WO1998022489A1 - Nouveaux analogues de nucleotides - Google Patents

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WO1998022489A1
WO1998022489A1 PCT/JP1997/004187 JP9704187W WO9822489A1 WO 1998022489 A1 WO1998022489 A1 WO 1998022489A1 JP 9704187 W JP9704187 W JP 9704187W WO 9822489 A1 WO9822489 A1 WO 9822489A1
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Takeshi Imanishi
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Takeshi Imanishi
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    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA

Definitions

  • the present invention relates to novel nucleotide analogs, and more particularly, to nucleotide analogs suitable for antisense molecules.
  • Antisense oligonucleotides are one of the most promising fields in recent years as pharmaceuticals because they specifically regulate the expression of unwanted genes.
  • the antisense method is based on the concept of controlling the flow of so-called centralola dogma using DNA ⁇ RNA ⁇ protein using an antisense oligonucleotide.
  • nucleic acid derivatives have been synthesized and studied. For example, phosphorothioate in which the oxygen atom on the phosphorus atom has been replaced with a zeo atom, methylphosphonate in which the methyl group has been replaced with a methyl group, and more recently, those in which the phosphorus atom has been replaced with a carbon atom and ribose is acyclic.
  • Backbone molecules have also been synthesized (F.
  • nucleotide analogs for antisense molecules that have high cell membrane permeability in vivo, are not easily hydrolyzed by enzymes, and are easy to synthesize.
  • the inventors of the present invention designed a nucleic acid derivative in which the sugar moiety of a nucleic acid was modified, which would be useful in the antisense method, synthesized it, and confirmed its usefulness.
  • the present invention will be described.
  • nucleotide analogs of the present invention have the following general formula:
  • B may be the same or different and is a pyrimidine or purine nucleobase or a derivative thereof
  • This monomer unit has the general formula:
  • B is a pyrimidine or purine nucleobase or an analog thereof
  • Y 2 are the same or different and are a protecting group for hydrogen or a hydroxyl group.
  • the protecting group any known group can be used, and it is preferably an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, a cycloalkyl group, an aryl group, an acyl group, an aralkyl group or a silyl group. Nucleoside analogs or their amide derivatives.
  • the alkyl group refers to a linear or branched alkyl group having 1 to 20 carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, an ⁇ -propyl group, an i-propyl group, an n-butyl group, and a t-alkyl group. Butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl and the like.
  • the alkenyl group refers to a linear or branched alkenyl group having 2 to 20 carbon atoms, and examples thereof include a vinyl group, an aryl group, a butenyl group, a pentenyl group, a geranyl group, and a farnesyl group. .
  • the alkynyl group refers to a linear or branched alkynyl group having 2 to 20 carbon atoms, and includes, for example, an ethynyl group, a propynyl group, a butynyl group and the like.
  • the cycloalkyl group refers to a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms, and examples thereof include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cyclohexyl group, and a cyclooctyl group.
  • Heterocyclic groups in which one or more arbitrary methylenes on the ring of the cycloalkyl group are substituted with an oxygen atom, a sulfur atom, or a nitrogen atom substituted with an alkyl group are also included, and examples thereof include a tetrahydroviranyl group.
  • An aryl group means a monovalent substituent obtained by removing one hydrogen atom from an aromatic hydrocarbon group, and examples thereof include phenyl, tolyl, xylyl, biphenyl, naphthyl, anthryl, and phenanthryl. And the like. Further, the carbon atom on the ring of the aryl group may be substituted by one or more groups such as a halogen atom, a lower alkyl group, a hydroxyl group, an alkoxy group, an amino group, a nitro group, and a trifluoromethyl group. Examples of the substituent include a halogen atom, a hydroxyl group, an amino group, an alkoxy group and an aryloxy group.
  • Examples of the acetyl group include an acetyl group, a formyl group, a propionyl group, a benzoyl group, A benzyloxycarbonyl group;
  • Examples of the silyl group include a trialkylsilyl group, preferably a trimethylnyl group, a triethylsilyl group, a triisopropylsilyl group, a t-butyldimethylsilyl group, a t-butyldiphenylsilyl group, and the like. Preferred is a trimethylsilyl group.
  • the aralkyl group refers to an alkyl group substituted with an aromatic hydrocarbon, and is preferably a benzyl group or a trityl group. Each aromatic ring may be substituted.
  • a further preferred aralkyl group is a 4,4′-dimethoxytrityl (DMT r) group.
  • the pyrimidine or purine nucleobase is thymine, peracil, cytosine, adenine, guanine and derivatives thereof.
  • FIG. 1 is a chart showing the change over time in ultraviolet absorption (260 nm) when a natural oligonucleotide is decomposed with exonuclease.
  • FIG. 2 is a chart showing the change with time in the ultraviolet absorption (260 nm) when the oligonucleotide (X 2) of the present invention is decomposed with exonuclease].
  • the nucleotide analog of the present invention can be synthesized as follows. For the sake of simplicity, first, a compound in which B in the above formula is peracyl will be described.
  • the compound 3 is reacted with 4,4′-dimethoxytrityl chloride to obtain a compound 4 in which the 5′-hydroxyl group is protected. Further, by reacting with NaHMDS, 5′- ⁇ (4,4′-dimethoxytrityl) -1,3′-0,4′-methanouridine, conjugated compound 5 is obtained.
  • Compound 5 is reacted with 2-cyanoethyl-1-N, N, ⁇ ', ⁇ '-tetraisopropylphosphorodiamidite to obtain an amidite (compound 6), and various antisense oligomer analogs are obtained using DN DN synthesizer. Synthesize the body. Next, the resulting antisense oligomer analog is purified using a reverse-phase column, and the purity of the purified product is analyzed by reverse-phase HLPC, whereby the production of the purified oligonucleotide analog can be confirmed.
  • One or more monomer units of compound 5 can be present in the oligonucleotide analog. Further, it may be present at two or more positions in the oligonucleotide analog in a state of being isolated via one or more natural nucleotides.
  • an antisense molecule having the nucleotide analog of the present invention introduced at a required position in a required number (length) can be synthesized.
  • the nucleotide analogs have 2 to 50, preferably 10 to 30, nucleoside units in total length.
  • Such an antisense molecule is not easily degraded not only for exonuclease but also for endonuclease, and can exist in a living body for a long time after administration to the living body.
  • RNA forms a double strand with the sense strand RNA to inhibit the formation (translation) of a pathogenic in vivo component (protein), or forms a triplex with the double-stranded DNA. Inhibits transcription to mRNA. It may also inhibit the growth of infected viruses.
  • antisense molecules using the nucleotide analogs of the present invention It is expected to be useful as a drug for treating diseases by inhibiting the function of genes such as antitumor agents and antiviral agents.
  • the antisense molecule using the nucleotide analog of the present invention can be formulated into a preparation for parenteral administration by blending a conventional auxiliary agent such as a buffer and Z or a stabilizer.
  • a conventional auxiliary agent such as a buffer and Z or a stabilizer.
  • a common pharmaceutical carrier can be blended and formulated into an ointment, cream, liquid, salve or the like.
  • anhydrous benzene solution (4 ml) of NaHMDS (8.96 mmo 1) in Compound 4 (735 mg, 0.90 mm 01) in anhydrous THF (11 lm 1) was added at room temperature. For 48 hours. Saturated aqueous sodium bicarbonate was added to the reaction solution, and extracted three times with CH 2 C 1 2. The organic layer was washed once with saturated brine, and dried over anhydrous M GS0 4.
  • the solvent was distilled off under reduced pressure, and the obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography.
  • the 3 'monohydroxy group is bound to the support, and the dimethoxytrityl group (DMT r group) of 5'-0-dimethoxytritylthymidine (0.2mo1) is deprotected by trichloroacetic acid, and the 5'-hydroxyl group is deprotected.
  • DMT r group dimethoxytrityl group
  • 5'-0-dimethoxytritylthymidine 0.2mo1
  • the support was cleaved from the support with Nia water lm1, the cyanoethyl group was removed from phosphorus, and the protecting groups for adenine, guanine and cytosine were removed.
  • the resulting 5 '— 0-dimethoxytrityl oligonucleotide was stripped of the DMTr group with 5 ml of trifluoroacetic acid on a reversed-phase column (illipore, Oligo-Pak TM SP), and was subsequently purified.
  • 5′-GCGXTTTTTGCT-3 ′ (XT 5) (0.02 mmo 1, 10%) was obtained.
  • the purity of the obtained oligonucleotide analog was confirmed by reversed-phase HPLC.
  • antisense hybrid-forming ability was examined by measuring the Tm of annealed oligosaccharide chains (antisense chains), which are various antisense molecules synthesized in Example 2, and sense chains.
  • a final concentration of 100 mM NaC, 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.2), 10 M antisense strand, and 4 M sense strand was used to prepare a sample solution (500 L) in boiling water. And cooled to room temperature over 10 hours. Pass a nitrogen stream through the cell chamber of the spectrophotometer (Shimadzu, UV-2100 PC) to prevent dew condensation, gradually cool the sample solution to 5 ° C, keep it at 5 ° C for another 20 minutes, and then measure. Has begun. The temperature was increased by 0.2 ° C per minute to 90 ° C, and the UV absorption at 260 nm was measured at 0.1 ° C intervals. To prevent the concentration from changing due to temperature rise, the cell was used with a lid, and a drop of mineral oil was added to the surface of the sample solution for measurement.
  • nucleosides are represented by capital letters such as TC, A, and G
  • analogs in the present invention are represented by small letters such as t, c, a, and g.
  • a buffer solution of snake venom phosphodiesterase (0.0 O OSUZm 1, 400/1) was mixed with an oligonucleotide buffer solution (10 M, 400 ⁇ 1) kept at 37 ° C for 15 minutes.
  • the increase in UV absorption (260 nm) due to oligomer degradation was measured over time at 37 ° C using SH IMADZU UV-2100 PC.
  • the composition of the buffer used was Tris HC1 (pH 8.6) 0.1 M, NaC 10.1 M, and MgC12 14 mM, and was sufficiently degassed before measurement.
  • FIG. 1 naturally chain
  • FIG. 2 X2 1390
  • the UV absorption value of the natural chain became constant at about 30 minutes after the start of the enzymatic reaction, and became constant at about 90 minutes for X2.
  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand
  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand
  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand
  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand
  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand
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  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand
  • Sequence type nucleotide, nucleotide analog Number of strands: single strand

