DE69633679T2

DE69633679T2 - Substituierte aryl-oder heteroarylamide mit retinoid-ähnlicher biologischer aktivität

Info

Publication number: DE69633679T2
Application number: DE69633679T
Authority: DE
Inventors: Min Teng; Tien T. Duong; A. Roshantha CHANDRARATNA
Original assignee: Allergan Inc
Current assignee: Allergan Inc
Priority date: 1995-11-22
Filing date: 1996-11-19
Publication date: 2006-02-09
Anticipated expiration: 2016-11-20
Also published as: US6320047B1; DE69633679D1; NZ323574A; HUP9901993A2; US20020091262A1; MX206851B; MX9804103A; KR19990071542A; IL124593A; HUP9901993A3; US6245786B1; ATE280160T1; US5917048A; US6437129B1; CA2238310A1; BR9611615A; US6051713A; JP4125785B2; IL143747A0; JP2000500498A

Description

1. Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Verbindungen, die ein Retinoid-artige biologische Aktivität aufweisen. Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere Amide, die zwischen Aryl- oder Heteroarylaminen und Aryl- oder Heteroarylcarbonsäuren gebildet werden, bei denen eine der aromatischen oder heteroaromatischen Komponenten einen Elektronenabziehenden Bestandteil trägt. Die Verbindungen weisen eine Retinoid-artige biologische Aktivität auf.
2. Hintergrund
Verbindungen, die eine Retinoid-artige Wirksamkeit aufweisen, sind in der Technik wohl bekannt und in zahlreichen US- und anderen Patenten und wissenschaftlichen Publikationen beschrieben worden. Es ist im Allgemeinen bekannt und in der Technik akzeptiert, dass eine Retinoid-artige Wirksamkeit zur Behandlung von Tieren der Säugetierspezies, einschließlich von Menschen, zum Heilen oder Lindern der Symptome und Zustände zahlreicher Krankheiten und Leiden von Nutzen ist. Es ist mit anderen Worten in der Technik allgemein akzeptiert, dass pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine Retinoid-artige Verbindung oder Verbindungen als wirksamen Inhaltsstoff aufweisen, als Regulatoren der Zellproliferation und Differentiation bzw. Differenzierung und insbesondere als Mittel zur Behandlung Hautbezogener Erkrankungen, einschließlich aktinischer Keratosen, Arsen-Keratosen, entzündlicher und nicht-entzündlicher Akne, Psoriasis, Ichtyosen und anderer Keratinisierungs- und hyperproliferativer Störungen der Haut, Ekzem, atopischer Dermatitis, Darrier-Krankheit, Lichen planus, Vorbeugung und Umkehrung einer Glucocorticoid-Schädigung (Steroidatrophie), als topisches antimikrobielles Mittel, als Haut-Anti-Pigmentierungsmittel und zur Behandlung und Umkehrung der Wirkungen des Alters und der Lichtschädigungen der Haut, verwendet werden können. Retinoid-Verbindungen sind ebenfalls zur Vorbeugung und Behandlung kanzeröser und präkanzeröser Zustände von Nutzen, einschließlich prämaligner und maligner hyperproliferativer Erkrankungen, wie beispielsweise Krebs der Brust, der Haut, der Prostata, der Zervix, des Uterus, des Darms, der Blase, des Ösophagus, des Magens, der Lunge, der Larynx, der Mundhöhle, des Blut- und lymphatischen Systems, von Metaplasien, Dysplasien, Neoplasien, Leukoplakien und Papilloma der Schleimhautmembranen und bei der Behandlung des Kaposi-Sarkoms. Zusätzlich können Retinoid-Verbindungen als Mittel zur Behandlung von Krankheiten des Auges einschließlich, ohne Beschränkung, proliferativer Vitreoretinopathie (PVR), Netzhautablösung, trockenem Auge und anderen Corneopathien verwendet werden, ebenso wie in der Behandlung und Vorbeugung verschiedener kardiovaskulärer Erkrankungen, einschließlich, ohne Beschränkung, von Krankheiten, die mit dem Lipid-Stoffwechsel verbunden sind, beispielsweise Dyslipidämien, der Vorbeugung einer Post-Angioplastie-Restinosis und als Mittel zur Erhöhung der Konzentration an zirkulierendem Gewebsplasminogenaktivator (TPA). Andere Verwendungen für Retinoid-Verbindungen schließen die Vorbeugung und Behandlung von Zuständen und Krankheiten ein, die mit dem humanen Papilloma-Virus (HPV) in Verbindung stehen, einschließlich von Warzen und Genitalwarzen, verschiedene entzündliche Erkrankungen, wie beispielsweise Lungenfibrose, Ileitis, Colitis und Morbus Crohn, neurodegenerative Erkrankungen, wie beispielsweise die Alzheimer Krankheit, Parkinson Krankheit und Schlaganfall, nicht richtige Hirnanhangsdrüsen-Funktion, einschließlich einer nicht ausreichenden Produktion von Wachstumshormon, die Modulation der Apoptose einschließlich sowohl der Induktion der Apoptose und einer Hemmung einer T-Cell-aktivierten Apoptose, der Wiederherstellung des Haarwachstums, einschließlich von Kombinationstherapien mit den vorliegenden Verbindungen und anderen Mitteln, wie beispielsweise Minoxidil^®, Krankheiten, die mit dem Immunsystem verbunden sind, einschließlich der Verwendung der vorliegenden Verbindungen als immunsuppressive Mittel und Immunstimulanzien, eine Modulation der Organtransplantatabstoßung und die Erleichterung der Wundheilung, einschließlich der Modulation der Chelosis bzw. Narbenbildung.
US-Patent Nr. 4 723 028 (Shudo), die veröffentlichte Europäische Patentanmeldung Nr. EP-A-0 170 105 (Shudo), EP-A-0 617 020 (Shudo), EP-A-0 619 116, die Deutsche Patentanmeldung Nr. DE-35 24 199 A1 (Shudo), PCT WO 91/16051 (Spada et al.), PCT WO 85/04652 (Polus), S. Keidel et al., Eur. J. Biochem; 212, 13–26 (1993), Seiten 13–25 und J. Med. Chem. 1988, 31, 2182–2192 (Kagechika et al.) beschreiben oder betreffen Aryl- und Heteroaryl- oder Diaryl-substituierte Olefine oder Amide, die eine Retinoid-artige oder verwandte biologische Aktivität aufweisen. Sun et al. (Chem. Abs. 117, 1992, 124091) offenbart die inhibitorische Wirkung eines Diarylamids auf murine Papilloma.
Die US-Patente Nr. 4 992 468, 5 013 744, 5 068 252, 5 175 185, 5 202 471, 5 264 456, 5 324 840, 5 326 898, 5 349 105, 5 391 753, 5 414 007 und 5 434 173 (angemeldet auf denselben Anmelder wie in der vorliegenden Anmeldung) und die darin erwähnten Patente und Veröffentlichungen beschreiben oder betreffen Verbindungen, die eine Retinoid-artige biologische Aktivität aufweisen und eine Struktur, bei der ein Phenyl und ein Heteroaryl oder ein Phenyl und eine zweite Phenyl-Gruppe mit einer olefinischen und acetylenischen Bindung gebunden sind. Noch weiter betreffen mehrere gleichzeitig anhängige Anmeldungen und kürzlich erteilte Patente, die auf den Anmelder der vorliegenden Anmeldung übertragen wurden, weitere Verbindungen mit einer Retinoid-artigen Aktivität.
Es ist in der Technik nunmehr allgemeines Wissen, dass zwei Haupttypen von Retinoid-Rezeptoren in Säugetieren existieren (und auch in anderen Organismen). Die beiden Haupttypen oder Familien von Rezeptoren werden jeweils als RARs und RXTs bezeichnet. Innerhalb jedes Typs existieren Subtypen; in der RAR-Familie werden die Subtypen als RAR_α, RAR_β und RAR_τ bezeichnet, und in RXR sind die Subtypen: RXR_α, RXB_β und RXR_τ. Es wurde ebenfalls in der Technik etabliert, dass die Verteilung der beiden Retinoid-Hauptrezeptortypen und der mehreren Subtypen in den verschiedenen Geweben und Organen und Säugetierorganismen nicht gleichförmig ist. Demgemäß zählt bei den Verbindungen, die dazu in der Lage sind, an Retinoid-Rezeptoren zu binden, die Spezifität oder Selektivität für einen der Haupttypen oder Familien oder sogar eine Spezifität oder Selektivität für ein oder mehrere Subtypen als eine wünschenswerte pharmakologische Eigenschaft.
Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen mit einer Retinoid-artigen biologischen Aktivität bereit und insbesondere Verbindungen, die an einen oder mehrere RAR-Retinoid-Rezeptorsubtypen binden.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen der Formel 1
bei der X CH oder N ist;
W₁ H oder OH ist;
W₂ H, F oder NO₂ ist;
W₃ H, F oder NO₂ ist;
R₈ H, CH₃ oder C₂H₅ ist, mit dem Vorbehalt, dass, wenn X CH ist, dann W₁, W₂ und W₃ alle nicht H sind und zumindest eines von W₁ und W₂ aus den Gruppen ausgewählt ist, die aus F und NO₂ bestehen.
Verbindungen der Erfindung können zur Behandlung von Haut-bezogenen Krankheiten verwendet werden, einschließlich, ohne Beschränkung, aktinischer Keratosen, Arsen-Keratosen, entzündlicher und nicht-entzündlicher Akne, Psoriasis, Ichtyosen und anderen Keratinisierungs- und hyperproliferativen Störungen der Haut, Ekzem, atopische Dermatitis, Darrier-Krankheit, Lichen planus, Vorbeugung und Umkehrung einer Glucocorticoid-Schädigung (Steroidatrophie), als topisches antimikrobielles Mittel, als Haut-Anti-Pigmentierungsmittel und zur Behandlung und Umkehrung der Wirkungen des Alters und einer Lichtschädigung der Haut. Die Verbindungen sind ebenfalls zur Vorbeugung und Behandlung kanzeröser und präkanzeröser Zustände von Nutzen, einschließlich prämaligner und maligner hyperproliferativer Erkrankungen, wie beispielsweise Krebs der Haut, der Brust, der Prostata, der Zervix, des Uterus, des Darms, der Blase, des Ösophagus, des Magens, der Lunge, der Larynx, der Mundhöhle, des Blut- und lymphatischen Systems, von Metaplasien, Dysplasien, Neoplasien, Leukoplakien und Papilloma der Schleimhautmembranen und bei der Behandlung des Kapo si-Sarkoms. Zusätzlich können die vorliegenden Verbindungen als Mittel zur Behandlung von Erkrankungen des Auges einschließlich, ohne Beschränkung, proliferativer Vitreoretinopathie (PVR), Netzhautablösung, trockenes Auge und weiteren Corneopathien, ebenso wie in der Behandlung und Vorbeugung verschiedener kardiovaskulärer Erkrankungen, einschließlich, ohne Beschränkung, von Krankheiten, die mit dem Lipid-Stoffwechsel verbunden sind, wie beispielsweise Dyslipidämien, der Vorbeugung einer Post-Angioplastie-Restinosis und als Mittel zur Erhöhung des Spiegels an zirkulierendem Gewebsplasminogenaktivator (TPA). Andere Verwendungen für die Verbindungen der vorliegenden Erfindung schließen die Vorbeugung und Behandlung von Zuständen und Krankheiten ein, die mit dem menschlichen Papilloma-Virus (HPV) assoziiert sind, einschließlich Warzen und Genitalwarzen, verschiedene entzündliche Erkrankungen, wie beispielsweise Lungenfibrose, Ileitis, Colitis und Morbus Crohn, neurodegenerative Erkrankungen, wie beispielsweise die Alzheimer Krankheit, Parkinson Krankheit und Schlaganfall, nicht-geeignete Hirnanhangsdrüsen-Funktion, einschließlich einer nicht ausreichenden Produktion von Wachstumshormon, einer Modulation der Apoptose, einschließlich sowohl der Induktion der Apoptose als auch der Hemmung der T-Cell-aktivierten Apoptose, der Wiederherstellung des Haarwachstums, einschließlich von Kombinationstherapien mit den vorliegenden Verbindungen und anderen Mitteln, wie beispielsweise Minoxidil^®, Krankheiten, die mit dem Immunsystem in Verbindung stehen, einschließlich der Verwendung der vorliegenden Verbindungen als immunsuppressive Mittel und Immunstimulanzien, die Modulation einer Organtransplantatabstoßung und die Erleichterung der Wundheilung, einschließlich einer Modulation der Chelosis.
Die Erfindung betrifft ebenfalls eine pharmazeutische Zubereitung, die die Verbindung nach Formel 1 in Mischung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel 1 umfassen das Umsetzen einer Verbindung der Formel 2 mit einer Verbindung nach Formel 3 in Gegenwart eines sauren Akzeptors oder Wasser-Akzeptors, wobei X₁ OH, Halogen oder eine andere Gruppe ist, die die -COX₁-Gruppe für die Amid-Bildung reaktiv macht, wobei R₁ tertiäres Butyl ist und m 2 ist, W H oder OH und p 1 ist, Y Phenyl ist, B CO₂R₈ ist, W' H ist, F oder NO₂ ist, r 2 ist und wobei die verbleibenden Symbole wie in Verbindung mit Formel 1 definiert sind.
Formel 2
Formel 3

