A1; CN100339701C; EP1304566A4

Description

明細書バイ才センサ技術分野

本発明は、試料中に含まれる基質を迅速、かつ高精度に定量するためのバイォセンサに関する。背景技術

スクロース、グルコースなど糖類の定量分析法として、施光度計法、比色法、還元滴定法および各種クロマトグラフィ一を用いた方法等が開発されている。しかし、これらの方法は、いずれも糖類に対する特異性があまり高くないので、精度が悪い。これらの方法のうち施光度計法によれば、操作は簡便ではあるが、操作時の温度の影響を大きく受ける。従って、施光度計法は、一般の人々が家庭などで簡易に糖類を定量する方法としては適切でない。

近年、酵素の有する特異的触媒作用を利用した種々のタイプのバイォセンサが開発されている。

以下に、試料中の基質の定量法の一例として、グルコースの定量法について説明する。

電気化学的なグルコースの定量法としては、酵素であるグルコースォキシダ一ゼ（E C 1 . 1 . 3 . 4 ：以下 G O Dと略す）と酸素電極あるいは過酸化水素電極とを使用する方法が一般に知られている（例えば、鈴木周一編「バイオセンサ一」講談社）。 ·

G O Dは、酸素を電子伝達体として、基質である i3—D—グルコースを D _ダルコノー（5—ラクトンに選択的に酸化する。酸素の存在下で、 G O Dによる酸化反応過程において、酸素が過酸化水素に還元される。酸素電極によって、この酸素の減少量を計測するか、あるいは過酸化水素電極によって過酸化水素の増加量を計測する。酸素の減少量および過酸化水素の増加量は、試料中のグルコースの含有量に比例するので、酸素の減少量または過酸化水素の増加量からグルコースを定量することができる。

上記方法では、酵素反応の特異性を利用することにより、精度良く試料中のグルコースを定量することができる。しかし、反応過程からも推測できるように、測定結果は試料に含まれる酸素濃度の影響を大きく受ける欠点があり、試料に酸素が存在しない場合は測定が不可能となる。そこで、酸素を電子伝達体として用いず、フェリシアン化カリウム、フエ口セン誘導体、キノン誘導体等の有機化合物や金属錯体を電子伝達体として用いる新しいタイプのグルコースセンサが開発されてきた。このタイプのセンサでは、酵素反応の結果生じた電子伝達体の還元体を作用極上で酸化することにより、その酸化電流量から試料中に含まれるグルコース濃度が求められる。この際、対極上では、電子伝達体の酸化体が還元され、電子伝達体の還元体の生成する反応が進行する。このような有機化合物や金属錯体を酸素の代わりに電子伝達体として用いることにより、既知量の G O Dとそれらの電子伝達体を安定な状態で正確に電極上に担持させて試薬層を形成することが可能となり、試料中の酸素濃度の影響を受けることなく、精度良くグルコースを定量することができる。また、酵素および電子伝達体を含有する試薬層を、乾燥状態に近い状態で電極系と一体化させることもできるので、この技術に基づいた使い捨て型のグルコースセンサが近年多くの注目を集めている。その代表的な例が、特許第 2 5 1 7 1 5 3号公報に示されるバイオセンサである < 使い捨て型のグルコースセンサにおいては、測定器に着脱可能に接続されたセンサに、試料を導入するだけで、容易にグルコース濃度を測定器で測定することができる。

上記の様なグルコースセンサを用いた測定では、数 1オーダーの試料量で試料中の基質濃度を容易に求めることが可能である。しかしながら、近年、 1 ^ 1以下程度とさらに微量な試料での測定が可能なバイオセンサの開発が各方面において切望されている。従来の電気化学ダルコースセンサでは、殆どの場合、一平面上に電極系が配置されている。そのため、試料が極微量の場合は、電極間の電荷移動、主にイオンの移動に対する抵抗が大きくなることにより、測定結果にバラツキが生じる場合があった。

そこで、作用極と対極が相互に対向する位置に配置されたバイオセンザが提案されている（特開平 1 1— 3 5 2 0 9 3号公報）。このタイプのセンサでは、作用極と対極が相互に対向する位置に配置されたことにより、作用極一対極間のイオン移動が円滑になる等の理由により、従来の一平面上に電極系が配置されたバイオセンサよりも、高精度、かつ高感度で、試料中に含まれるグルコース等の基質を定量することができる < 近年、測定に必要なサンプル量のさらなる微量化が求められていることから、さらに微量のサンプルにおいても測定可能となるように、バイォセンサのさらなる高感度化が切望されている。