Description

明細書 新規ヌクレオチド類縁体
[技術分野]
本発明は新規なヌクレオチド類縁体に関し、 更に詳細にはアンチセンス分子に 適したヌクレオチド類縁体に関するものである。
[背景技術]
1 9 7 8年アンチセンス分子がィンフルェンザゥィルスの感染を阻害したとの 報告が初めてなされた。 以後、 ガン遺伝子発現や A I D S感染を阻害したとの報 告もなされている。 アンチセンスオリゴヌクレオチドが望ましくない遺伝子の発 現を特異的に制御することから、 医薬品として近年、 最も期待されている分野の うちの一つである。
アンチセンス法とは、 D N A→R N A→タンパク質という、 いわゆるセントラ ノレドグマの一連の流れをアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて制御しようと いう概念に基づいている。
しかしながら、 天然型オリゴヌクレオチドをアンチセンス分子としてこの方法 に適用した場合、 生体内の酵素により加水分解を受けたり、 細胞膜透過性が高く ないなどの問題が生じた。 そしてこれらを解消するために核酸誘導体が数多く合 成され、 研究が重ねられてきた。 例えば、 リン原子上の酸素原子をィォゥ原子に 置換したホスホロチォエート、 メチル基に置換したメチルホスホネート、 また最 近になっては、 リン原子も炭素原子で置換したものやリボースを非環式骨格にし た分子も合成されている (F. Eckstein et al. , Biochem.， 18, 592(1979), P. S. Miller et al.， ucleic Acids Res. , 11, 5189 (1983), P. Herdewijn et al. , J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1， 1567 (1993)， P. E. Nielsen et al.， Science, 254, 1497 (1991))。
し力、し、 いずれの場合も、 生体内での安定性またはオリゴヌクレオチドの合成 の容易さ等の点で満足のいく誘導体が得られていない。 生体内で細胞膜透過性が高く、 酵素の加水分解を受けにく く、 しかも合成が容 易であるアンチセンス分子用のヌクレオチド類縁体が提供されることが望まれて いる。
[発明の開示]
本発明の発明者等は、 アンチセンス法において有用であろう、 核酸の糖部分を 修飾した核酸誘導体を設計し、 それを合成してその有用性を確認した。 以下に本 発明を説明する。
本発明のヌクレオチド類縁体は下記の一般式：
Figure imgf000004_0001
Q = P- 0"
[式中、 Bは同一または異なってもよく、 ピリミジンもしくはプリン核酸塩基ま たはそれらの誘導体である] で表されるヌクレオチド類縁体であるモノマー単位 を 1または 2以上含有するオリゴまたはポリヌクレオチド類縁体である。
このモノマー単位は一般式：
Figure imgf000004_0002
[式中、 Bはピリミジンもしくはプリン核酸塩基又はそれらの類縁体であり、 及び Y 2は同一もしくは異なり、 水素または水酸基の保護基である。 保護基と しては公知のどのような基も使用できるが、 好ましくは、 アルキル基、 アルケニ ル基、 アルキニル基、 シクロアルキル基、 ァリール基、 ァシル基、 ァラルキル基 又はシリル基である] で表わされるヌクレオシド類縁体もしくはそれらのアミダ ィ 卜誘導体である。
アルキル基とは炭素数 1一 2 0の直鎖または分枝鎖状のアルキル基を示し、 例 えば、 メチル基、 ェチル基、 η—プロピル基、 i一プロピル基、 n—ブチル基、 t一ブチル基、 ペンチル基、 へキシル基、 ヘプチル基、 ォクチル基、 ノニル基、 デシル基等があげられる。
アルケニル基とは、 炭素数 2— 2 0の直鎖または分枝鎖状のアルケニル基を示 し、 例えば、 ビニル基、 ァリル基、 ブテニル基、 ペンテニル基、 ゲラニル基、 ファ ルネシル基等があげられる。
アルキニル基とは、 炭素数 2— 2 0の直鎖または分枝鎖状のアルキニル基を示 し、 例えば、 ェチニル基、 プロピニル基、 プチニル基等があげられる。
シクロアルキル基とは、 炭素数 3— 8のシクロアルキル基を示し、 例えば、 シ クロプロピル基、 シクロブチル基、 シクロペンチル基、 シクロへキシル基、 シク 口へプチル基、 シクロォクチル基等があげられる。 シクロアルキル基の環上の 1 つ以上の任意のメチレンが酸素原子や硫黄原子あるいはァルキル基で置換された 窒素原子に置換された複素環基も含まれ、 例えばテトラヒ ドロビラニル基などが あげられる。
ァリール基とは、 芳香族炭化水素基から水素原子 1個を除いた 1価の置換基を 意味し、 例えば、 フヱニル基、 トリル基、 キシリル基、 ビフヱニル基、 ナフチル 基、 アン卜リル基、 フヱナントリル基等である。 また、 ァリール基の環上の炭素 原子はハロゲン原子、 低級アルキル基、 水酸基、 アルコキシ基、 アミノ基、 ニト 口基、 トリフルォロメチル基等の 1種以上の基によって置換されていてもよい。 置換基としてはハロゲン原子、 水酸基、 アミノ基、 アルコキシ基、 ァリールォキ シ基等があげられる。
ァシル基としては、 ァセチル基、 ホルミル基、 プロピオニル基、 ベンゾィル基、 ベンジルォキシカルボニル基等があげられる。 シリル基の例としては、 トリアル キルシリル基があげられるが、 好ましくは、 トリメチルンリル基、 卜リエチルシ リル基、 トリイソプロピルシリル基、 t —ブチルジメチルシリル基、 t —ブチル ジフヱニルシリル基等があげられ、 更に好ましくは卜リメチルシリル基である。 ァラルキル基とは、 芳香族炭化水素で置換されたアルキル基を意味し、 好まし くはべンジル基、 トリチル基である。 各々の芳香環は置換されていてもよい。 更 に好ましいァラルキル基としては、 4 , 4 ' —ジメ トキシトリチル （DMT r ) 基である。
本発明における、 ピリミジン又はプリン核酸塩基とは、 チミン、 ゥラシル、 シ トシン、 アデニン、 グァニン及びそれらの誘導体である。
[図面の簡単な説明]
図 1 天然型のオリゴヌクレオチドをェキソヌクレアーゼで分解した時の紫外 部吸収 （2 6 0 n m) の経時変化を示すチャートである。
図 2 本発明のオリゴヌクレオチド （X 2 ) をェキソヌクレアーゼで分解した 時の紫外部吸収 （2 6 0 n m) の経時的変化を示すチャートである] 。
本発明のヌクレオチド類縁体は次のように合成できる。 説明を簡明にするた め、 まず、 上記の式中 Bがゥラシルである化合物を例にとって説明する。
( 1 ) モノマーュニッ 卜の合成
Figure imgf000007_0001
差替え用紙 （規貝 IJ26)
Figure imgf000008_0001
5/1 差替え用紙 （規則 26) 文献既知の化合物である 2' , 3'— 0—シクロへキシリデンーゥリジン （1) を ρ—トルエンスルホニルクロリ ドと反応させて、 化合物 2を得る。 次いで、 こ の化合物を TF Α— Η20中で撹拌することにより、 4'— (ρ— トルエンスルホ ニルォキシメチル） ゥリジンである化合物 3を得る。
化合物 3に 4, 4'ージメ トキシトリチルクロリ ドを反応させて、 5' 位の水酸 基を保護した化合物 4を得る。 さらに、 NaHMDSと反応させることにより、 5'—〇一（4, 4'—ジメ トキシトリチル） 一3'—0， 4'—メタノウリジン、 ィ匕 合物 5を得る。
(2) オリゴヌクレオチド類縁体の合成
化合物 5に 2—シァノエチル一N， N, Ν',Ν'—テトライソプロピルホスホ ロジアミダイトを作用させ、 アミダイ卜体 （化合物 6) を得、 DN Αシンセサイ ザ一を用いて種々のアンチセンスオリゴマー類縁体を合成する。 次いで、 得られ るアンチセンスオリゴマー類縁体を逆相カラムを用 t、て精製し、 精製物の純度を 逆相 HL PCで分析することにより、 精製オリゴヌクレオチド類縁体の生成を確 認できる。