H₂N-Y(W')r-B

Allgemeine Ausführungsformen – Definitionen
Der Begriff Alkyl betrifft und deckt ab alle und jede Gruppen, die als normales Alkyl, verzweigtkettiges Alkyl und Cycloalkyl bekannt sind. Der Begriff Alkenyl betrifft und deckt ab normales Alkenyl, verzweigtkettiges Alkenyl und Cycloalkenyl-Gruppen mit einer oder mehreren Stellen einer Unsättigung. In ähnlicher Weise betrifft der Begriff Alkinyl und deckt ab normales Alkinyl und verzweigtkettige Alkinyl-Gruppen mit ein oder mehreren Dreifachbindungen.
Niederes Alkyl bedeutet die oben erwähnte breite Definition von Alkyl-Gruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen im Falle von normalem niederen Alkyl und, falls anwendbar, 3 bis 5 Kohlenstoffatome für niedere verzweigtkettige und Cycloalkyl-Gruppen. Niederes Alkenyl ist in ähnlicher Weise mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen für normale niedere Alkenyl-Gruppen und 3 bis 6 Kohlenstoffatome für verzweigtkettige und niedere Cycloalkenyl-Gruppen definiert. Niederes Alkenyl ist ebenfalls in ähnlicher Weise definiert, als 2 bis 6 Kohlenstoffatome für normale niedere Alkenyl-Gruppen und 4 bis 6 Kohlenstoffatome für verzweigtkettige niedere Alkenyl-Gruppen.
Der Begriff „Ester" wie hierin verwendet, betrifft und deckt ab irgendeine Verbindung, die in die Definition dieses Begriffes fällt, wie er klassischerweise in der organischen Chemie verwendet wird. Er schließt organische und anorganische Ester ein. Dieser Begriff deckt die Produkte ab, die aus der Behandlung der Funktion -COOH mit Alkoholen oder Thioalkoholen gewonnen werden, vorzugsweise mit aliphatischen Alkoholen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen. Wenn der Ester von Verbindungen mit der Funktion -CH₂OH abgeleitet ist, deckt dieser Begriff Verbindungen ab, die aus organischen Säuren abgeleitet sind, die zur Bildung von Estern in der Lage sind, einschließlich von Phosphor-basierten und Schwefel-basierten Säuren, oder Verbindungen der Formel -CH₂OCOR₁₁, wobei R₁₁ irgendeine substituierte oder unsubstituierte aliphatische, aromatische, heteroaromatische oder aliphatisch-aromatische Gruppe ist, vorzugsweise mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen in den aliphatischen Anteilen.
Soweit nichts anderes in der Anmeldung angegeben ist, sind bevorzugte Ester aus den gesättigten aliphatischen Alkoholen oder Säuren von 10 oder weniger Kohlenstoffatomen oder den zyklischen oder gesättigten aliphatisch-zyklischen Alkoholen und Säuren von 5 bis 10 Kohlenstoffatomen abgeleitet. Besonders bevorzugte aliphatische Ester sind solche, die aus niederen Alkylsäuren und Alkoholen abgeleitet sind. Ebenfalls bevorzugt sind die Phenyl- oder niederen Alkylphenylester.
Der Begriff Amide weist die Bedeutung auf, die diesem Begriff in der organischen Chemie klassischerweise zugeordnet wird. Er schließt in diesem Falle die unsubstituierten Amide und alle aliphatischen und aromatischen mono- und disubstituierten Amide ein. Soweit in dieser Anmeldung nichts anderes angegeben ist, sind bevorzugte Amide die mono- und disubstituierten Amide, die aus den gesättigten aliphatischen Radikalen von 10 oder weniger Kohlenstoffatomen oder den zyklischen oder gesättigten aliphatisch-zyklischen Radikalen von 5 bis 10 Kohlenstoffatomen abgeleitet sind. Besonders bevorzugte Amide sind solche, die aus substituierten und unsubstituierten niederen Alkylaminen gewonnen werden. Ebenfalls bevorzugt sind mono- und disubstituierte Amide, die aus den substituierten und unsubstituierten Phenyl- oder niederen Alkylphenylaminen abgeleitet sind. Unsubstituierte Amide werden ebenfalls bevorzugt.
Acetale und Ketale schließen die Radikale der Formel -CK ein, wobei K (-OR)₂ ist. Hier ist R niederes Alkyl. Ebenfalls kann K -OR₇O sein, wobei R₇ niederes Alkyl von 2 bis 5 Kohlenstoffatomen, geradkettig oder verzweigt ist.
Ein pharmazeutisch verträgliches Salz kann für irgendwelche Verbindungen in dieser Erfindung hergestellt werden, das eine Funktionalität hat, die dazu in der Lage ist, solche Salze zu bilden, beispielsweise eine saure Funktionalität. Ein pharmazeutisch verträgliches Salz ist jedes Salz, das die Aktivität der Stammverbindung beibehält und keine schädlichen oder abträglichen Wirkungen auf das Subjekt, das behandelt wird, und im Kontext, in dem es verabreicht wird, ausübt. Pharmazeutisch verträgliche Salze können aus organischen oder anorganischen Basen abgeleitet sein. Das Salz kann ein ein- oder mehrwertiges Ion sein. Von speziellem Interesse sind die anorganischen Ionen Natrium, Kalium, Kalzium und Magnesium. Organische Salze können mit Aminen hergestellt werden, insbesondere Ammoniumsalze wie beispielsweise Mono-, Di- und Trialkylamine oder Ethanolamine. Salze können ebenfalls mit Koffein, Tromethamin und ähnlichen Molekülen gebildet werden. Wenn ein Stickstoff existiert, der ausreichend basisch ist, dass er zur Bildung von sauren Additionssalzen in den Lage ist, können solche mit anorganischen oder organischen Säuren oder Alkylierungsmitteln, wie beispielsweise Methyliodid, gebildet werden. Bevorzugte Salze sind solche, die mit anorganischen Säuren, wie beispielsweise Salzsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure gebildet werden. Irgendwelche einer Vielzahl von einfachen organischen Säuren, wie beispielsweise Mono-, Di- oder Trisäuren, können ebenfalls verwendet werden.
Einige der Verbindungen der vorliegenden Erfindung können trans- und cis-(E und Z) Isomere aufweisen. Zusätzlich können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung ein oder mehrere Chiralitätszentren enthalten und können deswegen in einer enantiomeren und diastereomeren Form existieren. Der Umfang der vorliegenden Erfindung soll all solche Isomere per se abdecken, ebenso wie Gemische aus cis- und trans-Isomeren, Gemische aus Diasteromeren und racemische Gemische von Enantiomeren (optische Isomere) genauso.
Die am meisten bevorzugten Verbindungen der Erfindung sind in Tabelle 1 dargestellt, unter Bezugnahme auf Formel 1.
Formel 1
Tabelle 1
Verabreichungswege
Die Verbindungen dieser Erfindung können systemisch oder topisch verabreicht werden, abhängig von solchen Erwägungen wie dem zu behandelnden Zustand, dem Bedarf nach einer ortsspezifischen Behandlung, der zu verabreichenden Menge an Arzneistoff und zahlreichen weiteren Erwägungen.
In der Behandlung von Dermatosen wird es im Allgemeinen bevorzugt sein, den Arzneistoff topisch zu verabreichen, wobei in bestimmten Fällen, beispielsweise der Behandlung einer schweren zystischen Akne oder einer Psoriasis, die orale Verabreichung ebenfalls angewendet werden kann. Irgendeine übliche topische Formulierung, beispielsweise eine Lösung, Suspension, Gel, Creme oder Salbe und dergleichen können verwendet werden. Die Zubereitung solcher topischen Zubereitungen ist in der Literatur der pharmazeutischen Zubereitungen wohl beschrieben, wie beispielsweise in Remington's Pharmaceutical Science, Ausgabe 17, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania. Zur topischen Verabreichung können diese Verbindungen ebenfalls als Pulver oder Spray, insbesondere in Aerosolform, verabreicht werden. Wenn der Arzneistoff systemisch verabreicht werden soll, kann er als Pulver, Pille, Tablette oder dergleichen oder als Sirup oder Elixier verabreicht werden, die zur oralen Verabreichung geeignet sind. Zur intravenösen oder intraperitonealen Verabreichung wird die Verbindung als Lösung oder Suspension zubereitet werden, die dazu in der Lage ist, durch Injektion verabreicht zu werden. In bestimmten Fällen kann es nützlich sein, diese Verbindungen durch Injektion zu formulieren. In bestimmten Fällen kann es von Nutzen sein, diese Verbindungen in Suppositorienform oder als Formulierung mit verlängerter Freisetzung zur Ablagerung unter der Haut oder durch intramuskuläre Injektion zu formulieren.
Weitere Medikamente können einer solchen topischen Zubereitung zu sekundären Zwecken wie der Behandlung der Hauttrockenheit, der Bereitstellung eines Schutzes gegen Licht; weitere Medikationen zur Behandlung von Dermatosen; Medikamente zur Behandlung einer Infektion, zur Reduzierung einer Irritation bzw. Reizung, Entzündung und dergleichen, zugesetzt werden.