本発明は、上記課題に鑑み、測定に必要なサンプル量が少なく、かつ高感度のバイォセンサを提供することを目的とする。発明の開示

本発明のバイオセンサは、作用極を有する第 1の絶縁性基板、前記作用極と対向させた対極を有する第 2の絶縁性基板、少なくとも酸化還元酵素を含む試薬層、並びに第 1および第 2の絶縁性基板の間に形成された試料供給路を具備し、前記試料供給路内に前記作用極、対極および試薬層が露出し、かつ前記作用極と前記対極との距離が 1 5 0 zm以下であることを特徴とする。

ここで、対極の試料供給路に露出している部分の面積は、作用極の試料供給路に露出している部分の面積と同じかそれ以下であり、かつ前記作用極の直上に前記対極が位置することが好ましい。

作用極は、試料供給路に露出している部分の面積 S iが 0. 0 1〜 2.0 mm²、より好ましくは 0. 1〜 2. 0 mm²、対極の試料供給路に露出している部分の面積 S ₂が 0. 0 0 5〜 2 0mm²、より好ましくは 0. 0 5 〜 2. 0 mm²であり、 S ₂≤ S であることが好ましい。

ここで、第 1および第 2の基板の間にスぺ一サ部材を挟んだ構成が好ましい。図面の簡単な説明

図 1は本発明の一実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図である。

図 2は同グルコースセンサの縦断面図である。

図 3は本発明の他の実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図である。

図 4は本発明のさらに他の実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図である。

図 5は同グルコースセンサの縦断面図である。

図 6は本発明のさらに他の実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図である。

図 7は同グルコースセンサの縦断面図である。

図 8は比較例のグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図である。

図 9は同グルコースセンサの縦断面図である。

図 1 0は本発明の実施例 1のグルコースセンサの試料供給路高さと応答電流値（比）との関係を示すグラフである。

図 1 1は本発明の実施例 2のグルコースセンサの作用極一対極間距離と応答電流値（比）との関係を示すグラフである。

図 1 2は本発明の実施例 3のグルコースセンサの作用極一対極間距離と応答電流値（比）との関係を示すグラフである。発明を実施するための最良の形態

上記のように、本発明のバイオセンサは、作用極を有する第 1の絶縁性基板、前記作用極と対向させた対極を有する第 2の絶縁性基板、少なくとも酸化還元酵素を含む試薬層、並びに第 1および第 2の絶縁性基板の間に形成された試料供給路を具備し、前記試料供給路内に前記作用極、対極および試薬層が露出し、かつ前記作用極と前記対極との距離が 1 5 0 m以下である。作用極と対極との距離は、 4 0〜 1 5 0 mが好ましく、より好ましくは 4 0〜 1 0 0 mである。

本発明によるバイオセンサは、前記試料供給路内に毛管作用により収容される試料液量は、 1 0 n 1 〜 5 Z 1であるのが好ましく、より好ましくは 5 0 η 1〜 5 0 0 η 1である。

このようにすると、作用極と対極間の電荷移動が容易になるとともに、作用極上における酸化還元種の拡散層の広がりを抑制し、拡散層での酸化還元種の濃度勾配が高い状態で維持されることにより、センサ応答が増加する。

ここで、対極の試料供給路に露出している部分の面積 S ₂が、作用極の試料供給路に露出している部分の面積 S と同じかそれ以下であり、かつ対極が作用極の直上に位置することが好ましい。ここで、対極が作用極の直上に位置するとは、作用極の垂直方向から見て、対極の全部が作用極に重なるように形成されていることを意味する。

