DE3029579C2 - Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut - Google Patents
Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus VollblutInfo
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Description
In der Klinischen Chemie ist die Abtrennung von Serum oder Plasma aus Blut von überragender Bedeutung,
da praktisch nur aus diesen beiden die Analyse von gelösten Blutbestandteilen störungsfrei durchgeführt werden
kann.
Die normale und gebräuchlichste Form der Abtrennung von Serum oder Plasma von den Erythrozyten ist die
Zentrifugatlon. Diese ist jedoch Insbesondere bei der Verwendung kleiner Probenmengen problematisch, auch
ist die Trennung von Überstand und Blutkuchen nicht immer einfach, so daß hierfür eine ganze Reihe von
Hilfsmitteln in der Literatur zu finden sind, z. B. DE-AS 25 59 242.
Von besonderer Problematik ist die Verwendung von Vollblut bei Schnelldiagnostica. Schnelldlagnostica sind
reagentienhaltige saugfähige oder quellbare Träger, vorzugsweise aus Filterpapier, auf die eine geringe Menge,
z. B. ein Tropfen der zu untersuchenden Flüssigkeit aufgebracht wird und bei denen aufgrund der überwiegend
sehr kurzen Reaktion eine Farbänderung eintritt, die entweder visuell bewertet wird oder remisslonsphotometrisch
ausgemessen wird. Da trübe und gefärbte Lösungen wie Blut die Ablesung stören, hat es daher nicht
an Versuchen gefehlt, Schnelldlagnostica für die direkte Verwendung von Vollblut zugänglich zu machen. Hierbei
sind z. B. zu nennen das Überziehen von Testpapieren mit semtpermeablen Membranen (US-P 30 92 465)
und die Verwendung von wasserquellbaren Filmen, in die nur die gelösten Bestandteile des Blutes, nicht aber
die Erythrozyten eindringen können (DE-AS 15 98 153). Diese beiden Verfahren sind an sich brauchbar, allerdings
nur bei Testen für niedermolekulare Bestandteile des Blutes, wie z. B. Glucose oder Harnstoff; höhermolekulare
Bestandteile des Blutes, wie z. B. Lipide oder die an Serum-Protein gebundenen Substrate wie z. B. Bilirubin,
können auf diese Welse nicht bestimmt werden, well sie nicht In der Lage sind, In den Film einzudringen
bzw. durch die semipermeable Membran hindurchzugelangen. Weiterhin sind Vorschläge bekannt geworden,
diagnostische Mittel zum Abtrennen der Blutzellen mit Membranfiltern zu bedecken (DE-AS 22 22 951 und
DE-OS 29 22 958). Der Nachteil dieser diagnostischen Mittel Ist, daß durch Membranfilter das Blut nur sehr
ι \ langsam und in geringer Menge durchdringen kann, well sie leicht verstopfen und die Reaktion entsprechend
^ lange dauert. Im Gegensatz zu den vorher genannten diagnostischen Mitteln, die bereits Im Handel sind, sind
»Schnellteste« der zuletzt geschilderten Art deshalb noch nicht Im Handel erschienen.
ι 65 Aufgabe der Erfindung war es daher, ein einfaches Mittel zum Abtrennen von Plasma oder Serum aus Vollblut
zu finden, daß ohne Zentrifugieren rasch und sicher kleine Mengen Blut trennt und Insebesondere als
Probenvorbereitung für diagnostische Zwecke geeignet ist.
Es wurde nun gefunden, daß die Abtrennung von Plasma bzw. Serum aus Vollblut schnell und einfach und
Es wurde nun gefunden, daß die Abtrennung von Plasma bzw. Serum aus Vollblut schnell und einfach und
in genügender Menge erfolgt, wenn man das Blut durch eine Schüttung aus Glasfasern allein oder in Mischung
mit anderen Fasem strömen läßt. Diese Tatsache muß um so mehr als überraschend angesehen werden, als
in der oben erwähnten DE-AS 22 22 951 die Verwendung von Glasfasermatten zur Abtrennung von weißen
Blutzellen schon beschrieben ist, jedoch für die Abtrennung der Erythrozyten die zusätzliche Verwendung von
Membranfiltern als unbedingt notwendig gefordert wird. >
Aus der DE-A 29 22 958 1st weiterhin ein Integrales mehrschichtiges Analysenelement für Blut bekannt, bei
dem die korpuskularen Bestandteile aes Blutes durch eine Kombination von einem Faserfilter, welches üblicherweise
aus Papier besteht, jedoch auch ein Kunstfaser- oder Glasfaservlies sein kann, und einem Membranfilter,
abgetrennt werden. DJe genannten Faserfilter sind dabei lediglich zur Abtrennung gröberer Partikel, wie koaguliertem
Blut, geeignet und die Erythrozyten verdien nur durch das Membranfilter zurückgehalten.
