EP0364871A1 - Method for making bovine pericardium materials, and use thereof - Google Patents

Method for making bovine pericardium materials, and use thereof Download PDF

Info

Publication number
EP0364871A1
EP0364871A1 EP89118882A EP89118882A EP0364871A1 EP 0364871 A1 EP0364871 A1 EP 0364871A1 EP 89118882 A EP89118882 A EP 89118882A EP 89118882 A EP89118882 A EP 89118882A EP 0364871 A1 EP0364871 A1 EP 0364871A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
treatment
bovine pericardial
pericardial tissue
bovine
tissue
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP89118882A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Edmund Scholl
Helmut Waldert
Helmut Beyer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
B Braun Melsungen AG
Original Assignee
B Braun Melsungen AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by B Braun Melsungen AG filed Critical B Braun Melsungen AG
Publication of EP0364871A1 publication Critical patent/EP0364871A1/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing bovine pericardium materials which have excellent biocompatibility and increased stability, and to the use of the materials thus produced as grafts or implants in human medicine and veterinary medicine.
  • DE-OS 30 34 273 relates to a process for the production of collagen, which is characterized in that natural, insoluble collagen is treated with an aqueous solution of an alkali metal sulfate and / or alkali metal hydroxide, that the fat-free collagen is treated with an aqueous solution Contains alkali sulfate, treated and optionally washed with distilled water, the collagen dissolved in an aqueous solution, optionally adding a small amount of a biologically active substance such as an antibiotic, a hormone or a spermicide to the solution, freezing this solution and the product under vacuum dries.
  • a biologically active substance such as an antibiotic, a hormone or a spermicide
  • US Pat. No. 4,006,083 describes a sterile, collagen product which can be used in surgery and has a felt or faux fur structure, which has a hemostatic effect, has a high absorption capacity for body fluids, stimulates cell regeneration, has a high absorption capacity, essentially not of body tissues is repelled and has optimal mechanical properties, which enables this material to be used in the care of skin injuries or in skin injuries or in bone cavities.
  • U.S. Patent 4,502,159 describes the manufacture of a tubular prosthesis, such as a vessel or urethral prosthesis. This is made by sewing together the opposite corners of a pericardium tissue with a biocompatible thread. An exact description of the sewing procedure is given. It is preferable to use bovine pericard, which has similar extensibility to human tissue. After sewing, the tubular fabric is tanned in a 0.5% glutardialdehyde solution for 7 days. The smooth side of the pericardial tissue is in the lumen, the basement membranes on the surface. Sterilization is carried out by preservation in formalin or with radiation sterilization of a physiological saline solution containing the pericard.
  • pericard - hereinafter also referred to as the pericard - which, as an implant to cover human tissue defects, met the requirements in an almost optimal manner.
  • the measure according to feature b) is repeated after step d) before step e).
  • the treatment in process step c) is preferably carried out in a dilute aqueous basic solution of sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide and / or sodium carbonate. It is particularly preferred to use a 2 to 2.5% by weight aqueous sodium hydroxide solution which should generally act on the bovine pericard tissue over a period of up to 16 hours, with 0 per 100 g bovine pericard tissue , 50 to 1.00 l of the diluted basic solution is used. On the one hand, this achieves a good cleaning effect, which includes inactivation of enzymes and potential germs as completely as possible, but on the other hand also prevents damage to the collagen-containing tissue.
  • the pericardial tissue After treatment with the dilute, aqueous, basic solution, the pericardial tissue is generally swollen strongly to 2 to 5 times the original volume.
  • the treatment in process step e) is preferably carried out with a 10 to 11% by weight sodium chloride solution, as a result of which a swelling state of the collagen which is favorable for further processing can be set.
  • a swelling state of the collagen which is favorable for further processing can be set.
  • lower concentrations of sodium chloride solutions cause an insufficient swelling of the collagen which has swollen strongly after the alkaline treatment.
  • Higher concentrations of sodium chloride solution would only unnecessarily enrich the cattle pericard material with salt residues and are therefore not useful.
  • the treatment in process step g) is preferably carried out using a complexing agent known to the person skilled in the art for complexing polyvalent metal ions, some of which are protein are bound.
  • a disodium EDTA solution has proven to be particularly preferred, which is present, for example, in a concentration of 0.3 to 0.5% by weight.
  • This complexing reagent must be adjusted to a basic pH of more than 11 in order to be able to fully develop its complexing action. Treatment with the complexing agent should generally be carried out over a period of 0.5 to 2 hours.
  • the rinsing in process step h) is preferably continued until a weakly alkaline pH of at most 8.5 has been reached.
  • an acetate buffer system with a pH of 4.5 to 6.0 is used as the acidic buffer system for the treatment in process step i).
  • the step of oxidative bleaching following the wet chemical treatment is preferably carried out in such a way that the bovine pericard fabric is treated with an aqueous solution containing hydrogen peroxide with a content of less than 2% by weight, in particular around 1.5% by weight .-%.
  • This bleaching with hydrogen peroxide serves the purpose of oxidatively destroying any collagen accompanying substances without attacking the collagen itself. It has been shown that concentrations of hydrogen peroxide above 2.0% by weight are not suitable for the purposes of the invention, since these already cause noticeable damage to the collagen-containing bovine pericard tissue.
  • the hydrogen peroxide treatment is generally carried out over a period of 0.5 to 2 hours, using 0.5 to 1.0 l of hydrogen peroxide solution per 100 g of bovine pericard tissue.
  • the bovine pericard tissue is degreased and dried in such a way that the pieces are first covered with a sufficient amount of acetone and this solvent is renewed 2 to 6 times over a period of 12 to 24 hours.
  • the bovine pericardial tissue thus drained is transferred to a Soxhlet apparatus and residual amounts of water and fat residues are removed in an exhaustive extraction. After extraction, the beef pericard pieces are air dried and then rehydrated in demineralized water (swelling).
  • the bovine pericardial tissue is then freeze-dried and sterilized in an automatically controlled freeze-drying system.
  • the manufacturing method according to the invention described above is particularly suitable for producing a product of constant quality that can be used in the medical field.
  • the bovine pericard obtained according to the invention can be used as a translate or implant in the most varied fields of veterinary medicine or human medicine, which are well known to the person skilled in the art.
  • Figure 1 shows an example of the effect that can be achieved by the inventive method.
  • FIG. 1 shows the course of the tensile strength of 10 mm wide strips of the pericard material obtained according to the invention and in comparison to the common market product Lyodura R after implantation under the back skin of rats (values averaged for 10 test animals each). 50 such strips were implanted and removed at different times after the operation in order to then measure the existing tensile strength.
  • Curve A was determined with Pericard made according to the method of the invention.
  • Curve B was determined for comparison with Lyodura R.
  • the pericardial implants according to the invention were compared with lyophilized dura, Lyodura R and with acetone-dried dura mater (Tutoplast R ). The inflammatory response and the condition of the implant were assessed macroscopically. The samples were then fixed with 4% formalin and subjected to a histological examination.
  • the microarchitecture of the collagen scaffold was compared to non-implanted controls.
  • the histological assessment of the implants extends to the invasion behavior of cells (connective tissue cells, immunocompetent cells), the connection between the implant and the recipient (ingrowth behavior), absorption or vitalization of the foreign material and possible rejection reactions.
  • the pericard implant acted as a guardrail, in the spaces between which the cells migrate:
  • the vitality index increases from the first to the sixth week.
  • the implant After 3 and 6 months after implantation, the implant was so well integrated that it was indistinguishable from autochthonous dura (revitalized by fibrocytes and penetrated by blood vessels in the peripheral zones). The inside of the implant is covered by the same cell type as the autologous dura. There were no adhesions to the cortex.
  • the pericardium which is used as the starting material for cattle, is first separated from adhering organ parts in the slaughterhouse after the usual meat inspection by an official veterinarian and roughly freed of fat and connective tissue. In this way flat pieces of approximate size 30 x 15 cm and a piece weight of approximately 1 kg are obtained. These beef heart bags prepared in this way are then transported in an ice-filled cooler bag from the slaughterhouse to the production site and, depending on the amount of raw material, are temporarily stored at below -20 ° C before further processing.
  • the raw pericard pieces are first rinsed individually with purified water - usually soaked in water - to remove adhering blood and water-soluble protein components.
  • the heavily swollen pericard pieces are then transferred into 37.5 l of a 10% aqueous saline solution in order to adjust the swelling state (partial swelling) required for the further process steps.
  • the NaCl treatment is carried out at room temperature. A rinsing process with demineralized water follows.
  • the pericard pieces are subjected to oxidative bleaching in 37.5 l of 1.5% hydrogen peroxide solution for one hour.
  • the bleaching process is carried out at room temperature. In this way, on the one hand, the efficiency of the cleaning operations is ensured, but, on the other hand, an impairment of the collagen tissue is avoided.
  • the rinsed bovine pericard pieces were placed in such an amount of acetone that the bovine pericard tissue was completely covered with acetone.
  • the solvent was replaced three times within 8 hours.
  • the bovine pericardial tissues thus drained were then transferred to a Soxhlet apparatus and extracted with acetone for about 7 hours. After the extraction, the pericard pieces were air dried and then rehydrated in a transport vessel with demineralized water.
  • Drying was carried out in an automatically controlled freeze dryer. Freeze-drying proceeds as follows: Lowering the temperature to +1 ° C, lowering the temperature to -40 ° C, switching on the vacuum, heating the shelves to +40 ° C and drying under full vacuum.
  • the sterilization is carried out by radiation sterilization with 2.5 Mrad.

