DE2625834A1 - Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten - Google Patents

Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten

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DE2625834A1 DE19762625834 DE2625834A DE2625834A1 DE 2625834 A1 DE2625834 A1 DE 2625834A1 DE 19762625834 DE19762625834 DE 19762625834 DE 2625834 A DE2625834 A DE 2625834A DE 2625834 A1 DE2625834 A1 DE 2625834A1
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/54Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
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    • C12Q1/26Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten unter Anwendung einer Rexod-Reaktion als Meßreaktion.
In der klinischen und pharmazeutischen Chemie, der Biochemie und der Lebensmittelchemie sind Redox-Reaktionen zur Bestimmung von Enzym- bzw. Substrat-Konzentrationen von großem Interesse. Die Auswertung dieser Reaktionen kann über photometrische Messungen erfolgen. Sind in dem Testsystem neben den interessierenden Redox-Partnern nun noch weitere reduzierende Substanzen vorhanden, so ist mit Störungen zu rechnen. Besonders häufig ist im Probenmaterial Ascorbinsäure anzutreffen. Sie gibt als starkes Reduktionsmittel zu Störungen Anlaß, wenn
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INSPECTED
Pharmaka oder physiologische Flüssigkeiten, wie Harn oder Urin, ascorbinhaltige Pflanzensäfte oder sonstige Lebensmittel, die Ascorbinsäure enthalten oder denen sie zugesetzt wurde, zur Untersuchung kommen. So ist z.B. bekannt, daß folgende Reaktionen durch Ascorbinsäure gestört werden:
A Reaktionen, bei denen H3O2 und ein Wasserstoffdonator mit Peroxidase (POD) umgesetzt werden, werden durch die Reaktion
Ascorbinsäure + H9O0 ^ Dehydroascorbinsäure + H9O
gestört.
B Reaktionen, bei denen Tetrazoliumsalze mit Reduktionsmitteln zu Formazanen reduziert werden, werden durch die Reaktion
Ascorbinsäure + Tetrazoliumsalz > Formazan + Dehydroascorbinsäure
gestört.
C Reaktionen, bei denen Phenole mit nucleophilen Reagentien oxidativ gekuppelt werden, werden dadurch gestört, daß Ascorbinsäure in noch nicht geklärter Weise zu Nebenreaktionen führt, so daß uneinheitliche Kupplungsprodukte entstehen, die in ihrem Absorptionsverhalten in normalem und UV-Licht von den normalerweise gebildeten Kupplungsprodukten abwe i chen.
Zur Entfernung der Ascorbinsäure aus dem Probenmaterial sind die üblichen Oxidationsmethoden in der Regel ungeeignet. Oxidationsmittel greifen auch Substrate und Enzyme an und zer-
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stören sie. Ihre Reduktionsprodukte, meist zwei- oder dreiwertige Metallionen, hemmen häufig die Enzyme, die zur Indikatorreaktion benutzt werden. Die Zerstörung der Ascorbinsäure mit Sauerstoff erfordert stark alkalisches Milieu, z.B. 25-proz. NaOH. Das führt ebenfalls zur Zerstörung von Substraten und Enzymen.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten unter Anwendung einer Redox-Reaktion als Meßreaktion zu schaffen, welches durch Ascorbinsäure nicht mehr gestört wird.
Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß dem Reaktionsansatz Ascorbatoxidase zugesetzt wird.
Ascorbatoxidase katalysiert die Reaktion:
Ascorbinsäure + 1/2 O2 Dehydroascorbinsäure
+ H2O
Nach den Angaben der Literatur über Ascorbinsäure-Oxidase war zu erwarten, daß sich dieses Enzym nicht für den erfindungsgemäßen Zweck verwenden läßt. Alle bisher gewonnenen Enzympräparate produzieren nämlich in einer Nebenreaktion H3O2. Gleichzeitig unterliegt die Ascorbatoxidase einer sehr raschen Inaktivierung, welche dem gleichzeitig gebildeten H„0„ zugeschrieben wird (Biochemical Copper Proceedings Symposium Harriman New York 1965, S. 305 - 337). Das gilt auch für höchstgereinigte Präparationen,« die in der Ultrazentrifuge und bei der Elektrophorese keinerlei Verunreinigungen mehr zeigen (Biochem. £, 1362 - 137O (1965)). Die Reaktionsinaktivierung wird auf die H2O2-Bildung zurückgeführt (Biochem. Biophys. Acta 5_6, 427 bis 439 (1962)). Nach den Berechnungen der letzteren Autoren kann 1 U Ascorbatoxidase in 1 mMol/1 Ascorbinsäurelösung
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_2
0,7 10 mMol/1 H3O2 produzieren. Solche Ascorbat-Konzentrationen sind in Probelösungen häufig vorhanden. Das gebildete H3O2 steht ohne weiteres für enzymatische Reaktionen zur Verfügung, wie am Beispiel der Katalase nachgewiesen wurde.