Aus Ullmanns Enzyklopädie der technischen Chemie, 3. Aufl., Bd. 7, S. 346, Verlag Urban und Schwarzenberg,
München, 1956 sind Glasfaserschichten aus Glasfasern mit Faserdicken von 1 bis 2 μ oder 3 bis 4 μ als
Wärme und Schallisolatoren beschrieben. Wetterhin werden Glasfasern mit weniger als 1 μ Faserdicke zur
Herstellung von Sonderpapieren, Dokumentenpapieren und Filterpapieren benutzt, da ihre Festigkeit, chemische
Resistenz und Hitzebeständigkeit übliche Cellulosepapiere übertrifft. Eine Brauchbarkeit solcher Materialien
zum Trennen von Blutbestandteilen wird dabei nicht beschrieben.
Erfindungsgemäß wird daher ein neues Verfahren zum Abtrennen von Plasma oder Serum aus Vollblut offenbart,
bei dem man das Blut langsam durch eine Schicht aus Glasfasern mit einem Durchmesser von 0,2 bis
2,5 μ sickern läßt und das abgetrennte P'nsma oder Serum gewinnt, wobei das Volumen des abzutrennenden
Plasmas oder Serums höchstens 50% vom Saugvolumen der Glasfaserschicht beträgt.
Weiterhin wird ein diagnostisches Mittel bereitgestellt, zum Nachweis von Inhaltsstoffen des Plasmas oder
Serums, £uf welches Vollblut aufgebracht und das Plasma abgetrennt wird. Ein solches diagnostisches Mittel
enthält mindestens eine Glasfaserschicht und eine Reaktionsschicht, wobei die Glasfaserschicht als einzige
Filterschicht aus Glasfasern mit einem Durchmesser von 0,2 bis 2,5 μ besteht und keine zusätzlichen Membranfilter
zur Abtrennung der Erythrozyten vorhanden sind. Die Erfindung ist im übrigen in den Ansprüchen näher gekennzeichnet.
Die Glasfasern können lose gestapelt, sowie In Form von Papieren, Vliesen oder Filzen, aber auch gehalten
durch eine äußere Form in jeder gewünschten Gestalt Verwendung finden. Die so gestalteten Glasfasern können als Abdeckung für eines der oben beschriebenen Schnelldlagnostica dazu
dienen, daß dieses diagnostische Mittel, für dessen Verwendung bisher die vorherige Gewinnung von Serum
C oder Plasma notwendig war, jetzt für die direkte Verwendung von Vollblut geeignet ist.
Weiterhin können mit Glasfasern gefüllte Säulen, F|ltemutschen oder andere geeignete Gefäße auch dazu
I': verwendet werden, durch einfaches Durchlaufen .von Blut Serum oder Plasma ohne Zentrifugation zu gewinnen
% und diese in geeigneter Weise für diagnostische Mittel bereitzustellen, da das Serum bzw. Plasma schneller
durch eine solche Schicht durchläuft, als die Erythrozyten und Leucozyten.
κ Die oben genannten Glasfasern können aus Fasern unterschiedlichen Durchmessers bestehen. Das Glasmate-
k; rial kann aus alkallhaltigum oder alkalifreiem Borosllikatglas, aber auch aus reinem Quarzglas bestehen. Faserig
material aus anderen technischen Gläsern, z. B. borfreien Alkaligläsern, Kristallglas, Bleiglas u. a. befinden sich
'. In den notwendigen Abmessungen der Fasern nicht im Handel und konnten daher nicht untersucht werden. Es
j wird aber davon ausgegangen, daß auch sie geeignet sind. Der Durchmesser der Glasfasern kann zwischen 0,2 μ
|i bis etwa 2,5 μ, vorzugsweise aber zwischen 0,5 μ und 1,5 μ, liegen. Ihre Länge ist nur durch die Art der Stape-
r{ lung begrenzt, hat aber ansonsten keinen Einfluß.