Abstract

Process for producing bovine pericardium material through processing of raw bovine pericardium tissue by wet chemical preparation, oxidant bleaching, rinsing, degreasing, drying and sterilising, whereby the collagen contained in the bovine pericardium is processed in a given sequence of processing stages. The bovine pericardium material obtained by said process can be advantageously used for implants and transplants in human and veterinary medicine.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstel­lung von Rinder-Pericard-Materialien, die eine ausgezeichnete Biokompatibilität sowie eine erhöhte Stabilität besitzen, und die Verwendung der so hergestellten Materialien als Transplan­tate oder Implantate in der Humanmedizin und Veterinärmedizin.The present invention relates to a method for producing bovine pericardium materials which have excellent biocompatibility and increased stability, and to the use of the materials thus produced as grafts or implants in human medicine and veterinary medicine.

Seit Anfang dieses Jahrhunderts versucht man in der Chirurgie größere Gewebsdefekte mit Hilfe von Transplantaten aus kolla­genem Bindegewebe zu decken (Marchant, 1901; Kleinschmidt, 1914). Seit 1954 steht humane Dura mater als homologes Transplantat in lyophilisierter Form, seit 1973 in Form eines lösungsmittelgetrockneten Produkts zur Verfügung. In vielen Fällen hat sich Humandura dank ihrer guten Gewebeverträglich­keit, des Fehlens immunologischer Reaktionen und nicht zuletzt wegen der hohen Reißfestigkeit bewährt, so daß dieses Bio­material auch heute noch mit Erfolg eingesetzt wird. Leider steht Dura mater als Human-Transplantat aber nur in sehr be­grenztem Umfang zur Verfügung und kann daher den Bedarf seitens der Chirurgie bei weitem nicht decken. Auch gibt es einige Indikationen, zum Beispiel in der Neurochirurgie und im HNO-Bereich, bei denen sich Dura-Transplantate häufig als etwas zu steif und von der Dicke her nicht optimal erwiesen haben.Since the beginning of this century, attempts have been made in surgery to cover larger tissue defects with the help of transplants from collagenous connective tissue (Marchant, 1901; Kleinschmidt, 1914). Human dura mater has been available as a homologous graft in lyophilized form since 1954, and in the form of a solvent-dried product since 1973. In many cases, Humandura has proven itself thanks to its good tissue tolerance, the lack of immunological reactions and not least because of its high tensile strength, so that this biomaterial is still used successfully today. Unfortunately, dura mater is only available to a very limited extent as a human transplant and can therefore by no means meet the needs of surgery. There are also some Indications, for example in neurosurgery and in the ENT area, in which dura-grafts have often proven to be a bit too stiff and the thickness of which has not been optimal.

Die DE-OS 30 34 273 betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Kollagen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß natürliches, un­lösliches Collagen mit einer wäßrigen Lösung eines Alkalisulfats und/oder Alkalihydroxids behandelt wird, daß man das fettfreie Kollagen mit einer wäßrigen Lösung, die ein Alkalisulfat ent­hält, behandelt und gegebenenfalls mit destilliertem Wasser wäscht, das Kollagen in einer wäßrigen Lösung löst, der Lösung gegebenenfalls eine kleine Menge einer biologisch wirksamen Sub­stanz, wie ein Antibiotikum, ein Hormon oder ein Spermizid, zu­setzt, diese Lösung einfriert und das Produkt unter Vakuum trocknet.DE-OS 30 34 273 relates to a process for the production of collagen, which is characterized in that natural, insoluble collagen is treated with an aqueous solution of an alkali metal sulfate and / or alkali metal hydroxide, that the fat-free collagen is treated with an aqueous solution Contains alkali sulfate, treated and optionally washed with distilled water, the collagen dissolved in an aqueous solution, optionally adding a small amount of a biologically active substance such as an antibiotic, a hormone or a spermicide to the solution, freezing this solution and the product under vacuum dries.

Allerdings nimmt diese Offenlegungsschrift den Gegenstand der vorliegenden Erfindung weder in allen Merkmalen vorweg noch legt sie diesen für den Fachmann nahe.However, this published specification does not anticipate the subject matter of the present invention in all its features, nor does it suggest this to the person skilled in the art.

Das US-Patent 4 006 083 beschreibt ein steriles, in der Chirur­gie einsetzbares Kollagenprodukt mit einer Filz- oder Webpelz­struktur, welches eine hämostatische Wirkung ausübt, eine hohe Absorptionskapazität für Körperflüssigkeiten besitzt, die Zell­regeneration anregt, ein hohes Resorptionsvermögen aufweist, im wesentlichen nicht von Körpergeweben abgestoßen wird und das optimale mechanische Eigenschaften besitzt, was dieses Material dazu befähigt, bei der Versorgung von Hautverletzungen oder in Hautverletzungen oder in Knochenhöhlungen eingesetzt zu werden.US Pat. No. 4,006,083 describes a sterile, collagen product which can be used in surgery and has a felt or faux fur structure, which has a hemostatic effect, has a high absorption capacity for body fluids, stimulates cell regeneration, has a high absorption capacity, essentially not of body tissues is repelled and has optimal mechanical properties, which enables this material to be used in the care of skin injuries or in skin injuries or in bone cavities.

Allerdings nimmt die Lehre dieses US-Patents den Gegenstand der vorliegenden Erfindung weder in allen Merkmalen vorweg, noch legt sie diesen nahe.However, the teaching of this U.S. patent does not anticipate or suggest the subject matter of the present invention in all its features.

Das US-Patent 4 502 159 beschreibt die Herstellung einer röhren­förmigen Prothese, wie beispielsweise ein Gefäß oder eine Harn­leiterprothese. Diese wird durch Zusammennähen der entgegenge­setzten Ecken eines Pericardgewebes mit einem biokompatiblen Faden hergestellt. Es wird eine exakte Beschreibung beim Vor­gehen des Nähens angegeben. Vorzugsweise verwendet man Pericard vom Rind, das ähnliche Dehnbarkeiten wie humane Gewebe besitzt. Das röhrenförmige Gewebe wird nach dem Vernähen für 7 Tage in einer 0,5 %igen Glutardialdehyd-Lösung gegerbt. Die glatte Seite des Pericardgewebes befindet sich im Lumen, die Basal­membranen auf der Oberfläche. Sterilisation erfolgt durch Kon­servierung in Formalin bzw. mit Strahlensterilisation einer das Pericard enthaltenden physiologischen Kochsalzlösung.U.S. Patent 4,502,159 describes the manufacture of a tubular prosthesis, such as a vessel or urethral prosthesis. This is made by sewing together the opposite corners of a pericardium tissue with a biocompatible thread. An exact description of the sewing procedure is given. It is preferable to use bovine pericard, which has similar extensibility to human tissue. After sewing, the tubular fabric is tanned in a 0.5% glutardialdehyde solution for 7 days. The smooth side of the pericardial tissue is in the lumen, the basement membranes on the surface. Sterilization is carried out by preservation in formalin or with radiation sterilization of a physiological saline solution containing the pericard.

Allerdings gibt dieses US-Patent keine Hinweise über die Iso­lierung, Reinigung bzw. die physikalischen und chemischen Eigenschaften der so hergestellten röhrenförmigen Prothese, so daß der Gegenstand des US-Patents den Gegenstand der vorliegen­den Erfindung nicht nahelegen kann.However, this US patent gives no information about the isolation, cleaning or the physical and chemical properties of the tubular prosthesis thus produced, so that the subject matter of the US patent cannot suggest the subject matter of the present invention.

Aus diesen Gegebenheiten des Standes der Technik resultierte zwangsläufig der Wunsch, ein praktisch unbegrenzt verfügbares Transplantat bzw. Implantat bereitzustellen, das möglichst alle positiven Eigenschaften der Dura mater in sich vereinigt und darüber hinaus noch gewisse Vorteile bei der Handhabung bietet. Zusätzlich sollte gewährleistet sein, daß keine für den Men­schen gefährlichen Keime (HIV-Viren, Hepatitis-Viren etc.) durch das Rohmaterial eingeschleppt werden konnten, wie dies bei humanen Transplantaten grundsätzlich möglich ist.These conditions of the prior art inevitably resulted in the desire to provide a practically unlimited available graft or implant that combines all the positive properties of the dura mater as possible and also offers certain advantages in handling. In addition, it should be ensured that no germs dangerous for humans (HIV viruses, hepatitis viruses etc.) could be introduced through the raw material, as is fundamentally possible with human transplants.