In dem System
Wasserstoffdonator + H3O3 Farbstoff + 2 H3O
zum photometrischen Nachweis von H9O9 bewirkt es bei einem molaren Extinktionskoeffizienten von ca. 20 cm /yu,Mol eine extinktionsdifferenz von 0,14. Da der Meßbereich normaler photometrischer Reaktionen von ca. 0,01 - 1,00 reicht, wird hier ein untragbarer Fehler hervorgerufen. In gleicher Weise werden Reaktionen gestört, bei denen anstelle von H3O3 organische Hydroperoxide und anstelle von POD Hämoglobin oder andere Oxidationskatalysatoren verwendet werden.
Aber abgesehen von diesem durch das H3O3 hervorgerufenen Fehler war aus der oben zuletzt angeführten Literaturstelle bekannt, daß die Umsetzung der Ascorbinsäure schon lange vor ihrer vollständigen Entfernung zum Stillstand kommt.
Besonders gravierend mußte dies bei all solchen Redox-Reaktionen sein, bei denen H3O3 entsteht, da dieses H3O3 ja einerseits die Inaktivierung des Enzyms noch beschleunigen mußte und andererseits die Neubildung von H3O3 durch die Ascorbatoxidase selbst zu völlig unübersichtlichen Erscheinungen führt. Es ist daher höchst überraschend, daß es entgegen den Erwartungen möglich ist, die auf dem Vorhandensein von Ascorbat beruhenden Störungen durch den Ascorbatoxxdasezusatz vollständig zu beseitigen, ohne daß andere Störungen auftreten, die den Vorteil der Ascorbatbeseitigung wieder zunichte machen.
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Vorzugsweise wird das erfindungsgemäße Verfahren bei enzymatischen Reaktionen angewendet, insbesondere solchen, bei denen H2O2 gebildet wird, also bei Reaktionen, die durch Oxidasen wie Glucoseoxidase, Uricase, Cholesterinoxidase und dergleichen katalysiert werden, ferner bei Reaktionen, bei denen Tetrazoliumsalze reduziert werden und bei Reaktionen, bei denen Phenole mit nucleophilen Reagentien oxidativ gekuppelt werden. Die zugesetzte Ascorbatoxidasemenge richtet sich nach der Höhe der zu erwartenden Ascorbinsäuremenge in der Probe. In der Regel werden 0,002 bis 100 U-Ascorbatoxidase/ml, vorzugsweise 0,01 bis 30 U/ml Testansatz eingesetzt werden. Der pH-Wert der Reaktion richtet sich in erster Linie nach dem pH-itfert, welcher für das oder die anderen beteiligten Enzyme erforderlich ist. PH-Werte zwischen 4,0 und 8,5 erwiesen sich dabei für das Verfahren der Erfindung als geeignet. Besonders bevorzugt wird im Rahmen der Erfindung die Verwendung einer Ascorbatoxidase aus Zucchini (Cucurbita pepo meriullosa) . Aber auch Ascorbatoxidase anderer Herkunft ist geeignet.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten, enthaltend ein System zur Bestimmung eines Substrats oder Enzyms mit einer Redox-Reaktion als Meßreaktion, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es zusätzlich Ascorbatoxidase enthält.
