WO1984003300A1 - Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells - Google Patents

Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells Download PDF

Info

Publication number
WO1984003300A1
WO1984003300A1 PCT/SU1984/000007 SU8400007W WO8403300A1 WO 1984003300 A1 WO1984003300 A1 WO 1984003300A1 SU 8400007 W SU8400007 W SU 8400007W WO 8403300 A1 WO8403300 A1 WO 8403300A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
στσ
мину
σστ
interferon
σдσ
Prior art date
Application number
PCT/SU1984/000007
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Valdis Martynovich Berzin
Alexandr Jurievich Tsimanis
Jury Ivanovich Vishnevsky
Uldis Rudolfovich Apsalon
Andris Valdisovich Dishler
Elmar Yanovich Gren
Evgeny Davydovich Sverdlov
Galina Sergeevna Monastyrskaya
Sergei Anatolievich Tsarev
Alexandr Anatolie Smorodintsev
Vladimir Ivanovich Iovlev
Guna Yanovna Feldmane
Arnis Ernestovich Duk
Original Assignee
Inst Organicheskogo Sinteza Ak
Inst Bioorg Chimii
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Organicheskogo Sinteza Ak, Inst Bioorg Chimii filed Critical Inst Organicheskogo Sinteza Ak
Priority to GB08426019A priority Critical patent/GB2150573B/en
Publication of WO1984003300A1 publication Critical patent/WO1984003300A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/56—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/811—Interferon
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
    • Y10S930/142—Interferon

Definitions

  • Poli- ⁇ fractions receive two-way calculator for oligo- ⁇ -cellulose.
  • the synthesis of ⁇ -D ⁇ is carried out using synthetic oligomers that incorporate gay and international communication in the field of broadcasting termination. Sin ⁇ ez v ⁇ tse ⁇ i ⁇ susches ⁇ vlyayu ⁇ with ⁇ m ⁇ schyu ⁇ asheya ⁇ a ⁇ len ⁇ va D ⁇ - ⁇ lime ⁇ azy I.
  • the method of treating the claimed patient is the Czech Republic, including the isolation of the matrix ( ⁇ ) -m from the industrial treatment of people - 3 - the synthesis of a gay host, which is integrated into the plasmid ⁇ 322 by means of the control panel ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ s ⁇ in ⁇ m, s ⁇ glasya ⁇ iz ⁇ b ⁇ e ⁇ eniyu in ⁇ aches ⁇ - ve gene in ⁇ e ⁇ e ⁇ yaa is ⁇ lzuyu ⁇ gene in ⁇ e ⁇ e ⁇ na ⁇ g s ⁇ by the following ⁇ e ⁇ vichn ⁇ y s ⁇ u ⁇ u ⁇ y D ⁇ : ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ S ⁇ S ⁇ S ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ - ⁇ ⁇ C ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ S ⁇ S ⁇ S ⁇ ⁇
  • the inactive mixture (600 ⁇ l) contains: 50 m ⁇ TRIS- ⁇ _ ( ⁇ 8.1), 6 m ⁇ m_ ⁇ 1 2 , 5 m ⁇ diet, 150 m ⁇ ⁇ , mixture ⁇ ntended ⁇ réelle. ⁇ , ⁇ , ⁇ , sy ⁇ - 0.5 m ⁇ each, 7 mcg / ml powder ( ⁇ ) -m- ⁇ , 20 mcg / ml old and 200 units of the agent of the resulting transhase. The reaction is transferred to the course of the first hour at 42 °.
  • Section 2a Because it is synthesized, 0 distinguishes how it is written in Section 2a.
  • the unit at the & 50 high-molecular area the unit is converted to a unit of / 850 ⁇ l /, with a room rate of 30 mt of acetate ( ⁇ 4.5), 0.3 ⁇ Ga ⁇ . ⁇ ⁇ , 2 ⁇ g / ml ⁇ - ⁇ ⁇ . sos and 115 units / ml of nuclease Bd *.
  • the mixture is incubated for 5 30 minutes at 37 ° and the two-integer ⁇ - ⁇ is isolated as described in section 2a.
  • reaction mixture contains 140 mg of potassium hydroxide 0.4 ⁇ ⁇ - ⁇ ⁇
  • the reaction product is distinguished by the description in Section 2a of the method.
  • a small ( ⁇ b) connection to a widespread industrial plant in the plasmid ⁇ 323 is connected by the following method.
  • 125 ⁇ l of the mixture contains 200 mixtures ⁇ 322, a widespread and tested organic product, and 400 units.
  • ml of terminal deoxynucleotidyltransphase The mixture is incubated for 5 minutes at 37 ° and the synthesis product isolated as described in section 2a.
  • P ⁇ i ⁇ m ⁇ schi ⁇ es ⁇ zh ⁇ tszh ⁇ yan ⁇ g ⁇ ayaalzhza was ideya ⁇ i ⁇ itsi ⁇ vana ⁇ lazmida ⁇ zh ⁇ 05- ⁇ , s ⁇ de ⁇ zhaschaya gay ⁇ eiya ⁇ e ⁇ e ⁇ nai ⁇ d ⁇ n ⁇ lem ⁇ i ⁇ an ⁇ v ⁇ g ⁇ ⁇ m ⁇ a.
  • the yield of the patient is 4–6 * 10 units. from the first litigation of the bacterium susceptia. Intended use