Eine Behandlung von Dermatosen oder irgendwelchen anderen Indikationen, von denen bekannt ist oder entdeckt wird, dass sie gegenüber einer Behandlung mit Retinoidsäure bzw. Retinsäure-artigen Verbindungen empfänglich sind, werden durch Verabreichung der thera peutisch wirksamen Dosis einer oder mehrerer Verbindungen der vorliegenden Erfindung bewirkt werden. Eine therapeutische Konzentration ist diejenige Konzentration, die eine Reduktion des speziellen Zustandes bewirkt oder dessen Ausbreitung verlangsamt. In bestimmten Fällen kann die Verbindung potentiell in einer prophylaktischen Weise verwendet werden, um den Ausbruch eines speziellen Zustandes zu vermeiden.
Eine nützliche therapeutische oder prophylaktische Konzentration variiert von Zustand zu Zustand und kann in bestimmten Fällen mit dem Schweregrad des zu behandelnden Zustandes oder der Empfänglichkeit bzw. Empfindlichkeit des Patienten gegenüber der Behandlung variieren. Demgemäß wird nicht nur eine einzige Konzentration nützlich sein, sondern wird eine Modifikation abhängig von den speziellen Einzelheiten der zu behandelnden Krankheit eine Modifikation erfordern. Solche Konzentrationen können durch Routineexperimente erreicht werden. Es wird jedoch angenommen, dass in der Behandlung beispielsweise der Akne oder ähnlicher Dermatosen eine Formulierung, die zwischen 0,01 und 1,0 mg pro ml Zubereitung enthält, eine therapeutisch wirksame Konzentration zur Gesamtanwendung darstellen wird. Wenn sie systemisch verabreicht wird, würde eine Menge zwischen 0,01 und 5 mg pro kg pro Tag pro Körpergewicht als ein therapeutisches Ergebnis in der Behandlung vieler Erkrankungen, für die diese Verbindungen von Nutzen sind, wirksam erachtet werden.
Assay der Retinoid-artigen biologischen Aktivität
Die Retinoid-artige Aktivität der Verbindungen der Erfindung kann in Assays bestätigt werden, bei denen die Fähigkeit der Verbindung, an Retinoid-Rezeptoren zu binden, gemessen wird. Wie es im einleitenden Abschnitt dieser Anmeldung erwähnt wird, existieren zwei Haupttypen von Retinoid- bzw. Retinsäure-Rezeptoren (RAR und RXR) in Säugetieren (und anderen Organismen). Innerhalb jedes Typs existieren Subtypen (RAR_α, RAR_β, RAR_τ, RXR_α, RXR_β und RXR_τ), deren Verteilung in den verschiedenen Geweben und Organen von Säugetierorganismen nicht gleichförmig ist. Die selektive Bindung von nur einem oder zwei Retinoidrezeptor-Subtypen innerhalb einer Retinoidrezeptor-Familie kann vorteilhafte pharmakologische Eigenschaften ergeben, wegen der variierenden Verteilung der Subtypen in mehreren Säugetiertypen oder Organen. Aus den oben zusammengefassten Gründen wird die Bindung jedes oder aller der Retinoid-Rezeptoren ebenso wie eine spezifische oder selektive Aktivität in einer Rezeptorfamilie oder eine selektive oder spezifische Aktivität in einem der Rezeptor-Subtypen als wünschenswerte pharmakologische Eigenschaft betrachtet.
Im Lichte des Vorhergehenden hat der Stand der Technik Assay-Verfahren zum Testen der Agonisten-artigen Aktivität der Verbindungen in den RAR_α-, RAR_β-, RAR_τ-, RXR_α-, RXR_β- und RXR_τ-Rezeptor-Subtypen entwickelt. Beispielsweise ist ein chimerer Rezeptor-Transaktivierungsassay, der auf eine Agonisten-artige Aktivität in den RAR_α-, RAR_β-, RAR_τ-, RXR_α-Rezeptor-Subtypen testet und der auf den Arbeiten basiert, veröffentlicht von Feigner, P. L., und Hol, M. (1989), Focus, 11 2, ausführlich im US-Patent Nr. 5 455 265 beschrieben. Die Beschreibung des US-Patents Nr. 5 455 265 ist durch diese Bezugnahme hierin ausdrücklich mitaufgenommen.
Ein Holorezeptor-Transaktivierungsassay und ein Liganden-Bindungsassay, der das Vermögen der Verbindungen der Erfindung testet, an mehrere Retinoidrezeptor-Subtypen zu binden, ist jeweils in der veröffentlichten PCT-Anmeldung Nr. WO 93/11755 beschrieben (insbesondere auf den Seiten 30–33 und 37–41), veröffentlicht am 24. Juni 1993, deren Beschreibung durch diese Bezugnahme hierin mitaufgenommen ist. Eine Beschreibung des Liganden-Bindungsassays ist ebenfalls nachstehend bereitgestellt.
Bindungsassay
Alle Bindungsassays wurden in einer ähnlichen Weise durchgeführt. Alle sechs Rezeptortypen wurden aus dem exprimierten Rezeptortyp (RARα, β, τ und RXRα, β, τ) gewonnen, exprimiert in Baculoviren. Stammlösungen aller Verbindungen wurden als 10 mM Ethanol-Lösungen hergestellt und Serienverdünnungen wurden in 1 : 1-DMSO; Ethanol durchgeführt. Assay-Puffer bestanden aus den folgenden für alle sechs Rezeptorassays: 8% Glycerol, 120 mM KCl, 8 mM Tris, 5 mM CHAPS, 4 mM DTT und 0,24 mM PMSF, pH 7,4 bei Raumtemperatur.
Alle Rezeptor-Bindungsassays wurden in derselben Weise durchgeführt. Das endgültige Assayvolumen betrug 250 μl und enthielt von 10–40 μg Extrakt Protein abhängig vom Rezeptor, der untersucht wurde, zusammen mit 5 nM (³H) All-trans-Retinsäure oder 10 nM (³H) 9 cis-Retinsäure und variierende Konzentrationen von konkurrierendem Ligand bei Konzentrationen, die sich von 0–10^–5 M bewegten. Die Assays wurden für ein 96-Well-Mini-Tube-System formatiert. Inkubationen wurden bei 4°C durchgeführt, bis ein Gleichgewicht erreicht war. Eine unspezifische Bindung war als diejenige definiert, die in Gegenwart von 10.000 nM des geeigneten unmarkierten Retinsäureisomers verblieb. Am Ende der Inkubationszeitspanne wurden 50 μl 6,25% Hydroxyapatit in einem geeigneten Waschpuffer zugesetzt. Der Waschpuffer bestand aus 100 mM KCl, 10 mM Tris und entweder 5 mM CHAPS (RXRα, β, τ) oder 0,5% Triton X-100 (RARα, β, τ). Das Gemisch wurde gevortexed und für 10 Minuten bei 4°C inkubiert, zentrifugiert, und der Überstand wurde entfernt. Das Hydroxyapatit wurde dreimal mehr mit dem geeigneten Waschpuffer gewaschen. Der Rezeptor-Ligandenkomplex wurde durch Hydroxyapatit adsorbiert. Die Menge an Rezeptor-Ligandkomlex wurde durch Flüssigkeitsszintillations-Zählen von Hydroxyapatit-Pellets bestimmt.
Nach Korrektur der unspezifischen Bindung wurden die IC₅₀-Werte bestimmt. Der IC₅₀-Wert ist als die Konzentration an konkurrierendem Liganden definiert, die erforderlich ist, um die spezifische Bindung um 50% zu reduzieren. Der IC₅₀-Wert wurde graphisch aus einem Loglogit-Plot der Daten bestimmt. Die K_d-Werte wurden durch Anwendung der Cheng-Prussof-Gleichung auf die IC₅₀-Werte, die markierte Liganden-Konzentration und den K_d des markierten Liganden bestimmt. Die Ergebnisse des Liganden-Bindungsassays wurden in K_d-Zahlen ausgedrückt (siehe Cheng et al., Biochemical Pharmacology, Bd. 22, Seiten 3099–3108, hierin ausdrücklich durch Bezugnahme mitaufgenommen).
Tabelle 2 zeigt die Ergebnisse des Liganden-Bindungsassays für bestimmte beispielhafte Verbindungen der Erfindung.
Tabelle 2
Wie aus den Testergebnissen ersichtlich ist, die in Tabelle 2 zusammengefasst sind, binden die darin angezeigten beispielhaften Verbindungen an RAR_α-Rezeptoren spezifisch oder selektiv.
KREBSZELLLINIEN-ASSAYS
Materialien und Methoden
Hormone
All-trans-Retinsäure (t-RA) (Sigma Chemicals Corp., St. Louis, MO) wurde bei –70°C aufbewahrt. Vor dem Experiment wurde die Verbindung in 100% Ethanol zu 1 mM aufgelöst und in Kulturmedium unmittelbar vor Verwendung verdünnt. Alle Experimente wurden in gedämpftem Licht durchgeführt. Die Kontrollen wurden unter Verwendung derselben Konzentration an Ethanol, wie sie in den experimentellen Platten vorlagen, untersucht, und diese Konzentration an Verdünnungsmittel wies in keinem Assay eine Wirkung auf.
Zellen und Zellkultur
Alle Zelllinien, RPMI 8226, ME-180 und AML-193, wurden von der American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) bezogen. RPMI 8226 ist eine humane hämatopoetische Zelllinie, gewonnen aus dem Peripherblut eines Patienten mit einem multiplen Myelom. Die Zellen ähneln den Lymphoplastoidzellen anderer humaner Lymphozytenzelllinien und sezernieren α-Typ-Leichtketten von Immunglobulin. Die RPMI-8226-Zellen wurden in RPMI-Medium (Gibco) gezüchtet, ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum, Glutamin und Antibiotika. Die Zellen wurden als Suspensionskulturen gehalten, bei 37°C in einer befeuchteten Atmosphäre von 5% CO₂ in Luft gezüchtet. Die Zellen wurden bis zu einer Konzentration von 1 × 10⁵/ml zweimal pro Woche verdünnt.
ME-180 ist eine humane epidermoide Karzinomzelllinie, die aus der Cervix gewonnen wurde. Der Tumor war ein hoch-invasives Plattenepithelkarzinom im irregulären Zellclustern und keiner signifikanten Keratinisierung. Die ME-180-Zellen wurden im McCoy's 5a-Medium (Gibco) gezüchtet und aufrechterhalten, ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum, Glutamin und Antibiotika. Die Zellen wurden als Monolayer-Kulturen gehalten, die bei 37°C in einer angefeuchteten Atmosphäre von 5% CO₂ in Luft gezüchtet wurden. Die Zellen wurden auf eine Konzentration von 1 × 10⁵/ml zweimal pro Woche verdünnt.