Bevorzugte Reagentien dieser Art enthalten, falls Glucose das zu bestimmende Substrat ist, Peroxidase, Glucoseoxidase, o-Dianisidin oder Azino-di-3-äthylbenzylthiazolinsulfonat (6) zusammen mit Puffer oder Hexokinase, Glucose-6-phosphatdehydrogenase, Diaphorase, NADP, ein Tetrazoliumsalz wie INT: 3-(4-Jodphenyl)-2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H-tetrazoliumchlorid und Puffer. Bei Harnsäure aus dem zu bestimmenden Substrat besteht das System vorzugsweise aus Peroxidase, Uricase, einem
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Phenol wie z.B. 2,4-Dichlorphenol, Aminoantipyrin und Puffer. Im Falle der Glutamatbestimmung besteht das System bevorzugt aus Glutamatdehydrogenase, Diaphorase, NAD, INT und Puffer. Für Tyrosin wird Tyrosinase, B-Methyl-ö-kaliumsulfonyl-benzthiazolonhydrazon(2), für die Brenzcatechinbestimmung Diphenoloxidase, S-Methyl-ö-kaliumsulfonyl-benzthiazolonhydrazon (2), jeweils zusammen mit Puffer, bevorzugt. Alle diese Systeme zur Bestimmung von Substraten sind aber bekannt. An ihrer Stelle können jedoch auch andere bekannte Systeme zur Bestimmung von Substraten oder Enzymen im Rahmen des erfindungsgemäßen Reagens verwendet werden.
Von besonderer Bedeutung ist die Erfindung auch für die Anwendung auf dem Gebiet der Schnelldiagnostika. Derartige Schnelldiagnostika enthalten in der Regel die verschiedenen, für die Durchführung des Verfahrens benötigten Reagentien entweder in einem saugfähigen Träger imprägniert oder mit einem geeigneten Bindemittel auf einer Trägerfolie als Überzug aufgebracht. Die bevorzugte Ausführungsform ist hierbei der Zusatz der Ascorbatoxidase zum Gemisch der übrigen Reagenzien mit nachfolgender Imprägnation auf einem saugfähigen Träger. Auf diese Weise werden z.B. durch Ascorbinsäure praktisch nicht gestörte Testpapiere zum Nachweis von Glucose im Harn (z.B. gemäß DT-OS 2 3 38 9 32), von Blut im Harn (z.B. gemäß P 24 60 903-8 oder DBP 22 35 152) und von Blut im Stuhl erhalten. Daß die Ascorbatoxidase in den Testpapieren für Blut im Harn funktionsfähig und lagerstabil bleibt, muß als höchst überraschend angesehen werden. Diese Testpapiere enthalten nämlich überschüssige Mengen an organischen Hydroperoxiden, von denen ähnlich wie von H^O« eine Inaktivierung der Ascorbatoxidase zu erwarten gewesen wäre.
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Die Ascorbatoxidase kann aber auch auf einem getrennten Träger aufgebracht werden, der mit dem Träger der übrigen Reagentien vereinigt, beispielsweise darübergelegt, verklebt oder gemeinsam eingesiegelt wird. Besonders bevorzugt als Träger für die Ascorbatoxidase wird in diesem Falle ein sogenanntes wasserlösliches Papier (z.B. gemäß DT-OS 24 36 598), das die Farbreaktion auf dem Trägerpapier der anderen Reagentien besonders gut erkennen läßt. Diese Ausführungsweise ist besonders dann von Vorteil, wenn in der Reagentienkombination Substanzen vorhanden sind, die mit der Ascorbatoxidase unverträglich sind, beispielsweise stark saure Reagentien, wie sie bei den Verfahren zur Bestimmung von ürobilinogen, Bilirubin und Nitrit verwendet werden.
Bei den obigen Ausführungsformen werden bis zu 5000 U Ascorbatoxidase pro ml Imprägnierlösung, vorzugsweise bis 2000 U/ml Imprägnierlösung für die Reagensherstellung eingesetzt. Weniger als 1 ü/ml werden im allgemeinen nicht den angestrebten Effekt sicherstellen.