一般に電気化学分野の測定系では、対極における反応が律速とならないように、対極の面積を作用極の面積よりも大きくする。しかし、本発明のバイオセンサでは、対極と作用極とが対向した位置に配置されているので、対極の面積を作用極の面積と同じかそれ以下にすると、対極の面積が作用極の面積よりも大きい場合と比較して、対極上の電流密度がより高くなる等の理由により、対極近傍における酸化還元種の濃度が高くなると考えられる。センサ応答は、対極近傍における酸化還元種の濃度に依存するため、結果として、基質を高感度に定量することが可能となる。また、対極の面積の減少に伴い、試料供給路の容積を低減することができるので、サンプル量の削減が可能となる。対極の面積は、作用極の面積よりも小さいことが好ましい。このようにすると、上記の効果がより顕著になる。

作用極が第 1の絶縁性基板上に形成され、対極が第 2の絶縁性基板上に形成されていることが好ましい。このようにすると、バイオセンサの製造工程が容易になる。

ここで、第 1の基板と第 2の基板とが、スぺーサ部材を挟む構造であることが好ましい。このようにすると、基板への物理的圧力に対しての強度が増加するので、作用極と対極との接触による短絡を防止することができるとともに、電流応答への物理的圧力の影響を低減することができる。

本発明の第 1および第 2の基板としては、電気絶縁性を有し、保存および測定時に充分な剛性を有する材料であれば用いることができる。例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビエル、ポリアミド、飽和ポリエステル樹脂等の熱可塑性樹脂、尿素樹脂、メラミン樹脂、フエノール樹脂、エポキシ樹脂、不飽和ポリエステル樹脂等の熱硬化性樹脂があげられる。中でも、電極との密着性の点から、ポリエチレンテレフ夕レー卜が好ましい。

スぺ一サ部材としては、電気絶縁性を有し、保存および測定時に充分な剛性を有する材料であれば用いることができる。例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド、飽和ポリエステル樹脂等の熱可塑性樹脂、尿素樹脂、メラミン樹脂、フエノール樹脂、ェポキシ樹脂、不飽和ポリエステル樹脂等の熱硬化性樹脂があげられる。作用極としては、電子伝達体を酸化する際にそれ自身が酸化されない導電性材料であれば用いることができる。対極としては、パラジウム、金、白金、カーボン等の一般的に用いられる導電性材料であれば用いることができる。

酸化還元酵素としては、試料中に含まれる測定対象の基質に対応したものが用いられる。例えば、フルクト一スデヒドロゲナーゼ、ダルコ一スォキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナ一ゼ、アルコールォキシダーゼ、乳酸ォキシダーゼ、コレステロールォキシダーゼ、キサンチンォキシダ一ゼ、アミノ酸ォキシダーゼ等があげられる。

本発明のバイオセンサは、試薬層に電子伝達体を含むことが好ましい, 電子伝達体としては、フェリシアン化力リウム、 P —ベンゾキノン、フェナジンメトサルフエ一ト、メチレンブルー、フエロセン誘導体等があげられる。また、酸素を電子伝達体とした場合にも電流応答が得られる < 電子伝達体は、これらの一種または二種以上が使用される。

本発明のバイオセンサは、試薬層に親水性高分子を含むことが好ましい。親水性高分子としては、種々のものを用いることができる。例えば. ヒドロキシェチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ェチルセルロース、ェチルヒドロキシェチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリリジン等のポリアミノ酸、ポリスチレンスルホン酸、ゼラチンおよびその誘導体、ポリアクリル酸およびその塩、ポリメタァクリル酸およびその塩、スターチおよびその誘導体、無水マレイン酸またはその塩の重合体があげられる。中でも、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシェチルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースが好ましい。

以下、本発明の実施の形態を図面を参照して詳しく説明する。構造を表す図面においては、各要素の相対的な位置やサイズは必ずしも正確ではない。実施の形態 1

パイォセンサの一例として、グルコースセンサについて説明する。図 1および図 2を用いて、本実施の形態を説明する。図 1は本実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図であり、図 2はその縦断面図である。

1 1はポリエチレンテレフタレ一トからなる第 1の電気絶縁性の基板を表す。この基板 1 1上には、スクリーン印刷により銀ペーストを印刷し、作用極リード 1 2および電極の下地が形成され、ついで、樹脂バインダーを含む導電性カーボンペーストを電極の下地上に印刷して作用極 1 4が形成されている。この作用極 1 4は、作用極リード 1 2と接触している。基板 1 1上には、絶縁性べ一ストを印刷して絶縁層 1 6が形成されている。絶縁層 1 6は、作用極 1 4の外周部を覆っており、これにより作用極 1 4の露出部分の面積を一定に保っている。

