DE3729189A1

DE3729189A1 - Analytisches verfahren

Info

Publication number: DE3729189A1
Application number: DE19873729189
Authority: DE
Inventors: Hajime Makiuchi; Yuzo Iwata; Kikuo Hirai; Kenji Wakabayashi
Original assignee: Fuji Photo Film Co Ltd
Current assignee: Fujifilm Holdings Corp
Priority date: 1986-09-01
Filing date: 1987-09-01
Publication date: 1988-03-03
Also published as: JPS6361147A; JPH0672845B2; US5047351A

Description

Gebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein analytisches Verfahren, mit dem eine spezielle Komponente bzw. ein spezieller Bestand teil in einer fluiden Probe, basierend auf einer opti schen Änderung, bestimmt wird, wie beispielsweise Kolori metrie. Insbesondere betrifft die Erfindung das Verkürzen der Analysierzeit in einem solchen analytischen Verfahren.

Beschreibung des Standes der Technik

Die kolorimetrische Analyse ist ein Verfahren, das auf einer optischen Änderung basiert, wie Färbung oder Farb änderung, welche durch die Reaktion eines geeigneten Rea gens mit der zu detektierenden Zielsubstanz (Analyt) verursacht wird. In einer konventionellen Analyse, bei der eine che mische Reaktion in Lösung erfolgt, wird ein Reagens, das mit dem Analyt zum Erzeugen einer optischen Änderung reagiert, zu der Probenlösung hinzugefügt. Andererseits wird in einem Trockenverfahren, wie es kürzlich ent wickelt worden ist, eine flüssige Probe punkt- bzw. fleckenförmig auf ein analytisches Element aufgebracht, welches das Reagens enthält, und die in dem Element auf tretende optische Änderung wird gemessen. Beispiele von analytischen Elementen vom Trockentyp sind in der US-Pa tenschrift 39 92 158, der US-Patentschrift 42 92 272, etc. beschrieben und dargestellt. Der Begriff "punkt- bzw. fleckenförmig aufgebracht" bedeutet im Rahmen der vorlie genden Beschreibung insbesondere "aufgetüpfelt oder auf gesprenkelt".

Wie oben beschrieben, ist es, wenn ein Reagens zu einer Probenlösung hinzugefügt wird oder wenn eine Probenlösung auf ein analytisches Element vom Trockentyp aufgetüpfelt oder aufgesprenkelt wird, so, daß der Analyt in der Probe mit dem Reagens reagiert, um eine Färbung o. dgl. zu er zeugen. Wenn z. B. eine Blutprobe oder eine Blutplasma probe auf ein analytisches Element vom Trockentyp, wie es in der US-Patentschrift 42 92 272 beschrieben ist, auf getüpfelt oder aufgesprenkelt wird, reagiert die Glucose in der Probe mit dem Reagens unter Bildung einer gefärb ten Substanz, wie beispielsweise einer rotgefärbten Sub stanz. Die optische Dichte des analytischen Elements vom Trockentyp entspricht dem Betrag an gefärbter Substanz, der erzeugt worden ist. Daher wird die optische Reflexions dichte nach einer vorgeschriebenen bzw. vorbestimmten Zeit gemessen, und sie bzw. ihr Meßwert wird in Glucosekonzen tration (Blutzuckerwert) umgewandelt, indem man eine vorher erhaltene Kalibrierungs- bzw. Eichkurve verwendet. Im Naßverfahren wird gewöhnlich die optische Transparenz- bzw. Durchlässigkeitsdichte gemessen.

Nach dem Stande der Technik erfolgte eine Messung der op tischen Dichte nur einmal nach einer vorbestimmten Zeit vom Auftüpfeln oder Aufsprenkeln der Probenlösung oder der Hinzufügung des Reagens aus, ausgenommen die Raten- bzw. Verhältnisauswertung zur Bestimmung der Enzymaktivi tät o. dgl. Jedoch endet die Reaktion im Falle einer nied rigeren Analytkonzentration in einer relativ kurzen Zeit dauer, und es ist generell nicht notwendig, zu warten, bis die obige vorgeschriebene bzw. vorbestimmte Zeit vergangen ist. Andererseits wird bei höherer Analytkon zentration die analytische Genauigkeit herabgesetzt, wenn die Reaktionszeit kurz ist, weil die Neigung der Kali brier- bzw. Eichkurve in diesem Falle klein ist und infolgedessen der Änderungskoeffizient der bestimmten bzw. ermittelten Konzentration zunimmt.