Description

ЛΕЙΚΟΙЩГΑΡΗЫЙ ЧΕЛΟΒΕЧΕСΚИЙ ИΗΤΕΡΦΕΡΟΗ л И СПΟСΟБ ΕГΟ ПΟЛУЧΕΗИЯ Β ΕΑΚΤΕΡИΑЛЬШΧ ΚЛΕΤΚΑ2 Οбласτь τеχяиκи Ηасτοящее изοбρеτение οτнοсиτся κ геннοй инженеρии, а τοчяее κасаеτся нοвοгο лейκοциτаρяοгο челοвечесκοгο инτеρφеροна н и сποсοба егο ποлучеяия в баκτеρиальяыχ κлеτκаχ»
Пρедшесτвующий уροвеяь τеχниκи Инτеρφеροш, в τοм числе лейκοциτаρный инτеρφеροн, πρедсτавляюτ сοбοй κласс иядуцибельяыχ белκοв ποзвοнοч- ныχ, προявляющиχ анτивиρусную и аяτимиκροбную аκτивнοсτь, учасτвугощиχ в ρегуляции иммунοлοгичесκиχ ρеаκций κлеτκи и οбладающиχ ρадиοπροτеκτορным и προτивοοπуχοлевым дей- сτвием. Лейκοциτаρные инτеρφеροяы челοвеκа сοсτазляюτ мульτигеннοе семейсτвο с не менее двенадцаτью членами, чτο дοκазанο аяализοм сτρуκτуρы χροмοсοмнοй ДΗΚЙ Κ-ДΗΚ, синτезиροваянοй яам^ΡΗΚ инτеρφеροнοв, а τаκже анализοм амияοκислοτяοй ποследοваτельнοсτи иядивидуальныχ белκοв из геτеροгеняοй смеси лейκοциτаρныχ ияτеρφеροнοв челοвеκа. Извесτяы ρазличные лейκοциτаρные челοвечесκие ияτеρ- φеροны, ποлучеяяые πуτем геннοй инженеρии, наπρимеρ ин- τеρφеροя Α, προдуциρуемый ρеκοмбинанτяοй ДΗΚ в κлеτκаχ
Ε сοϋ /Οοеάάеϊ Б. У. еЬ аϊ , Ηитаη ΙеикοсуЬе ι -Ье егοη ρгοάисесϊ . Ъу Ε. сοϋ ϊз Ыο1ο§ιса11у ас"Ыνе , Νа"Ьиге, 1980 , 282, 411-416/ или лейκοциτаρный челοвечесκий инτеρφеροн "? /Οвчиняиκοв Ю.Α. и дρуτие "Пρямая эκсπρессия гена челοвβ- чесκοгο лейκοциτаρяοгο инτеρφеροна Ρ Β κлеτκаχ Ε сοϊϊ" , Дοκлады Ακадемии науκ,Ι982, 265, 238-242/, πρедсτавляющий сοбοй белοκ, сοсτοящий из 166 аминοκислοτ сο следующеϊ ποследοваτельяοсτью: σϋьρд зъσΝΗΕΑЪϊьι-Αдмσнιзρρзσз БΗΗББ'θΡдΕΕΡБαждρдκΑαΑΙзν
ЬΗ ΜϊддΤΡΗЬΡ5ΤΚБ55 Τ ν д5ЬЬΕΚΡЗΤΕΙ-ΝςςЬ)ΙБΜ Сνϊд ν νΕΕ Ι-Μ ΝνБ5ΙЬΑν ΚΥΡдΗΙΤЬΥΙΤΞΚΚΥ5Ρσ : ΞννΚ βΙ Κ5Ρ5Ь5 ΙΡдΞΗЬйΗΚ
Α - аϊа ; С - суз ; Τ) - ааρ ; Ε - §1и Ρ - ρЬ.е ; - §1у; Η - Ыз ; I - ϋе; Κ - Ιуз ; Ъ - Ιеи; Ш - те"Ь - азη; Ρ - ρгο С} - §1η ; Η - аг§; 5 - зег; Τ - "Ыιг V - νаϊ ; Ψ - "Ьгρ ; Υ - "Ьуг. - 2 -
Для ποлучеяия уκазаннοгο инτеρφеροна суммаρяунз ияφορмациοяяую ΡΗΚ ποлучаюτ из лейκοциτοв челοвечесκοй κροви, иядуциροванныχ виρусοм Ηьюκасτля, гуанидияχлορид- -гуанидияτиοциаяаτяым меτοдοм. Пοли-Α φρаκциюмτΡΗΚ ποлу- чаюτ двуκρаτнοй οчисτκοй на οлигο-άΤ-целлюлοзе. Синτез κ-ДΗΚ προвοдяτ, исποльзуя синτеτичесκий οлигοяуκлеοτщд, κοмπлемеяτаρяыи геяу инτеρφеροна в οбласτи τеρминации τρаясляции. Синτез вτοροϊ цеπи οсущесτвляюτ с ποмοщью φρашеяτа Κленοва ДΗΚ-ποлимеρазы I. Пοлучеяную τаκим οό- ρазοм двуχцеποчечную ДΗΚ ποсле ρеκοясτρуκции всτρаиваюτ в веκτορную πлазмиду ρΒн 322 ποд κοяτροлем τρиπτοφанοвο- гο προмοτορа. Уκазаянοй ρеκοмбияаяτяοй πлазмидοй τρансφορ- миρуюτ κлеτκи Ε.ΟΟΙΙ.
Уκазанные лейκοциτаρные челοвечесκие ияτеρφеροяы οτ- личаюτся мелщу сοбοй κаκ πο эφφеκτивнοсτж ποдавления ци- τοπаτжчесκοгο дежсτвжя οднοгο и τοгο же виρуса, τаκ и πο аκτивнοсτи προτив ρазличныχ виρусοв. Ρасκρыτие изοбρеτения Β οснοву изοбρеτения ποлοжена задача сοзданжя нοвο- гο лежκοцжτаρнοгο челοвечесκοгο инτеρφеροна, οбладающегο сπециφичнοсτью анτивиρуснοгο и анτиπροлиφеρаτивнοгο дей- сτвия.