! Weiterhin können die Glasfasern untereinander, aber auch mit Fasern aus anderen Materialien, vermischt
j werden, wodurch der Innere Zusammenhalt der Fasern verbessert werden kann. Geeignet sind z. B. synthetische
Fasern wie Polyester, Polyamid u. a., aber auch .Fasern aus Polyethylen, Polypropylen und anderen nachträglich
■ durch Wärme verformbaren Kunststoffen.
Weiterhin können die Glasfasern durch Zusatz von anorganischen Bindemitteln (z. B. Wasserglas) oder orga-,;■.■
nlschen Bindemittel (ζ. B. Polyvinylacetat, Polyvinylpropionat, Poyacrylsäureester u. a.) verfestigt werden,
■··, durch die die Glasfasern an den Berührungsstellen verklebt werden.
\>i. Besonders bevorzugt ist die Kombination der erfindungsgemäßen Glasfaserschichten mit diagnostischen
[Λ Mitteln, die ebenfalls Gegenstand der Erfindung 1st.
t* Den Aufbau eines solchen erfindungsgemäßen diagnostischen Mittels erläutert Fig. 1. Auf einer steifen
[■j Grundfolie 2 ist die Reaktionsschicht 1 des Schnelldlagnosticums aufgeklebt. Dicht über der Reaktlonsschicht
U ist eine dünne, für Flüssigkelten durchlässige formstabiie Trennschicht 4 aufgebracht, die aus einem Netzwerk
h aus gewebten oder verfilzten Kunststoff-Fäden besteht und die auf beiden Selten der Reaktionsschicht In leicht
[Jj lösbarer Welse auf die Grundfolie In der Art geklebt ist, daß ein leicht zu fassendes Ende Aa am längeren Teil
der Grundfolie freibleibt. Oberhalb der Reaktionsschicht ist nun das Glasfaserpapier 3 aufgebracht. Dieses wird
$ durch ein weiteres Netzwerk 5 in seiner Lage fixiert, das wie das Netzwerk 4 oberhalb und unterhalb der Reak-
>$; tlonsschlcht angeklebt Ist.
Die Reaktionsschicht 1 kann aus einem imprägnierten saugfähigen Träger oder quellbarem oder porösem ta
Kunststoffllm bestehen. Als Unterlage 2 dient vorzugsweise eine dickere Kunststoffolie, ein fester Karton, eine
Glasplatte oder ein anderes stabiles Trägermaterial.
Nach Aufbringen eines Bluttropfens 8 auf die obere Seite des Schnelldlagnosticums wird im Glasfaserpapier
das Plasma von den Erythrozyten und Leucozyten abgetrennt. Das auf diese Welse abgetrennte Plasma gelangt
über die Trennschicht 4 in die Reaktionszone 1 des diagnostischen Mittels. Nach einer angemessenen Zeit, In
der das Plasma in die Reaktionszone eingedrungen 1st, wird die Trennschicht an ihrem freien Ende ergriffen
und mit dem Glasfaserpapier und der Halteschicht abgetrennt. Anschließend kann die Reaktionsschicht, In der
nun die Nachweisreaktion stattfindet, visuell oder remlsslonsphotometrlsch ausgewertet werden.
Einen weiteren möglichen Aufbau des erfindungsgemäßen Schnelldlagnostlcums verdeutlicht Flg. 2, wobei
zusätzlich zu dem oben beschriebenen Aufbau eine oder mehrere für Flüssigkeiten alier Art durchlässige Schichten
6 in der Art aufgebracht sind, daß sie entweder oberhalb (Flg. 2 a) oder unterhalb (Flg. 2 b) der Glasfaserpapiere
zu liegen kommen. Diese zusätzlichen Schichten können mit Reagenzien Imprägniert sein, die entweder
leicht löslich sind und zusammen mit dem Plasma In die Reaktionszone gelangen oder aber weniger löslich sind
und eine oder mehrere Vorstufen der Nachweisreaktion bereits außerhalb der endgültigen Reaktionszone 1
ablaufen lassen.