Kurzer Abriß der Erfindung

Ein Ziel der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Verfügung zu stellen, welches fähig ist, die Reaktionszeit auf das bzw. ein Minimum zu verkürzen, ohne daß die analytische Genauigkeit in der Kolorimetrie vermindert wird.

Dieses Ziel wird gemäß der Erfindung durch ein Verfahren erreicht, welches die folgenden Verfahrensschritte um faßt:

(a) Messen der optischen Dichte während zweier oder mehrerer Zeiten bzw. Male in geeigneten Zeitinter vallen bzw. zu Zeitpunkten, zwischen denen geeignete Zeitintervalle liegen, nach dem Beginn der Reaktion, um der Variation bzw. Änderung der optischen Dichte zu fol gen,
(b) Beurteilen, basierend auf der optischen Dichte, die bei der früheren Messung erhalten worden ist, ob die Reaktion weiter fortschreitet bzw. fortschreiten soll oder nicht,
(c) wenn geurteilt bzw. gefolgert wird, daß die Fortsetzung der Reaktion in Größen der analytischen Ge nauigkeit nicht notwendig ist, Auswählen der Kalibrier- bzw. Eichkurve, welche der Reaktionszeit entspricht,
(d) wohingegen, wenn geurteilt bzw. gefolgert wird, daß die Fortsetzung der Reaktion notwendig ist, weiter mit der Reaktion fortgefahren wird und
(e) Wiederholen der Verfahrensschritte (b) und (d), bis die Beurteilung bzw. Folgerung erhalten wird, daß die Fortsetzung bzw. Weiterführung der Reaktion nicht not wendig ist.

Kurze Beschreibung der Figuren der Zeichnung

Die Erfindung sei nachstehend in näheren Einzelheiten und unter Bezugnahme auf die Figuren der Zeichnung anhand von besonders bevorzugten Ausführungsformen und -beispielen näher beschrieben; es zeigt

Fig. 1 eine Schnittansicht einer Analysier einrichtung, die in einem Beispiel der Erfindung verwen det wird;

Fig. 2 eine Aufsicht auf den Objektträgerlade hebel der Analysiereinrichtung;

Fig. 3 ein repräsentatives Ablaufdiagramm;

Fig. 4 das Logikdiagramm, das in dem Beispiel angewandt wird;

Fig. 5 eine Kurvendarstellung, welche die Be ziehungen zwischen der Reaktionszeit und der optischen Reflexionsdichte, die unter Verwendung von Serumproben gemessen wurde, welche Glucose in verschiedenen Konzen trationen enthielten, wiedergibt; und

Fig. 6 eine Kurvendarstellung, welche die Kalibrier- bzw. Eichkurven für jede Reaktionszeit zeigt.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

In dem analytischen Verfahren nach der Erfindung wird zu nächst die Beziehung zwischen der Reaktionszeit und der optischen Dichte für verschiedene Analytkonzentrationen gemessen. Unter einem Analyt soll hier insbesondere die zu detektierende Zielsubstanz der Reaktion verstanden werden, die wiederum insbesondere ein Reaktionsprodukt sein kann, das in dem Bereich, in welchem die Reaktion stattfindet, die optische Dichte verändert; der Analyt kann auch die Substanz sein, die bei der Reaktion derart verbraucht wird, daß dadurch die optische Dichte im Reak tionsgebiet verändert wird. Bezüglich der besonders be vorzugten Definition des Analyten wird auf die vorlie gende Beschreibung des Standes der Technik verwiesen. Durch die obigen bzw. vorstehenden Beziehungen kann die obere Grenze der Reaktionszeit, die fähig ist bzw. in der man fähig ist, die effektive Veränderung der opti schen Dichte für jede Analytkonzentration zu erhalten, bestimmt werden. Dann wird die optische Grenzdichte als der Index für die Beurteilung, ob die Reaktion fortgesetzt werden sollte oder nicht, für jede Reaktionszeit bestimmt, und zwar basierend auf der Gesamtzunahme oder -abnahme der optischen Dichte danach. Nachfolgend werden die Kali brier- bzw. Eichkurven für die jeweiligen Reaktionszeiten erhalten.