Unter Berücksichtigung aller produktrelevanten Parameter wurde in bovinem Pericard - im folgenden auch Pericard genannt - ein biologisches Material gefunden, das als Implantat zur Deckung humaner Gewebsdefekte in nahezu optimaler Weise den Anfor­derungen genügte.Taking all product-relevant parameters into account, a biological material was found in the bovine pericard - hereinafter also referred to as the pericard - which, as an implant to cover human tissue defects, met the requirements in an almost optimal manner.

Die Erfindung stellt sich die Aufgabe, ein Verfahren zur Her­stellung von Rinder-Pericard-Materialien zu schaffen, bei dem die biologische Kompatibilität und Stabilität des hierbei erhaltenen Erzeugnisses verbessert wird. Weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung neuer Verwendungs­möglichkeiten für dieses Erzeugnis.The invention has for its object to provide a method for producing bovine pericard materials, in which the biological compatibility and stability of the product obtained in this way is improved. Another object of the present invention is to provide new uses for this product.

Bei experimentellen Untersuchungen wurde nun überraschend gefunden, daß durch ein modifiziertes Herstellungsverfahren die Resistenz der im Rinder-Pericard enthaltenen Skleroproteine gegen biologischen Abbau sowie ihre Biokompatibilität auch ohne Aldehyd-Gerbung mittels Formaldehyd oder Glutardialdehyd - wie dies in US-A 4.502.159, WO 84/04669 sowie US-A 4.456.589 be­schrieben ist - gesteigert werden kann.In experimental investigations, it has now surprisingly been found that the scleroproteins contained in the bovine pericard are resistant to biological degradation and their biocompatibility, even without aldehyde tanning by means of formaldehyde or glutardialdehyde - as described in US Pat. No. 4,502,159, WO 84, using a modified production process / 04669 and US-A 4,456,589 - can be increased.

Die vorliegende Erfindung betrifft somit ein Verfahren zur Herstellung von Rinder-Pericard-Material durch Aufarbeitung von rohem Rinder-Pericard-Gewebe durch eine naßchemische Aufbe­reitung, oxidative Bleichung, Auswaschen, Entfetten, Trocknen und Sterilisieren, das dadurch gekennzeichnet ist, daß die naßchemische Aufbereitung des Rinder-Pericard-Gewebes folgende Schritte umfaßt:

  • a) Wässern des Rinder-Pericard-Gewebes,
  • b) mechanische Entfernung von Fettgewebe und Basalmembranen von der Oberfläche des Rinder-Pericard-Gewebes,
  • c) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit einer verdünnten, wäßrigen, basischen Lösung,
  • d) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von restlicher Base,
  • e) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit verdünnter wäßriger Natriumchloridlösung,
  • f) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von Natriumchloridresten,
  • f) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit einem Kom­plexierungsmittel,
  • h) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von Komplexierungsmittelresten,
  • i) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit einem sauren Puffersystem und
  • j) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von sauren Puffersystemresten.
The present invention thus relates to a process for the production of bovine pericardial material by working up raw bovine pericardial tissue by wet chemical processing, oxidative bleaching, washing out, degreasing, drying and sterilizing, which is characterized in that the wet chemical processing of Bovine pericardial tissue includes the following steps:
  • a) watering the bovine pericardial tissue,
  • b) mechanical removal of adipose tissue and basement membranes from the surface of the bovine pericardial tissue,
  • c) treatment of the bovine pericardial tissue with a dilute, aqueous, basic solution,
  • d) rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove residual base,
  • e) treatment of the bovine pericardial tissue with dilute aqueous sodium chloride solution,
  • f) rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove residual sodium chloride,
  • f) treatment of the bovine pericardial tissue with a complexing agent,
  • h) rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove complexing agent residues,
  • i) treatment of the bovine pericardial tissue with an acidic buffer system and
  • j) Rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove acidic buffer system residues.

Nach einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfin­dung wiederholt man im Anschluß an Verfahrensschritt d) vor Verfahrensschritt e) die Maßnahme nach Merkmal b).According to a preferred embodiment of the present invention, the measure according to feature b) is repeated after step d) before step e).

Obgleich die vorstehend beschriebenen Maßnahmen im naßchemi­schen Aufbereitungsschritt ohne weiteres auch oberhalb von Raumtemperatur oder unterhalb von Raumtemperatur durchgeführt werden können, so ist es doch im Sinne der vorliegenden Erfin­ dung bevorzugt, sämtliche naßchemischen Verfahrensschritte bei Raumtemperatur, also zwischen 15 °C und 25 °C durchzuführen.Although the measures described above can also be carried out above room temperature or below room temperature in the wet chemical preparation step, it is within the meaning of the present invention tion preferred to carry out all wet chemical process steps at room temperature, that is between 15 ° C and 25 ° C.

Vorzugsweise wird die Behandlung im Verfahrensschritt c) in einer verdünnten wäßrigen basischen Lösung von Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Lithiumhydroxid und/oder Natriumcarbonat durchgeführt. Besonders bevorzugt ist die Verwendung einer 2 bis 2,5 Gew.-%igen wäßrigen Natriumhydroxidlösung, welche im allgemeinen über einen Zeitraum bis zu 16 Stunden auf das Rin­der-Pericard-Gewebe einwirken soll, wobei man pro 100 g Rinder-­Pericard-Gewebe 0,50 bis 1,00 l der verdünnten basischen Lösung verwendet. Hierdurch wird einerseits ein guter Reinigungseffekt erreicht, der eine möglichst vollständige Inaktivierung von Enzymen und potentiellen Keimen einschließt, andererseits aber auch eine Schädigung des Kollagen-haltigen Gewebes vermieden.The treatment in process step c) is preferably carried out in a dilute aqueous basic solution of sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide and / or sodium carbonate. It is particularly preferred to use a 2 to 2.5% by weight aqueous sodium hydroxide solution which should generally act on the bovine pericard tissue over a period of up to 16 hours, with 0 per 100 g bovine pericard tissue , 50 to 1.00 l of the diluted basic solution is used. On the one hand, this achieves a good cleaning effect, which includes inactivation of enzymes and potential germs as completely as possible, but on the other hand also prevents damage to the collagen-containing tissue.

Nach der Behandlung mit der verdünnten, wäßrigen, basischen Lösung ist das Pericard-Gewebe im allgemeinen stark auf das 2-­bis 5fache des Ursprungsvolumens aufgequollen.After treatment with the dilute, aqueous, basic solution, the pericardial tissue is generally swollen strongly to 2 to 5 times the original volume.

Vorzugsweise wird die Behandlung im Verfahrensschritt e) mit einer 10 bis 11 Gew.-%igen Natriumchloridlösung ausgeführt, wodurch ein für die weitere Verarbeitung günstiger Quellzustand des Kollagens eingestellt werden kann. Niedrigere Konzentra­tionen an Natriumchloridlösungen bewirken demgegenüber eine nur unzureichende Entquellung des nach der alkalischen Behandlung stark gequollenen Kollagens. Höhere Konzentrationen an Natrium­chloridlösung würden das Rinder-Pericard-Material nur unnötig mit Salzresten anreichern und sind schon deshalb nicht sinn­voll.The treatment in process step e) is preferably carried out with a 10 to 11% by weight sodium chloride solution, as a result of which a swelling state of the collagen which is favorable for further processing can be set. In contrast, lower concentrations of sodium chloride solutions cause an insufficient swelling of the collagen which has swollen strongly after the alkaline treatment. Higher concentrations of sodium chloride solution would only unnecessarily enrich the cattle pericard material with salt residues and are therefore not useful.

Vorzugsweise wird die Behandlung im Verfahrensschritt g) mit einem dem Fachmann bekannten Komplexierungsmittel für die Komplexierung mehrwertiger Metallionen, die zum Teil protein­ gebunden vorliegen, durchgeführt. Als besonders bevorzugt hat sich in diesem Falle eine Dinatrium-EDTA-Lösung erwiesen, welche beispielsweise in einer Konzentration von 0,3 bis 0,5 Gew.-% vorliegt. Dieses Komplexierungsreagenz muß, um seine komplexierende Wirkung voll entfalten zu können, auf einen basischen pH-Wert von mehr als 11 eingestellt werden. Die Be­handlung mit dem Komplexierungsmittel sollte im allgemeinen über einen Zeitraum von 0,5 bis 2 h durchgeführt werden.The treatment in process step g) is preferably carried out using a complexing agent known to the person skilled in the art for complexing polyvalent metal ions, some of which are protein are bound. In this case, a disodium EDTA solution has proven to be particularly preferred, which is present, for example, in a concentration of 0.3 to 0.5% by weight. This complexing reagent must be adjusted to a basic pH of more than 11 in order to be able to fully develop its complexing action. Treatment with the complexing agent should generally be carried out over a period of 0.5 to 2 hours.