Заявляемый лежκοциτаρный челοвечесκиж инτеρφеροн ж являеτся яοвым и в лиτеρаτуρе не οπисан. Задача ρешена τем, чτο, сοгласнο изοбρеτенжю, заяв- ляемый инτеρφеροн πρедсτавляеτ сοбοй белοκ сο следую- щей аминοκислοτнοи ποследοваτельнοсτью: СБЬΡдτнзьαшϊ ьιι-ι-Αдм&нιзнρзсжБйΥБ αρραжνΡБ^αρдκ ςΑϊзΑΡ
ΗЖϊдςϊΡЖЬΡЗΪΚΒЗЗΑ ТОΕΙΙ БΚΡ ΙΒ^Ρдαы^ЬБ СνταЬΤανΕΕΙ ^Ε ϋЗΙЬΑ7ЖУΡдΗΙ ЬΥ С ΥЗ СΑ 7ΕΥ ΗΑΞΩйЗΡ35'З ϊдκσЬШ Β
Заявляемыи яοвый лейκοциτаρный челοвечесκиж инτеρ- φеροн ιг οбладаеτ сπециφичнοсτью анτивиρусяοгο и аяτи- προлиφеρаτивнοгο дейсτвия. Иеποльзοваяие эτοгο яοвοгο ви- да инτеρφеροяа ποзвοлжτ ρасшжρжτь аρсенал сρедсτв для селеκτивяοгο вοздейсτвия на виρусы и злοκачесτвеняые οб- ρазοвания.
Сποсοб ποлученжя заявляемοгο лейκοциτаρнοгο челοве- чесκοгο ияτеρφеροна ж,вκлючающшϊ выделение маτρичнοи ποлж (Α)-м-ΡΗΚ из индуциροваняыχ лейκοциτοв челοвеκа, ζνκεΑϊ - 3 - синτез геяа жнτеρφеροяа, всτρаиваяие в веκτορяую πлаз- миду ρБΕ 322 ποд κοнτροлем τρиπτοφаяοвοгο προмοτορа и τρансφορмацжю ποлучеяяοй ρеκοмбжнанτнοй ДΗΚ κлеτοκ баκ- τеρий Ε. сοϊϊ, в κοτοροм, сοгласяο изοбρеτению, в κачесτ- ве гена инτеρφеροяа исποльзуюτ ген инτеρφеροна ιг сο сле- дующей πеρвичнοй сτρуκτуροй ДΗΚ: τοτ ΟΑΤ στο σστ ΟΑΟ ΑСΙ СΑС Αοσ σια οοτ ΑΑΙ ΑΟΟ ΑΟΟ σσσ τια ΑΤΑ στσ στο σσΑ ΟΑΑ ΑΙΟ ΟΟΑ ΑΟ-Α Αϊσ τστ СΑΙ τισ гсс τσσ στσ ΑΑΟ ΟΑΟ ΑΟΑ ΤΑΤ ΟΑΤ ττσ οσ ττσ σσσ ΟΑΟ ΟΑС στσ ΤΤΤ"ΟΑΪ σσσ ΑΑσ СΑΟ ττσ ΟΑΟ ΑΑ σστ σΑ σσσ дτσ τστ σσσ ττσ σΑΤ ΟΑΟ Ατσ дτσ σΑ ΟΑΟ Ασσ ττσ ΑΑΙ στσ ττσ Αα ΑΟΑ Α ΟΑΤ ΤΟΑ τστ σστ σστ τσσ ΟΑΤ ΟΑΟ дσσ στσ στд σ-Ασ ΑΑΑ ττσ Τ ΑΤΤ ΟΑΑ σττ ττσ ΟΑΟ σ στσ ΑΑΤ ΟΑС СΤΑ СΑΑ σσσ τστ στσ ΑΟΑ ΟΑΟ ΟΑΟ сττ σσσ στσ ΟΑΑ ΟΑΟ ΑΤΤ σσσ στσ ΑΤΟ ΑΑΤ ΟΑΟ ΟΑС τσσ Αϊσ στσ οστ οτο ΑΟΟ ΑΑΑ ΓΑС ΤΙΓ ΟΑΑ ΑΟΑ ΑΤΟ ΑСΤ σττ ΤΑΤ στο ΑΙΟ ΟΟΟ ΑΑΟ ΑΑΑ ΤΑС ΑΟС σστ τοτ οσσ шοο ΟΑΟ ατг οτσ ΑΟΑ ΟΟΑ ΟΑΑ ΑΤΟ ΑΤΟ ΑΟΑ ισσ ττσ τστ τττ
ГСΛ ΑСΑ ΑΑС ГΤΟ 0ΑΑ ΑΑΑ ΟΟΑ ΙΤΑ ΑΟΑ Α00 ΑΑΟ ΟΑΤ
Ιучшжи ваρжаяτ ρасκρыτия изοбρеτеяжя
Для лучшегο ποнимаяжя яасτοящегο изοбρеτения πρивο- диτся следующий πρимеρ οсущесτвления сποсοба ποлучения лейκοциτаρнοгο челοвечесκοгο инτеρφеροнаΗ" в баκτеρиаль- ныχ κлеτκаχ. Ιϊρимеρ.
I. Βыделенже, οчисτκа и χаρаκτеρжсτиκа ποли (Α)- -м-ΡБΚ
1,4-Κг^ иядуциροваяныχ виρусοм Сендай οчищеняыχ .
ЛеЙΚΟЦИΤΟΒ κρθΒИ челοвеκа (Саη-Ьеϊϊ Κ.е-Ь аϊ., Μе-Ыι.Εηζ., 1981, 28, ρаг-ь Α, 29-38) ποсле 4,5 часοв жнκубации οсаж- даюτ ценτρиφугжροванием (30 мжн, 1500 οб/мин) и сусπея- диρуюτ в 100 мл 0,85% ΚаСϊ. Пοлж (Α)-ΗУΙ-ΡΗΚ жз сусπензжи лежκοциτοв выделяюτ и οчшцаюτ πο οπисаннοй меτοдиκе (Ιаβа-Ьа 3. е* аϊ. , Νа-Ьиге, 1980, 284. 316-320) , вκлючаю- щей аφφияяую χροмаτοгρаφию яа οлигο-а.τ -целлюлοзе, φρаκ- циοниροвание в лияейяοм гρадиенτе 5-20 ) саχаροзы и κοнценτρиροвание 12 з φρаκции на οлигο-аτ - целлюлοзе. Κρиτеρием κачесτва ποли (Α)-м-ΡΗΚ служжτ ее маτρичная - 4 - аκτивнοсτь в οοциτаχ Χеηοриз ϊаеν±з, κοτορая сοсτавляеτ 3000 ед.аκτ.инτеρφеροяа яа мκг ΡБΚ πρи сρеднем выχοде 4-5 мκг 12з ποли (Α)-**м-ΡΗΚ.
2. Сжнτез κ-ДΗΚ на маτρице ποлж (Α)-м-ΡΗΚ а) Сжнτез οдяοцеποчечяοй κ-ДΗΚ
Ρеаκциοнная смесь (600 мκл) сοдеρжиτ: 50 мΜ τρис-ΗСЬ _(ρΗ 8,1), 6 мΜм_С12, 5 мΜ диτиοτρеиτ, 150 мΜ ΚСΙ, смесь Ρнϊа. СΤΡ, αΑΤΡ, йΤΤΡ, сйΤΡ- 0,5 мΜ κазκдοгο, 7 мκг/мл ποли (Α)-м-ΡΗΚ, 20 мκг/мл οлигο
Figure imgf000006_0001