次に、第 2の電気絶縁性の基板 2 1の裏面に、銀ペーストを印刷して対極リ一ド 2 3および電極の下地を形成し、次いで導電性カーボンベーストを前記電極の下地上に印刷して対極 2 5を形成し、さらに対極 2 5 の露出部分の面積が作用極 1 4の露出部分の面積よりも大きくなるように、絶縁性ペーストを印刷して、絶縁層 2 7が形成されている。基板 2 1には、空気孔 2 9が形成されている。

酵素である G O Dおよび電子伝達体のフェリシアン化力リゥムを含有する水溶液を基板 1 1の作用極 1 4上に滴下した後、乾燥して試薬層 1 0が形成される。さらに、試薬層 1 0上に、界面活性剤であるレシチンを含有する界面活性剤層 2 0が形成されている。

最後に、基板 1 1、基板 2 1、およびスぺーサ部材 1 7を、図 1中の一点鎖線で示すような位置関係をもって接着することにより、図 2のようなグルコースセンサが組み立てられる。

基板 1 1 と基板 2 1 との間に挟み込むスぺーサ部材 1 7は、スリット 1 8を有しており、このスリット 1 8は基板 1 1 と 2 1との間に、試料供給路となる空間部を形成する。このスぺ一サ部材 1 7の厚みを、変化させることにより、試料供給路の高さ、すなわち作用極 1 4と対極 2 5 との距離を変えることができる。

基板 2 1の空気孔 2 9は、前記の試料供給路に連通しているので、スリット 1 8の解放端に形成される試料供給口 1 9に試料を接触させれば毛管現象により試料は容易に試料供給路内にある試薬層 1 0に達する。実施の形態 2

図 3は、本実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた斜視図である。本実施の形態では、対極 2 5 aを作用極 1 4と同様 (に四角形とし、その面積を作用極のそれと等しくした。その他は、実施の形態 1 と同様である。実施の形態 3

図 4は、本実施の形態におけるタルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた斜視図であり、図 5はその縦断面図である。

このグルコースセンサは、以下のような手順で作製される。

まず、両側に立ち上がり片 3 7 、 3 7を有する電気絶縁性の基板 3 1 上に、パラジウムをスパッ夕リングして、作用極 3 4およびそのリ―ド 3 2を形成する。次に、基板 3 1上に絶縁性部材 3 6を貼付することにより、作用極 3 4および測定器に揷入するリード 3 2の端子部を規定する。一方、第 2の電気絶縁性基板 4 1の内面に、同じくパラジウムをスパッタリングして対極 4 5、および対極リード 4 3を作製する。次に、基板 4 1の内面に絶縁性部材 4 7を貼付することにより、対極 4 5および測定器に挿入するリード 4 3の端子部を規定する。

次いで、基板 3 1に第 2の基板を接合する。この時、作用極 3 4と対極 4 5は、基板 3 1と基板 4 1との間に形成される空間部を介して対向する位置に配置される。作用極と対極間の距離は、例えば 1 0 0 mとする。試薬層 3 0および界面活性剤層 4 0は、実施の形態 1 と同様にして、電極 3 4を覆うように形成される。このようにして作製されるセンサは、電極 3 4および 4 5に近い方の端面が試料供給口 3 9となる。ここから供給される試料は、空気孔 4 9に連なる空間部の毛管作用により電極部に達する。実施の形態 4

図 6は本実施の形態におけるグルコースセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた斜視図であり'、図 7はその縦断面図である。

このグルコースセンサは、以下の手順で作製される。電気絶縁性の第 1の基板 5 1上に、パラジウムをスパッ夕リングして、作用極 5 4およびそのリ一ド 5 2を形成する。次に、基板 5 1上に、絶緣性部材 5 6を貼付することにより、作用極 5 4、および測定器に挿入するリード 5 2の端子部を規定する。一方、外側に膨出した曲面部 6 8 を有する第 2の電気絶縁性基板 6 1の曲面部 6 8の内壁面に、パラジゥムをスパッ夕リングして対極 6 5およびそのリード 6 3を形成する。曲面部 6 8の曲率を調節することにより、作用極 5 4と対極 6 5との距離を制御することができる。