In Fig. 3 wird ein anderer Aufbau (Fig. 3 a Seitenansicht, Fig. 3 b Aufsicht) des erflndungsgemäßen Schnelldiagnosticums
beschrieben, bei dem das Glasfaserpapier 3 direkt auf die Grundfolie 2 aufgeklebt ist. Auf einen
Teil des Glasfaserpapiers 1st die Reaktionsschicht 7 aufgebracht. Auf den freibleibender) Teil des Glasfaserpapiers
wird das Blut 8 aufgetragen. Das sich Im Glasfaserpapier von den Erythrozyten abtrennende Plasma
diffundiert im Glasfaserpapier zu der Reaktionsschicht und in diese hinein. Die bei der Reaktion entstehenden
Reaktionsfarben können von der Oberseite des Schnelldlagnostlcums beobachtet und ausgewertet werden. Die
Reaktionsschicht kann direkt durch Bedrucken oder Beschichten auf die Glasfasermatte aufgebracht werden. Sie
kann aber auch in Form eines ganz- oder teilimprägnierten saugfähigen Trägers auf das Gläsfaserpapier aufgeklebt
werden.
Weiterhin kann, wie in Fig. 4 und Flg. 5 beschrieben, das erfindungsgemäße diagnostische Mittel so aufgebaut
sein, daß auf der Grundfolie 2 zuerst ein saugfähiges Material 9 wie z. B. Cellulosepapier oder ein Kunststoffvlies
und oberhalb dieses Materials das Glasfaserpapier 3 und die Reaktionsschicht 7 aufgeklebt sind. Dabei
kann das saugfähige Material 9 die gleiche Fläche wie die Reaktionsschicht einnehmen (Flg. 5) oder aber eine
größere Fläche, so daß das Material 9 eine Fläche freiläßt (Flg. 4). Das Blut wird auf die freibleibende Fläche
des saugfähigen Materials (Fig. 4) oder direkt neben das saugfähige Material (Flg. 5) aufgetropft und von
diesem schnell aufgenommen und unter das Glasfaserpapier gesaugt. Anschließend wird durch die Saugfähigkeit
des Glasfaserpapiers Blut durch das Glasfaserpapier nach oben gesaugt, wobei die Abtrennung der Erythrozyten
erfolgt und Plasma in die Indikatorzone gelangt. Die Reaktion wird wie in Fig. 3 von der Oberseite des Schnelldiagnosticums
beobachtet.
Fig. 6 zeigt einen weiteren Aufbau eines für die direkte Verwendung von Vollblut geeigneten Schnelldlagnosticums.
Dieses ist so aufgebaut, daß auf der steifen Grundfolie 2 nebeneinander eine saugfähige Schicht 9, die
z. B. aus einem Cellulosepapier oder aus einem cellulosehaltigen Kunstfaservlies besteht und eine Glasfaser-
schicht 3 aufgebracht sind. Die beiden Schichten sollen einen engen Kontakt aufweisen. Auf der Oberfläche der
saugfähigen Schicht 9 befinden sich die für das Schnelldiagnosticum notwendigen Nachweisreagenzien, die z. B.
durch Beschichten mit einem offenen Film gemäß DE-OS 29 10 134 aufgebracht sein können. Beim Auftragen
des Bluttropfens auf die von der Reaktionszone entferntere Seite der Glasfaserschicht findet die Trennung
Plasma-Erythrozyten so statt, daß zuerst das Plasma mit seiner Front an der Trenhstelle zu der saugfähigen
Schicht 9 anlangt und sofort von dieser aufgesaugt wird. Durch Kapillarkräfte gelangt dann das Plasma In den
eigentlichen Testbezirk, wo sich die Nachweisreaktion z. B. durch efne von oben sichtbare Farbveränderung
bemerkbar macht.
Weiterhin kann das erfindungsgemäße diagnostische Mittel In der In Fig. 7 beschriebenen Form hergestellt
werden. Dabei wird das Glasfaserpapier 3 auf eine Grundfolie 2 aufgeklebt. Die Grundfolle hat an der Berüh-
rungsstelle ein oder mehrere Löcher 11. Auf der anderen Seite ist eine Reaktionsschicht 7 direkt oder durch
Kleben auf das Glasfaserpapier aufgebracht. Das Blut 8 wird so auf das diagnostische Mittel aufgebracht, daß es
durch das Loch (oder die Löcher) auf das Glasfaserpapier 3 gelangen kann. Das Im Glasfaserpapier abgetrennte
Plasma trifft nun auf die Reaktionsschicht 7 und führt zu der Reaktion, die visuell oder remlssionsphotometrisch
an deren Oberfläche ausgewertet werden kann.