и 200 ед.аκτукл οбρаτяοй τρаясκρиπτазы Шν. Ρеаκцию προвοдяτ в τечеяие I часа πρи 42°. Пο οκοячаяии сияτеза κ смесж дοбавляюτ ЭДГΑ /эτжленджамжяτеτρаацеτаτ/ дο κοяценτρациж 10 мΜ, смесь деπροτеинизиρуюτ οдним οбъемοм φенοл - СΗСϊ^ (1:1) и вοдную сρеду προπусκаюτ чеρез κοлοнκу (0,4*15 см) с се-5 φадеκсοмδδθ в 10 ьϋ τρис-ΗСΙ- (ρΗ 7,5), 0,25 Μ ϊГаСϊ.
Κοмπлеκс κ-ДΗΚ с ποли (Α)-м-ΡΗΚ из φρаκций οсаждаюτ эτи- лοвым сπиρτοм и οсадοκ ρасτвορяюτ в 50 мκл Η^Ο. Κ ρасτвο- ρу дοбавляюτ 5,1 мκл 5Ν ρасτвορаϊ&ΟΗ и ποсле инκубации •. в τечение 40 минуτ πρи 20° ρасτвορ яейτρализуюτ 8,5 мκл0 3 Μ ацеτаτа яаτρия (ρΗ 4,5) , дοбавляюτ 30 мκл Η^Ο и οд- нοцеποчечную κ-ДΗΚ οсаддаюτ эτилοвым сπиρτοм. б) Сияτез двуχцеποчечяοж κ-ДБΚ Οсадοκ οднοцеποчечнοж κ-ДΗΚ ρасτвορяюτ в 100 мκл ρе- 5
Figure imgf000006_0002
лимеρазы I /φρаιменτ Κленοва/ и инκубиρуюτ в τечение 30 мияуτ πρж 37°. Пο οκοячанжж ρеаκцжж προдуκτ синτеза0 выделяюτ κаκ οπисанο в ρазделе 2а. Пοсле χροмаτοгρаφии на сеφадеκсе &50 высοκοмοлеκуляρную φρаκцию πеρевοдяτ в ρасτвορ /850 мκл/, еοдеρнащии 30 мΜ ацеτаτа наτρия (ρΗ 4,5), 0,3 ΜϊГаΟΙ, 3 ΉΜ. ΖηЗΟ^ , 2 мκг/мл τ-ΡΗΚ Ε. сοϊϊ и 115 ед.аκτ./мл нуκлеазыБд*. Смесь инκубиρуюτ в τечение5 30 минуτ πρи 37° и двуχцелοчечяую κ-ДΗΚ выделяюτ κаκ οπисаяο в ρазделе 2а.
3. Κлοяжροвание в κлеτκаχ Ε. сοϊз. Κ-Ι2ЬΕΙ веκτορяыχ πлазмид ρΒΕ 322, яесущиχ в Ε ь I сайτе всτροен- - 5 - ные меτοдοм οлигο (άС)-οлигο (аο- ) κοняеκτοροв геяы ияτеρφеροна а) Пρисο.едияение κοннеκτοροв
Οлигο (αС) κοяяеκτορы κ двуχцеποчечяοй Κ-ДΗΚ πρисοе- диняюτ следующжм οбρазοм.
20 мκл ρеаκциοянοй смеси сοдеρжиτ 140 мΜ κаκοдилаτ κалия 0,4 ιΜ κ-ДΗΚ τρансφ
Figure imgf000007_0001
προдуκτ ρеаκции выделяюτ πο οπисаянοй в ρазделе 2а меτο- диκе.
Οлигο (αб) κοннеκτορы κ ρасщеπленяοй ρесτρиκτазοй Ρз-Ы πлазмиде ρΒн 322 πρисοединяюτ следующим οбρазοм. 125 мκл ρеаκцжοняοй смеси сοдеρжиτ 200 ιΜ κаκοдилаτ
Figure imgf000007_0002
ρΒκ 322, ρасщеπлеянοй ρесτρиκτазοй йьϊ, и 400 ед.аκτ. мл τеρминальнοй дезοκсинуκлеοτидилτρансφеρазы. Смесь инκу- биρуюτ в τечение 5 минуτ πρи 37° и προдуκτ синτеза выде- ляюτ κаκ οπисаяο в ρазделе 2а.
Β уκазанныχ услοвияχ ρеаκций κ мοлеκуле двуχцеποчеч- яοй κ-ДΗΚ и ρасщеπлеянοй πлазмиды ρΒн 322 πρисοединжлοсь 15-20 мοяοмеρныχ едияиц аСΜΡ и <ιСΜΡ, сοοτвеτсτвеянο. б) Κлοниροвание ρеκοмбинанτныχ ДΗΚ в κлеτκаχ Ε. сοϋ Κ-Ι2 ннι,
20 мκл ρасτвορа 6 яг κ-ДΗΚ и 40 нг веκτορа, ποлучен- яыχ κаκ .οπисаяο в ρазделе За, в 10 мΜ τρис-ΗСЪ (ρΗ 7,5), 0,1 Μ ϊГаСϊ иϊй ЭДГΑ яагρеваюτ в τечение 10 минуτ πρи 65°, 2 часа πρи 42°, οχлаадаюτ в τечение 3 часοв дο 22° и исποльзуюτ для τρаясφορмации πο меτοду /Ба§ег1- м. е* аϊ., Сеηе, 1979, НΚ-Ι2 ΗΕϊ(-Ρ", ρгο,1еи,"Ыιϊ, Ιас
Figure imgf000007_0003
Ι~") . Τаκим πуτем ποлучаюτ 1200 τеτρациκлия (5 мκг/мл) - усτοйчивыχ τρанс- φορмаτοв, из κοτορыχ 98 προявляюτ амπищшшн
(150 мκг/мл) - чувсτвиτельнοсτь и исποльзуюτся для сκρининга ρеκοмбинаяτοв.
4» Οτбορ ρеκοмбжнанτяыχ ДΗΚ, яесущиχ гены лейκο-
Ο^ΥιΡΙ - 6 - циτаρнοгο инτеρφеροна челοвеκа - а) Οτбορ ρеκοмбинаяτяыχ ДΗΚ, несущиχ гены лежκοцж- τаρяοгο инτеρφеροяа челοвеκа οсущесτвляюτ с ποмοщью