次に、基板 6 1の内壁面に、絶縁性部材 6 7を貼付することにより、対極 6 5、および測定器に挿入する端子部を規定する。この時、対極 6 5の面積が作用極 5 4の面積と等しくなるようにする。対極 6 5の端子部は、基板 6 1の後端 6 1 aの裏面に露出している。曲面部 6 8の端部には、空気孔 6 9を有する。作用極 5 4上に試薬層 5 0を形成し、さらにこれを覆うように界面活性剤層 6 0を形成する。最後に、基板 5 1 と基板 6 1を貼り合わせて、グルコースセンサを組み立てる。実施例 1

実施の形態 1において、スぺ一サ部材 1 7の厚みを変えることにより、試料供給路の高さの異なる 5種のセンサを作製した。作用極の面積は 1 . 0 mm ²である。対極は、直径約 3 . 6 m mの円形であるが、その直径がスベーサ部材 1 7のスリット 1 8の幅より大きいので、一部は試料供給路に露出しない。対極の試料供給路に露出する部分の面積は約 5 . 3 mm²である。

比較例として、同一基板上に作用極と対極を有するグルコースセンサを作製した。実施例 1 と同様に、試料供給路の高さの異なる 5種のダルコースセンサを作製した。図 8は比較例のセンサの試薬層および界面活性剤層を除いた分解斜視図であり、図 9はその縦断面図である。

ポリエチレンテレフタレートからなる電気絶縁性基板 1 0 1上に、スクリーン印刷により銀ペーストを印刷し、作用極リ一ド 1 0 2および対極リード 1 0 3を形成し、次いで、樹脂バインダーを含む導電性カーボンペーストを印刷して作用極 1 0 4を形成した。この作用極 1 0 4は、作用極リード 1 0 2と接触している。さらに、この基板 1 0 1上に、絶縁性ペーストを印刷して絶縁層 1 0 6を形成した。絶縁層 1 0 6は、作用極 1 0 4の外周部を覆っており、これにより作用極 1 0 4の露出部分の面積を一定に保っている。次に、樹脂バインダーを含む導電性力一ポンペーストを、対極リード 1 0 3と接触するように基板 1 0 1上に印刷して対極 1 0 5を形成した。作用極 1 0 4の面積は 1 . 0 m m²、対極

1 0 5の試料供給路に露出する部分の面積は約 4 . 3 mm²である。酵素の G O Dおよび電子伝達体のフェリシアン化力リゥムを含有する水溶液を作用極 1 0 4および対極 1 0 5上に滴下した後乾燥して試薬層

1 0 7を形成し、その試薬層 1 0 7上に、界面活性剤であるレシチンを含有する界面活性剤層 1 0 9を形成した。これらの基板 1 0 1、空気孔

1 1 4を備えたカバー 1 1 2、およびスリット 1 1 1を有するスぺーサ部材 1 1 0を図 8中の一点鎖線で示すような位置関係をもって接着した以上の実施例 1および比較例のセンサを用いて、一定量のグルコースを含む水溶液のグルコース濃度の測定を行った。試料を試料供給口から試料供給路に供給し、一定時間経過後に、対極を基準にして作用極に 5 0 0 m Vの電圧を印加した。この電圧印加により、作用極と対極との間に流れる電流値を測定したところ、試料中のグルコース濃度に比例した電流応答が観察された。

グルコースを 1 8 0 m gノ d 1含む溶液について、試料供給路の高さが異なる各グルコースセンサにより応答電流値を測定した。図 1 0は、実施例 1のセンサによる試料供給路の高さと応答値（比）との関係を示したものである。応答値（比）は、試料供給路の高さの等しい比較例のセンサによる応答値を 1 0 0とした比で示している。

図 1 0からわかるように、試料供給路の高さを 1 5 0 m以下にすると、実施例 1の比較例に対する応答値（比）が急激に増加している。これは、作用極と対極が相互に対向し、作用極一対極間の距離が 1 5 0 m以下であると、作用極での酸化還元種の拡散層の成長が抑制され、対極上の酸化還元種の濃度がセンサ応答に反映すること、および作用極一対極間の電荷移動等が良好となることによるものであると考えられる < また、実施例 1においては、測定に必要なサンプル量が約 0 . 5〜 3 . であった。このように本発明によると、作用極一対極間の距離が限定されるため、測定に必要なサンプル量を削減することが可能となった。実施例 2