Die Reaktionsschicht 7 kann sowohl aus einer, z. B. auf die Glasfasermatte aufgedruckten Schicht bestehen,
sie kann aber auch aus einem mehrschichtigen Element bestehen, bei dem die Schichten verschiedene Reagenzien
enthalten können und/oder mehrere Funktionen erfüllen können, z. B. in der DE-OS 29 22 958 beschrieben.
Fig. 8 a zeigt in der Seitenansicht und Fig. 8b zeigt in der Aufsicht einen weiteren Aufbau eines solchen
erfindungsgemäßen diagnostischen Mittels, bei dem die aus Glasfasern bestehende Trennschicht 3 sowie eine
5·' oder mehrere für die Reaktion notwendigen Schichten 12 durch eine vorgefertigte Form 18 zusammengehalten
werden. Das Blut wird hierbei auf die Seite des Glasfaserfilters aufgetropft. Das abgetrennte Plasma gelangt
anschließend in die Reaktionsschicht(en), wobei die Indikatorreaktion auf der dem Glasfaserfilter gegenüberliegenden
Seite visuell oder remissionsphotometrisch ausgewertet wird.
Aus zeicheniechnlschen Gründen sind in einigen Figuren die verschiedenen Schichten teilweise mit einem
Aus zeicheniechnlschen Gründen sind in einigen Figuren die verschiedenen Schichten teilweise mit einem
Zwischenraum gezeichnet. In der praktischen Ausführung liegen die Schichten aufeinander, so daß Flüssigkeiten
ungehindert übertreten können. Weiterhin sind die Reaktionsschichten 1 und 12 querunterteilt, um
anzudeuten, daß sie auch aus mehreren übereinanderliegenden Schichten bestehen können.
Desweiteren beschreibt Fig. 9 den Aufbau einer erflndungsgemäßen Form, die Plasma von den Erythrozyten
des Vollblutes ohne Zentrifugieren abtrennt und für diagnostische Zwecke bereitstellt. Dazu wird ein Rohr
oder ein Gefäß, das z. B. die beschriebene Form 13 hat, mit den oben beschriebenen Glasfasern 14 gefüllt. Das
Blut 8 wird oben in das Gefäß eingefüllt. Auf dem Weg nach unten wird nun durch die Glasfasern das Plasma
von den Erythrozyten des Blutes abgetrennt. Das sich im unteren Teil des Gefäßes sammelnde Plasma kann
nun z. B. durch eine »end-to-endÄ-Kapillare aufgenommen oder abgesaugt werden und direkt einem anderen
diagnostischen Verfahren zugeführt werden.
Einen anderen erfindungsgemäßen Aufbau beschreibt die Fig. 10, wobei das zur Abtrennung der Erythrozyten
geeignete Gefäß 13 die Form einer Kolbenspritze aufweisen kann, die Im unteren Teil mit Glasfasern 14
dicht gefüllt ist. Das Blut 8 wird In das oben offene Gefäß eingebracht. Nach erfolgter Trennung von Erythrozyten
und Plasma, wobei das Plasma sich im unteren Gefäßteil sammelt, kann durch Einführen und vorsichtiges
Drücken des Kolbens 17 zuerst das Plasma aus dem Spritzenkörper herausgedrückt werden.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Plasma-Gewinnung kann, wie In Flg. 11 beschrieben, auch mit einem
Gefäß 15 durchgeführt werden, das durch ein In einer Richtung durchlässiges Ventil in zwei Teile getrennt ist
und mit den oben beschriebenen Glasfasern gefüllt ist. Das Blut 8 wird oben In das Gefäß eingefüllt. Das
Plasma sammelt sich nach der Abtrennung von den Erythrozyten im unteren Teil des Gefäßes und kann nun s
durch Zusammenpressen des unteren Gefäßteiles entleert werden. Dabei verhindert das Ventil 16, daß das
Plasma In den oberen, die Blutzellen enthaltenden Teil zurückströmt.