AML-193 wurde aus den Blast-Zellen etabliert, klassifiziert als akute Monozyten-Leukämie M5. Der Wachstumsfaktor, nämlich Granulozytenkolonie-Stimulationsfaktor (GM-CSF) war dazu erforderlich, diese Zelllinie zu etablieren und Wachstumsfaktoren sind für seine kontinuierliche Proliferation in einem chemisch definierten Medium notwendig. Die AML-193-Zellen wurden in Iscove's modified Dulbecco's Medium gezüchtet und aufrechterhalten, ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum, Glutamin und Antibiotika mit 5 μg/ml Insulin (Sigma Chemical Corp.) und 2 ng/ml rh GM-CSRF (R and D Systems). Die Zellen wurden auf eine Konzentration von 3 × 10⁵/ml zweimal pro Woche verdünnt.
Einbau von ³H-Thymidin
Das zur Bestimmung des Einbaus an radiomarkiertem Thymidin verwendete Verfahren wurde für das von Shrivastav et al. beschriebene Verfahren angepasst. RPMI-8226-Zellen wurden in einer 96-Well-Rundboden-Mikrotiterplatte (Costar) in einer Dichte von 1.000 Zellen/Well ausplattiert. Zu geeigneten Wells wurden Retinoid-Testverbindungen in den Endkonzentrationen zugesetzt, die für ein Endvolumen von 150 μl/Well angegeben sind. Die Platten wurden für 96 Stunden bei 37°C in einer angefeuchteten Atmosphäre von 5% CO₂ in Luft inkubiert. Anschließend wurde 1 μCi von (5'-³H)-Thymidin (Amersham, UK, 43 Ci/mmol spezifische Aktivität) in 25 μl Kulturmedium jedem Well zugesetzt und die Zellen für zusätzliche 6 Stunden inkubiert. Die Kulturen wurden weiter wie unten beschrieben verarbeitet.
ME-180-Wells, geerntet durch Trypsinisierung, wurden in einer 96-Well-Flachboden-Miktrotiterplatte (Costar) in einer Dichte von 2.000 Zellen/Well ausplattiert. Die Kulturen wurden wie oben beschrieben für RPMI 8226 behandelt, mit den folgenden Ausnahmen. Nach Inkubation mit Thymidin wurde der Überstand vorsichtig entfernt und die Zellen wurden mit einer 0,5 mM Lösung und Thymidin in Phosphat-gepufferter Salzlösung gewaschen. ME-180-Zellen wurden kurz mit 50 μl 2,5% Trypsin behandelt, um die Zellen von der Platte zu entfernen.
AML-193-Zellen wurden in einer 96-Well-Rundboden-Mikrotiterplatte (Costar) in einer Dichte von 1.000 Zellen/Well ausplattiert. Den geeigneten Wells wurden Retinoid- Testverbindungen in den für ein Endvolumen von 150 μl/Well angegebenen Endkonzentrationen zugesetzt. Die Platten wurden für 96 Stunden bei 37°C in einer angefeuchteten Atmosphäre von 5% CO₂ in Luft inkubiert. Anschließend wurde 1 μCi von (5'-³H)-Thymidin (Amersham, UK, 43 Ci/mmol spezifische Aktivität) in 25 μl Kulturmedium jedem Well zugesetzt und die Zellen wurden für zusätzliche 6 Stunden inkubiert.
Alle Zelllinien wurden darauf wie folgt verarbeitet: Die zelluläre DNA wurde mit 10% Trichloressigsäure auf Glasfaserfilterkissen unter Verwendung eines SKATRON Multi-Well-Zellerntegerätes präzipitiert (Skatron Instruments, Sterlin, VA). Die in der DNA enthaltene Radioaktivität wurde als direktes Maß des Zellwachstums durch Flüssigkeits-Szintillationszählung gemessen. Die Zahlen repräsentieren den durchschnittlichen Zerfall pro Minute von eingebautem Thymidin aus dreifachen Wells ± Standardabweichung des Mittelwerts. In den oben erwähnten In-vitro-Zelllinien verursachte die beispielhafte Verbindung 2 der Erfindung eine signifikante Abnahme der Proliferation der Tumorzelllinien (wie durch Einbau von radioaktiv markiertem Thymidin gemessen) im 10^–11 bis 10^–6 molaren Konzentrationsbereich der Testverbindung.
Spezielle Ausführungsformen
Die Verbindungen dieser Erfindung können durch die chemischen Synthesewege hergestellt werden, die hierin dargestellt sind. Der Synthesechemiker wird klar erkennen, dass die hier dargelegten Bedingungen spezielle Ausführungsformen sind, die auf jede und alle der durch Formel 1 repräsentierten Verbindungen verallgemeinert werden können.
Allgemein gesprochen, umfasst das Verfahren der Herstellung der Verbindungen der Erfindung die Bildung eines Amids durch Reaktion einer Verbindung der allgemeinen Formel 2 mit einer Verbindung der allgemeinen Formel 3, wie diese Formeln in dem Abschnitt Zusammenfassung der vorliegenden Patentanmeldung definiert sind. Somit ist, wie oben erwähnt, eine Verbindung der Formel 2 eine Säure oder eine „aktivierte Form" einer Carbonsäure, die an einen substituierten Phenyl- (in Formel 1 ist X CH) oder einen substituierten Pyridyl- (in Formel 1 ist X N) Ring gebunden ist.
Der Begriff „aktivierte Form" der Carbonsäure sollte in dieser Hinsicht als ein solches Derivat der Carbonsäure verstanden werden, das dazu in der Lage ist, ein Amid zu bilden, wenn es mit einem primären Amin der Formel 3 umgesetzt wird.
Dies bedeutet allgemein gesprochen solche Derivate einer Carbonsäure, von denen normalerweise bekannt ist und die in der Technik verwendet werden, um Amid-Bindungen mit einem Amin zu bilden. Beispiele für geeignete Formen oder Derivate für diesen Zweck sind Säurechloride, Säurebromide und Ester der Carbonsäure, insbesondere aktive Ester, bei denen die Alkoholkomponente des Esters eine gute Austrittsgruppe bildet. Gegenwärtig am meisten bevorzugt als Reagenzien gemäß Formel 2 sind Säurechloride (X₁ ist Cl). Die Säurechloride von Formel 2 können durch traditionelle Verfahren aus den entsprechenden Estern hergestellt werden (X₁ ist beispielsweise Ethyl), durch Hydrolyse und durch Behandlung mit Thionylchlorid (SOCl₂).
Die Säurechloride von Formel 2 können ebenfalls durch direkte Behandlung der Carbonsäuren mit Thionylchlorid hergestellt werden, wobei die Carbonsäure eher als der Ester hiervon kommerziell erhältlich oder durch ein bekanntes Syntheseverfahren erhältlich ist. Die Säurechloride von Formel 2 werden typischerweise mit dem Amin von Formel 3 in einem inerten Lösungsmittel umgesetzt, wie beispielsweise Methylenchlorid, in Gegenwart eines Säureakzeptors wie beispielsweise Pyridin.
Die Carbonsäuren selbst gemäß Formel 2 sind ebenfalls zur Amid-Bildung geeignet, wenn sie mit einem Amin, einem Katalysator (4-Dimethylaminopyridin) in Gegenwart eines dehydratisierenden Mittels wie beispielsweise Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) oder besonders bevorzugt 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid (EDC) umgesetzt werden.
Die Carbonsäuren oder die entsprechenden Ester von Formel 2 werden allgemein gesprochen wie in der chemischen wissenschaftlichen oder Patentliteratur beschrieben hergestellt und die Literaturverfahren zu ihrer Herstellung können, falls notwendig, durch solche chemischen Reaktionen und Prozesse modifiziert werden, die in der Technik per se bekannt sind. Reaktionsschema 1 stellt ein Beispiel für die Herstellung einer 2,6-di-tert-Butylisonicotinsäure (Verbindung C) bereit, die ein Reagenz gemäß Formel 2 zur Herstellung mehrerer bevorzugter Verbindungen der vorliegenden Erfindung ist. Somit wird 2,6-di-tert-Butyl-4-methylpyridin (kommerziell erhältlich von Aldrich Chemical Corp.) mit N-Bromsuccinimid und Benzoylperoxid umgesetzt, um 4-Brommethyl-2,6-di-tert-Butylpyridin (Verbindung A) bereitzustellen. Verbindung A wird mit einer Base (Natriumhydroxid) umgesetzt, um die entsprechende Hydroxymethyl-Verbindung (Verbindung B) zu ergeben, die danach in einer Jones-Oxidationsreaktion oxidiert wird, um 2,6-di-tert-Butylisonicotinsäure zu ergeben (Verbindung C).
Reaktionsschema 1
Reaktionsschema 1 (Fortsetzung)
Ein weiteres Beispiel für eine Verbindung, die als Reagenz zur Herstellung der Carbamoyl-(oder Amid)-Verbindungen der vorliegenden Erfindung dient, ist in Reaktionsschema 1 bereitgestellt. 2,4-di-tert-butylphenol (Aldrich) wird in Eisessig bromiert, um 2-Brom-4,6-di-tert-butylphenol (Verbindung D) bereitzustellen, das danach mit Methoxymethylchlorid (MOMCl) umgesetzt wird, so dass sich O-Methoxymethyl-2-brom-4,6-di-tert-butylphenol (Verbindung E) ergibt. Verbindung E wird mit t-Butyllithium, gefolgt von Kohlendioxid, behandelt, so dass sie O-Methoxymethyl-3,5-di-tert-butylsalicylsäure (Verbindung F) ergibt. Verbindung F ist ein Reagenz, dass sich von den im Allgemeinen von Formel 2 umfassten Verbindungen nur dadurch unterscheidet, als die Hydroxyl-Funktion dieser Verbindung durch die Methoxymethyl(MOM)-Gruppe geschützt wird. Jedoch wird die Methoxymethyl-Schutzgruppe nach Bildung der Carbamoyl(amid)-Bindung, wie in Reaktionsschema 5 beispielhaft aufgeführt wird, entfernt. Die Reaktion einer aromatischen Brom-Verbindung (bei spielsweise Verbindung D) mit t-Butyllithium, gefolgt von Kohlendioxid, ist ein bevorzugtes Verfahren zur Herstellung mehrerer aromatischer Carbonsäuren gemäß Formel 2, beschrieben in der vorliegenden Anmeldung.