化合物 5のモノマーュニッ トは、 オリゴヌクレオチド類縁体の中に 1つ以上存 在させることができる。 また、 オリゴヌクレオチド類縁体中の 2力所以上の位置 に、 1又は 2以上の天然ヌクレオチドを介して隔離された状態で存在させても良 い。 本発明によれば、 本発明のヌクレオチド類縁体を必要な位置に必要な数 （長 さ） で導入したアンチセンス分子を合成することができる。 ヌクレオチド類縁体 全体の長さとしてヌクレオシド単位が 2〜50、 好ましくは 10〜30個である。 このようなアンチセンス分子は、 ェキソヌクレアーゼに対してばかりでなく、 エンドヌクレアーゼに対しても分解されにくく、 生体への投与後、 長く生体内に 存在することができる。 そして、 例えば、 センス鎖 RN Aと二重鎖を形成して病 因となる生体内成分 （タンパク質） の形成 （翻訳） を阻害したり、 二重鎖 DNA との間で三重鎖を形成して mRN Aへの転写を阻害する。 また、 感染したウィル スの増殖を阻害すると考えられる。
これらのことから、 本発明のヌクレオチド類縁体を用いたアンチセンス分子は、 抗腫瘍剤、 抗ゥィルス剤をはじめとした遺伝子の働きを阻害して疾病を治療する 医薬品としての有用性が期待されている。
本発明のヌクレオチド類縁体を用いたアンチセンス分子は、 例えば緩衝剤およ び Zまたは安定剤等の慣用の助剤を配合して非経口投与用製剤とすることができ る。 また、 局所用の製剤としては、 慣用の医薬用担体を配合して軟膏、 クリーム、 液剤、 または膏薬等に調剤できる。
本発明のヌクレオチド類縁体の合成を実施例及び製造例により、 さらに詳しく 説明する。
実施例 1 ：モノマ一ュニッ 卜の合成
(1) 2'， 3'—0—シクロへキシリデン一 4' — (p—トルエンスルホニルォ キシメチル） ゥリジン （化合物 2) の合成
窒素気流下、 文献 (G. H. Jones et al， J. Org. Chem. , 44, 1309(1979)) 既知の 化合物 1 (956mg、 2. 7 Ommo 1 ) の無水ピリジン （13. 5ml) 溶 液に室温で p-トルエンスルホニルクロライ ド （77 lmg, 4.05mmo 1 ) を加え、 60°Cで 5時間撹拌した。 反応液に飽和重曹水を加えた後、 ベンゼンで 3回抽出した。 有機層を飽和食塩水で 1回洗浄後、 無水 MgS04にて乾燥した。 溶媒を減圧留去し、 ベンゼンで 3回共沸し、 得られた粗生成体をシリカゲルカラ ムクロマトグラフィー （CHC l 3 : MeOH=15 ： 1) により精製後、 ベン ゼン Zへキサンにて再沈殿し、 白色粉末 （化合物 2) (808mg( 1. 59m mo 1 , 59%) を得た。
即 104-106。C (benzene/hexane).
IR(KBr)： v ma x3326, 2929， 2850, 1628, 1577, 1544, 1437, 1311, 1244cin- 1 ·
'H-NMRCacetone-de)： δ 1.45-1.67(10H, m， cyclohexyl -）， 2.45 (3H, s， φ - CH ， 3.71 (2H, ABq, J=ll.5Hz, C5' - H2)， 4.20(2H, ABq, J=10.5Hz， C4' -CH20Ts), 4.92(1H, d， J2， 3 ' =6.4Hz, C3' - H), 5.05, 5.06(1H, dd, 2， =3.7Hz, J2， 3' =6.4Hz, C2' - H)， 5.60(1H, d， W 5， =7.3Hz, C4-H), 5.75(1H, d, 2' =3.7Hz, CI' -H), 7.48(2H， d, J=8.2Hz, φ),1.1 7(1H, d， ' 5' =7.8Hz, C5- H), 7.81 (2H, d, J=8.2Hz, ø)， 10.10(1H, s， NH).
13C-N R(acetone-d6)： δ 21.5, 24.1, 24.5, 25.5, 34.8.36.9, 63.5, 69.7, 82.5, 84.7, 87.8， 92.9, 102.9.115.4, 128.8, 130.8, 133.9, 142.7, 145.9， 151.3.163.5.
ass(EI):m/z 481(M+-H20).
Anal Calcd. for C23H28N209S'l/3 H20:C, 53.69 ;H, 5.61 ;N, 5.44 ;S, 6.22. Found :C, 53.99 ;H, 5.48;N,5.42;S, 6.10.
(2) 4' ― (p—トルエンスルホニルォキシメチル） ゥリジン （化合物 3) の合成
上記の化合物 2 (107mg, 0. 2 lmmo 1 ) を TFA— H20 (98 ： 2, lm l ) 中室温で 10分間撹拌した。 反応液を減圧留去し、 ェタノ一ルを加 えて 3回共沸した。 得られた粗生成体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (CHC 13： Me OH= l 0 ： 1) により精製し、 白色粉末 （化合物 3) (8 5. Omg, 0. 2 Ommo 1 , 94%) を得た。
mpll9-120°C.
IR(KBr)：レ raa x3227, 3060, 2932, 2837, 1709, 1508, 1464, 1252， 978, 835, 763, 556cm"1. ^-NMRCacetone-de): (5 2.3K3H, s, 0-CH3).2.84(3H, s, OH), 3.7K2H, s, C5* -H2),
4.13， 4.20 (2H, ABq, J=10.9Hz， C4' -CH2OTs), 4.28, 4.3K1H, dd, 2， =8.6Hz, J2' 3' =
5.6Hz, C2' - H)， 4.36(1H, d, J2' 3， =5.6Hz, C3* - H), 5.54(1H, d， J4， 5， =7.9Hz， C4-H), 5.
75(1H, d, Ji* 2 =6.6Hz, CI' - H)， 7.32(2H, d， J=7.9Hz), 7.67(2H, d, J=8.2Hz), 7.70(1H, d, W 5' =8.3Hz. C5-H), 10.14(1H, s, NH).
13C-NMR(acetone-d6)： δ 21.5, 63.7, 70.8, 72.7， 74.6, 86.8, 88.8, 103.1, 128.8, 130.
7， 133.9, 141.7， 145.8, 151.8, 163.9.
ass(EI):m/z 256(M+- OTs).
(3) 5' — O— (4， 4' —ジメ トキシトリチル） 一 4' — (p—トルエン スルホニルォキシメチル） ゥリジン （化合物 4) の合成
上記化合物 3 (1. 13 g, 2. 64mmo 1 ) に無水ピリジンを加えて 3回 共沸した後、 無水ピリジン （14. 5m l ) 溶液とし、 窒素気流下、 室温で 4， 4ージメ トキシトリチルクロライド （1. 07 g, 3. 1 7mmo 1 ) を加え室 温で 16時間撹拌した。
反応溶液に飽和重曹水を加えた後、 CH2C I 2で 3回抽出した。 有機層を飽和 食塩水で 1回洗浄後、 無水 MgS04にて乾燥した。 溶媒を減圧留去し、 ベンゼ ンで 2回共沸した後、 得られた粗生成体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (CHC 13： E t3N： MeOH=60 ： 2 ： 0→60 ： 2 ： 4) により精製後、 エタノールノへキサンにて再沈殿し、 白色粉末 （化合物 4) (868mg, 1. 06mmo 1 , 41%) を得た。
rapl04-105°C (Et20/hexane).
IR(KBr)： v max3396, 2937, 2737, 2675, 2493, 1691, 1474， 1397, 1173, 1035cm-1.