Weiterhin kann das erfindungsgemäße Verfahren mit einer Anordnung durchgeführt werden, die durch
Flg. 1 beschrieben wird, wobei die auf die Trägerfolie 2 geklebte Schicht 1 aus einem definiert saugenden Material
besteht, so daß beim Auftragen von Blut ein definiertes Plasmavolumen In die Schicht 1 gelangt. Nach dem
Abtrennen der Schichten 3, 4 und 5 kann das Plasma, d. h. die zu analysierende Substanz durch ein Lösungsmittel
eluiert werden. Die Elution des Plasmas und die Analyse kann sofort, aber auch -je nach zu analysierender
Substanz - zu einem späteren Zeltpunkt an anderem Ort durchgeführt werden. Falls die Analyse erst später
durchgeführt werden soll, kann es vorteilhaft sein, das Plasma zunächst, beispielsweise mit warmer Luft oder
durch Gefriertrocknen, einzutrocknen. Es 1st weiterhin möglich, getrennt von dem Bezirk für das Aufbringen
der Probe, einen oder mehrere Bereiche vorzusehen, die Reagenzien enthalten, so daß beim Eluieren mit einem
Lösungsmittel das ganze Reaktionsgemisch gleichzeitig eluiert wird.
In den folgenden Beispielen soll die Erfindung näher erläutert werden:
Cholesterin-Teststrelfen
0,117 g Methylhydroxypropylcellulose (Culminal MHPC 8000)
7,000 g Titandioxid
0,138 g KH2PO4
0,479 g Na2HPO4 · H2O
3400 U Cholesterinesterase
5000 U Cholesterinoxidase
7 104U Peroxidase
0,476 g Natriumdioctylsulfosuccinat
werden in 700 ml Wasser gelöst. Dann werden nacheinander
14,0 g Cellulose
4,2 g Polyvlnylpropionat-Dispersion
homogen eingearbeitet. Zuletzt wird
0,33 g Tetramethylbenzidin gelöst in
1,6 ml Aceton
zugegeben. Dieser Ansatz wird etwa 300 μ dick auf eine glatte Kunststoffolie beschichtet und nach dem Trocknen
bei 60° C bis 70° C in 6 mm breite Streifen geschnitten. Diese Streifen werden anschließend zusammen mit
einem 60 μ starken Netzwerk aus Nylon und einem ebenfalls in 6 mm breite Steifen geschnittenen Glasfaserpapier
(Glasfaserfilter Nr. 3362 von Schleicher & Scholl) auf eine Polyesterfolie geklebt. Anschließend wird sie
in 6 mm breite Streifen zerschnitten.
Betüpfelt man die Oberseite des Teststreifens mit 40 μΐ Blut und entfernt nach 1 Minute das Glasfaserpapier
mit dem restlichen Blut zusammen mit dem Netzwerk durch Abreißen, dann bildet sich innerhalb von 3 Minuten
auf dem Testbezirk eine Reaktionsfarbe, die derjenigen entspricht, die man erhält, wenn anstelle des Blutes
mit dem abzentrifugierten Plasma des gleichen Blutes getüpfelt wird.
Beispiel 2
Cholesterin-Test
Cholesterin-Test
0,45 g KH2PO4
1,55 g Na2HPO4 H2O
1,5 χ 10* U Cholesterinesterase
I χ 104 U Cholesterinoxidase ω
3 χ 105 U Peroxidase
2,0 g Na-Dioctylsulfosucclnat
6,9 g Natrium Alginat (Algipon)
werden in 250 ml Wasser gelöst, dann werden noch
2,0 g 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin
gelöst in 15 ml Aceton dazugegeben. Anschließend werden noch
20,0 g Kieselgur
20,0 g Kieselgur
homogen verteilt. Diese Reaktionsmasse wird in 6 mm breiten Streifen mit einer Siebdruckmaschine
(Gewebe: 190 μ) auf ein Glasfaserpapier (z. B. das Glasfaserfllter Nr. 85/90 von Machery, Nagel & Co.) in der
im Beispiel 1 beschriebenen Form aufgebracht. Das bedruckte Glasfaserpapier wird bei 60° C bis 80° C getrocknet
und so In 12 mm breite Steifen geschnitten, daß die bedruckte Reaktionszone die eine Hälfte des Streifens
ausmacht. Dieser Streifen wird auf das Ende einer Polyesterfolie geklebt und diese quer zu den Glasfaser-
H) papieren In 6 mm breite Streifen geschnitten. Wenn nun auf die der Reagenzschicht abgewendeten Kante des
unbeschichteten Glasfaserpapiers 40 μΙ Blut aufgetropft werden, diffundiert das Piasam unter die Reaktionszone.