Reaktionsschema 2
Reaktionsschema 2 stellt Beispiele für die Herstellung aromatischer Aminocarbonsäuren oder Ester bereit, die als Reagenzien entsprechend Formel 3, oben beschrieben, dienen. Somit wird gemäß Reaktionsschema 2 3-Nitro-6-methyl-fluorbenzol (Aldrich) einer Oxidation, einer Umwandlung der sich ergebenden Carbonsäure in ein Säurechlorid und danach in einen Ethylester, unterworfen, gefolgt von einer Reduktion der Nitro-Gruppe, so dass sich Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G) ergibt. Als weiteres Beispiel wird 2,4,6-Trifluorbenzoesäure in den Methylester durch das Säurechlorid umgewandelt und das 4-Fluor-Atom wird durch Reaktion mit Natriumazid verdrängt, so dass sich das Zwischenpro dukt der Azido-Verbindung (Verbindung H) ergibt. Verbindung H wird durch Hydrierung reduziert, so dass sich Methyl-2,6-difluor-4-aminobenzoat ergibt (Verbindung I). Als noch weiteres Beispiel wird 2-Nitro-4-aminobenzoesäure (Research Plus Inc.) in seinen Methylester (Verbindung K) durch das entsprechende Säurechlorid umgewandelt.
Reaktionsschema 3
Lediglich für beispielhafte Zwecke veranschaulicht Reaktionsschema 3 die Synthese primärer Amino-Verbindungen aus den Säurechloriden (X₁ = C₁) oder einer anderen Form aktivierter Säuren von Formel 2, wobei das primäre Amin nicht durch ein veröffentlichtes Literatur-Verfahren verfügbar ist. Somit wird im Wesentlichen gemäß der Schritte einer Curtius-Umlagerung das Säurechlorid von Formel 2 mit Natriumazid in Azeton umgesetzt, um die Azid-Verbindung von Formel 5 zu ergeben. Das Azid von Formel 5 wird in einem polaren hoch-siedenden Lösungsmittel erhitzt, beispielsweise t-Butanol, um das Isocyanat- Zwischenprodukt von Formel 6 bereitzustellen, das zu einer primären Amino-Verbindung hydrolysiert wird.
Reaktionsschema 4
Lediglich für beispielhafte Zwecke veranschaulicht Reaktionsschema 4 Beispiele zur Herstellung von Verbindungen, die nicht kommerziell erhältlich sind, oder die nicht durch ein veröffentlichtes Literaturverfahren erhältlich sind. Somit wird auf dem Wege eines Beispiels 2,5-Difluor-4-brombenzoesäure (erhältlich nach dem Literaturverfahren von Sugawara et al., Kogyo Kaguku Zasshi, 1970, 73, 972–979, hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen) zunächst durch Behandlung mit Ethylalkohol und Säure verestert, um den entsprechenden Ester zu ergeben, und wird danach mit Butyllithium umgesetzt, gefolgt von Kohlendioxid, so dass sich der Monoester von 2,5-Difluorterephthalsäure ergibt (Verbindung L). Eine ähnlich Reaktionsfolge, die mit 2,3,5,6-Difluor-4-brombenzoesäure durchgeführt wird (erhältlich aus dem Literaturverfahren von Reuman et al., J. Med. Chem. 1995, 38, 2531–2540, hierin durch Bezugnahme mit aufgenommen) ergibt die Monoester der 2,3,5,6-Tetrafluorterephthalsäure (Verbindung M). Die gerade dargestellte Reaktionsfolge kann allgemein gesprochen zur Synthese der Verbindungen mit einer solchen Modifikation verwendet werden, die für den Fachmann auf dem Gebiet klar erkenntlich sind, wobei solche Verbindungen nicht durch ein bekanntes Literatur-Verfahren erhältlich sind.
Zahlreiche weitere Reaktionen, die zur Herstellung von Verbindungen der Erfindung und zur Umwandlung von Verbindungen der Formel 1 innerhalb des Umfangs der vorliegenden Erfindung in noch weitere Verbindungen der Erfindung geeignet sind und ebenfalls zur Herstellung der Reagenzien von Formel 2 und Formel 3, werden für den Fachmann auf dem Gebiet im Lichte der vorliegenden Offenbarung leicht erkennbar werden. In dieser Hinsicht wird die folgende allgemeine Synthesemethodologie, anwendbar auf die Umwandlung der Verbindungen der Formel 1 in weitere Homologe und/oder Derivate und ebenfalls zur Herstellung der Reagenzien von Formel 2 und 3 erwähnt.
Carbonsäuren werden typischerweise durch Rückflusskühlung der Säure in einer Lösung des geeigneten Alkohols in Gegenwart eines sauren Katalysators wie beispielsweise Salzsäure oder Thionylchlorid verestert.
Alternativ kann die Carbonsäure mit dem geeigneten Alkohol in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid und Dimethylaminopyridin kondensiert werden. Der Ester wird wiedergewonnen und durch herkömmliche Mittel aufgereinigt. Acetale und Ketale werden einfach durch das in March, „Advanced Organic Chemistry", 2. Ausgabe, McGraw-Hill Book Company, Seite 810), beschriebene Verfahren hergestellt. Alkohole, Aldehyde und Ketone können durch Ausbildung von jeweils Ethern und Estern, Acetalen oder Ketalen durch bekannte Verfahren geschützt werden, wie beispielsweise solche, die in McOmie, Plenum Publishing Press, 1973 und Protecting Groups, Hsg. Greene, John Wiley & Sons, 1981, beschrieben sind.
Die Säuren und Salze, die aus den Verbindungen der Formel 1 abgeleitet sind, werden einfach aus den entsprechenden Estern gewonnen. Eine basische Verseifung mit einer Alkalimetallbase wird die Säure ergeben. Beispielsweise kann ein Ester der Formel 1 in einem polaren Lösungsmittel, wie beispielsweise einem Alkanol, gelöst werden, vorzugsweise unter einer Inertatmosphäre bei Raumtemperatur, mit einem ungefähr dreifachen molaren Überschuss an Base, beispielsweise Kalium oder Lithiumhydroxid. Die Lösung wird für eine verlängerte Zeitspanne zwischen 15 und 20 Stunden gerührt, abgekühlt, angesäuert, und das Hydrolysat durch herkömmliche Mittel wiedergewonnen.
Das Amid kann durch geeignete Amidierungsmittel, die in der Technik bekannt sind, aus den entsprechenden Estern oder Carbonsäuren gebildet werden. Ein Weg, solche Verbindungen herzustellen, besteht darin, eine Säure in ein Säurechlorid umzuwandeln und darauf diese Verbindung mit Ammoniumhydroxid oder einem geeigneten Amin zu behandeln.
Alkohole können durch Umwandeln der entsprechenden Säure in das Säurechlorid mit Thionylchlorid oder anderen Mitteln hergestellt werden (J. March, „Advanced Organic Chemistry", 2. Ausgabe, McGraw-Hill Book Company) und darauf Reduzieren des Säurechlorids mit Natriumborhydrid (March, ebd., Seite 1124), was die entsprechenden Alkohole ergibt. Alternativ können Ester mit Lithiumaluminiumhydrid bei reduzierten Temperaturen reduziert werden. Ein Alkylieren dieser Alkohole mit geeigneten Alkylhalogeniden unter Williamson-Reaktionsbedingungen (March, ebd., Seite 357) ergibt die entsprechenden Ether. Diese Alkohole können durch deren Umsetzung mit geeigneten Säuren in Gegenwart von sauren Katalysatoren oder Dicyclohexyldiimid und Dimethylaminopyridin umgewandelt werden.
Aldehyde können aus den entsprechenden primären Alkoholen unter Verwendung milder Oxidationsmittel wie beispielsweise Pyridiniumdichromat in Methylenchlorid hergestellt werden (Corey, E. J., Schmidt, G., Tet. Lett., 399, 1979) oder wie Dimethylsulfoxid/Oxalylchlorid in Methylenchlorid (Omura, K. Swern, D., Tetrahedron, 1978, 34, 1651).
Ketone können aus einem geeigneten Aldehyd durch Behandlung des Aldehyd mit einem Alkyl-Grignard-Reagenz oder einem ähnlichen Reagenz, gefolgt von Oxidation, hergestellt werden.
Acetale oder Ketale können aus dem entsprechenden Aldehyd oder Keton durch das in March, ebd., Seite 810 beschriebene Verfahren hergestellt werden.
Reaktionsschema 5
Reaktionsschema 5 (Fortsetzung)
Reaktionsschema 5 veranschaulicht Beispiele zur Bildung der Carbamoyl(amid)-Verbindungen der vorliegenden Erfindung durch Umsetzen eines Reagenz von Formel 2 mit einem Reagenz von Formel 3. Somit wird 2,6-di-tert-Butylisonicotinsäure (Verbindung C) mit Thionylchlorid (SOCl₂) umgesetzt, um das Zwischenproduktsäurechlorid bereitzustellen, das darauf mit Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G) in Gegenwart eines Säureakzeptors (Pyridin) umgesetzt wird, um Ethyl 2-fluor-4[(2'6'-di-tert-butylpyrid-4'yl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 1) zu ergeben. Als weiteres Beispiel wird 3,5-di-tert-Butylbenzoesäure (erhältlich durch das Literaturverfahren von Kagechika et al., J. Med. Chem. 1988, 31, 2182, hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen) mit Thionylchlorid umgewandelt, gefolgt von Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G), um Ethyl 2-fluor-4-[(3'5'-di-tert-butylphenyl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 5) zu ergeben. Als noch weiteres Beispiel wird O-Methoxymethyl-3,5-di-tert-butylsalicylsäure (Verbindung F) mit Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G) in Gegenwart eines 4-Dimethylaminopyridin (DMAP)-Katalysators und 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid (EDC) umgesetzt, um Ethyl 2-fluor-4-[(2-methoxymethyl-3'5-di-tert-butylphenyl)carbamoyl]benzoat (Verbindung N) zu ergeben. Die Methoxymethyl-Schutzgruppe wird von Verbindung N durch Behandlung mit Bortrifluoridetherat und Thiophenol entfernt, um Ethyl 2-fluor-4-[(2'-hydroxy-3'5'-di-tert-butylphenyl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 7) zu ergeben.