Vorzugsweise setzt man die Spülung im Verfahrensschritt h) so lange fort, bis man einen schwach-alkalischen pH-Wert von maxi­mal 8,5 erreicht hat.The rinsing in process step h) is preferably continued until a weakly alkaline pH of at most 8.5 has been reached.

Vorzugsweise setzt man für die Behandlung in Verfahrensschritt i) als saures Puffersystem ein Acetat-Puffersystem mit einem pH-Wert von 4,5 bis 6,0 ein.Preferably, an acetate buffer system with a pH of 4.5 to 6.0 is used as the acidic buffer system for the treatment in process step i).

Vorzugsweise wird der nach der naßchemischen Aufbereitung fol­gende Schritt der oxidativen Bleichung in der Art ausgeführt, daß man das Rinder-Pericard-Gewebe mit einer Wasserstoffper­oxid-haltigen wäßrigen Lösung mit einem Gehalt von weniger als 2 Gew.-%, insbesondere um 1,5 Gew.-% vornimmt. Diese Bleichung mittels Wasserstoffperoxid dient dem Zweck, noch vorhandene Begleitstoffe des Kollagens oxidativ zu zerstören, ohne das Kollagen selbst anzugreifen. Es hat sich gezeigt, daß Kon­zentrationen von Wasserstoffperoxid oberhalb 2,0 Gew.-% im Sinne der Erfindung nicht geeignet sind, da diese bereits eine merkliche Schädigung des Kollagen-haltigen Rinder-Peri­card-Gewebes bewirken. Die Wasserstoff-Peroxid-Behandlung wird im allgemeinen über einen Zeitraum von 0,5 bis 2 Stunden durch­geführt, wobei man pro 100 g Rinder-Pericard-Gewebe 0,5 bis 1,0 l Wasserstoffperoxidlösung verwendet.The step of oxidative bleaching following the wet chemical treatment is preferably carried out in such a way that the bovine pericard fabric is treated with an aqueous solution containing hydrogen peroxide with a content of less than 2% by weight, in particular around 1.5% by weight .-%. This bleaching with hydrogen peroxide serves the purpose of oxidatively destroying any collagen accompanying substances without attacking the collagen itself. It has been shown that concentrations of hydrogen peroxide above 2.0% by weight are not suitable for the purposes of the invention, since these already cause noticeable damage to the collagen-containing bovine pericard tissue. The hydrogen peroxide treatment is generally carried out over a period of 0.5 to 2 hours, using 0.5 to 1.0 l of hydrogen peroxide solution per 100 g of bovine pericard tissue.

Im Anschluß an diese oxidative Bleichung werden Wasserstoff­peroxidreste durch erschöpfendes Auswaschen mit Wasser in an sich bekannter Weise durchgeführt.Following this oxidative bleaching, hydrogen peroxide residues are carried out by exhaustive washing out with water in a manner known per se.

Das Entfetten und Trocknen des Rinder-Pericard-Gewebes erfolgt in der Weise, daß die Stücke zunächst mit einer ausreichenden Menge an Aceton bedeckt werden, und über einen Zeitraum von 12 bis 24 h dieses Lösungsmittel 2 bis 6 mal erneuert wird. Das so entwässerte Rinder-Pericard-Gewebe wird in eine Soxhlet-Appara­tur überführt und in einer erschöpfenden Extraktion restliche Wassermengen und Fettreste entfernt. Nach der Extraktion werden die Rinder-Pericard-Stücke an der Luft getrocknet und anschlie­ßend in entmineralisiertem Wasser rehydratisiert (Quellung).The bovine pericard tissue is degreased and dried in such a way that the pieces are first covered with a sufficient amount of acetone and this solvent is renewed 2 to 6 times over a period of 12 to 24 hours. The bovine pericardial tissue thus drained is transferred to a Soxhlet apparatus and residual amounts of water and fat residues are removed in an exhaustive extraction. After extraction, the beef pericard pieces are air dried and then rehydrated in demineralized water (swelling).

Anschließend wird das Rinder-Pericard-Gewebe in einer auto­matisch gesteuerten Gefriertrocknungsanlage gefriergetrocknet und sterilisiert.The bovine pericardial tissue is then freeze-dried and sterilized in an automatically controlled freeze-drying system.

Das vorstehend beschriebene erfindungsgemäße Herstellungsver­fahren ist in besonderer Art dazu geeignet, um ein im medi­zinischen Bereich einsetzbares Produkt gleichbleibender Quali­tät zu erzeugen.The manufacturing method according to the invention described above is particularly suitable for producing a product of constant quality that can be used in the medical field.

Das erfindungsgemäß erhaltene Rinder-Pericard kann als Trans­lantat oder Implantat auf den verschiedensten Gebieten der Veterinärmedizin oder Humanmedizin, die dem Fachmann wohl­bekannt sind, eingesetzt werden. Verwiesen ist in diesem Zu­sammenhang auf die Firmenbroschüre der Fa. B. Braun Melsungen AG "LyoduraR zum homöoplastischen Ersatz von Körperstrukturen" aus dem Jahre 1978 und die darin genannten sehr zahlreichen Literaturstellen.The bovine pericard obtained according to the invention can be used as a translate or implant in the most varied fields of veterinary medicine or human medicine, which are well known to the person skilled in the art. In this connection, reference is made to the company brochure from B. Braun Melsungen AG "Lyodura R for the homeoplastic replacement of body structures" from 1978 and the very numerous references mentioned therein.

Beurteilung der Reißfestigkeit im subkutanen ImplantationstestAssessment of the tensile strength in the subcutaneous implantation test

Die Figur 1 zeigt beispielhaft, welche Wirkung durch das erfindungsgemäße Verfahren erzielt werden kann.Figure 1 shows an example of the effect that can be achieved by the inventive method.

Die Figur 1 zeigt den Verlauf der Reißfestigkeit von 10 mm breiten Streifen des erfindungsgemäß erhaltenen Pericard-­Materials und im Vergleich zu dem gängigen Marktprodukt LyoduraR nach Einpflanzung unter die Rückenhaut von Ratten (Werte für jeweils 10 Testtierte gemittelt). Hierbei wurden je 50 solcher Streifen implantiert und zu verschiedenen Zeit­punkten nach der Operation entnommen, um dann noch die vor­handene Reißfestigkeit zu messen. Die Kurve A wurde mit Pericard ermittelt, das nach dem Verfahren der Erfindung her­gestellt worden war. Die Kurve B wurde zum Vergleich mit LyoduraR ermittelt.FIG. 1 shows the course of the tensile strength of 10 mm wide strips of the pericard material obtained according to the invention and in comparison to the common market product Lyodura R after implantation under the back skin of rats (values averaged for 10 test animals each). 50 such strips were implanted and removed at different times after the operation in order to then measure the existing tensile strength. Curve A was determined with Pericard made according to the method of the invention. Curve B was determined for comparison with Lyodura R.

Es kann über den Beobachtungszeitraum von 21 Tagen zwischen dem heterologen, erfindungsgemäß hergestellten Material Pericard und dem homologen Material LyoduraR kein signifikanter Unter­schied bezüglich der Reißfestigkeit gefunden werden, womit gezeigt wurde, daß das heterologe Material ein hervorragender Ersatz für das homologe Material darstellt. Tabelle Reißfestigkeit von Pericard- und Durastreifen (10 mm breit) nach Implantation (n = 10 pro Gruppe); jeder im Diagramm eingetretene Punkt der Kurve basiert auf 10 Einzelmessungen. Implantationszeit Pericard gemäß Erfindung LyoduraR (Tage) (Newton) (Newton) 0 25.0 ± 9.4 23 ± 10.0 100 % ± 38 92 % ± 40 1 24.1 ± 7.9 22.8 ± 9.1 96 % ± 32 91 % ± 36 4 19.0 ± 9.0 19.2 ± 8.5 76 % ± 36 77 % ± 34 7 18.8 ± 6.3 14 ± 5.1 75 % ± 25 56 % ± 20 14 10.0 ± 4.5 10.1 ± 4.5 40 % ± 18 40 % ± 18 21 6.5 ± 3.0 7.0 ± 4.5 26 % ± 12 28 % ± 18 zweite Zeile = Angabe in % O-Wert Pericard = 100 % There was no significant difference in tensile strength between the heterologous Pericard material produced according to the invention and the homologous material Lyodura R over the observation period of 21 days, which showed that the heterologous material is an excellent replacement for the homologous material. table Tensile strength of pericardium and dura strips (10 mm wide) after implantation (n = 10 per group); every point on the curve that occurs in the diagram is based on 10 individual measurements. Implantation time Pericard according to the invention Lyodura R (Days) (Newton) (Newton) 0 25.0 ± 9.4 23 ± 10.0 100% ± 38 92% ± 40 1 24.1 ± 7.9 22.8 ± 9.1 96% ± 32 91% ± 36 4th 19.0 ± 9.0 19.2 ± 8.5 76% ± 36 77% ± 34 7 18.8 ± 6.3 14 ± 5.1 75% ± 25 56% ± 20 14 10.0 ± 4.5 10.1 ± 4.5 40% ± 18 40% ± 18 21st 6.5 ± 3.0 7.0 ± 4.5 26% ± 12 28% ± 18 second line = in% O value pericard = 100%

Beurteilung der Biokompatibilität im subkutanen Implantations­testAssessment of biocompatibility in the subcutaneous implantation test

I. An insgesamt 58 Kaninchen und 220 Ratten wurden subkutane Implantationen von Pericard vorgenommen. Untersuchungsparameter waren der pathologisch-anatomische Befund und die histologische Untersuchung der Implantate nach abgestuften Zeitpunkten von 7 Tagen bis zu 12 Monaten.I. Subcutaneous implantation of Pericard was performed on a total of 58 rabbits and 220 rats. Examination parameters were the pathological-anatomical finding and the histological examination of the implants after graduated times from 7 days to 12 months.