Weiterhin können auch getrennte Zonen des Trägermaterials mit der Ascorbatoxidase bzw. den anderen Testreagentien imprägniert werden. In diesem Falle wird zweckmäßig der Träger mit der zu untersuchenden Lösung derart in Berührung gebracht, daß die Lösung zuerst mit der ascorbatoxidasehaltiqen Zone in Berührung kommt und von dort aus in die Zone gesaugt wird, welche die übrigen Testreagentien enthält.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird die Ascorbatoxidase nach den bekannten Methoden der Enzymfixierung an unlöslichen Trägern am Trägermaterial gebunden. Geeignete Methoden sind bekannt aus
DT-OSen 17 68 512 22 60 184
21 28 743 24 26 988
22 60 185 26 03 319
19 15 970. - 8 -
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Bevorzugte Methoden für das erfindungsgemäße Verfahren sind die Glucosebestimmung mit Peroxidase und Glucoseoxidase und o-Dianisidin oder 2,2'Azino-di- 3-äthylbenzthiazolinsulfonat-(6) (ABTS), die Glucosebestimmung nach der Hexokinase/Glucose-6-phosphatdehydrogenase-Methode, der Nachweis von Harnsäure mittels Phenol, Aminoantipyrin, Peroxidase und Uricase, die Bestimmung von Thyrosin oder Brenzcatechin mittels SMBTH (4-Methyl-6-kaliumsulfonyl-benzthiazolonhydrazon(2) und Thyrosinase bzw. Diphenoloxidase.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter. Beispiel 1
Bestimmung von Glucose mit o-Dianisidin,· Peroxidase (POD) und Glucoseoxidase (GOD), gemessen im Photometer, Wellenlänge 4 32 nm, Meßtemperatur: 25°C.
Küvette Nr. 1
Phosphatpuffer
pH 7,01 M
2 /5 2 ,5 2 ,1 2 ,5 2 ,5
o-Dianisidin
5 mg/ml
0 ,1 0 ,1 0 0 ,1 0 ,1
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Küvette Nr.
POD, 180 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Glucose-Lösung
1 mg/ml 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03
Ascorbinsäure-
lösung 10 mM - 0,1 0,q-| 0,1 0,01
Wasser 0,12 0,02 0,11 - O,O9
Ascorbat-Oxidase
500 U/ml 25° 0, 02 0,02 1 0,1
1 Min. bei C inkubieren, E1 ablesen, dann starten mit E1 das ΔΕ
GOD 70 U/ml 25 O,1 0 ,1 0,1 o, 540 0,543
30 Min. bei
berechnen
°C inkubieren ' E2 ablesen , aus
A E 0,541 0 ,010 0,316 o,
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung (keine Ascorbinsäure) .
Küvette 2 und 3 zeigen, daß 1 bzw. 0,1 /*Mol Ascorbat den Test praktisch vollständig bzw. zu 41,5% hemmen, Küvette 4 und zeigen die vollständige Entstörung dieser Ascorbat-Konzentrationen durch Zusatz von je 10 U Ascorbat-Oxidase.
Beispiel 2
Nachweis von Glucose mit 2,2'-Azino-di- Cs-äthyl-benzthiazolinsulfonat(6)J (ABTS), POD und GOD im Photometer, Wellenlänge: 432 nm, Meßtemperatur: 25°C.
709850/0517 . . " 10 "
Küvette Nr. 1 2 3 0,1 0,1 0,000 0,1 4 5 mit 0,1
Phosphatpuffer
pH 5,6 0,1 M
2,75 2,75 2,75 inkubieren, E„ ablesen 2,75 2,75 -E1 das Δ Ε
ABTS 50 HiM 0,05 0,05 0,05 0,505 0,40 0,O5 0,05 0,504
POD 250 U/ml 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02
Glucose-Lösung
0,1 mg/ml
0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Ascorbinsäure-
Lösung 1 mM
0,1 0,01 0,1 0,01
Wasser 0,12 0,02 0,11 - 0,09
Ascorbat-Oxidase
500 U/ml
- - - 0,02 0,02
1 Min.bei 25°C inkubieren, E1 ablesen, starten
GOD 70 U/ml 0,1
30 Min. bei 25°C
berechnen
, aus E„
Δ Ε 0,502
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung (kein Ascorbat). Küvette2 und 3 zeigen, daß 0,1 bzw. 0,01^MoI Ascorbat den Test vollständig bzw. zu 21% hemmen.
Küvette 4 und 5 zeigen die vollständige Entstörung dieser Ascorbat-Konzentrationen durch je 10 U Ascorbat-Oxidase.
Beispiel 3
Nachweis von Harnsäure mittels Phenol, Aminoantipyrin, POD und Uricase am Analysenautomaten (AutoAnalyzer).
-11-
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Testprinzip
Harnsäure + O3 + H3O Allantoin + H3O3
2 H-O2 + 2,4-Dichlorphenol + 4-Aminoantipyrin > Chinoider
Farbstoff + 2 H3O
Herstellung der Lösungen
1 Ascorbat-Oxidase-Feagens
In 600 ml bidest. Wasser wird der Inhalt einer Flasche 1 gelöst. Zusatz von 0,3 ml Brij -35. In dunkler Flasche bei ca. A0C vier Wochen, bei ca. 25°C eine Woche haltbar.