32ρ -мечеяыχ синτеτичесκиχ Ι6-членяыχ οлигοяуκлеοτид- ныχ зοядοв с ποследοваτельнοсτью άΤСΤСΑΤСΑΤΤΤСΤССΤ (Α) и αССΤСΤСΑΤСΤСССΤСΑ (Б) , κοмπлеменτаρяые χаρаκτеρным для бοлыπиясτва жзвесτныχ генοв леπκοциτаρяοгο инτеρφеροяа челοвеκа /&οе<Ιάе1 Б.ν. еЪ аϊ., ЫаЪиге,1981,290, 20-26/ κοнсеρваτивным учасτκам яуκлеοτждοв 504-519 κοдиρующей цеπи и нуκлеοτидοв 68-83 яеκοдиρующей цеπи, сοοτвеτсτвея- яο. Для введения 5ι--κοнцевοж меτκж 30 ммοль οлигοяуκлеο- τжда жнκубжρуюτ в τеченже 30 мжнуτ πρж 37° в 20 мκл ρе- аκциοннοи смеси, сοдеρжащей 50 мΜ τρис-ΗСЬ (ρΗ 8,0), 5 мΜ джτиοτρежτ, 7 Ш. м§С12, 3 мκΜ Χ"-^ 32Ρ ΑΤΡ ж 20 ед. аκτ. ποлжнуκлеοτждκжназы φага Τ^- 5 -[_ Ρ| -мечеяый οлж- гοнуκлеοτид οчищаюτ χροмаτοгρаφжей на- сеφадеκсе 050 (0,4-22 см) в Η^Ο. б) Гибρидизация κοлοний на нжτροцеллюлοзяыχ φильτρаχ с 5 - Ρ| мечеными οлигοнуκлеοτждяымж зοядами ϊсг Αρ3 τρансφορманτы выρащиваюτ на яжτροцеллюлοзныχ φжльτρаχ (φ 90 ш) дο ποявления κοлοяий, ποτοм φильτρы πеρенοсяτ на агаρ, сοдеρжащий χлορамφеяжκοл (500* мκг/мл) , ж προдοлжаюτ ияκубацию 18 часοз. Далее φильτρы οбρабаτы- ваюτ 0,5 н ΗаθΗс ποследующей яейτρализацией в I Μ τρис- -ΗСΙ (ρΗ 8,0) ж ваκуумнοй сушκοй (2-4 часа πρи 80°), ж προвοдяτ πρегибρндизацию φильτροв в τеченже 2 часοв πρи 37° в смеси, сοдеρжащей 0,15 Μ τρис-ΗСΙ (ρΗ 8,0), 0,75 Μ ΝаСΙ, 5 мΜ ЭПГΑ, I ιΜ ^ΗΡΟ^, 250 мκг/мл τ-ΡΗΚ ж дο- децжлсульφаτ наτρия, бычий сывοροτοчныж альбумин, φиκοд ж ποливинилπиροллидοя - πο 0,1$ κаждοгο. Пοсле προсушκж яа φильτροвальяοж бумаге φжльτρы смачжваюτ вышеуκазаянοж смесью 500 мκл/φильτρ/, еοдеρжащей Ι'ΙΟ6 имπ/мия/мл
-οлигοяуκлеοτида, заπажваюτ в ποлиэτиленοвыи πаκеτ и инκубиρуюτ в τечеяие 20 часοв πρи 37°. Пοсле гжбρжджзацжи φильτρы πρж 22° τρжжды οτмываюτ ρасτвοροм 0,1 Μ τρжс-ΗСΙ ρΗ 8,0), 0,5 Μ ΕεС 0,1$ дοдецжлсульφаτ наτρжя, высушжваюτ ж авτοгρаφжρуюτ на ρеяτгеяοвсκοй πлея- - 7 - κе в τечеяие 20-70 часοв. Αвτορадиοгρаφия φильτροв вы- явила несκοльκο κοлοяий, ποлοжжτельныχ в гжбρидизацжи с οбеими 5 - Ρ] -мечеяыми οлигοнуκлеοτидными зοндами Α и Б. Ρесτρиκцжοнный анализ πлазмидяοй ДΗΚ из эτиχ κοлο- 5 нжй и аналжз нуκлеοτжднοж ποследοваτельнοсτи всτροеяяοй κ-ДΗΚ ποκазал, чτο οдна ρеκοмбинанτная ДΗΚ ρϊж Ю5 сοдеρжиτ κοροτκую ποследοваτельнοсτь 5 -неτρаяслиρуемοгο учасτκа, κοдиρующую ποследοваτельнοсτь ποлнοгο геяа че- лοвечесκοгο лейκοциτаρяοгο инτеρφеροяа нοвοгο вида лей-0 κοциτаρяοгο ияτеρφеροна И" ж 370 нуκлеοτждοв 3 -неτρан- слиρуемοи часτи геяа.
5. Κοясτρужροвание ρеκοмбинанτныχ ДΗΚ, οбесπечи- вающиχ синτез ияτеρφеροна Νв κлеτκаχ Ε СΟΙΪ а) Плазмида ρϊш Ι05-Ι , яесущая гея πρеияτеρφеροяа Ν ποд κοнτροлем 1; προмοτορа. ДΕЖ ρеκοмбияаяτяοй πлазмж- ды ρϊжϊθδ, сοдеρжащей вышеуποмянуτый гея инτеρφеροяа Ν, выделяюτ из лизаτа τρаясφορмиροваняыχ κлеτοκ Ε.сοϊχ и οчищаюτ на гидροκсиаπаτиτе πο извесτяοй меτοдиκе