Die erfindungsgemäßen Pericardimplantate wurden mit lyophili­sierter Dura, LyoduraR sowie mit acetongetrockneter Dura mater (TutoplastR) verglichen. Es wurden makroskopisch die Entzün­dungsreaktion und die Implantatbeschaffenheit beurteilt. An­schließend wurden die Proben mit 4 %igem Formalin fixiert und einer histologischen Untersuchung unterzogen.The pericardial implants according to the invention were compared with lyophilized dura, Lyodura R and with acetone-dried dura mater (Tutoplast R ). The inflammatory response and the condition of the implant were assessed macroscopically. The samples were then fixed with 4% formalin and subjected to a histological examination.

Die Mikroarchitektur des Kollagengerüstes wurde mit nicht im­plantierten Kontrollen verglichen.The microarchitecture of the collagen scaffold was compared to non-implanted controls.

Die histologische Beurteilung der Implantate erstreckt sich auf das Invasionsverhalten von Zellen (Bindegewebszellen, immuno­kompetente Zellen), die Verbindung Implantat-Empfänger (Ein­wachsverhalten), Resorption bzw. Vitalisierung des Fremdma­terials und mögliche Abstoßungsreaktionen.The histological assessment of the implants extends to the invasion behavior of cells (connective tissue cells, immunocompetent cells), the connection between the implant and the recipient (ingrowth behavior), absorption or vitalization of the foreign material and possible rejection reactions.

Ergebnisse:Results:

Bei der Untersuchung der devitalisierten Pericardproben vor der Implantation wurde nachgewiesen, daß diese vollkommen frei von Zellen oder Resten von Zellbestandteilen waren. Dagegen wiesen lyophilisierte und insbesondere lösungsmittelgetrocknete Dura mater noch vereinzelt Kernmaterial auf.Examination of the devitalized pericard samples before the implantation showed that they were completely free of cells or residues of cell components. In contrast, lyophilized and, in particular, solvent-dried dura mater still had isolated core material.

a) Mikroarchitektur der Implantate:a) Microarchitecture of the implants:

Es konnte festgestellt werden, daß die Anordnung der Kollagen­faserstruktur wichtig ist für das Einwanderungsverhalten von Bindegewebszellen.It was found that the arrangement of the collagen fiber structure is important for the immigration behavior of connective tissue cells.

Straffe, dicht liegende Kollagenfaserbündel (bei lösungsmittel­getrockneter Dura) behindern die Revitalisierung. Bei dem meist als dissoziierte Fasern vorliegenden Pericard und der LyoduraR ist die Repopulation mit Zellen aus der Bindegewebsreihe er­leichtert.Tight, tightly lying collagen fiber bundles (in the case of solvent-dried dura) hinder revitalization. The repopulation with cells from the connective tissue row is facilitated with the pericard and Lyodura R , which is usually present as dissociated fibers.

b) Vitalität des Implantates:b) Vitality of the implant:

Das Pericard-Implantat verhielt sich als Leitschiene, in dessen Zwischenräume die Zellen einwandern:The pericard implant acted as a guardrail, in the spaces between which the cells migrate:

Bereits nach einer Woche sind in das Implantat reichlich Zellen eingewandert, die sich diffus ausgebreitet haben. Es handelt sich um Fibroblasten und histiozytäre Elemente. Der Vitalitäts­index nimmt von der ersten bis zur 6. Woche hin zu.After just one week, cells that have spread diffusely migrated into the implant. They are fibroblasts and histiocytic elements. The vitality index increases from the first to the sixth week.

c) Infiltration des Implantates mit nicht zur Bindegewebsreihe gehörenden Zellen wie Lymphozyten, Makrophagen, Fremdkörper­riesenzellen.c) Infiltration of the implant with cells that do not belong to the connective tissue series, such as lymphocytes, macrophages, foreign body giant cells.

Das Auftreten dieser Zellen, die quantitativ erstaunlicherweise in geringerer Zahl bei den Pericardproben auftraten als bei den Duraproben, ist nicht mit einer aufkommenden Abstoßungsreaktion gleichzusetzen, sondern als immuninformativer Vorgang aufzu­fassen. Im Gegensatz zur Invasion mit Fibroblasten und Histio­zyten dringen diese Lymphozyten, Makrophagen und Riesenzellen selten tief in das Implantat ein. Makrophagen traten gehäuft auf, wo es zu Blutungen ins Wundbett kam. Die Zellen (Ly., Makr., RZ) wurden ausgewählt und ein Index berechnet, der bei der zum klinischen Einsatz kommenden Pericardprobe (1,43) im Vergleich zu den Duraproben (lyophilisiert: 2,2; acetongetrock­net: 2,32) niedriger lag. Dieses Phänomen ist wahrscheinlich darauf zurückzuführen, daß Pericard sehr gut devitalisiert ist, und keine Zell- bzw. Zellkernreste mehr enthält, die eventuell immunogen wirken könnten.The occurrence of these cells, which astonished in quantitative numbers in the pericard samples than in the Dura samples, is not to be equated with an emerging rejection reaction, but rather to be regarded as an immuno-informative process. In contrast to the invasion with fibroblasts and histiocytes, these lymphocytes, macrophages and giant cells rarely penetrate deep into the implant. Macrophages occurred frequently where there was bleeding into the wound bed. The cells (Ly., Makr., RZ) were selected and an index calculated which was lower for the pericard sample (1.43) coming into clinical use compared to the Dura samples (lyophilized: 2.2; acetone-dried: 2.32). This phenomenon is probably due to the fact that Pericard is very well devitalized and no longer contains any cell or nucleus residues that could possibly be immunogenic.

d) Akute Entzündungs- und Abstoßreaktionend) Acute inflammatory and rejection reactions

Bei der Pericardprobe wurden keine Immunoreaktionen nachge­wiesen.No immunoreactions were detected in the pericardial sample.

Zusammenfassend konnte festgestellt werden, daß das bessere Abschneiden der Pericardproben nicht nur auf das Ausbleiben von Abstoßungsreaktionen zurückzuführen ist, sondern auch auf den besseren Vitalitätsaspekt, wobei hier die etwas geringere Dicke der Pericardproben eine Rolle spielt.In summary, it was found that the better performance of the pericard samples is not only due to the absence of rejection reactions, but also to the better vitality aspect, the somewhat smaller thickness of the pericard samples playing a role here.

II. Beurteilung von Biokompatibilität und Funktionsfähigkeit von Pericard als Dura mater cerebralis-Ersatz beim HundII. Assessment of biocompatibility and functionality of pericardium as a dura mater cerebralis replacement in dogs

Nach 3 und 6 Monaten post implantationem war das Implantat so gut integriert, daß es von autochthoner Dura nicht mehr zu unterscheiden war (von Fibrozyten revitalisiert und in den Randzonen von Blutgefäßen durchzogen). Die Innenseite des Implantates ist vom gleichen Zelltyp überzogen wie autologe Dura. Verwachsungen zur Gehirnrinde bestanden nicht.After 3 and 6 months after implantation, the implant was so well integrated that it was indistinguishable from autochthonous dura (revitalized by fibrocytes and penetrated by blood vessels in the peripheral zones). The inside of the implant is covered by the same cell type as the autologous dura. There were no adhesions to the cortex.

Dieser Effekt des mittels des erfindungsgemäßen Verfahrens hergestellten Rinder-Pericard-Materials im Vergleich zu han­delsübichen Dura-Materialien wird in den Figuren 2 - 5 dokumentiert.This effect of the cattle pericard material produced by means of the method according to the invention in comparison with commercially available dura materials is documented in FIGS. 2-5.