In einem noch weiteren Beispiel, dargestellt in Reaktionsschema 5, wird 2,6-di-tert-Butylisonicotinsäure (Verbindung C) mit Thionylchlorid (SOCl₂) umgesetzt, wird das sich ergebende Zwischenprodukt des Säurechlorids mit Methyl-2,6-difluor-4-aminobenzoat (Verbindung I) umgesetzt, gefolgt von Verseifung der Ester-Gruppe, so dass sich 2,6-Difluor-4-[(2'6'-di-tert-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 10) ergibt. Die 3,5-Ditert-butylbenzoesäure wird derselben Reaktionsfolge unterworfen, um 2,6-Difluor-4-[(3'5'-di-tert-butylphenyl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 12) zu ergeben.
Als noch weiteres Beispiel, dargestellt in Reaktionsschema 5, wird 2,6-di-tert-Butylisonicotinsäure (Verbindung G) mit Thionylchlorid (SOCl₂) umgesetzt, gefolgt von Methyl 2-nitro-4-aminobenzoat (Verbindung K) und Verseifung der Ester-Funktion, so dass sich 2Nitro-4-[(2'6'-di-tert-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 14) ergibt.
Spezielle Beispiele
4-Brommethyl-2,6-di-t-butylpyridin (Verbindung A)
Einem Gemisch aus 2,6-di-t-butyl-4-methylpyridin (Aldrich, 2,0 g, 9,73 mmol) in 25 ml wasserfreiem CCl₄ wurde Benzoylperoxid (24 mg, 0,097 mmol) und NBS (1,9 g, 10,7 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für 16 Stunden unter Rückflusskühlung erhitzt. Nach dessen Abkühlung auf Raumtemperatur wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie (Silicagel, Hexan) gereinigt, so dass sich ein Öl (1,957 g) ergab, das 82% des erwünschten Produktes und 18% des Ausgangsmaterials enthielt. ¹H NMR δ 7.09 (s, 2H), 4.39 (s, 2H), 1.35 (s, 18H).
4-Hydroxymethyl-2,6-di-t-butylpyridin (Verbindung B)
Eine heterogene Lösung aus 4-Brommethyl-2,6-di-t-butylpyridin (Verbindung A, 1,743 g, 82% Reinheit) in 20 ml 12% NaOH in Wasser und 10 ml 1,4 Dioxan wurde für 12 Stunden unter Rückflusskühlung erhitzt. Die Lösung trennte sich spontan in zwei Schichten, wenn sie auf Raumtemperatur abgekühlt wird. Die obere Schicht wurde abgetrennt und Ethylacetat wurde zugesetzt. Diese organische Schicht wurde darauf mit Salzlösung, Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Das erwünschte Produkt wurde durch Säulenchromatographie aufgereinigt (Ethylacetat/Hexan 1/9), so dass sich ein weißer Feststoff ergab. ¹H NMR δ 7.09 (s, 2H), 4.67 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 2.3 (b, 1H), 1.36 (s, 18H)
2,6-di-t-Butylisonicotinsäure (Verbindung C)
Jone's-Reagenz wurde tropfenweise einer Lösung aus 4-Hydroxymethyl-2,6-di-t-butylpyridin (Verbindung B, 302 mg, 1,37 mmol) in 5 ml Aceton zugesetzt, bis die Lösung ihre Farbe von Hellgelb nach Orange veränderte (55 Tropfen Jone's-Reagenz wurden verbraucht). Nach 5 Minuten wurden 2 ml Isopropanol dem Reaktionsgemisch zugesetzt und ein grünes Präzipitat aus Cr³⁺-Salz wurde gebildet. Das Präzipitat wurde durch Filtration entfernt und die Lösung wurde mit Ethylacetat verdünnt, darauf mit Salzlösung und Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Nach Filtration wurde das Lösungsmittel entfernt, so dass sich das erwünschte Produkt als weißer Feststoff (227 mg) ergab. ¹H NMR δ 7.71 (s, 2H), 1.34 (s, 18H)
2-Brom-4,6-di-t-butylphenol (Verbindung D)
Einer Lösung aus 2,6-Di-t-butylphenol (Aldrich, 2,0 g, 9,7 mmol) in 2 ml HOAc wurde Br₂ (0,5 ml, 9,7 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan 1/20) aufgereinigt, um das erwünschte Produkt (2,54 g) als weißen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR δ 7.33 (d, J = 2.3 Hz, 1H)), 7.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.29 (s, 9H).
O-Methoxymethyl-2-brom-4,6-di-t-butylphenol (Verbindung E)
Einer Lösung aus 2-Brom-4,6-di-t-butylphenol (Verbindung D, 2,54 g, 8,88 mmol) und einer katalytischen Menge Bu₄NI in 20 ml wasserfreiem CH₂Cl₂ wurde bei 0°C Diisopropylethylamin (9,51 ml, 53 mmol) zugesetzt, gefolgt von Methoxymethylchlorid (2,02 ml, 26,6 mmol). Das Reaktionsgemisch wurde für 12 Stunden auf 45°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde darauf mit 10% Zitronensäure und darauf NaHCO₃ (gesättigt), Salzlösung gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Nach Filtration und Entfernung des Lösungsmittels unter reduziertem Druck wurde der Rückstand durch Säulenchromatographie (reines Hexan) aufgereinigt, so dass sich die Titelverbindung als farbloses Öl (2,79 g) ergab. ¹H NMR δ 7.40 (d, J = 2.44 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.29 (s, 9H).
O-Methoxymethyl-3',5'-di-t-butylsalicylsäure (Verbindung F)
Einer Lösung aus O-Methoxymethyl-2-brom-4,6-di-t-butylphenol (Verbindung E, 2,79 g, 8,5 mmol) in 30 ml wasserfreiem THF bei –78°C unter Argon wurden 11 ml t-BuLi (1,7 M in Hexan, 18,7 mmol) zugesetzt. Dieses Gemisch wurde bei –78°C für 1 Stunde gerührt. Darauf wurde CO₂ (g) in die Lösung bei –78°C für 1 Stunde eingeblasen. Nach Entfernung des CO₂-Stroms wurde das Reaktionsgemisch für eine zusätzliche Stunde bei –78°C gerührt. Darauf wurden 10% HCl zugesetzt und das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und es wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Nach Konzentration wurde der Rückstand durch Säulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan 1/1) aufgereinigt, um die Titelverbindung als weißen Feststoff (492 mg) zu ergeben. ¹H NMR δ 7.75 (d, J = 2.81 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H), 3.62 (s, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.26 (s, 9H).
Ethyl 4-amino-2-fluorbenzoat (Verbindung G)
Einem Gemisch aus 2-Fluor-4-nitrotoluol (1,0 g, 6,4 mmol, Aldrich) und Na₂Cr₂O₇ (2,74 g, 8,4 mmol) in 13,7 ml HOAc wurde langsam 6,83 ml H₂SO₄ zugesetzt. Das Gemisch wurde langsam für 1 Stunde auf 90°C erhitzt, um eine grünlich heterogene Lösung zu ergeben. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit Ethylacetat verdünnt. Der pH der Lösung wurde mit wässriger NaOH auf 4 eingestellt. Das Gemisch wurde mit zusätzlichem Ethylacetat extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit NaHCO₃ (gesättigt), darauf Salzlösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Nach Filtration wurde die Lösung bis zur Trockne konzentriert, und wurde dann in 6 ml SOCl₂ gelöst und für 1 Stunde auf 80°C erhitzt. Der Überschuss an SOCl₂ wurde unter reduziertem Druck entfernt und der Rückstand in 5 ml CH₂Cl₂, 2 ml EtOH und 2 ml Pyridin gelöst. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt und bis zur Trockne konzentriert. Ethyl 2-fluor-4-nitrobenzoat wurde als weißer Feststoff nach Säulenchromatographie des Rückstandes mit Ethylacetat/Hexan (1/9) gewonnen. Dieser Feststoff wurde in 10 ml Ethylacetat gelöst und Pd/C (50 mg) wurde zugesetzt. Die Hydrierung wandelte Ethyl 2-fluor-4-nitrobenzoat in die Titelverbindung um. ¹H NMR δ 7.77 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.41 (dd, J₁ = 9.6, J₂ = 2.2 Hz, 1H), 6.33 (dd, J₁ = 13.0, J₂ = 2,2 Hz, 1H), 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.3 (b, 2H), 1.37 (t, 3 = 7.1 Hz, 3H).
Methyl 4-amino-2,6-difluorbenzoat (Verbindung I)
Eine Lösung aus Trifluorbenzoesäure (150 mg, 0,85 mmol, Aldrich) in 0,5 ml SOCl₂ wurde unter Rückflusskühlung für 2 Stunden erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und überschüssiges SOCl₂ wurde unter reduziertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde in 1 ml Pyridin und 0,2 ml Methanol gelöst. Nach Rühren bei Raumtemperatur für 30 Minuten wurde das Lösungsmittel entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie aufgereinigt (Ethylacetat/Hexan 1/10), um Methyltrifluorbenzoat als farbloses Öl zu ergeben. Dieses Öl wurde darauf in 1 ml CH₃CN gelöst, darauf wurde eine Lösung aus NaN₃ (100 mg, 1,54 mmol) in 0,5 ml Wasser zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für 2 Tage unter Rückflusskühlung erhitzt. Das Salz wurde durch Filtration entfernt und die verbleibende Lösung wurde zu einem Öl konzentriert. Dieses Öl wurde darauf in 1 ml Methanol gelöst, gefolgt von einer katalytischen Menge an Pd/C (10% G/G). Das Reaktionsge misch wurde für 12 Stunden hydriert. Der Katalysator wurde entfernt und die Lösung zu einem Öl konzentriert. Nach Säulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan 1/3) wurde die Titelverbindung als farblose Kristalle gewonnen. ¹H NMR δ 6.17 (d, J = 10.44 Hz, 2H), 4.2 (b, 2H), 3.87 (s, 3H).