Wenn eine Probe mittels des Trockenverfahrens analysiert wird, wird die Probe auf ein analytisches Element getupft oder gesprenkelt, um eine Farbreaktion einzuleiten. Im Falle eines Naßverfahrens wird ein Farbreagens zu der Pro benlösung hinzugefügt. Die Sprenkel- bzw. Tüpfel- oder Hinzufügungszeit wird angenähert als die Zeit zum Einlei ten bzw. Starten der Farbreaktion festgelegt bzw. einge stellt. Das analytische Element oder die Reaktionslösung wird unter konstanten Bedingungen gehalten. Die Zeitin tervalle zur Messung der optischen Dichte sind vorzugs weise gleich. Nach der ersten vorgeschriebenen bzw. vor bestimmten Zeit wird die optische Dichte des analytischen Elements oder der Reaktionslösung gemessen. Wenn die optische Dichte bei der ersten vorgeschriebenen bzw. vor bestimmten Reaktionszeit nicht die kritische optische Dichte erreicht, dann wird die optische Dichte bei dieser Zeit unter Verwendung der Kalibrier- bzw. Eichkurve für diese Reaktionszeit in die Analytkonzentration umgewandelt. Dann kann die Analyse der nächsten Probe begonnen werden. Wohingegen dann, wenn die optische Dichte größer als die optische Grenzdichte ist, die Reaktion weiter bis zu der zweiten vorgeschriebenen bzw. vorbestimmten Zeit fortgesetzt wird, und dann wird die optische Dichte er neut gemessen. Wenn die optische Dichte zu bzw. bei der zweiten vorgeschriebenen bzw. vorbestimmten Reaktionszeit nicht die optische Grenzdichte erreicht, wird die optische Dichte zu bzw. bei dieser Zeit unter Verwendung der Kali brier- bzw. Eichkurve für diese Reaktionszeit in die Analytkonzentration umgewandelt. Dann kann die Analyse der nächsten Probe begonnen werden. Wohingegen dann, wenn die optische Dichte größer als die optische Grenzdichte ist, die Reaktion weiter bis zu der dritten vorgeschrie benen bzw. vorbestimmten Zeit fortgesetzt wird, und diese Schritte werden wiederholt. Andererseits ist es nicht notwendig, diese Schritte zu wiederholen, wenn die Färbung ausreichend wird, um die optische Dichte genau messen zu können. Demgemäß wird vorzugsweise eine maximale Reak tionszeit vorherbestimmt. Diese maximale Reaktionszeit ist im Falle eines Naßverfahrens gewöhnlich eine konven tionelle Reaktionszeit.

Das Verfahren nach der Erfindung ist auf verschiedene Kolorimetrien anwendbar, und es ist besonders effektiv in den Kolorimetrien, in denen verschiedene integrale ana lytische Elemente vom Trockentyp verwendet werden, weil es hier notwendig ist, daß eine große Anzahl von Proben leistungsfähig gemessen wird. Zum Beispiel ist dieses Verfahren auf Kolorimetrien (hierunter sollen besondere kolorimetrische Verfahren verstanden werden), welche die folgenden Farbreaktionen benutzen, anwendbar:

1. Verschiedene Farbreaktionen, welche das Wasser stoffperoxid, das direkt oder indirekt durch die Reaktion mit dem Analyten erzeugt worden ist, detektieren. Zum Bei spiel:
- (a) Die Kopplungsreaktion zwischen einem Phenazon, wie beispielsweise 1-Phenyl-2,3-dimethyl-4-amino pyrazolin-5-on oder 1-(2,4,6-Trichlorphenyl)-2,3- dimethyl-4-aminopyrazolin-5-on, und einem Phenol, wie beispielsweise Phenol, α-Naphthol oder 1,7 Dihydroxynaphthalin, in der Gegenwart von Per oxidase oder anderen Substanzen, die Peroxid- Katalysierungsaktivität haben;
- (b) die Farbänderungsreaktion eines Chromogens vom Benzidintyp, wie beispielsweise Benzidin, o-Toluidin, o-Dianisidin oder Tetramethylbenzi din, in der Gegenwart von Peroxidase, etc. (siehe beispielsweise US-Patentschrift 29 81 606);
- (c) die farberzeugende Reaktion von einem Leuco-Farb stoff, der einen Imidazolring hat, wie beispiels weise 2,4,5-Triarylimidazol oder 2,4-Diaryl-5- alkylimidazol;
2. die Fomazan-Farbstoffbildungsreaktion von einem Tetraziumsalz bzw. Tetrazdiumsalz durch ein wahl- bzw. elektronenüber tragendes Mittel, welches konjugiert mit der Oxidations-Reduk tions-Reaktion zwischen NAD und NADH oder NADP und NADPH (siehe beispielsweise das japanische Patent KOKAI 59- 88 097);
3. die azobilirubinerzeugende Reaktion durch Binden eines aromatischen Diazoniumsalzes und Bilirubin (siehe bei spielsweise die US-Patentschrift 28 54 317, die US-Pa tentschrift 38 80 588, die europäische Offenlegungs- bzw. Patentschrift 01 15 873 A, etc.);
4. die azofarbstoffbildende Reaktion mittels Vanill mandelsäure und Diazoniumsalz, wie beispielsweise p-Nitro benzoldiazonium;
5. die farbbildende Reaktion von Creatinin und einem Picrat (Jaffe's Verfahren);
6. die Farbdissoziation von einem selbstfärbenden Substrat in der Gegenwart einer enzymatischen Aktivität. Zum Beispiel die Hydrolyse, welche p-Nitrophenol von einem p-Nitrophenol-substituierten Oligosaccharid erzeugt (US-Patentschrift 42 33 403), und die Hydrolyse, welche p-Nitrophenol von q-Glutamyl-p-nitroanilid oder p-Nitro phenolphosphat erzeugt;
7. die Reaktion eines Naphthylamins, wie N-(1-Naph thyl)-N′-diethylethylendiamin mit o-Phthalaldehyd und Harnstoff in einer sauren Umgebung (siehe beispielsweise ja panische Patente KOKAI 55-69 038 und 58-1 17 457);
8. die chelatfarbbildende Reaktion zwischen einem Metallion, beispielsweise einem Calciumion, und einem chelatierenden bzw. chelatbildenden Reagens, wie bei spielsweise 3,3-Bis[(di(carboxymethyl)amino)methyl]-o- kresolphthalein;
9. die Farbänderung eines Säure-Base-Indikators durch pH. Zum Beispiel die Farbänderungen von Phenolsulfo phthalein, Bromkresolgrün und Bromkresolpurpur;
10. die Farbänderung eines Säure-Base-Indikators durch Protein bzw. Eiweiß. Zum Beispiel die Farbänderun gen von Bromkresolgrün, Bromkresolpurpur, Tetrabromphenol blau u. dgl. durch Albumin, insbesondere bei der Verwen dung für die Analyse von Ammoniak oder Harnstoff;
11. die Färbung von Biuret-Reagens in einer alkali schen Umgebung, insbesondere bei der Benutzung für die Analyse von Gesamtprotein bzw. -eiweiß.

Das Verfahren nach der Erfindung ist nicht nur für Farbbildung oder Farbänderung, sondern auch für Entfär bung oder Abnahme von gefärbtem Material geeignet, wie bei spielsweise bei der Analyse von Glucose durch Messen der Abnahme von NADH oder NADPH und bei der Analyse von Glu cose durch Messen der Abnahme von Ferricyanid bzw. Eisen-(III)-cyanid.

Das Verfahren nach der Erfindung ist auch verwendbar für das Messen der Fluoreszenz, die durch Anregung unter Ver wendung von elektromagnetischen Wellen emittiert wird, welche kurze Wellenlänge haben, wie beispielsweise Ultra violettstrahlung oder radioaktive Strahlen, und zum Mes sen der Lumineszenz, wie beispielsweise Chemilumineszenz und Biolumineszenz, einschließlich der Lumineszenz von Luminol durch die Wechselwirkung von Wasserstoffperoxid.