Es zeigen:

  • Figur 2: Pericard 6 Wochen nach subkutaner Implantation bei der Ratte. Gut revitalisiertes, vollkommen reizloses Implantat mit vitalen Fibroblasten ohne Lymphozyten, Neubildung von Kollagen.
  • Figur 3: Lösungsmittelgetrocknete Dura mater 6 Wochen nach subkutaner Implantation bei der Ratte (Vergleich). Lokale Akkumulation von Lymphozyten, im zentralen Bereich noch keine Revitalisierung durch Fibro­blasten.
  • Figur 4: Pericard 12 Wochen nach subkutaner Implantation bei der Ratte. Gute Integration von Implantat und Wirts­gewebe, keine immunokompetenten Zellen vorhanden.
  • Figur 5: Lösungsmittelgetrocknete Dura mater 12 Wochen p.i. (Vergleich). Lokale Akkumulation von Lymphozyten; das Transplantat ist durch die dichte Fasterstruktur weitgehend avital.
Show it:
  • Figure 2: Pericard 6 weeks after subcutaneous implantation in the rat. Well revitalized, completely irritation-free implant with vital fibroblasts without lymphocytes, new collagen formation.
  • Figure 3: Solvent-dried dura mater 6 weeks after subcutaneous implantation in the rat (comparison). Local accumulation of lymphocytes, in the central area no revitalization by fibroblasts.
  • Figure 4: Pericard 12 weeks after subcutaneous implantation in the rat. Good integration of implant and host tissue, no immunocompetent cells available.
  • Figure 5: Solvent-dried dura mater 12 weeks pi (comparison). Local accumulation of lymphocytes; the graft is largely avital due to the dense fasting structure.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird nachstehend anhand eines Ausführungsbeispiels zur Herstellung von Rinder-Pericard erläutert.The method according to the invention is explained below using an exemplary embodiment for the production of cattle pericard.

AusführungsbeispielEmbodiment 1. Rohstoff-Gewinnung1. Extraction of raw materials

Die als Ausgangsmaterial dienenden Herzbeutel (Pericardium) von Rindern werden im Schlachthof nach der üblichen Fleischbeschau durch einen amtlichen Tierarzt zunächst von anhaftenden Organ­teilen abtetrennt und grob von Fett- und Bindegewebe befreit. Man erhält auf diese Weise flächige Stücke von der ungefähren Größe 30 x 15 cm und einem Stückgewicht von etwa 1 kg. Diese so vorbereiteten Rinderherzbeutel werden dann in einer mit Eis beschickten Kühltasche vom Schlachthof zur Produktionsstätte transportiert und dort je nach Menge des anfallenden Roh­materials vor der Weiterverarbeitung bei unter -20 °C zwischen­gelagert.The pericardium, which is used as the starting material for cattle, is first separated from adhering organ parts in the slaughterhouse after the usual meat inspection by an official veterinarian and roughly freed of fat and connective tissue. In this way flat pieces of approximate size 30 x 15 cm and a piece weight of approximately 1 kg are obtained. These beef heart bags prepared in this way are then transported in an ice-filled cooler bag from the slaughterhouse to the production site and, depending on the amount of raw material, are temporarily stored at below -20 ° C before further processing.

2. Naßchemische Aufbereitung2. Wet chemical processing

Die rohen Pericard-Stücke werden zunächst einzeln mit gerei­nigtem Wasser gespült - üblicherweise fließend gewässert - um anhaftendes Blut und wasserlösliche Eiweißanteile zu entfernen.The raw pericard pieces are first rinsed individually with purified water - usually soaked in water - to remove adhering blood and water-soluble protein components.

Nach dem Wässern werden alle makroskopisch sichtbaren Reste von Fettgewebe und Basalmembranen entfernt. Anschließend erfolgt eine Behandlung mit 2 %iger wäßriger Natronlauge bei Raum­temperatur. Die Pericardstücke (5000 g) verbleiben insgesamt 16 Stunden im Laugenbad (37,5 l). Nach Entnahme erfolgt dann ein ca. 10 Minuten dauernder Spülprozeß in entmineralisiertem Wasser, der sooft wiederholt wird, bis der pH des Spülwassers auf einen Wert unter 8 gesunken ist. Dies ist nach ca. 1 Stunde erreicht. Sollten noch Basalmembranen und Fettreste festzu­stellen sein, so werden sie auf dieser Prozeßstufe endgültig entfernt.After soaking, all macroscopically visible residues of fatty tissue and basement membranes are removed. Treatment with 2% aqueous sodium hydroxide solution is then carried out at room temperature. The pericard pieces (5000 g) remain in the lye bath (37.5 l) for a total of 16 hours. After removal, a rinsing process in demineralized water takes about 10 minutes and is repeated until the pH of the rinsing water has dropped to a value below 8. This is after about 1 hour reached. If there are still basement membranes and fat residues, they will be removed at this stage of the process.

Die stark gequollenen Pericard-Stücke werden nun in 37,5 l einer 10 %igen wäßrigen Kochsalzlösung transferiert, um den für die weiteren Prozeßschritte erforderlichen Quellzustand (par­tielle Entquellung) einzustellen. Die NaCl-Behandlung wird bei Raumtemperatur durchgeführt. Es schließt sich ein Spülprozeß mit entmineralisiertem Wasser an.The heavily swollen pericard pieces are then transferred into 37.5 l of a 10% aqueous saline solution in order to adjust the swelling state (partial swelling) required for the further process steps. The NaCl treatment is carried out at room temperature. A rinsing process with demineralized water follows.

Um störende Schwermetallionen und etwaige Kalkeinlagerungen aus dem Pericardgewebe zu entfernen, erfolgt nun eine Behandlung mit 37,5 l schwach alkalisch eingestellter EDTA-Lösung, Zusam­mensetzung pro 100 ml: 0,3 g. Anschließend wird wie in den vor­ausgegangenen Prozeßschritten mit entmineralisiertem Wasser gespült, um überschüssigen Komplexbildner zu entfernen und gleichzeitig den pH auf einen Wert von 8,5 zu bringen. Die nun folgende Behandlung mit 1 mal 37,5 l Acetat-Puffer (pH = 4,8, Zusammensetzung pro 100 ml: 0,01 mol/100 ml Na-acetat . 3 H₂O, 59 Volumen-Teile; 0,01 mol/100 ml Essigsäure, 41 Volumen-Teile) dient dem Zweck, alle etwa noch im Pericard-Gewebe verbliebenen Laugenreste abzupuffern und ein schwach saures Milieu für den späteren Bleichprozeß vorzubereiten. Überschüssige Puffersub­stanzen werden wie vorstehend beschrieben durch Spülen mit entmineralisiertem Wasser entfernt.In order to remove disturbing heavy metal ions and any lime deposits from the pericardial tissue, treatment is now carried out with 37.5 l of EDTA solution with a weakly alkaline composition, composition per 100 ml: 0.3 g. Then, as in the previous process steps, rinsing with demineralized water is carried out in order to remove excess complexing agents and at the same time to bring the pH to a value of 8.5. The following treatment with 1 x 37.5 l acetate buffer (pH = 4.8, composition per 100 ml: 0.01 mol / 100 ml Na acetate. 3 H₂O, 59 parts by volume; 0.01 mol / 100 ml of acetic acid, 41 parts by volume) serves the purpose of buffering off any lye residues still remaining in the pericard tissue and preparing a weakly acidic medium for the subsequent bleaching process. Excess buffer substances are removed by rinsing with demineralized water as described above.

3. Oxidative Bleichung3. Oxidative bleaching

Im Anschluß an die naßchemische Aufbereitung werden die Peri­card-Stücke einer einstündigen oxidativen Bleichung in 37,5 l 1,5 %iger Wasserstoffperoxid-Lösung unterzogen. Wie alle vor­ausgegangenen Behandlungsschritte wird auch der Bleichprozeß bei Raumtemperatur durchgeführt. Auf diese Weise wird einer­seits die Effizienz der Reinigungsoperationen sichergestellt, andererseits aber eine Beeinträchtigung des kollagenen Gewebes vermieden.Following the wet chemical processing, the pericard pieces are subjected to oxidative bleaching in 37.5 l of 1.5% hydrogen peroxide solution for one hour. Like all previous treatment steps, the bleaching process is carried out at room temperature. In this way, on the one hand, the efficiency of the cleaning operations is ensured, but, on the other hand, an impairment of the collagen tissue is avoided.

4. Auswaschen4. Wash out

Zur Entfernung überschüssigen Reagenzes wird anschließend mit entmineralisiertem Wasser gemäß dem üblichen Programm gespült.To remove excess reagent, it is then rinsed with demineralized water according to the usual program.

5. Entfettung5. Degreasing

Die gespülten Rinder-Pericard-Stucke wurden in eine solche Menge Aceton gelegt, daß das Rinder-Pericard-Gewebe vollständig mit Aceton überdeckt war.The rinsed bovine pericard pieces were placed in such an amount of acetone that the bovine pericard tissue was completely covered with acetone.

Innerhalb von 8 Stunden wurde das Lösungsmittel dreimal er­neuert. Die so entwässerten Rinder-Pericard-Gewebe wurden da­raufhin in eine Soxhlet-Apparatur überführt und ca. 7 Stunden mit Aceton extrahiert. Nach der Extraktion wurden die Pericard-­Stücke an der Luft getrocknet und anschließend in einem Trans­port-Gefäß mit entmineralisiertem Wasser rehydratisiert.The solvent was replaced three times within 8 hours. The bovine pericardial tissues thus drained were then transferred to a Soxhlet apparatus and extracted with acetone for about 7 hours. After the extraction, the pericard pieces were air dried and then rehydrated in a transport vessel with demineralized water.