/Сοϊшаη Α. е-Ь аϊ. , σ.ΒϊοсΙηет.1978,_91, 303-310/ 50 ΜΚГ ДΗΚ οбρабаτываюτ ρесτρиκτазοй Ρз-ьΙ ж προдуκτы ρасщеπле- нжя ρазделяюτ элеκτροφορеτичесκи в 0,8% агаροзнοм геяе. Φρагменτ ДΗΚ /οκοлο 960 πаρ οснοванжй/, сοдеρжащий гея жнτеρφеροна, выделяюτ элеκτροэлюцией и οчжщаюτ κаκ οπи- санθ Β /Αηа1у1;.3-ΙοсЬет. 1981, 112, 295-298/. Ю ΜΚГ φρагмеяτа ДΗΚ ρасщеπляюτ ρесτρиκτазοй ΒатΗ I, смесь οб- ρабаτываюτ яуκлеазοй з-^/Ο^δ ед.аκτ./мκг ДΗΚ, 30 минуτ πρи 22°/ и бοлыποй ΒашΗ Ι-Ρз-ь I φρагменτ /947 πаρ οсяο- ваяий/ ποсле элеκτροφορеза в 1,5 агаροзяοм гене выделя- юτ аналοгичнο ΡεЬ I φρагмеяτу. 5 мκг веκτορяοй πлазмиды ρΒй322--Ьгρ /Οвчиняиκοв Ю.Α, и дρугие, ДΑΗ, 1982, 265, 238-242/, сοдеρжащей προмοτορ- яый учасτοκ τρиπτοφаяοвοгο οπеροна Ε. сοϋ, ρасщеπляюτ ρесτρиκτазοй Ε. сο. ц. , заποлняюτ лиπκже κοяцы ДΗΚ ποлж- меρазοй I /φρашеяτ Κлеяοва/ πο οπисаянοж меτοджκе /Засктаη Κ. е-Ь аϊ., Ρгοс.ΝаϊΙΑсаό .Зсι υЗΑ,1976,71,4171-4178/ 1,5 мκг веκτορа лигжρуюτ в τечение 18 часοв πρи 10° в 10 мκл буφеρа 50 мΜ τρис-ΗСΙ (ρΗ 7,6), 10 мΜ м§сϊ2, 10 мΜ диτиοτρежτ, сοдеρжащем 0,27 мκг φρа-πйеяτа ДΒΚ с
У?>ιУ ? ( ΟΜΡΙ - 8 - генοм жнτеρφеροяа ж 20 ед.аκτ. Τ^ ДΗΚ-лжгазы. Смесь ρаз- бавляюτ 150 мκл буφеρа 10 мΜ τρжс-ΗСΙ (ρΗ 7,5), 50 мΜ Ηаσϊ , I мΜ ЭЙГΑ ж τρаясφορмиρуюτ κлеτκи Κ.сοϋ Κ-Ι2ΕΕΙ. Τρаясφορманτы, сοдеρжащие гея ияτеρφеροна, οτбжρаюτ гжб- ρидизацией κοлοниж, κаκ οπисанο в ρазделв 46. Пρи ποмοщи ρесτρжκцжοянοгο аяалжза была идеяτиφициροвана πлазмида ρϊж Ι05-Ι, сοдеρжащая гея πρеияτеρφеροнаи ποд κοнτροлем τρиπτοφанοвοгο προмοτορа.
Τρансφορлиροваняые ρϊж Ι05-Ι κлеτκи Ε.сοϋ Κ-Ι2Ε Ι в сρеде, сοдеρжащей (г/л): баκτοτρжπτοя - 10,0, дροажевοй эκсτρаκτ - 5,0,ιϊаСϊ - 10,0, амπициллин 0,02, выρащиваюτ дο οπτжчесκοй шюτяοсτи Αссд - Ι»0» οсаждаюτ ж ρазρушаюτ οбρабοτκοж лжзοцимοм и замορаживаяием - οττаиванием, κаκ
ΟПЖСаяο Β /Жа-Ьиге, 1980, 284, 316-320/. Ακτивнοсτь инτеρφеροяа сοсτавляеτ 0,5 - 1,0 * ΙΟ6 ед.аκτ. яа I л баκτеρиальнοж сусπеязии. б) Плазмида эκсπρессиж зρелοгο инτеρφеροяа й"
5 мκг бοлыпοгο ΒатΗΙ-Ρз-ьΙ φρагменτа /ДΗΚ ρϊж 105/ ποдвеρгаюτ часτжчяοму гждροлизу' ρесτρиκτазοж ЗаиЗΑ /2 ед.аκτ./мκг ДΗΚ, 5 мжяуτ πρж 37°/» смесь φρаг- меяτοв ρазделяюτ элеκτροφορезοм в 1 ,5% агаροзнοм геле и выделяюτ φρаιменτ длжнοй в 869 нуκлеοτждοв, сοдеρжащжж ген зρелοгο жнτеρφеροна без πеρвοгο κοдοяа. Κ эτοг-лу φρагменτу πρисοединяюτ синτеτжчесκиж οлигοнуκлеοτид /ДΑΗ, 1982, 265, 238-212/ с ΕеοκΙ и Заи ЗΑ лишшми κοн- цами , лигиρуюτ πο Ρз-ь I и Εсο κϊ сайτам веκτορнοж πлаз- миды ρΒ 322. Ρеκοмбинанτнοй ДΗΚ τρаясφορмиρуюτ κлеτκж Ε.сοϋ и ποсле гибρидизацжи с зοядамж ж ρесτρжκцжοннοгο аяалжза ДΗΚ жз τρансφορманτοв οτбжρаюτ πлазмиду ρ-ШϊΙ8, яесущую мοдиφжцжροваяный ген зρелοгο жнτеρφеροяа н. Κο- ροτκий Εсο Εϊ - Ρа-Ь I φρаιменτ πлазмиды ρϊжϊδ с мοдиφи- циροваяным генοм ияτеρφеροяа лигиρуюτ с Ρνи II - Εсο нϊ φρагмеяτοм 340 πаρ οсяοваний/ ДΗΚ πлазмиды ρΒκ 322 --Ьгρ, несущим -Ьιρ-προмοτορ, и 0,4 мκг προдуκτа всτρаиваюτ πο Ρз-ь I и заποлненнοму ΕсοΕ I сажτу веκτορяοж πлазмиды ρΒн 322» Пοсле τρаясφορмацжж κлеτοκ Ε.сοϋ κκϊ οτбжρаюτ 1000 ΤсгΑρ8 κлοнοв, из κοτορыχ ποсле гибρидизациοянοгο и ρесτρжκцжοннοгο аяализа ρеκ^мбинанτны ДΗΚ οτбиρаюτ πлаз- - 9 - миду ρϊж 18-36, сοдеρжащую ποд κοяτροлем τρиπτοφаяοвοгο προмοτορа гея зρелοгο инτеρφеροна ιг.
Βыχοд лейκοциτаρнοгο ияτеρφеροна Ν сοсτавляеτ 4-6*10 ед.аκτ. с I лиτρа баκτеρиальяοй сусπеязии. Пροмышленная πρименимοсτь
Заявляемый лейκοциτаρный челοвечесκий инτеρφеροя Ν οбладаеτ προτивοвиρуснοй аκτивнοсτью и мοжеτ найτж πρи- меяение в медицияе в κачесτве анτжвиρусяοгο, анτжмжκροб- нοгο и προτивοοπуχοлевοгο сρедсτва.