Methyl 2-nitro-4-aminobenzoat (Verbindung K)
2-Nitro-4-aminobenzoesäure (261 mg, 1,43 mmol) wurde in 1 ml SOCl₂ gelöst. Die Lösung wurde für 1 Stunde unter Rückflusskühlung erhitzt. Überschüssige SOCl₂ wurde unter reduziertem Druck entfernt und 5 ml CH₂Cl₂, 1 ml MeOH und TEA (0,24 ml, 1,7 mmol) wurden im Rückstand zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Überschüssige MeOH und TEA wurden entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie mit Ethylacetat/Hexan (1/3) aufgereinigt, um die Titelverbindung als gelben Feststoff (316 mg) zu ergeben. ¹H NMR δ 7.69 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.67 (dd, J = 8.3; 2.1 Hz, 1H), 4.31 (b, 2H), 3.94 (s, 3H).
Ethyl 2-fluor-4-[(2',6'-di-butylpyrid-4'yl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 1)
Eine Lösung aus 2,6-Di-t-butylisonicotinsäure (Verbindung C, 47,3 mg, 0,20 mmol) in 2 ml SOCl₂ wurden unter Rückflusskühlung für 2 Stunden erhitzt. Überschüssige SOCl₂ wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand in 2 ml wasserfreiem CH₂Cl₂ gelöst und Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G, 40,2 mg, 0,22 mmol) und Pyridin (0,0835 ml, 0,69 mmol) wurden zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 12 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan 1/9) aufgereinigt, um die Titelverbindung (71,2 mg) als weiße Feststoffe zu ergeben. ¹H NMR δ 8.56 (b, 1H), 7.91 (t, J = 8.36 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 12.82, 2.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.7, 2.0 Hz, 1H) 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.35 (s, 18H).
Ethyl 4-[2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 3)
Unter Verwendung desselben Verfahrens wie zur Synthese von Ethyl 2-fluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 1), jedoch unter Verwendung von 2,6-Di-t-butylisonicotinsäure (Verbindung C, 101 mg, 0,43 mmol) und Ethyl 4-aminobenzoat (78 mg, 0,47 mmol) wurde die Titelverbindung als weißer Feststoff (135 mg) gewonnen. ¹H NMR δ 8,43 (b, 1H), 8.02 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.48 (s, 2H), 4.33 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.38 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.35 (s, 18H).
Ethyl 2-fluor-4-[(3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 5)
Unter Verwendung desselben Verfahrens wie zur Synthese von Ethyl 2-fluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 1), jedoch unter Verwendung von 3,5-Di-t-butylbenzoesäure (60 mg, 0,26 mmol), erhältlich durch Literaturverfahren, siehe Kagechika et al., J. Med. Chem. 1988, 31, 2182–2192) und Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G, 51,5 mg, 0,28 mmol) wurde die Titelverbindung als weißer Feststoff erzielt (66 mg). ¹H NMR δ 8.21 (b, 1H), 7.03 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 12.8, 2.0 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 4.36 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.36 (s, 18H).
Ethyl 2-fluor-4-[(2'-methoxymethyl-3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoat (Verbindung N)
Einem Gemisch aus O-Methoxymethyl-3',5'-di-t-butylsalicylsäure (Verbindung F, 150 mg, 0,51 mmol), 4-Dimethylaminopyridin (142 mg, 0,61 mmol) und Ethyl 2-fluor-4-aminobenzoat (Verbindung G, 102 mg, 0,56 mmol) in 5 ml wasserfreiem CH₂Cl₂ wurde 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid (117 mg, 0,61 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 12 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum abgedampft und der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, darauf mit Salzlösung, Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Nach Filtration wurde das Lösungsmittel entfernt und der Rückstand durch Säulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan 1/3) aufgereinigt, um die Titelverbindung (58 mg) zu ergeben. ¹H NMR δ 8.97 (b, 1H), 7.94 (t, J = 8.37 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J) 2.6 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5.00 (s, 2H), 3.53 (s, 3H), 4.38 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.39 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1.33 (s, 9H).
Ethyl 2-fluor-4-[(2'-hydroxy-3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoat (Verbindung 7)
Einer Lösung aus Ethyl 2-fluor-4-[(2'-methoxymethyl-3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl] benzoat (Verbindung N, 34 mg, 0,07 mmol) in 1 ml THF wurden 10 Tropfen HOAc zuge setzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter Rückflusskühlung für 12 Stunden erhitzt. Das Lösungsmittel wurde entfernt und Ethylacetat wurde zugesetzt. Das Lösungsmittel wurde mit NaHCO₃ (gesättigt), Salzlösung, Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, um ein Öl zu ergeben. Man ließ das Öl sich der Atmosphäre gegenüber für 12 Stunden exponieren, und während dieser Zeit bildeten sich Kristalle. Die Kristalle wurden gesammelt und mehrere Male mit Hexan gewaschen, um die Titelverbindung als weißen Feststoff (13,5 mg) zu ergeben. ¹H NMR δ 10.73 (s, 1H), 7.98 (d, J = 2.56 Hz, 1H), 7.88 (b, 1H), 7.75 (t, J = 8.26 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 2.44 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 12.3, 2.0 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 8,6, 2.0 Hz, 1H), 4.35 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.5 (s, 9H).
2,6-Difluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 10)
Zu 2,6-Di-t-butylisonicotinsäure (Verbindung C, 20 mg, 0,085 mmol) wurde 1 ml SOCl₂ zugesetzt. Das Gemisch wurde unter Rückflusskühlung für 2 Stunden erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wurde überschüssiges SOCl₂ entfernt und der Rückstand in 2 ml CH₂Cl₂ gelöst. Dieser Lösung wurde Methyl-2,6-difluor-4-aminobenzoat (Verbindung I, 16 mg, 0,085 mmol) und Triethylamin (0,015 ml, 0,1 mmol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für 2 Stunden bei Raumtemperatur gehalten und darauf bis zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie mit Ethylacetat/Hexan (1/10) aufgereinigt, um den Methylester der Titelverbindung zu ergeben. Dieser wurde gemäß des allgemeinen Verfahrens (siehe unten) verseift, um die Titelverbindung als farblosen Feststoff zu ergeben. ¹H NMR δ 7.44 (s, 2H), 7.40 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 1.37 (s, 18H).
2,6-Difluor-4-[(3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl)benzoesäure (Verbindung 12)
Unter Verwendung desselben Verfahrens wie zur Herstellung von 2,5-Difluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 10), jedoch unter Verwendung von 3,5-Di-t-butylbenzoesäure (37 mg, 0,16 mmol) und Methyl 2,6-difluor-4-aminobenzoat (Verbindung I, 29 mg, 0,16 mmol) wurde die Titelverbindung als farblose Kristalle gewonnen. ¹H NMR δ 7.92 (b, 1H), 7.60 (m, 3H), 7.42 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 1.38 (s, 18H).
2-Nitro-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 14)
Unter Verwendung desselben Verfahrens wie zur Herstellung von 2,6-Difluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 10), jedoch unter Verwendung von 2,6-Di-t-butylisonicotinsäure (40 mg, 0,17 mmol) und Methyl 2-nitro-4-aminobenzoat (Verbindung K, 33 mg, 0,17 mmol) wurde die Titelverbindung als hellgelbes Öl gewonnen. ¹H NMR δ (Aceton-d⁶) 10.25 (b, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.93 (b, 1H), 7.70 (s, 2H), 1.36 (s, 18H).
Allgemeines Verfahren zur Synthese von Benzoesäure-Derivaten durch Hydrolyse der entsprechenden Methyl- oder Ethylester
Einer Lösung eines Esters (3,0 mmol) in 20 ml EtOH wurde 5 ml 1 N NaOH in Wasser zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und mit 10% HCl auf einen pH = 5 neutralisiert. Der Alkohol wurde durch Abdampfen entfernt und die wässrige Schicht wurde mit Ethylacetat (3 × 10 ml) extrahiert. Die Ethylacetat-Schicht wurde weiter mit NaHCO₃ (gesättigt), Salzlösung gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Nach Konzentration wurde die erwünschte Carbonsäure erhalten, die in Ethylacetat oder Acetonitril umkristallisiert werden konnte.
2-Fluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 2)