Diese nimmt In Abhängigkeit von der Cholesterinkonzentratlon des Blutes eine unterschiedlich stark gefärbte
blaue Reaktionsfarbe an. Die Intensität der Reaktionsfarbe entspricht derjenigen, die man erhält, wenn man
anstelle des Blutes mit dem aus dem gleichen Blut gewonnenen Serum oder Plasma tüpfelt.
Beispiel 3
Eine Reagenzienmasse, bestehend aus
Eine Reagenzienmasse, bestehend aus
16,0 g Cellulose M+N Ac 10
86,0 g einer 0,2%igen Lösung von Methylhydroxypropylcellulose (Culmlnal MHCP 8000)
0,32 g Netzmittel (Marion)
0,68 g Netzmittel (Na-Dloctylsulfosucclnat)
12,0 g Polyvinylproplonat-Dispersion (Propiofan 70 D)
0,48 g Tetramethylbenzldin
10,0 g Titandloxid
9600 U Cholesterinesterase
7200 U Cholesterinoxidase
l,04xl04U Peroxldase
0,01 g Gallussäure
wird in einer Dicke von 0,2 mm auf ein hydrophobes Polyestervlies (Reemay 2033 von Du Pont) beschichtet
und bei 60° C getrocknet. Anschließend werden ein 6 mm breiter Streifen dieser Beschichtung und ein 12 mm
breiter Streifen eines Glasfaserfilters (ζ. B. das Filter 3362 von Schleicher & Schüli) so nebeneinander auf einen
festen Plastikstrelfen geklebt, daß das Glasfaserfilter sehr eng an das beschichtete Vlies anstößt. Wenn von
diesem Plastikstrelfen quer 6 mm breite Streifen abgeschnitten werden, dann erhält man Teststreifen, bei denen
nach Auftropfen von ca. 50 μΐ Vollblut auf die vom Reagenzienvlies entfernte Seite des Glasfaserfiiters nach
kurzer Zeit nur reines Plasma in das Reagenzienvlies übertritt urtd zu elrter blauen Reaktionsfarbe führt, deren
Intensität mit der Konzentration des Cholesterins im Blut zunimmt.
Beispiel 4
Separate Plasmagewinnung
Separate Plasmagewinnung
ts Ein sich nach unten konisch verjüngendes Kunststoffgefäß (z. B. die Kunststoffspitze einer Kolbenhubpipelte)
wird zu V3 mit Glasfasern (z. B. die Faser 108 A aus Borosilikatglas der Firma Johns-Manville, Durchmesser:
0,5 bis 0,8 μ) locker gefüllt. Nachdem der obere freie Teil mit Blut gefüllt wurde, diffundiert das Serum in
die Gefäßspitze. Von dort kann eine »end-to-end«-Kapillare mit 15 μ! Inhalt durch Heranführen an die Pipettcnspltzenöffnung
gefüllt werden. Das auf diese Weise gewonnene Plasma kann nun direkt jedem beliebigen
analytischen Verfahren zugeführt werden.