■H-NMRCacetone-de): <52.4K3H, s， 0-CH3), 3.22.3.33(2H, ABq, J=9.9Hz, C5' - H2), 3.79(6H, s， p-OCHs- Φ ), 4.29(1H, dd, J 2' =6.3Hz, J2' 3， =5.6Hz， C2' - H), 4.34, 4.41 (2H, ABq, J=ll.2Hz, C4' -CH3OTs), 4.40(1H, d, J2' 3' =5.6Hz， C3' - H), 5.35(1H, d, J4， 5 ' =8.3Hz， C4-H), 5.82(1H, d, ' % =6.3Hz， CI' - H)， 6.89(4H, d， J=8.9Hz， p-CH30- φ ), 7.26-7.41 (7H, m), 7.43(1H, d, J4' 5， =8.3Hz, C5- H), 7.70 (2H, d， J=8.3Hz).
13C-NMR(acetone-d6)： <521.6, 55.5， 64.6, 70.7, 72.7, 74.3, 85.8.87.8, 88.9, 102.8, 114.0, 127.7, 128.7, 128.8, 130.7, 130.9, 131.0, 133.9， 141.1， 145.5， 151.4, 159.7, 163.3.
Anal Calcd for C38H38N20uS'l/3 H20:C, 61.95 ;H, 5.29 ;N, 3.80 ;S, 4.34. Found :C, 62.37 ;H, 5.26 ;N, 3.60 ;S, 4.15.
(4) 5'— 0— (4, 4'—ジメ トキシトリチル） 一3'—0, 4'—メタノ
ゥリジン （化合物 5) の合成
窒素気流下、 化合物 4 (735mg, 0. 90 mm 0 1 ) の無水 TH F ( 11. lm 1 ) 中に室温で NaHMDS (8. 96 mmo 1 ) の無水ベンゼン溶液 （4 ml) を加え、 室温で 48時間撹拌した。 反応溶液に飽和重曹水を加え、 CH2 C 12にて 3回抽出した。 有機層を飽和食塩水で 1回洗浄した後、 無水 M gS04 にて乾燥した。
溶媒を減圧留去し、 得られた粗生成体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (CHC 13： E t 3N： Me OH=60 ： 2 ： 0→60 ： 2 ： 4) により精製後、 エタノールノへキサンにて再沈殿し、 白色粉末 （化合物 5) (26 lmg, 0. 47mmo 1 , 52%) を得た。
mpl20-121°C (Et20/hexane).
IR(KBr)： v max3395, 3222, 3062, 2930, 1693, 1508, 1461, 1385, 1298, 1252, 1177, 1034 cm—
1 H-NMR(acetone-d6)： δ 2.92(1Η, br s, OH), 3.47， 3.5K2H, ABq, J=10.3Hz, C5' - H2),
3.85(6H, s, p-OCHs- Φ ), 4.36(1H, dd, J 2' =4.3Hz, J2' 3， =4.3Hz, C2' -H), 4.52, 4.83
(2H, ABq, 1=1.7Hz, C4' -CH20-)( 5.1K1H, d, J2' 3， =4.3Hz, C3' - H), 5.57(1H， d, J4， 5' = 7.7Hz, C4-H), 6.5K1H, d, 2， =7.7Hz, CI' -H), 6.96(4H, d， J=8.6Hz， p-CH3O-_0), 7.
39-7.4K7H. ni, φ), 7.52(2H. d， J=5.1Hz, φ ), 7.7K1H, d， W 5' =8.6Hz, C5-H).
13C-NMR(acetone-d6)： δ 55.4, 64.1， 75.5, 79.0, 85.5, 86.2, 87.1， 88.8, 103.3, 113.
7, 113.9, 127.6， 128.4, 128.6, 128.8, 129.9, 130.9， 131.1, 136.3, 136.4, 141.2, 145.
7, 151.6, 159.6, 163.4.
Mass(EI) :m/z 558(M+), 303(DmTr+), 256(M+- DmTr), 227( +-DmTrOCH2).
(5) 2' — 0_ [2—シァノエトキシ （ジイソプロピルァミノ） ホスフイノ] — 5'— 0—（4, 4'—ジメ トキシトリチル） 一 3'— 0， 4'—メタノ ゥリジン （化合物 6) の合成
化合物 5 (261mg， 0. 47mmo 1 ) 、 ジイソプロピルアンモニゥムテ トラゾリ ド （39. 9mg, 0. 23mmo 1 ) を無水 CH3CNで 3回共沸し た後、 無水 CH3CN—無水 THF (5 : 1、 10ml) 溶媒とし、 窒素気流下、 2—シァノエチル N, N, N'， N'—テトライソプロピルホスホロジアミダイ ト (0. 18ml, 0. 56mmo 1 ) を加え、 室温で 30分撹拌した。
溶媒を減圧留去し、 得られた粗生成体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(無水 A c OE t ： E 13N= 100 ： 4) により精製後、 無水ジェチルエーテ ルノへキサンにて再沈殿し、 白色粉末 （化合物 6) (34 Omg, 0. 47mm o 1 , 100%) を得た。
10 rap94-96°C (Et20/hexane).
IR(KBr)： v 2966, 2252.2049, 1697, 1607, 1509, 1460, 1298, 1253.1038.
31P- MR(acetone-d6): 5150.8, 151.2. 実施例 2：ォリゴヌクレオチド類縁体の合成
5'-d(GCG-X-TTTTTGCT)-3' (XT5)
5'-d(GCGTT-X-TTTGCT)-3' (T2XT3)
5'-d(GCGTTT-X-TTGCT)-3' (T3XT2) x = 5'-d(GCGTTTTT-X-GCT)-3' (T5X)
5'-d(GCG-X-X-TTTTTGCT)-3' (X2T4)
Figure imgf000014_0001
5,-d(GCGTT-X-X-TTTGCT)-3' (T2X2T2)
5'-d(GCGTTTT-X-X-GCT)-3' (T4X2)
5'- d(GCG- X-X-X-X-X-X- GCT)-3' (X6)
(1) 5' -GCGXTTTTTGCT-3' (XT5) の合成
3' 一水酸基が支持体に結合した 5' — 0—ジメ トキシトリチルチミジン （0. 2 mo 1 ) のジメ トキシトリチル基 （DMT r基） をトリクロ口酢酸によって 脱保護し、 その 5' —水酸基に 5' —0—ジメ トキシトリチルデォキシシチジン 2—シァノエチルホスホアミダイ ト誘導体をテトラゾールにより縮合し、 未反応 の 5' —水酸基を無水酢酸と 4ージメチルァミノピリジン、 2, 4, 6—コリジ ンでァセチル化した後、 ヨウ素と 2， 4, 6—コリジン、 水によりリンを酸化し た。
同様に脱保護、 縮合、 ァセチル化、 酸化を繰り返した。 （4員環アミダイ ト誘 導体も他のアミダイ ト誘導体と同様に用いることができた。 ） 最後の 5' — 0— ジメ トキシトリチルデォキシグアノシン 2—シァノエチルホスホアミダイ ト誘導 体を縮合し、 酸化して得られた 12— me rのオリゴマー （ここまでの工程は Ph armacia社製 DNA合成装置 Gene Assembler Plusにより行なった。 ） を濃アンモ
11 ニァ水 lm 1によって支持体から切り出すとともに、 リンからシァノエチル基を はずし、 さらにアデニン、 グァニン、 シトシンの保護基をはずした。
得られた 5' — 0—ジメ トキシトリチルオリゴヌクレオチドは、 逆相カラム ( illipore, Oligo- PakTMSP)上で卜リフルォロ酢酸 5 m 1により DMT r基をは ずし、 引き続き精製を行ない、 目的の 5' -GCGXTTTTTGCT-3' (XT 5) (0. 02mmo 1 , 10 %) を得た。 得られたオリゴヌクレオチド 類縁体の純度は逆相 H P L Cにより確認した。