6. Gefriertrocknung6. Freeze drying

Die Trocknung erfolgte in einer automatisch gesteuerten Ge­friertrocknungsanlage. Die Gefriertrocknung verläuft im einzel­nen wie folgt:
Temperaturabsenkung auf +1 °C, Temperaturabsenkung auf -40 °C, Einschalten des Vakuums, Aufheizung der Stellplatten auf +40 °C und Trocknung bei vollem Vakuum.Drying was carried out in an automatically controlled freeze dryer. Freeze-drying proceeds as follows:
Lowering the temperature to +1 ° C, lowering the temperature to -40 ° C, switching on the vacuum, heating the shelves to +40 ° C and drying under full vacuum.

7. Sterilisieren7. Sterilize

Die Sterilisierung erfolgt durch Strahlensterilisation mit 2,5 Mrad.The sterilization is carried out by radiation sterilization with 2.5 Mrad.

Claims (11)

1. Verfahren zur Herstellung von Rinder-Pericard-Material durch Aufarbeitung von rohem Rinder-Pericard-Gewebe durch eine naßchemische Aufbereitung, oxidative Bleichung, Auswaschen, Entfetten, Trocknen und Sterilisieren,
dadurch gekennzeichnet, daß die naßchemische Aufbereitung des Rinder-Pericard-Gewebes folgende Schritte umfaßt: a) Wässern des Rinder-Pericard-Gewebes, b) mechanische Entfernung von Fettgewebe und Basalmembranen von der Oberfläche des Rinder-Pericard-Gewebes, c) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit verdünnter, wäßriger, basischer Lösung, d) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von restlicher Base, e) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit verdünnter wäßriger Natriumchloridlösung, f) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von Natriumchloridresten, g) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit einem Kom­plexierungsmittel, h) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von Komplexierungsmittelresten, i) Behandlung des Rinder-Pericard-Gewebes mit einem sauren Puffersystem und j) Spülen des Rinder-Pericard-Gewebes mit entmineralisiertem Wasser zur Entfernung von sauren Puffersystemresten. 1. Process for the production of bovine pericard material by working up raw bovine pericard tissue by wet chemical processing, oxidative bleaching, washing out, degreasing, drying and sterilizing,
characterized in that the wet chemical preparation of the bovine pericardial tissue comprises the following steps: a) watering the bovine pericardial tissue, b) mechanical removal of adipose tissue and basement membranes from the surface of the bovine pericardial tissue, c) treatment of the bovine pericardial tissue with dilute, aqueous, basic solution, d) rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove residual base, e) treatment of the bovine pericardial tissue with dilute aqueous sodium chloride solution, f) rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove residual sodium chloride, g) treatment of the bovine pericardial tissue with a complexing agent, h) rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove complexing agent residues, i) treatment of the bovine pericardial tissue with an acidic buffer system and j) Rinsing the bovine pericardial tissue with demineralized water to remove acidic buffer system residues. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man im Anschluß an Verfahrensschritt d) vor Verfahrensschritt e) die Maßnahme nach Merkmal b) wiederholt.2. The method according to claim 1, characterized in that one repeats the measure according to feature b) after step d) before step e). 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die naßchemischen Aufbereitungsschritte a) und c) bis j) bei Raumtemperatur, also zwischen 15 °C und 25 °C, durchgeführt werden.3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the wet chemical preparation steps a) and c) to j) are carried out at room temperature, that is between 15 ° C and 25 ° C. 4. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung im Verfahrensschritt c) mit einer ver­dünnten, wäßrigen, basischen Lösung von Natriumhydroxid, Ka­liumhydroxid, Lithiumhydroxid und/oder Natriumcarbonat über einen Zeitraum von bis zu 16 Stunden durchführt und vorzugs­weise hierzu eine 2 bis 2,5 Gew.-%ige Natriumhydroxidlösung verwendet.4. Process according to Claims 1 to 3, characterized in that the treatment in process step c) is carried out with a dilute, aqueous, basic solution of sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide and / or sodium carbonate over a period of up to 16 hours and preferably for this purpose a 2 to 2.5 wt .-% sodium hydroxide solution used. 5. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung in Verfahrensschritt e) mit einer wäßri­gen, 10 bis 11 Gew.-%igen Natriumchloridlösung, durchführt.5. Process according to Claims 1 to 3, characterized in that the treatment in process step e) is carried out with an aqueous 10 to 11% by weight sodium chloride solution. 6. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung in Verfahrensschritt g) mit einer ver­dünnten wäßrigen Dinatrium-EDTA-Lösung, welche vorzugsweise 0,3 bis 0,5 Gew.-%ig ist, in einem alkalisch-wäßrigen Medium (pH ≧ 11) durchführt.6. The method according to claims 1 to 3, characterized in that the treatment in step g) with a dilute aqueous disodium EDTA solution, which is preferably 0.3 to 0.5 wt .-%, in an alkaline aqueous medium (pH ≧ 11). 7. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Spülung in Verfahrensschritt h) solange fortsetzt, bis man einen schwach-alkalischen pH-Wert von bis zu 8,5 er­reicht hat.7. Process according to Claims 1 to 3, characterized in that the rinsing in process step h) is continued until a weakly alkaline pH of up to 8.5 has been reached. 8. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung in Verfahrensschritt i) mit einem Ace­tat-Puffersystem mit einem pH-Wert von 4,5 bis 6, vorzugsweise 4,8 ausführt.8. Process according to Claims 1 to 3, characterized in that the treatment in process step i) is carried out with an acetate buffer system with a pH of 4.5 to 6, preferably 4.8. 9. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man die oxidative Bleichung mit Wasserstoffperoxid ent­haltenden wäßrigen Lösungen mit einem Gehalt von weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise um 1,5 Gew.-% vornimmt.9. The method according to claims 1 to 8, characterized in that one carries out the oxidative bleaching with hydrogen peroxide-containing aqueous solutions with a content of less than 2 wt .-%, preferably by 1.5 wt .-%. 10. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man das Entfetten und Trocknen durch Aceton-Behandlung bei Raumtemperatur, Soxhlet-Extraktion mit Aceton, Rehydratisierung und Gefriertrockung durchführt.10. The method according to claims 1 to 9, characterized in that the degreasing and drying is carried out by acetone treatment at room temperature, Soxhlet extraction with acetone, rehydration and freeze-drying. 11. Verwendung der gemäß Ansprüchen 1 bis 10 erhaltenen Rin­der-Pericard-Materialien zur Verwendung als Transplantate und Implantate in der Human- und Veterinärmedizin.11. Use of the bovine pericardial materials obtained according to claims 1 to 10 for use as grafts and implants in human and veterinary medicine.
EP89118882A 1988-10-15 1989-10-11 Method for making bovine pericardium materials, and use thereof Pending EP0364871A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3835237 1988-10-15
DE3835237A DE3835237C1 (en) 1988-10-15 1988-10-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP0364871A1 true EP0364871A1 (en) 1990-04-25

Family

ID=6365247

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP89118882A Pending EP0364871A1 (en) 1988-10-15 1989-10-11 Method for making bovine pericardium materials, and use thereof
EP89911979A Expired - Lifetime EP0438499B1 (en) 1988-10-15 1989-10-11 Process for producing bovine pericardium material and use thereof

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP89911979A Expired - Lifetime EP0438499B1 (en) 1988-10-15 1989-10-11 Process for producing bovine pericardium material and use thereof

Country Status (7)

Country Link
US (1) US5413798A (en)
EP (2) EP0364871A1 (en)
JP (1) JP2624553B2 (en)
AT (1) ATE106754T1 (en)
CA (1) CA1339093C (en)
DE (2) DE3835237C1 (en)
WO (1) WO1990003811A1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999048540A1 (en) * 1998-03-23 1999-09-30 Bio-Vascular, Inc. Implants and method of making
WO2003046055A1 (en) * 2001-11-22 2003-06-05 Matricel Gmbh Method for treating materials of biological origin and collagen-elastic product
US20120323324A1 (en) * 2000-01-11 2012-12-20 Davna Buskirk Soft and calcified tissue implants