Durch Verwendung des Verfahrens nach der Erfindung kann die Zeit für eine Analyse verkürzt werden, ohne daß die Genauigkeit bei der Bestimmung eines Analyten in einer flüssigen Probe vermindert wird, beispielsweise in der Kolorimetrie. Im Falle der konventionellen Endpunktmetho de wird nur eine einzige Zeit für die Reaktion von Proben, welche den Analyten in einem weiten Konzentrationsbe reich enthalten, festgesetzt bzw. eingestellt. Infolge dessen ist die Reaktionszeit übermäßig für Proben, die eine niedrigere Konzentration des Analyten enthalten. Da das Verfahren nach der Erfindung das Warten auf ein sol ches Übermaß von Reaktionszeit bei niedriger Analytkon zentration ausschaltet, wird an der Gesamtzeit für die Analyse gespart. Diese Zeiteinsparung ist besonders vor teilhaft in der Trockenverfahrenanalyse, in welcher die Verkürzung der für die Analyse erforderlichen Zeit wesent lich bzw. wichtig ist.

Andererseits ist eine längere Zeit für Reaktionen des Ana lyten erforderlich, wenn dieser von höherer Konzentration ist, um eine genügend hohe Genauigkeit der Analyse zu erzielen, weil eine kürzere Reaktionszeit eine geringere Neigung der Kalibrier- bzw. Eichkurve bewirkt, was zu ungenügender Genauigkeit bei größerem Änderungskoeffizien ten führt. Da diese Tendenz in der Trockenverfahrenana lyse vorherrscht, ist die Auswahl der Reaktionszeit wich tig. Durch die vorliegende Erfindung kann eine beträcht liche Verkürzung der Analysezeit erzielt werden, ohne daß die Genauigkeit der Analyse beeinträchtigt wird, und zwar nicht nur aufgrund einer einfachen Verkürzung der Reaktionszeit, sondern auch basierend auf der Wahl einer minimalen Reaktionszeit, was von der Konzentration des Analyten in der Probe abhängt, um genügend Genauigkeit zu erzielen.

Beispiel Präparation eines chemisch-analytischen Objektträgers

Ein chemisch-analytischer Objektträger vom Trockentyp für die Analyse von Glucose wurde wie folgt hergestellt:

Der verwendete Träger war ein farbloser transparenter Polyethylenterephthalatfilm, der eine Dicke von 180 µm hatte, auf welchem eine Gelatineunterbeschichtung vorge sehen war. Die folgende wäßrige Lösung wurde so auf den Träger aufgebracht, daß seine Trockendicke 15 µm wurde, und getrocknet, um eine Reagensschicht auszubilden.

Gelatine20 g Peroxidase2500 IE Glucoseoxidase1000 IE 1,7-Dihydroxynaphthalin0,5 g 4-Aminoantipyrin0,5 g Polyoxyethylennonylphenylether0,2 g Wasser200 ml

Die folgende wäßrige Lösung wurde so darauf aufgebracht, daß die Trockendichte 7 µm wurde, und getrocknet, um eine lichtblockierende Schicht auszubilden.

Gelatine10 g Titandioxid100 g Wasser500 ml

Die folgende wäßrige Lösung wurde auf die lichtblockieren de Schicht so aufgebracht, daß ihre Trockendichte 2 µm wurde, und zum Ausbilden einer klebenden Schicht getrock net.

Die obige klebende Schicht wurde mit 30 g/m² Wasser ange feuchtet, und ein breitgewebter Baumwollstoff wurde leicht darauf gedrückt, um ihn als Ausbreitungsschicht aufzulaminieren, gefolgt von Trocknen.

Der Film für die Analyse von Glucose wurde in Stücke ge schnitten, die eine Abmessung von 15 × 15 mm hatten, und jedes Stück wurde in einer Kunststoffanbringung bzw. -fassung von 24 × 28 mm angeordnet, so daß ein analytischer Objekt träger erhalten wurde.