(2) 5' -GCGTTXTTTGCT-3' (T2XT3) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGTTXTTTGCT-3' (T2X T3) (0. 04mmo l， 20%) を得た。
(3) 5' -GCGTTTXTTGCT-3' (T3XT2) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGTTTXTTGCT-3' (T3X T2) (0. 03mmo 1, 15%) を得た。
(4) 5' -GCGTTTTTXGCT-3" (T5X) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGTTTTTXGCT-3' (T5X) (0. 02mmo 1, 10%) を得た。
(5) 5' -GCGXXTTTTGCT-3' (X2T4) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGXXTTTTGCT-3' (X2T 4) (0. 03 mm o l， 15%) を得た。
(6) 5' -GCGTTXXTTGCT-3' (T2X2T2) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGTTXXTTGCT-3' (T2X 2T2) (0. 03mmo l， 15%) を得た。
(7) 5' -GCGTTTTXXGCT-3' (T4X2) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGTTTTXXGCT-3' (T4X 2) (0. 03mmo 1 , 15%) を得た。
(8) 5' -GCGXXXXXXGCT-3' (Χ6) の合成
(1) と同様にして、 目的の 5' -GCGXXXXXXGCT-3' (X6) (0. 03mmo 1 , 15%) を得た。
12 実験例 1 ：融解温度 （Tm) の測定
実施例 2で合成した種々のアンチセンス分子であるオリゴマー鎖 （アンチセン ス鎖） とセンス鎖とをァニーリング処理したものの Tmを測定することにより、 アンチセンスのハイプリッ ド形成能を調べた。
終濃度をそれぞれ、 N a C 1 100 mM、 リン酸ナトリゥム緩衝液 （ p H 7. 2) 10mM、 アンチセンス鎖 4 M：、 センス鎖 4〃 Mとしたサンプル溶液 （5 00 L) を沸騰水中に浴し、 10時間かけて室温まで冷却した。 分光光度計 (Shimadzu, UV-2100 PC) のセル室内に結露防止のために窒素気流を通 し、 サンプル溶液を 5 °Cまで徐々に冷却し、 さらに 20分間 5°Cに保った後、 測 定を開始した。 温度は 90°Cまで毎分 0. 2°Cずつ上昇させ、 0. 1°C間隔で 2 60 nmにおける紫外部吸収を測定した。 なお温度上昇により濃度が変化するの を防ぐため、 セルは蓋付きのものを用い、 サンプル溶液表面に鉱油を 1滴添加し 測定を行った。
測定に用いたアンチセンス鎖及びセル鎖の配列を次に示す。 ©
なお、 本明細書では便宜上天然ヌクレオシドを T. C, A, Gのように大文字 で表記し、 本発明における類縁体をそれぞれ t， c, a， gのように小文字で表 記する。
13 ォリゴマーの融解温度
—― ~~~~ - 一—————〜 センス鎖 Complementary DNA Complemeniary NA アンチセンス鎖 5' - AGCAAAAAACGC-3' 5'-AGCAAAAAACGC-3'
5'-GCGTTrTTTGCT-3' (T6) 45
5 GCGXTTTTTGCT- 3' (XT5) 45
5' - GCGTTXTTTGCT- 3' (T2XT3) 44
5'-GCGTTTXTTGCT- 3' (T3XT2) 3
5'-GCGTT TTXGCT- 3' (T5X) 45
34
5' - GCGTTXXTTGCT- 3' ( 2X2T2) 37 42
5'"GCGTTTTXXGCT-3' (T4X2) 37 43
5 -GCGXXXXXXGCT-3' (X6) N.D. 28
N.D. ： 検出されず
寸寸 実験例 2 ：酵素耐性の測定
天然型及び非天然型の下記のォリゴヌクレオチドについて、 ォリゴヌクレオチ ドを 3' 側から分解するェキソヌクレアーゼに対する耐性を調べた。
15分間 37 °Cに保ったオリゴヌクレオチドのバッファー溶液 （10 M, 4 00 ^ 1) に、 蛇毒ホスホジエステラーゼのバッファー溶液 （0. O OSUZm 1， 400 / 1 ) を混合した。 オリゴマーの分解による紫外部吸収 （260 nm) の増加を SH IMADZU UV— 2100 PCを用い、 37 °Cで経時的に測定 した。 用いたバッファーの組成は T r i s HC 1 (pH8. 6) 0. 1M, N a C 1 0. 1M, MgC 12 14 mMであり、 測定前に十分に脱気した。
測定に用いたオリゴヌクレオチドの配列を以下に示す。 ◎
天然鎖 5' — GTTTTTTTTTTTC— 3'
X2 5' -GTTTTTTTTTXXC-3' 半減期 （ 11/2) の測定
測定開始時 （ t = 0 ) 及び紫外部吸収 （ 260 n m) の増加が認められなくなつ た時点での紫外部吸収値の平均値を示す時間を半減期 （t1/2) とした。 結果は 次の通りである。
オリゴヌクレオチド 11/2 (秒）
天然鎖 350
X2 1390 また、 紫外部吸収の経時変化を示すチャートを図 1 (天然鎖） 及び図 2 (X2) に示した。 天然鎖は酵素反応開始後、 約 30分で紫外部吸収値が一定となり、 X 2では約 90分で一定となつた。
15 配列表
出願人の氏名：今西武
発明の名称：新規ヌクレオチド類縁体 整理番号：
出願番号：
出願日 ：平成 9年 11月 18 曰
優先権番号：特願平 8— 306585号 優先日 ：平成 8年 11月 18曰
配列の数： 10 配列番号： 1
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' — GCGXTTTTTGCT— 3' 配列番号： 2
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' -GCGTTXTTTGCT-3' 配列番号： 3
配列の長さ ： 12
16 配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' -GCGTTTXTTGCT-3' 配列番号： 4
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー ：直鎖状
配列：
5' -GCGTTTTTXGCT-3' 配列番号： 5
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー ：直鎖状
配列：
5' — GCGXXTTTTGCT - 3' 配列番号： 6
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
17 5' -GCGTTXXTTGCT-3' 配列番号： 7
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' -GCGTTTTXXGCT-3' 配列番号： 8
配列の長さ ： 12
配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' -GCGXXXXXXGCT-3' 配列番号： 9
配列の長さ ： 13
配列の型： ヌクレオチド
鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' -GTTTTTTTTTTTC-3' 配列番号： 10
配列の長さ ： 13
18 配列の型： ヌクレオチド、 ヌクレオチド類縁体 鎖の数： 1本鎖
トポロジー：直鎖状
配列：
5' -GTTTTTTTTTXXC-3'
19