実施の形態 2において、作用極および対極の面積をいずれも 1 . 0 mm ²とした他は、実施例 1 と同様の方法にてバイオセンサを作製した。そして、グルコースを 9 O .m g Z d 1含む溶液について、試料供給路の高さが異なる各グルコースセンサにより応答電流値を測定した。図 1 1 は、実施例 2のセンサによる試料供給路の高さ、すなわち作用極一対極間距離と応答値（比）との関係を示したものである。応答値（比）は、試料供給路の高さの等しい実施例 1のセンサによる応答値を 1 0 0とした比で示している。

図 1 1からわかるように、試料供給路の高さを 1 5 0 以下にすると、実施例 2のセンサの実施例 1に対する応答値（比）が急激に増加している。これは、作用極と対極が相互に対向し、作用極一対極間の距離が 1 5 0 m以下であると、作用極での酸化還元種の拡散層の成長が抑制され、対極上の酸化還元種の濃度がセンサ応答に反映すること、および作用極一対極間の電荷移動等が良好となることによるものであると考えられる。

一般の電気化学においては、対極における反応が律速になることを防ぐために、対極の面積は作用極の面積よりも大きくする。しかし、この系では、作用極と対極を対向に配置するため、対極上の電流密度が電流応答に反映される等の理由により、対極の面積が作用極の面積より大きい場合に比べて、高い応答電流が得られたと考えられる。

本実施例では、対極の面積が作用極と同等であるために、実施例 1よりも空気孔 2 9の位置を試料供給口側に近づけている。したがって、測定に必要なサンプル量をさらに削減することが可能となる。実施例 3

本実施例では、対極面積を 0 . 6 4 mm ²とした他は、実施例 2と同様にしてバイォセンサを作製した。そして、グルコースを 9 O m g / d 1 含む溶液について、試料供給路の高さが異なる各グルコースセンサにより応答電流値を測定した。図 1 2は、実施例 3のセンサによる試料供給路の高さ（作用極—対極間距離）と応答値（比）との関係を示したものである。応答値（比）は、試料供給路の高さの等しい実施例 1のセンサによる応答値を 1 0 0とした比で示している。

図 1 2からわかるように、作用極一対極間距離を 1 5 0 i m以下にすると、本実施例の実施例 1に対する応答値（比）が急激に増加している。これは、実施例 2で説明したものと同様の理由によるものと考えられる。本実施例では、対極の面積が作用極よりも小さいために、実施例 2よりも空気孔の位置を試料供給口側に近づけることができる。したがって測定に必要なサンプル量を実施例 2よりもさらに削減することが可能となる。産業上の利用の可能性

以上のように本発明によれば、測定に必要なサンプル量が少なく、かつ高感度のバイォセンサを得ることができる。

Claims

請求の範囲

1. 作用極を有する第 1の絶縁性基板、前記作用極と対向させた対極を有する第 2の絶縁性基板、少なくとも酸化還元酵素を含む試薬層、並びに第 1および第 2の絶縁性基板の間に形成された試料供給路を具備し、前記試料供給路内に前記作用極、対極および試薬層が露出し、かつ前記作用極と前記対極との距離が 1 5 0 zm以下であることを特徴とするバィォセンサ。

2. 前記対極の試料供給路に露出している部分の面積が、前記作用極の試料供給路に露出している部分の面積と同じかそれ以下である請求の範囲第 1項記載のバイオセンサ。

3. 前記作用極の試料供給路に露出している部分の面積が 0. 1〜

2. 0 mm²であり、前記対極の試料供給路に露出している部分の面積が 0. 0 5〜 2. Omm²である請求の範囲第 2項記載のバイオセンサ。

4. 前記作用極と前記対極との距離が 40 xm以上である請求の範囲第 1項記載のバイオセンサ。

5. 第 1および第 2の絶縁性基板の間に、スリットを有するスぺ一サ部材が挿入され、前記スリツトの部分に前記試料供給路が形成された請求の範囲第 1項記載のバイォセンサ。