Bestimmung der optischen Grenzdichten und Herstellung von Kalibrier- bzw. Eichkurven bei jeder Reaktionszeit

Es wurde die in Fig. 1 gezeigte Analysiereinrichtung ver wendet. Der analytische Objektträger 8 wurde in die Lade stelle 6 eines Objektträgerladehebels 5 eingebracht bzw. geladen, welcher die Form der Fig. 2 hatte, und zwar erfolgte das Einbringen bzw. Laden des Objektträgers in der Objektträgerladeposition 2, und es wurden 10 µl einer Probenlösung auf den Film für die Analyse von Glu cose 4 des analytischen Objektträgers 8 unter Verwendung einer Mikropipette aufgebracht, insbesondere aufgespren kelt oder aufgetüpfelt. Sofort wurde der Objektträger ladehebel 5 in die photometrische Position 3 gedrückt, und dadurch wurde der analytische Objektträger 8 in einem Inkubator 7 plaziert, wie in Fig. 1 gezeigt ist. In Fig. 1 ist mit 9 eine schwarze Platte und mit 10 eine weiße Platte bezeichnet. Diese Platten werden zum Einstel len des Kolorimeters verwendet. Mit 11 ist ein Hilfshei zer bezeichnet, der den analytischen Objektträger 8 von der Unterseite her erwärmt. Der analytische Objektträger 8 wurde inkubiert, und die optische Reflexionsdichte wurde von der Seite des Trägers her gemessen, auf der sich der Film befand, und zwar erfolgte die Messung automatisch für je eine Minute mittels eines Zeitgebers, der in der Analysiereinrichtung vorgesehen war. Das Licht für die Messung wurde von einer Lichtquelle 16 emittiert, die in einem photometrischen Kopf 12 angeord net war, und mittels einer Linse 13 auf die Position des analytischen Objektträgers 8 verdichtet. Das reflektier te Licht wurde von einem photometrischen Teil 14 empfan gen und mittels eines Verstärkers 17 vervielfältigt bzw. verstärkt. Andererseits wurde das Licht für die Referenz bzw. den Vergleich von dem anderen photometrischen Teil 15 empfangen und durch den anderen Verstärker 18 verviel fältigt bzw. verstärkt. Mit 19 ist ein Schalter bezeich net, während 20 ein Analog-zu-Digital-Umsetzer und 21 ein Computer ist. Nach der Messung wurde der analytische Ob jektträger herausgenommen, indem der Objektträgerlade hebel in die Objektträgerablös- bzw. -herausnehmposition 1 herausgezogen wurde, und der herausgenommene Objekt träger wurde in einen Objektträgerentladetrog 23 entladen. Mit 22 ist eine Grundplatte bezeichnet.

Unter Verwendung dieser Analysiereinrichtung und des vor stehend beschriebenen analytischen Objektträgers wurde die Beziehung zwischen der optischen Reflexionsdichte und der Reaktionszeit gemessen, und zwar mit einem Kon trollserum, das Glucose in einer Konzentration von 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550 und/oder 600 mg/dl enthielt (ein kommerzielles Kontrollserum und die Proben, zu denen Glucose jeder Konzentration hinzu gefügt worden war). Die optische Reflexionsdichte von jedem analytischen Objektträger wurde jede einzelne Mi nute bis 6 Minuten nach dem Aufbringen, insbesondere Auf tüpfeln oder Aufsprenkeln, von jedem Kontrollserum ge messen. Die Ergebnisse sind in Fig. 5 gezeigt. Aus diesen Ergebnissen sieht man, daß optische Grenz- bzw. Grenz schichtdichten wie folgt bestimmt wurden: 0,400 bei 2 Minuten später, 0,600 bei 3 Minuten später, 0,700 bei 4 Minuten später und 0,850 bei 5 Minuten später. Die Glu cosekonzentrationen von allen übrigen Proben, die durch die optische Schwellendichte bei 5 Minuten später hin durchgingen, wurden bei 6 Minuten später gemessen.

Nachfolgend wurden die jeweiligen Kalibrier- bzw. Eichkur ven bei 2, 3, 4, 5 und 6 Minuten später bzw. nach Reak tionsbeginn gemessen, und sie sind in Fig. 6 gezeigt.