Claims

請求の範囲
一般式
Figure imgf000023_0001
[式中、 Bは同一または異なってもよく、 ピリミジンもしくはプリン核酸塩基ま たはそれらの誘導体である] で表されるモノマー単位を 1または 2以上含有する ォリゴまたはポリヌクレオチド類縁体。
2. 上記ォリゴヌレオチドもしくはボリヌクレオチドが合計 2〜 5 0個のヌク レオチド単位からなることを特徴とする請求項 1記載のオリゴまたはポリヌクレ ォチド類縁体。
3. 一般式：
Figure imgf000023_0002
[式中、 Bはピリミジンもしくはプリン核酸塩基又はそれらの類縁体であり、 Yi及び Y2は同一もしくは異なり、 水素または水酸基の保護基である] で表わさ れるヌクレオシド類縁体。
20
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Cited By (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6303315B1 (en) 1999-03-18 2001-10-16 Exiqon A/S One step sample preparation and detection of nucleic acids in complex biological samples
US6316198B1 (en) 1999-03-18 2001-11-13 Exiqon A/S Detection of mutations in genes by specific LNA primers
US6639059B1 (en) 1999-03-24 2003-10-28 Exiqon A/S Synthesis of [2.2.1]bicyclo nucleosides
US6670461B1 (en) 1997-09-12 2003-12-30 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6734291B2 (en) 1999-03-24 2004-05-11 Exiqon A/S Synthesis of [2.2.1]bicyclo nucleosides
US7053207B2 (en) 1999-05-04 2006-05-30 Exiqon A/S L-ribo-LNA analogues
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
WO2007106690A2 (en) 2006-03-15 2007-09-20 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Degenerate nucleobase analogs
US7504495B2 (en) 2003-11-20 2009-03-17 Exiqon A/S Quencher compositions comprising anthraquinone moieties
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
EP2179996A1 (en) 2000-11-28 2010-04-28 Applera Corporation Sulfonated diarylrhodamine dyes
EP2196544A1 (en) 2001-11-21 2010-06-16 Applied Biosystems, LLC Kit for ligation detection assays using codeable labels
US7745122B2 (en) 2005-07-15 2010-06-29 Applied Biosystems, Llc Analyzing messenger RNA and micro RNA in the same reaction mixture
EP2208796A2 (en) 2005-01-06 2010-07-21 Applied Biosystems, LLC Polypeptides having nucleic acid binding activity and compositions and methods for nucleic acid amplification
WO2010135384A2 (en) 2009-05-21 2010-11-25 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Universal tags with non-natural nucleobases
EP2256213A1 (en) 2000-06-06 2010-12-01 Applied Biosystems, LLC Asynchronous primed PCR
US8017338B2 (en) 2007-11-20 2011-09-13 Life Technologies Corporation Reversible di-nucleotide terminator sequencing
US8084557B2 (en) 2007-12-18 2011-12-27 Basell Polyolefine Gmbh Gas-phase process for the polymerization of alpha-olefins
EP2405024A1 (en) 2005-07-15 2012-01-11 Life Technologies Corporation Hot start reverse transcription by primer design
EP2458011A1 (en) 2005-10-03 2012-05-30 Life Technologies Corporation Compositions, methods, and kits for amplifying nucleic acids
WO2012096523A2 (en) 2011-01-11 2012-07-19 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by pto cleavage and extension assay
EP2484781A2 (en) 2006-08-01 2012-08-08 Applied Biosystems, LLC Detection of analytes and nucleic acids
WO2012134195A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension-dependent cleavage
WO2012149339A2 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Sequenom, Inc. Quantification of a minority nucleic acid species
WO2012150835A2 (en) 2011-05-04 2012-11-08 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by po cleavage and hybridization
WO2013133561A1 (en) 2012-03-05 2013-09-12 Seegene, Inc. Detection of nucleotide variation on target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension assay
EP2770065A1 (en) 2013-02-25 2014-08-27 Seegene, Inc. Detection of nucleotide variation on target nucleic acid sequence
US8828700B2 (en) 2005-09-09 2014-09-09 Life Technologies Corporation SSB-polymerase fusion proteins
WO2014142575A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Seegene, Inc. Quantification of target nucleic acid using melting peak analysis
WO2014152673A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Quantitative assessment for cap efficiency of messenger rna
WO2014152659A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Quantitative assessment for cap efficiency of messenger rna
WO2015008985A1 (en) 2013-07-15 2015-01-22 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension-dependent immobilized oligonucleotide hybridization
US8962247B2 (en) 2008-09-16 2015-02-24 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non invasive prenatal diagnoses
WO2015057008A2 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence on solid phase by pto cleavage and extension using hcto assay
WO2015057998A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 The University Of British Columbia Device for formulating particles at small volumes
EP2913402A1 (en) 2010-07-16 2015-09-02 Tocagen Inc. Retrovirus detection
US9605313B2 (en) 2012-03-02 2017-03-28 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
WO2017075421A1 (en) 2015-10-29 2017-05-04 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Modification of 3' terminal ends of nucleic acids by dna polymerase theta
WO2017098468A1 (en) 2015-12-09 2017-06-15 Novartis Ag Label-free analysis of rna capping efficiency using rnase h, probes and liquid chromatography/mass spectrometry
US9920361B2 (en) 2012-05-21 2018-03-20 Sequenom, Inc. Methods and compositions for analyzing nucleic acid
US9926593B2 (en) 2009-12-22 2018-03-27 Sequenom, Inc. Processes and kits for identifying aneuploidy
EP3354750A1 (en) 2012-07-18 2018-08-01 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Kit of normalizing biological samples
WO2019066461A2 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Seegene, Inc. DETECTION OF TARGET NUCLEIC ACID SEQUENCES BY CLEAVAGE ANALYSIS AND EXTENSION OF PTO
WO2019116346A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Novartis Ag Polya tail length analysis of rna by mass spectrometry
US10738358B2 (en) 2008-09-16 2020-08-11 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
EP3797860A1 (en) 2016-01-06 2021-03-31 The University of British Columbia Bifurcating mixers and methods of their use and manufacture
US11060145B2 (en) 2013-03-13 2021-07-13 Sequenom, Inc. Methods and compositions for identifying presence or absence of hypermethylation or hypomethylation locus
WO2021198883A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Janssen Biopharma, Inc. Synthesis of oligonucleotides and related compounds
US11332791B2 (en) 2012-07-13 2022-05-17 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
US11365447B2 (en) 2014-03-13 2022-06-21 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
WO2022256597A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Translate Bio, Inc. Assay for quantitative assessment of mrna capping efficiency
US11591645B2 (en) 2017-08-31 2023-02-28 Seegene, Inc. Evaluation of performance of components using a pair of dimer-forming primers
WO2023043280A1 (ko) 2021-09-17 2023-03-23 주식회사 씨젠 합성 비자연 염기를 포함하는 태그 올리고뉴클레오타이드를 이용한 타겟 핵산 서열의 검출