¹H NMR δ (CD₃ΟD) 7.92 (t, J = 8.36 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 12,82, 2.0 Hz, 1H), 7.63 (s, 2H), 7.55 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 1.39 (s, 18H).

4-[(2',6'-Di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure (Verbindung 4)

¹H NMR δ (CD₃OD) 8.02 (d, J = 9,95 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 8.85 Hz, 2H), 7.63 (s, 2H), 1.40 (s, 18H).

2-Fluor-4-[(3',5'-di-t-butyl)phenylcarbamoyl]benzoesäure (Verbindung 6)

¹H NMR δ (CD₃OD) 7.92 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 12.8, 2.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 7.69 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 1.37 (s, 18H).

2-Fluor-4-[(2'-hydroxy-3',5'-di-t-butyl)phenylcarbamoyl]benzoesäure (Verbindung 8)

¹H NMR δ (Aceton-d₆) 12.3 (b, 1H), 10.07 (b, 1H), 7.98 (t, J = 8.48 Hz, 1H), 7.80 (m, 2H), 7.58 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.31. (s, 9H).

Claims

Verbindung der Formel
wobei X CH oder N ist; W₁ H oder OH ist; W₂ H, F oder NO₂ ist; W₃ H, F oder NO₂ ist; R₈ H, CH₃ oder C₂H₅ ist, unter dem Vorbehalt, dass, wenn X CH ist, dann W₁, W₂ und W₃ nicht alle H sind und zumindest eines von W₁ und W₂ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus F und NO₂ besteht.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X N ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei W₂ F ist und W₃ H ist.
Verbindung nach Anspruch 3, die Ethyl 2-fuor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat oder 2-Fluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei W₂ F ist und W₃ F ist.
Verbindung nach Anspruch 5, die Methyl 2,6-difluor-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat oder 2,6-Difluor-5-[2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei W₂ NO₂ ist.
Verbindung nach Anspruch 7, die Methyl 2-nitro-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat oder 2-Nitro-4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Verbindung nach Anspruch 2, wobei W₁, W₂ und W₃ alle Wasserstoff sind.
Verbindung nach Anspruch 9, die Ethyl 4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoat oder 4-[(2',6'-di-t-butylpyrid-4'-yl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X CH ist.
Verbindung nach Anspruch 11, wobei W₂ F ist und W₃ H ist.
Verbindung nach Anspruch 12, die Ethyl 2-fluor-4-[(3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoat oder 2-Fluor-4-[(3',5'-di-t-butyl)phenyl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Verbindung nach Anspruch 11, wobei W₂ F ist und W₃ F ist.
Verbindung nach Anspruch 14, die Methyl 2,6-difluor-4-[(3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoat oder 2,6-Difluor-4-[(3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Verbindung nach Anspruch 11, wobei W₁ OH ist.
Verbindung nach Anspruch 16, die Ethyl 2-fluor-4-[(2'-hydroxy-3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoat oder 2-Fluor-4-[(2'-hydroxy-3',5'-di-t-butylphenyl)carbamoyl]benzoesäure ist.
Pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung nach einem der vorhergehenden Ansprüche und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.