Untersuchung des Trennvermögens verschiedener Glasfasern in einem Versuchsaufbau nach Beispiel 4
Glasfasern: Eigenschaften, Trennvermögen Erythrozyten/Plasma
Johns-Manville | VEB Trisola | Durchmesser | (lim) | Faserlänge | Oberfläche | Trennung |
USA | DDR | Bereich | Mittelwert | μηι | Erythrozyten/Plasma | |
100 | 0,2 bis 0,29 | 0,25 | 300 | 5,1 | + | |
102 | 0,3 bis 0,33 | 0,32 | 4,5 | + | ||
104 | 0,34 bis 0,48 | 0,4 | 800 | 3,12 | + | |
106 | 0,49 bis 0,58 | 0,54 | 1000 | 2,6 | +++ | |
U 60 | 0^1 bis 0,64 | 0,58 | - | ++ | ||
108 A | 0,59 bis 0,88 | 0,74 | 1200 | 1,72 | -M- | |
U 70 | 0,65 bis 0,76 | 0,71 | ++ | |||
U 80 | 0,77 bis 0,93 | 0,85 6 |
+++ |
Fortsetzung | VEB Trisola | Durchmesser | (μΐίΐ) | Faserlänge | 1900 | Oberfläche | Trennung |
Johns-Manville | DDR | Bereich | Mittelwert μΐη | m2/g | Erythrozyten/Plasma | ||
USA | U 90 | 0,94 bis 1,19 | 1,07 | ++ | |||
UlOO | 1,2 bis 1,44 | 1,32 | Hierzu 4 Blatt Zeichnungen | +++ | |||
0,89 bis 2,16 | 1,53 | 0,71 | +++ | ||||
108 B | U 156 | 1,45 bis 2,49 | 1,97 | - | + | ||
2,17 bis 3,10 | 2,6 | 0,49 | - | ||||
110 | 2,6 bis 3,8 | 3,2 | 0,40 | - | |||
112 | F | 2,5 bis 4,0 | 3,3 | — | |||
++ gut +++ | sehr gut - negativ | ||||||
+ befriedigend | |||||||
Claims (13)
1. Verfahren zum Abtrennen von Plasma oder Serum aus Vollblut, dadurch gekennzeichnet, daß
man das Blut langsam durch eine Schicht aus Glasfasern mit einem Durchmesser von 0,2 bis 2,5 μ sickern
läßt und das abgetrennte Plasma oder Serum gewinnt, wobpi das Volumen des abzutrennenden Plasmas oder
Serums höchstens 50% vom Saugvolumen der Glasfaserschicht beträgt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Volumen des abzutrennenden Plasmas
oder Serums weniger als 30% vom Saugvolumen der Glasfaserschicht beträgt.
3. Verfahren nach einem der Asprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Glasfasern einen Durchmesser
von 0,5 bis 1,5 μ aufweisen.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß den Glasfasern synthetische
organische Fasern beigemischt oder diese durch anorganische oder organische Bindemittel verfestigt bzw.
miteinander verklebt sind.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Glasfasern in einer
Säule geschichtet sind und am Kopf der Säule die Aufgabe für das Blut und am Ende die Abnahme für das
Plasma oder Serum erfolgt.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß unterhalb der Glasfaserschicht ein Ventil und
darunter ein Zwischenspeicher für das Plasma oder Serum vorgesehen 1st. In dem sich das Plasma sammeil
und aus dem es in einem zweiten Schritt durch Komprimieren ausgetrieben wird.
7. Verfahren nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß man das ablaufende Plasma oder
Serum direkt in ein diagnostisches Mittel einbringt.
8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Glasfaserschicht aus einem Glasfaserpapier
oder Glasfaservlies besteht und Teil eines diagnostischen Mittels für den Nachwels von Inhaltsstoffen
des Plasmas oder Serums ist.
9. Diagnostisches Mittel zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 7 oder 8, enthaltend mindestens
eine Glasfaserschicht und eine Reaktionsschicht, dadurch gekennzeichnet, daß die Glasfaserschicht als
einzige Filterschicht aus Glasfasern mit einem Durchmesser von 0,2 bis 2,5 μ besteht.
10. Diagnostisches Mittel nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß die Glasfaserschicht die oberste
Schicht eines mehrschichtigen diagnostischen Mittels ist, welches auf einem Inerten Träger befestigt ist.
11. Diagnostisches Mittel nach Anspruch 9 oder 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Glasfaserschicht und
gegebenenfalls weitere Schichten über eine ablösbare Schicht mit der Reaktionsschicht verbunden sind.
12. Diagnostisches Mittel nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß die ablösbare Schicht ein
Netzwerk ist, welches nebon der Reaktionsschicht mit dem Träger verbunden Ist.
13. Diagnostisches Mittel nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß die Reaktionsschicht auf einem
Teilbereich der Glasfaserschicht in saugfähigem Kontakt aufgeklebt oder aufgedruckt ist.
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