Families Citing this family (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US7812149B2 (en) * 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US5898031A (en) * 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US20040147022A1 (en) * 1996-06-06 2004-07-29 Baker Brenda F. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US20050119470A1 (en) * 1996-06-06 2005-06-02 Muthiah Manoharan Conjugated oligomeric compounds and their use in gene modulation
WO2005121368A1 (en) * 2004-06-03 2005-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric gapped oligomeric compositions
US20040171031A1 (en) * 1996-06-06 2004-09-02 Baker Brenda F. Sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2998800A (en) 1999-03-24 2000-10-09 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The N-acylphosphoramidites and their use in oligonucleotide synthesis
WO2000078775A1 (fr) * 1999-06-22 2000-12-28 Sankyo Company, Limited Nouveaux nucleosides pontes en 3'-4' et analogues d'oligonucleotides
AU5429000A (en) * 1999-06-25 2001-01-31 Sankyo Company Limited Novel bicyclonucleoside derivatives
AU2002303176A1 (en) * 2001-03-27 2002-10-15 University Of Delaware Genomics applications for modified oligonucleotides
US20040096880A1 (en) * 2001-08-07 2004-05-20 Kmiec Eric B. Compositions and methods for the treatment of diseases exhibiting protein misassembly and aggregation
US7468244B2 (en) * 2001-09-27 2008-12-23 University Of Delaware Polymorphism detection and separation
US20030207327A1 (en) * 2001-09-27 2003-11-06 Kmiec Eric B. Coisogenic eukaryotic cell collections
EP1442137A4 (en) * 2001-11-07 2005-08-31 Applera Corp UNIVERSAL NUCLEOTIDES FOR NUCLEIC ACID ANALYSIS
US7355037B2 (en) * 2001-12-03 2008-04-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Thermolabile hydroxyl protecting groups and methods of use
ATE458047T1 (de) * 2002-03-07 2010-03-15 Univ Delaware Verfahren zur verstärkung der oligonucleotid- vermittelten nucleinsäuresequenzänderung unter verwendung von zusammensetzungen mit einem hydroxyharnstoff
US20030198960A1 (en) * 2002-04-01 2003-10-23 Wenhong Fan Signal amplifying targeted reporters for biological and chemical sensor applications
US7005265B1 (en) 2002-06-20 2006-02-28 Wenhong Fan Nonenzymatic catalytic signal amplification for nucleic acid hybridization assays
AU2003282477A1 (en) * 2002-10-07 2004-05-04 Napro Bio Therapeutics, Inc. Methods and compositions for reducing screening in oligonucleotide-directed nucleic acid sequence alteration
US20040219565A1 (en) 2002-10-21 2004-11-04 Sakari Kauppinen Oligonucleotides useful for detecting and analyzing nucleic acids of interest
EP1562971B1 (en) * 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
WO2004044132A2 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
WO2004090154A2 (en) 2003-04-01 2004-10-21 Activx Biosciences, Inc. Acyl- phosphate and phosphonate probes and methods of their synthesis and use in proteomic analysis
AU2004253455B2 (en) 2003-06-03 2011-03-03 Eli Lilly And Company Modulation of survivin expression
ATE553216T1 (de) 2003-06-20 2012-04-15 Exiqon As Sonden, bibliotheken und kits zur analyse von nukleinsäuregemischen und verfahren zu deren konstruktion
EP1636342A4 (en) * 2003-06-20 2008-10-08 Isis Pharmaceuticals Inc OLIGOMERIC COMPOUNDS FOR GENE MODULATION
US20050053981A1 (en) * 2003-09-09 2005-03-10 Swayze Eric E. Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini
AR045937A1 (es) 2003-09-18 2005-11-16 Lilly Co Eli Modulacion de la expresion del factor de iniciacion eucariotico eif4e
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
US8192937B2 (en) * 2004-04-07 2012-06-05 Exiqon A/S Methods for quantification of microRNAs and small interfering RNAs
AU2005252663B2 (en) * 2004-06-03 2011-07-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
US7884086B2 (en) * 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
WO2006065751A2 (en) * 2004-12-13 2006-06-22 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cpg oligonucleotide prodrugs, compositions thereof and associated therapeutic methods
US20060166238A1 (en) * 2004-12-22 2006-07-27 Ramsing Niels B Probes, libraries and kits for analysis of mixtures of nucleic acids and methods for constructing the same
WO2006069584A2 (en) * 2004-12-29 2006-07-06 Exiqon A/S NOVEL OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND PROBE SEQUENCES USEFUL FOR DETECTION AND ANALYSIS OF microRNAs AND THEIR TARGET mRNAs
US20060153745A1 (en) * 2005-01-11 2006-07-13 Applera Corporation Fluid processing device for oligonucleotide synthesis and analysis
US20070065840A1 (en) * 2005-03-23 2007-03-22 Irena Naguibneva Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of microRNAS and their target mRNAS
EP1971371B1 (en) 2005-12-01 2015-08-05 Pronai Therapeutics, Inc. Cancer therapies and pharmaceutical compositions used therein
WO2007073149A1 (en) 2005-12-22 2007-06-28 Keygene N.V. Alternative nucleotides for improved targeted nucleotide exchange
US20100286044A1 (en) * 2005-12-29 2010-11-11 Exiqon A/S Detection of tissue origin of cancer
JP5425474B2 (ja) * 2006-01-26 2014-02-26 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド ハンチンチン対する、組成物及びその使用
DK2314594T3 (da) 2006-01-27 2014-10-27 Isis Pharmaceuticals Inc 6-modificerede bicykliske nukleinsyreanaloger
EP2023939B1 (en) 2006-05-05 2012-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of pcsk9
US7666854B2 (en) * 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2007134181A2 (en) * 2006-05-11 2007-11-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
US20090023221A1 (en) * 2006-05-19 2009-01-22 Exigon A/S Oligonucleotide probes useful for detection and analysis of microrna precursors
EP2023938A4 (en) * 2006-05-23 2010-11-10 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF THE EXPRESSION OF ChREBP
US20080076674A1 (en) * 2006-07-06 2008-03-27 Thomas Litman Novel oligonucleotide compositions and probe sequences useful for detection and analysis of non coding RNAs associated with cancer
WO2008011473A2 (en) 2006-07-19 2008-01-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to hbxip
US8188255B2 (en) * 2006-10-20 2012-05-29 Exiqon A/S Human microRNAs associated with cancer
WO2008046911A2 (en) 2006-10-20 2008-04-24 Exiqon A/S Novel human micrornas associated with cancer
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
EP2102340A2 (en) 2006-11-27 2009-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
US8293684B2 (en) * 2006-11-29 2012-10-23 Exiqon Locked nucleic acid reagents for labelling nucleic acids
EP3536788A1 (en) 2006-12-21 2019-09-11 QIAGEN GmbH Microrna target site blocking oligos and uses thereof
US20090137504A1 (en) * 2006-12-21 2009-05-28 Soren Morgenthaler Echwald Microrna target site blocking oligos and uses thereof
WO2008086807A2 (en) * 2007-01-19 2008-07-24 Exiqon A/S Mediated cellular delivery of lna oligonucleotides
US8999634B2 (en) 2007-04-27 2015-04-07 Quest Diagnostics Investments Incorporated Nucleic acid detection combining amplification with fragmentation
US20100261175A1 (en) * 2007-06-15 2010-10-14 Exiqon A/S Use of short oligonucleotides for reagent redundancy experiments in rna functional analysis
EP3561494B1 (en) 2007-12-06 2022-03-02 Genalyte, Inc. METHOD FOR IDENTIFYING A SEQUENCE OF NUCLEOTIDES IN AN UNKNOWN SPECIES OF NUCLEIC ACID &#xA;AND DEVICE FOR CARRYING OUT THE METHOD
US20090326049A1 (en) * 2008-04-04 2009-12-31 Alexander Aristarkhov Blocking oligos for inhibition of microrna and sirna activity and uses thereof
US20100113284A1 (en) * 2008-04-04 2010-05-06 Alexander Aristarkhov Small interfering rna (sirna) target site blocking oligos and uses thereof
US8901095B2 (en) * 2008-07-29 2014-12-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Selective inhibition of polyglutamine protein expression
EP2347247B1 (en) 2008-10-27 2019-06-26 Genalyte, Inc. Biosensors based on optical probing and sensing
WO2010074562A1 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Keygene N.V. Use of double stranded rna to increase the efficiency of targeted gene alteration in plant protoplasts
US20110196141A1 (en) * 2009-09-07 2011-08-11 Council Of Scientific & Industrial Research Locked and unlocked 2'-o phosphoramidite nucleosides, process of preparation thereof and oligomers comprising the nucleosides
ES2772825T3 (es) 2009-09-11 2020-07-08 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulación de la expresión de huntingtina
US8927271B1 (en) * 2010-01-21 2015-01-06 Jack T. Johansen Compositions and methods for detecting target analytes
WO2011134474A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Exiqon A/S In situ hybridization method and buffer
WO2012006551A2 (en) 2010-07-08 2012-01-12 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Neuroprotective molecules and methods of treating neurological disorders and inducing stress granules
CA3060724A1 (en) 2010-11-05 2012-05-10 Genalyte, Inc. Optical analyte detection systems and methods of use
EP2646549B1 (en) 2010-12-02 2015-02-18 Keygene N.V. Targeted alteration of dna
WO2012074386A1 (en) 2010-12-02 2012-06-07 Keygene N.V. Targeted alteration of dna with oligonucleotides
EP2742135B2 (en) 2011-08-11 2020-06-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified gapped oligomeric compounds and uses thereof
US20130261010A1 (en) 2012-03-12 2013-10-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Optical analyte detection systems with magnetic enhancement and methods of use
CA2890725A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Pronai Therapeutics, Inc. Methods of using biomarkers for the treatment of cancer by modulation of bcl2|expression
EP2929050A1 (en) 2012-12-10 2015-10-14 AdvanDx, Inc. Use of probes for mass spectrometric identification of microorganisms or cells and associated conditions of interest
WO2014134144A1 (en) 2013-02-28 2014-09-04 The General Hospital Corporation Mirna profiling compositions and methods of use
EP2961841B1 (en) 2013-03-01 2020-01-22 National University Corporation Tokyo Medical and Dental University Chimeric single-stranded antisense polynucleotides and double-stranded antisense agent
US9983206B2 (en) 2013-03-15 2018-05-29 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Methods and compositions for enhancing immunoassays
AU2014272526A1 (en) 2013-05-30 2015-12-10 National University Corporation Tokyo Medical And Dental University Double-stranded agents for delivering therapeutic oligonucleotides
AU2014282666A1 (en) 2013-06-16 2016-01-07 National University Corporation Tokyo Medical And Dental University Double-stranded antisense nucleic acid with exon-skipping effect
WO2015075166A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treatment of a bacterial infection
WO2015118407A2 (en) 2014-01-29 2015-08-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Oligonucleotides and methods for inhibiting or reducing bacterial biofilms
AU2015272128B2 (en) 2014-06-10 2021-10-28 Erasmus University Medical Center Rotterdam Antisense oligonucleotides useful in treatment of Pompe disease
WO2016027168A2 (en) 2014-08-20 2016-02-25 Lifesplice Pharma Llc Splice modulating oligonucleotides and methods of use thereof
CA3007152A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Erasmus University Medical Center Rotterdam Enzymatic replacement therapy and antisense therapy for pompe disease
NL2017294B1 (en) 2016-08-05 2018-02-14 Univ Erasmus Med Ct Rotterdam Natural cryptic exon removal by pairs of antisense oligonucleotides.
NL2017295B1 (en) 2016-08-05 2018-02-14 Univ Erasmus Med Ct Rotterdam Antisense oligomeric compound for Pompe disease
WO2019076919A1 (en) 2017-10-17 2019-04-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) COMBINED TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS
EP3997225A1 (en) 2019-07-10 2022-05-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of epilepsy
WO2021074657A1 (en) 2019-10-17 2021-04-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combination treatment for cystic fibrosis
US20230016983A1 (en) 2019-11-19 2023-01-19 lNSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTÉ ET DE LA RECHERCHE MÉDICALE) Antisense oligonucleotides and thier use for the treatment of cancer
JP2023540429A (ja) 2020-07-10 2023-09-25 アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル） てんかんを治療するための方法及び組成物
WO2023152369A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Nucleic acid mir-9 inhibitor for the treatment of cystic fibrosis
WO2024017990A1 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating chronic pain disorders