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4663120B2 (en) * 1998-09-30 2011-03-30 メドトロニック，インコーポレイテッド Methods for reducing mineralization of tissues used in transplantation
DE19940426A1 (en) * 1999-08-26 2001-03-01 Tutogen Medical Gmbh Process for dehydrating biological tissues for the production of canned grafts
US6312474B1 (en) 1999-09-15 2001-11-06 Bio-Vascular, Inc. Resorbable implant materials
US7078163B2 (en) * 2001-03-30 2006-07-18 Medtronic, Inc. Process for reducing mineralization of tissue used in transplantation
DE10217779A1 (en) 2002-04-18 2003-11-13 Co Don Ag Preserved tissue matrix of a hollow organ, especially a blood vessel, process for the production and use thereof
US7144588B2 (en) 2003-01-17 2006-12-05 Synovis Life Technologies, Inc. Method of preventing surgical adhesions
US7955788B2 (en) * 2003-10-30 2011-06-07 Medtronic, Inc. Bioprosthetic tissue preparation with synthetic hydrogels
US20050266390A1 (en) * 2004-06-01 2005-12-01 Yuichiro Ueda Processes for removing cells and cell debris from tissue and tissue constructs used in transplantation and tissue reconstruction
US7651387B2 (en) * 2008-03-28 2010-01-26 Southern Lights Ventures 2002 Limited Apparatus and method for processing bovine pericardium
DE102008022319A1 (en) 2008-04-30 2009-11-05 Aesculap Ag Implant, in particular for restoring and / or regenerating human and / or animal tissue
JP5424147B2 (en) * 2009-06-26 2014-02-26 学校法人早稲田大学 Method and device for holding biological tissue during storage processing, and biological tissue subjected to storage processing
US9211361B2 (en) 2010-03-15 2015-12-15 Kemal Schankereli Thin collagen tissue for medical device applications
DE102011008604A1 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Tutogen Medical Gmbh Preparation of a graft of animal dermis with sodium sulfide solution
CN104524634B (en) * 2014-12-17 2017-01-18 陕西佰傲再生医学有限公司 Preparation method of tissue repair material
EP3693030A1 (en) 2019-02-07 2020-08-12 P+F Products + Features GmbH Method for preparing biological tissue for surgical implantation
CN111420122A (en) * 2020-04-30 2020-07-17 山东隽秀生物科技股份有限公司 Biological membrane capable of inducing bone regeneration and preparation method thereof

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4006083A (en) 1975-10-09 1977-02-01 Caterpillar Tractor Co. Pressure differential switch
DE3034273A1 (en) 1979-09-12 1981-04-02 Seton Co., Newark, N.J. REGENERATED COLLAGEN AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
US4456589A (en) 1982-07-08 1984-06-26 Genetic Laboratories, Inc. Preparation of animal tissues for surgical implantation in human recipients
WO1984004669A1 (en) 1983-05-24 1984-12-06 American Hospital Supply Corp Barrier layer for implantable tendons and ligaments
US4502159A (en) 1982-08-12 1985-03-05 Shiley Incorporated Tubular prostheses prepared from pericardial tissue
EP0172716A1 (en) * 1984-08-14 1986-02-26 Shiley Incorporated Retarded mineralization of implantable tissue by surface active betaines
GB2196008A (en) * 1985-06-19 1988-04-20 Mo Nii Microchirurg Process for preparing ophthalmological collagen coverings and coverings prepared thereby
US4776853A (en) * 1986-07-28 1988-10-11 Hsc Research Development Corporation Process for preparing biological mammalian implants

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5043794A (en) * 1973-08-22 1975-04-19
US4066083A (en) * 1976-06-03 1978-01-03 Pentapharm A.G. Sterile surgical collagen product
DE2854490C2 (en) * 1978-12-16 1981-04-09 B. Braun Melsungen Ag, 3508 Melsungen Bone substitute material with improved biological stability based on collagen
JPS5675152A (en) * 1979-11-26 1981-06-22 Matsuda Ika Kogyo Reinforcing material for medical treatment
JPS5897365A (en) * 1981-11-30 1983-06-09 ヘモコン・ゲゼルシヤフト・ツ−ル・エントヴイツクルング・フオン・コラ−ゲンプロドウクテン Production of surgical collagen fiber
GB8413319D0 (en) * 1984-05-24 1984-06-27 Oliver Roy Frederick Biological material

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4006083A (en) 1975-10-09 1977-02-01 Caterpillar Tractor Co. Pressure differential switch
DE3034273A1 (en) 1979-09-12 1981-04-02 Seton Co., Newark, N.J. REGENERATED COLLAGEN AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
US4456589A (en) 1982-07-08 1984-06-26 Genetic Laboratories, Inc. Preparation of animal tissues for surgical implantation in human recipients
US4502159A (en) 1982-08-12 1985-03-05 Shiley Incorporated Tubular prostheses prepared from pericardial tissue
WO1984004669A1 (en) 1983-05-24 1984-12-06 American Hospital Supply Corp Barrier layer for implantable tendons and ligaments
EP0172716A1 (en) * 1984-08-14 1986-02-26 Shiley Incorporated Retarded mineralization of implantable tissue by surface active betaines
GB2196008A (en) * 1985-06-19 1988-04-20 Mo Nii Microchirurg Process for preparing ophthalmological collagen coverings and coverings prepared thereby
US4776853A (en) * 1986-07-28 1988-10-11 Hsc Research Development Corporation Process for preparing biological mammalian implants

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999048540A1 (en) * 1998-03-23 1999-09-30 Bio-Vascular, Inc. Implants and method of making
US6468313B1 (en) 1998-03-23 2002-10-22 Bio-Vascular, Inc. Implants and method of making
US20120323324A1 (en) * 2000-01-11 2012-12-20 Davna Buskirk Soft and calcified tissue implants
WO2003046055A1 (en) * 2001-11-22 2003-06-05 Matricel Gmbh Method for treating materials of biological origin and collagen-elastic product

Also Published As

Publication number Publication date
EP0438499B1 (en) 1994-06-08
US5413798A (en) 1995-05-09
WO1990003811A1 (en) 1990-04-19
DE58907855D1 (en) 1994-07-14
JP2624553B2 (en) 1997-06-25
CA1339093C (en) 1997-07-29
ATE106754T1 (en) 1994-06-15
JPH04501077A (en) 1992-02-27
DE3835237C1 (en) 1989-12-28
EP0438499A1 (en) 1991-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0438499B1 (en) Process for producing bovine pericardium material and use thereof
DE69725592T2 (en) METHOD FOR OBTAINING A SUITABLE COLLAGEN-BASED MATRIX FROM SUBMUKOSA TISSUE
DE60014966T2 (en) TREATMENT FOR AVOIDING CALCIFICATION FOR FIXED BIOMATERIALS
DE69720243T2 (en) CHEMICAL MODIFICATION OF BIOMEDICAL MATERIALS WITH GENIPIN
DE3918628C2 (en) Process for the production of a cross-linked biopolymer based on collagen, implant from this biopolymer and process for the production of this implant
EP0052288B1 (en) Collagen preparations, process for their preparation and their use in human and veterinary medicine
DE69909096T2 (en) NETWORKING OF BIOPROTHESIS MATERIAL TO REDUCE CALCIFICATION AFTER IMPLANTATION
DE69731553T2 (en) TUBULAR TRANSPLANT FROM CLEANED SUBMUKOSA
DE69822255T2 (en) Method of crosslinking collagen material and bioprosthetic devices made therefrom
DE60009339T2 (en) COMPOSITION FOR TISSUE REGENERATION
EP0401199B1 (en) Method for the preparation of biological implant material
EP0012959B1 (en) Method of preparation of collagen-based bone substitute material with improved biological stability and bone substitute material obtained by this method
DE102011008604A1 (en) Preparation of a graft of animal dermis with sodium sulfide solution
EP1286708B1 (en) Method for producing a bio-artificial transplant
EP0321442B1 (en) Biologically absorbable implant material, and method for its preparation
EP1124593B1 (en) Method for preparing bone material
EP1354515B1 (en) Preserved tissue matrix of a hollow organ, in particular a blood vessel, method for its preparation and its use
EP1791422B1 (en) Sterilisation method for the production of implantable or transplantable biological material
DE102008013091A1 (en) Implant producing method for wound cover i.e. spongy-like and/or fleece-like body, involves producing suspension, which comprises telopeptide-containing collagen, and producing planar formation by drying of collagen containing mixture
EP3110246B1 (en) Method for preserving porcine cartilage tissue
EP0012443B1 (en) Dental pulp cavity filling material consisting of collagen, and method of its preparation
EP0069156A1 (en) Method for the preparation of transplants with higher biological stability
DD280466B5 (en) Method of making tissue implants
DD271054A1 (en) METHOD FOR PRODUCING TISSUE TRANSPLANTS AND BIOIMPLANTATES
DD280466A1 (en) Method of making tissue implants

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): ES GR

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: REQUEST FOR EXAMINATION WAS MADE

17P Request for examination filed

Effective date: 19900627

RBV Designated contracting states (corrected)

Designated state(s): AT BE CH DE ES FR GB GR IT LI LU NL SE

RBV Designated contracting states (corrected)

Designated state(s): AT BE ES GR

XX Miscellaneous (additional remarks)

Free format text: VERFAHREN ABGESCHLOSSEN INFOLGE VERBINDUNG MIT 89911979.6/0438499 (EUROPAEISCHE ANMELDENUMMER/VEROEFFENTLICHUNGSNUMMER) VOM 12.02.93.

REG Reference to a national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: 8566