Analytischer Betrieb

Das in dem Beispiel verwendete Logikdiagramm ist in Fig. 4 gezeigt.

Jeder analytische Objektträger wird in den Objektträger ladehebel eingeladen, und 10 µl einer Probenlösung werden aufgebracht, insbesondere aufgetüpfelt oder aufgespren kelt. Sofort wird der Objektträgerladehebel in die photo metrische Position gedrückt, und dadurch wird die Inkuba tion begonnen.

Die optische Reflexionsdichte wird automatisch nach 2 Mi nuten durch den Zeitgeber gemessen, der in der Analysier einrichtung vorgesehen ist. Wenn die optische Reflexions dichte geringer als 0,400 ist, wird die Glucosekonzentra tion der Probe aus dieser optischen Dichte dadurch be rechnet, daß die Kalibrier- bzw. Eichkurve benutzt wird, die sich bei 2 Minuten später (siehe oben in Verbindung mit Fig. 5) ergibt. Der analytische Objektträger wird aus dem Inkubator herausgenommen und in den Trog entladen.

Alle Kalibrier- bzw. Eichkurven werden im Computer ge speichert, und alle Berechnungen werden im Computer aus geführt. Wenn dagegen die optische Reflexionsdichte nicht geringer als 0,400 ist, wird die Reaktion weiter fortge setzt.

Die optische Reflexionsdichte wird erneut 3 Minuten nach dem Aufbringen gemessen. Wenn die optische Reflexions dichte geringer als 0,600 ist, wird die Glucosekonzentra tion aus dieser optischen Dichte dadurch berechnet, daß man Kalibrier- bzw. Eichkurve bei 3 Minuten später ver wendet. Der analytische Objektträger wird herausgenommen und in den Trog entladen. Wenn dagegen die optische Re flexionsdichte nicht geringer als 0,600 ist, wird die Reaktion weiter fortgesetzt.

Nach 4 Minuten und 5 Minuten werden entsprechende Vorgän ge wiederholt.

Nach 6 Minuten wird die Glucosekonzentration aus der op tischen Reflexionsdichte bei 6 Minuten später ohne Beur teilung berechnet, und der analytische Objektträger wird entladen.

Claims

1. Verfahren zum Analysieren eines Analyten, insbeson dere eines Reaktionsteilnehmers oder -produkts, der bzw. das detektiert werden soll, durch Beobachten einer oder mehrerer optimaler Änderungen aufgrund des Analyten, insbesondere des Reaktionsteilnehmers oder -produkts, der bzw. das de tektiert werden soll, dadurch gekennzeich net, daß es die folgenden Verfahrensschritte um faßt:

(a) Messen der optischen Dichte oder Emissionsin tensität während zweier oder mehrerer Zeiten zu bzw. in geeig neten Zeitintervallen nach dem Beginn der Reaktion, um der Variation bzw. Veränderung der optischen Dichte oder der Emissionsintensität zu folgen,
(b) Beurteilung, basierend auf der optischen Dichte oder Emissionsintensität, die bei der früheren Messung erhalten worden ist, ob die Reaktion weiter fortschreitet oder nicht bzw. weiter fortschreiten soll oder nicht,
(c) wenn geurteilt bzw. gefolgert wird, daß das Weitergehen bzw. Fortschreiten der Reaktion nicht not wendig ist, und zwar insbesondere in Größen der analyti schen Genauigkeit, Auswählen der Kalibrier- bzw. Eich kurve entsprechend der Reaktionszeit,
(d) wohingegen, wenn geurteilt bzw. gefolgert wird, daß das Weitergehen bzw. Fortschreiten der Reaktion not wendig ist, weiter mit der Reaktion fortgefahren wird und
(e) Wiederholen der Verfahrensschritte (b) und (d), bis die Beurteilung bzw. Folgerung erhalten wird, daß die Fortsetzung bzw. Weiterführung der Reaktion nicht notwendig ist.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekenn zeichnet, daß das Analysieren unter Verwendung eines analytischen Elements (4, 8) im Trockenverfahren ausgeführt wird.