Claims

- 10 -ПΡЩЭДΕΤ Ш0БΡΕΤΕΗИЯ
1. Ιейκοциτаρныж челοвечесκжй жнτеρφеροн υ , πρед- сτавляющий сοбοй белοκ сο следущеϊ аминοκислοτнοж ποсле- дοваτельнοсτью:
5 σБЬΡдΤΗ5ЪСΙ*ΙΚΚΑЫЬЬΑς ΚΙ5ΗЗ,5σЬΚБΚ Бϊ,0ΡΡ Ε7 ΒαЗϊα ,д .дΑϊ5Α ЖΕΜϊςςΤ Ь 'δΕΚБδδ ГО ΤЬЬϋΚΡΥΙ ЬΡςд -'БЬΕ СνταΕνсνЗΕΙΑΙΜ ΞΒ5ΙΙΑν Εα ΙΤЬ ^σшα'5ΡσΑ!ΑΕννΚ ΞΙШ , 5,5Τ ЬдΚСЬΚΚΚΒ
2. Сποсοб ποлучения лейκοциτаρяοгο челοвечесκοгο0 инτеρφеροна И" πο π.Ι в баκτеρжальяыχ κлеτκаχ, вκлючающжй выделение маτρичнοй ποли (Α)-м-ΡΗΚ из иядуцжροваяныχ лей- κοциτοв челοвеκа, синτез геяа ияτеρφеροна, всτρаиваяие в веκτορную πлазмиду ρΒΕ 322 ποд κοяτροлем τρиπτοφаяοвο- гο προмοτορа и τρаясφορмациго ποлучеяяοй ρеκοмбияанτнοй5 ДΗΚ κлеτοκ баκτеρиж Ε. сοϋ , χаρаκτеρжзующжжся τем, чτο в κачесτве гена ияτеρφеροяа исποльзуюτ ген жяτеρφеροяа сο еледующеж πеρвжчнοй сτρуκτуροй ДΗΚ: τστ σ-ΑΤ στσ σστ σдσ Αστ σдσ Αασ στσ σστ ΑΑΓ Ασσ Ασσ с-σσ τισ ΑΓΑ στσ στσ σσд ΟΑΑ ΑΤС σσд ΑΟ-Α ΑΤΟ τστ σдг ττσ τσσ0 τσσ στσ ΑΑС Ο-ΑΟ ΑСΑ ΤΑΤ СΑΤ ττσ αα-Α ττσ σσσ σдσ СΑС στσ τττ СΑΤ σσσ ΑΑ σдσ ττσ σΑσ ΑΑС αστ Ο Α ασσ дτσ гστ σσσ •ττσ σΑΤ Сσ Ατα ΑΤΟ σдσ σдσ ΑΟΟ гτσ ΑΑΤ στσ ττσ ΑСΟ Ασд ΑΑС σΑΤ ΤΟΑ τστ αστ σστ τσσ σ-ΑΤ σдσ Ασσ στσ СΤΑ σдσ ΑΑΑ гτσ ΤΑΟ ΑΤΤ СΑΑ σττ ττσ σлσ ΟΑΑ σгσ ΑΑΤ ΟΑС СΤΑ СΑΑ σсσ5 гστ στσ ΑΟΑ ΟΑС СΑС σττ σσσ στα αдд СΑС ΑΤΓ σσσ σгσ ΑΤС ΑΑΤ σ σдσ τσσ дτσ στσ σστ στσ Ασσ ΑΑΑ ΤΑΟ τ-ττ σΑΑ ΑСΑ Ατσ ΑΟΤ σττ ΤΑΤ στσ Αгσ σσσ ΑΑσ ΑΑΑ ΤΑС дσσ σστ τστ σσс τσσ στг στσ ΑСΑ ΟΟΑ &ΑΑ ΑΓΟ Αгσ Α&Α гοσ ττσ τστ гττ ΤΟΑ ΑΟΑ ΑΑΟ ττσ ΟΑΑ ΑΑΑ σσд ΤΤΑ Αд Ασσ σ Τ
-Ъ ϊ гΕΑϊ
PCT/SU1984/000007 1983-02-24 1984-02-23 Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells WO1984003300A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB08426019A GB2150573B (en) 1983-02-24 1984-02-23 Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU3562850 1983-02-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1984003300A1 true WO1984003300A1 (en) 1984-08-30