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0680688A (ja) * 1992-09-03 1994-03-22 Asahi Breweries Ltd ４’−メチルヌクレオシド誘導体

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5192749A (en) * 1990-05-21 1993-03-09 Syntex (U.S.A.) Inc. 4'-substituted nucleosides

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0680688A (ja) * 1992-09-03 1994-03-22 Asahi Breweries Ltd ４’−メチルヌクレオシド誘導体

Cited By (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8034909B2 (en) 1997-09-12 2011-10-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6670461B1 (en) 1997-09-12 2003-12-30 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US8153365B2 (en) 1997-09-12 2012-04-10 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7034133B2 (en) 1997-09-12 2006-04-25 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US8080644B2 (en) 1997-09-12 2011-12-20 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6316198B1 (en) 1999-03-18 2001-11-13 Exiqon A/S Detection of mutations in genes by specific LNA primers
US6303315B1 (en) 1999-03-18 2001-10-16 Exiqon A/S One step sample preparation and detection of nucleic acids in complex biological samples
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US6734291B2 (en) 1999-03-24 2004-05-11 Exiqon A/S Synthesis of [2.2.1]bicyclo nucleosides
US6639059B1 (en) 1999-03-24 2003-10-28 Exiqon A/S Synthesis of [2.2.1]bicyclo nucleosides
US7053207B2 (en) 1999-05-04 2006-05-30 Exiqon A/S L-ribo-LNA analogues
EP2316975A1 (en) 2000-06-06 2011-05-04 Applied Biosystems, LLC Asynchronous primed PCR
EP2256213A1 (en) 2000-06-06 2010-12-01 Applied Biosystems, LLC Asynchronous primed PCR
EP2179996A1 (en) 2000-11-28 2010-04-28 Applera Corporation Sulfonated diarylrhodamine dyes
EP2221347A1 (en) 2000-11-28 2010-08-25 Applera Corporation Sulfonated diarylrhodamine dyes
EP2196544A1 (en) 2001-11-21 2010-06-16 Applied Biosystems, LLC Kit for ligation detection assays using codeable labels
US7504495B2 (en) 2003-11-20 2009-03-17 Exiqon A/S Quencher compositions comprising anthraquinone moieties
EP2208796A2 (en) 2005-01-06 2010-07-21 Applied Biosystems, LLC Polypeptides having nucleic acid binding activity and compositions and methods for nucleic acid amplification
EP2813581A1 (en) 2005-01-06 2014-12-17 Applied Biosystems, LLC Polypeptides having nucleic acid binding activity and compositions and methods for nucleic acid amplification
US9267130B2 (en) 2005-01-06 2016-02-23 Applied Biosystems, Llc Polypeptides having nucleic acid binding activity and compositions and methods for nucleic acid amplification
EP2405024A1 (en) 2005-07-15 2012-01-11 Life Technologies Corporation Hot start reverse transcription by primer design
US8487085B2 (en) 2005-07-15 2013-07-16 Applied Biosystems, Llc Analyzing messenger RNA and micro RNA in the same reaction mixture
US7745122B2 (en) 2005-07-15 2010-06-29 Applied Biosystems, Llc Analyzing messenger RNA and micro RNA in the same reaction mixture
US9422603B2 (en) 2005-07-15 2016-08-23 Applied Biosystems, Llc Analyzing messenger RNA and micro RNA in the same reaction mixture
EP2308990A1 (en) 2005-07-15 2011-04-13 Life Technologies Corporation Analyzing messenger RNA and micro RNA in the same reaction mixture
US8962254B2 (en) 2005-07-15 2015-02-24 Applied Biosystems, Llc Analyzing messenger RNA and micro RNA in the same reaction mixture
US8828700B2 (en) 2005-09-09 2014-09-09 Life Technologies Corporation SSB-polymerase fusion proteins
US9580743B2 (en) 2005-09-09 2017-02-28 Life Technologies Corporation SSB-polymerase fusion proteins
EP2458011A1 (en) 2005-10-03 2012-05-30 Life Technologies Corporation Compositions, methods, and kits for amplifying nucleic acids
WO2007106690A2 (en) 2006-03-15 2007-09-20 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Degenerate nucleobase analogs
EP2484781A2 (en) 2006-08-01 2012-08-08 Applied Biosystems, LLC Detection of analytes and nucleic acids
EP3305915A1 (en) 2006-08-01 2018-04-11 Applied Biosystems, LLC Detection of analytes and nucleic acids
US8017338B2 (en) 2007-11-20 2011-09-13 Life Technologies Corporation Reversible di-nucleotide terminator sequencing
US8715938B2 (en) 2007-11-20 2014-05-06 Life Technologies Corporation Reversible di-nucleotide terminator sequencing
US8084557B2 (en) 2007-12-18 2011-12-27 Basell Polyolefine Gmbh Gas-phase process for the polymerization of alpha-olefins
US10738358B2 (en) 2008-09-16 2020-08-11 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
US8962247B2 (en) 2008-09-16 2015-02-24 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non invasive prenatal diagnoses
US10612086B2 (en) 2008-09-16 2020-04-07 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
EP3597657A1 (en) 2009-05-21 2020-01-22 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Universal tags with non-natural nucleobases
WO2010135384A2 (en) 2009-05-21 2010-11-25 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Universal tags with non-natural nucleobases
EP3150619A1 (en) 2009-05-21 2017-04-05 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Universal tags with non-natural nucleobases
US9926593B2 (en) 2009-12-22 2018-03-27 Sequenom, Inc. Processes and kits for identifying aneuploidy
US11180799B2 (en) 2009-12-22 2021-11-23 Sequenom, Inc. Processes and kits for identifying aneuploidy
EP2913402A1 (en) 2010-07-16 2015-09-02 Tocagen Inc. Retrovirus detection
EP2826868A1 (en) 2011-01-11 2015-01-21 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by pto cleavage and extension assay
EP3543352A1 (en) 2011-01-11 2019-09-25 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by pto cleavage and extension assay
EP2708608A1 (en) 2011-01-11 2014-03-19 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by pto cleavage and extension assay
WO2012096523A2 (en) 2011-01-11 2012-07-19 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by pto cleavage and extension assay
WO2012134195A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension-dependent cleavage
EP3378954A1 (en) 2011-04-29 2018-09-26 Sequenom, Inc. Quantification of a minority nucleic acid species
WO2012149339A2 (en) 2011-04-29 2012-11-01 Sequenom, Inc. Quantification of a minority nucleic acid species
WO2012150835A2 (en) 2011-05-04 2012-11-08 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequences by po cleavage and hybridization
US11312997B2 (en) 2012-03-02 2022-04-26 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
US10738359B2 (en) 2012-03-02 2020-08-11 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
US9605313B2 (en) 2012-03-02 2017-03-28 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
WO2013133561A1 (en) 2012-03-05 2013-09-12 Seegene, Inc. Detection of nucleotide variation on target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension assay
US11306354B2 (en) 2012-05-21 2022-04-19 Sequenom, Inc. Methods and compositions for analyzing nucleic acid
US9920361B2 (en) 2012-05-21 2018-03-20 Sequenom, Inc. Methods and compositions for analyzing nucleic acid
US11332791B2 (en) 2012-07-13 2022-05-17 Sequenom, Inc. Processes and compositions for methylation-based enrichment of fetal nucleic acid from a maternal sample useful for non-invasive prenatal diagnoses
EP3354750A1 (en) 2012-07-18 2018-08-01 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Kit of normalizing biological samples
EP2770065A1 (en) 2013-02-25 2014-08-27 Seegene, Inc. Detection of nucleotide variation on target nucleic acid sequence
WO2014142575A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Seegene, Inc. Quantification of target nucleic acid using melting peak analysis
US11060145B2 (en) 2013-03-13 2021-07-13 Sequenom, Inc. Methods and compositions for identifying presence or absence of hypermethylation or hypomethylation locus
WO2014152659A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Quantitative assessment for cap efficiency of messenger rna
WO2014152673A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Quantitative assessment for cap efficiency of messenger rna
EP3495505A1 (en) 2013-03-14 2019-06-12 Translate Bio, Inc. Quantitative assessment for cap efficiency of messenger rna
WO2015008985A1 (en) 2013-07-15 2015-01-22 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence by pto cleavage and extension-dependent immobilized oligonucleotide hybridization
WO2015057998A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 The University Of British Columbia Device for formulating particles at small volumes
WO2015057008A2 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Seegene, Inc. Detection of target nucleic acid sequence on solid phase by pto cleavage and extension using hcto assay
US11365447B2 (en) 2014-03-13 2022-06-21 Sequenom, Inc. Methods and processes for non-invasive assessment of genetic variations
WO2017075421A1 (en) 2015-10-29 2017-05-04 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Modification of 3' terminal ends of nucleic acids by dna polymerase theta
WO2017098468A1 (en) 2015-12-09 2017-06-15 Novartis Ag Label-free analysis of rna capping efficiency using rnase h, probes and liquid chromatography/mass spectrometry
EP3656872A1 (en) 2015-12-09 2020-05-27 Novartis AG Label-free analysis of rna capping efficiency using rnase h, probes and liquid chromatography/mass spectrometry
EP3797860A1 (en) 2016-01-06 2021-03-31 The University of British Columbia Bifurcating mixers and methods of their use and manufacture
US11591645B2 (en) 2017-08-31 2023-02-28 Seegene, Inc. Evaluation of performance of components using a pair of dimer-forming primers
WO2019066461A2 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Seegene, Inc. DETECTION OF TARGET NUCLEIC ACID SEQUENCES BY CLEAVAGE ANALYSIS AND EXTENSION OF PTO
WO2019116346A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Novartis Ag Polya tail length analysis of rna by mass spectrometry
WO2021198883A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Janssen Biopharma, Inc. Synthesis of oligonucleotides and related compounds
WO2022256597A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Translate Bio, Inc. Assay for quantitative assessment of mrna capping efficiency
WO2023043280A1 (ko) 2021-09-17 2023-03-23 주식회사 씨젠 합성 비자연 염기를 포함하는 태그 올리고뉴클레오타이드를 이용한 타겟 핵산 서열의 검출

Also Published As

Publication number Publication date
ATE232880T1 (de) 2003-03-15
DE69719220T2 (de) 2004-01-22
AU4966997A (en) 1998-06-10
ES2192672T3 (es) 2003-10-16
EP0963997B1 (en) 2003-02-19
DE69719220D1 (de) 2003-03-27
EP0963997A4 (en) 2000-11-29
US6043060A (en) 2000-03-28
EP0963997A1 (en) 1999-12-15

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