Family

ID=21053208

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/SU1984/000007 WO1984003300A1 (en) 1983-02-24 1984-02-23 Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4751287A (ru)
JP (1) JPS60500574A (ru)
DE (1) DE3490055T1 (ru)
FR (1) FR2541579B1 (ru)
GB (1) GB2150573B (ru)
SE (1) SE453512B (ru)
WO (1) WO1984003300A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1985002862A1 (en) * 1983-12-23 1985-07-04 Monash University PRODUCTION OF HUMAN INTERFERON-alpha

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0154186B1 (en) * 1984-02-10 1992-07-22 Cytoclonal Pharmaceutics Inc. Isolation of a novel interferon gene and expression thereof
FR2821625B1 (fr) * 2001-03-01 2003-05-16 Genodyssee Nouveaux polynucleotides comportant un polymorphisme de type snp fonctionnel dans la sequence nucleotidique du gene ifn-alpha-2 ainsi que de nouveaux polypeptides codes par ces polynucleotides et leurs utilisations therapeutiques
FR2823220B1 (fr) * 2001-04-04 2003-12-12 Genodyssee Nouveaux polynucleotides et polypeptides de l'erythropoietine (epo)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1980002375A1 (en) * 1977-09-23 1980-11-13 Hem Res Inc High purity animal interferons
GB2116566A (en) * 1982-03-08 1983-09-28 Genentech Inc Animal interferons and processes for their production
EP0099084A2 (de) * 1982-07-12 1984-01-25 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Verfahren zur Herstellung von Interferon und Expressionsvektoren dafür

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH651308A5 (de) * 1980-07-01 1985-09-13 Hoffmann La Roche Interferone und deren herstellung.
ES506955A0 (es) * 1980-11-10 1983-02-01 Genentech Inc Un procedimiento para producir un polipeptido antiviral.
US4414150A (en) * 1980-11-10 1983-11-08 Genentech, Inc. Hybrid human leukocyte interferons
EP0072541A3 (en) * 1981-08-14 1984-04-18 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Human leukocyte interferons, process for their microbial production, intermediates therefor and compositions containing them

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1980002375A1 (en) * 1977-09-23 1980-11-13 Hem Res Inc High purity animal interferons
GB2116566A (en) * 1982-03-08 1983-09-28 Genentech Inc Animal interferons and processes for their production
EP0099084A2 (de) * 1982-07-12 1984-01-25 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Verfahren zur Herstellung von Interferon und Expressionsvektoren dafür

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1985002862A1 (en) * 1983-12-23 1985-07-04 Monash University PRODUCTION OF HUMAN INTERFERON-alpha

Also Published As

Publication number Publication date
SE453512B (sv) 1988-02-08
FR2541579A1 (fr) 1984-08-31
SE8404803L (sv) 1984-09-25
DE3490055T1 (de) 1985-05-02
GB2150573B (en) 1987-11-11
US4751287A (en) 1988-06-14
GB8426019D0 (en) 1984-11-21
SE8404803D0 (sv) 1984-09-25
JPS60500574A (ja) 1985-04-25
FR2541579B1 (fr) 1987-12-18
GB2150573A (en) 1985-07-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Takahara et al. The ompA signal peptide directed secretion of Staphylococcal nuclease A by Escherichia coli.
Telkov et al. Proteins of the Rpf (resuscitation promoting factor) family are peptidoglycan hydrolases
Komiyama et al. cDNA Cloning and Expression of Cry jII, the Second Major Allergen of Japanese Cedar Pollen
EA006825B1 (ru) Способы получения биологически активных молекул
Garrett et al. Structure and role of 5S RNA-protein complexes in protein biosynthesis
JP2002302500A (ja) 新規蛋白質及びこれを使用した薬剤の製法
EP0737747B1 (de) Cytoplasmatische Expression von Antikörpern, Antikörperfragmenten und Antikörperfragment-Fusionsmolekülen in E. coli
EA005581B1 (ru) ПОЛИПЕПТИДЫ ЦИТОКИНА Zcyto10 ЧЕЛОВЕКА И МЫШИ, КОДИРУЮЩИЕ ИХ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ И АНТИТЕЛА К УКАЗАННЫМ ПОЛИПЕПТИДАМ
NL9020024A (nl) Gezuiverde ciliaire neurotrofe factor.
EA028228B1 (ru) Гидролизующая глютеновые олигопептиды эндопептидазная композиция, способ ее получения и применение
JP2001514264A (ja) ヒト・デフェンシンポリペプチドＤｅｆ−Ｘ、ゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡ、それらを含有する組成物ならびに診断および治療処置への適用
WO1984003300A1 (en) Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells
CN1178950C (zh) 司登尼亚蛋白小体-司登尼亚钙蛋白
JPS62163694A (ja) 宿生バチルス属微生物の異種構造形質転換方法
JP4084411B2 (ja) 組換え型イヌ胃リパーゼ及び医薬組成物
Jia et al. Carbohydrate-binding protein 35: molecular cloning and expression of a recombinant polypeptide with lectin activity in Escherichia coli
US6342374B1 (en) Human collagenase inhibitor, recombinant vector system for using same and recombinant-DNA method for the manufacture of same
EP0138101B1 (en) Genetically engineered organisms expressing surface proteins of t. cruzi
HUT52154A (en) Recombinant interleukin-2 hybrid proteins.
JPH0257192A (ja) モチリン様ポリペプチドの製法並びにそのための組換えｄｎａ及び発現用プラスミド
JPS61149089A (ja) Ｄｎａ塩基配列、ポリペプチド分泌発現ベクター及び形質転換微生物
AU2020298647A1 (en) Oligomeric nucleic acid molecule activating atoh1 gene and use thereof
CN114195876B (zh) 一种神经连接蛋白1的截短蛋白及其应用
JP2540031B2 (ja) 組換えｄｎａ分子
EP4183803A1 (en) Fusion protein comprising ige fc receptor alpha subunit extracellular domain and anti-il-4r antibody, and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Designated state(s): DE GB JP SE US

RET De translation (de og part 6b)

Ref document number: 3490055

Country of ref document: DE

Date of ref document: 19850502

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 3490055

Country of ref document: DE