2 Uricase-Reagens
In 800 ml bidest. Wasser wird der Inhalt einer Flasche 2 gelöst. Zusatz von 2,0 ml Brij -35. In dunkler Flasche bei ca. 4°C vier Wochen, bei ca. 25°C eine Woche haltbar.
Konzentrationen der Lösungen
1 50 mM Phosphatpuffer, pH 5,6
Ascorbat-oxidase > in den aus Fig.2 der Zeichnung ersichtlichen Mengen.
2 31 mM Tris/Citronensäure, pH 8>9
Uricase > 0,08 U/ml
POD >0,015 ü/ml . .
3,0 mM 2,4-Dichlorphenol, 4,0 mM 4-Aminoantipyrin
Zur Durchführung der Bestimmung wird das Schlauchsystem des Automaten gemäß dem in Fig. 1 der Zeichnung dargestellten Fließschema zusammengestellt.
Fig. 2 der Zeichnung faßt in graphischer Darstellung die Ergebnisse der Versuche zusammen.
Beispiel 4
Nachweis von Glucose mit HK/G6P-DH, NADP, INT und Diaphorase im Photometer. Meßwellenlänge: 492 nm, Inkubationstemperatur:
25°c. 709850/0517
- 12 -
Küvette Nr.
Phosphatpuffer, pH 7,5 0,1 M NADP/INT je 1 mg/ml Diaphorase 5 U/ml
Glucose-Lösung 0,05 mg/ml Ascorbat-Lösung 10 mM Ascorbat-Oxidase 35 U/ml Wasser
1,7 1,7 1,7
0,1 0,1 0,1
0,1 0,1 0,1
0,1 0,1 0,1
- 0,01 0,01
- - 0,03
0,04 0,03
3 Min. bei 25°C inkubieren, E.. ablesen, ,05 starten mit
HK/G6P-DH-Lösung je 56 U/ml O E2-I 0,05 0,
15 Min. inkubieren, E2 ablesen , aus ,234 ϊ- das Λ
Δ Ε O 0,307 ,05 .
fcE berechnen
0,
,230
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung.
Küvette 2 zeigt, daß 0,01 ^MoI Ascorbat den Test um 34% zu hoch ausfallen läßt, Küvette 3 zeigt, daß 1 U Ascorbat-Oxidase diese Störung völlig beseitigt.
Beispiel 5
Bestimmung von Glutamat mittels GlDH, NAD/INT/Diaphorase im Photometer. Meßwellenlänge 492 nm, Temperatur 25°C.
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Küvette Nr. 1 2 1,0 1,0 3 29 0 1 4 ,0 5
Phosphatpuffer,
pH 5,6, 0,01 inM
1,30 1,20 0,2 0,2 1, 1 2 0 ,18 ,2 1,27
Glutamat-Lösung
0,2 mg/ml
0,1 0,1 o, 01 0 ,1 0,1
Ascorbat-Lösung
5 mM
_ 0,1 0, 0 ,1 0,01
Ascorbat-Oxidase
100 U/ml
- - - die ,02 0,02
3 Min. bei 25°C inkubieren, dann
pipettieren
in einzelnen Küvetten
0,2 M TRA, 0,05 M
Kaliumphosphat
puffer, pH 8,6 mit
1,5% Triton-X-100
1, 1 1,0
NAD-Lösung,
5 mg/ml
0, 0 0,2
Diaphorase-Lösung
10 U/ml ' 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 GlDH 1000 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
E- ablesen, Reaktion starten mit 0,05 0 ,05 ,186 0 ,05
INT-Lösung,
2 mg/ml
0,05 0,05 ablesen, aus E2-I das Δ. Ε
15 Min. bei
errechnen.
25°C inkubieren, E- 0,380 0 0 ,182
0,184 1,560
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung.
Küvette 2 und 3 zeigen,daß 0,5 bzw. 0,05 /4,MoI Ascorbat den Test um 700 bzw. um 100% zu hoch ausfallen lassen.
Küvette 4 und 5 zeigen die völlige Beseitigung dieser Störung durch 2 U Ascorbat-Oxidase.
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Beispiel 6
Bestimmung von Tyrosin mit S-Methyl-ö-kaliumsulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) (SMBTH) und Tyrosinase im Photometer, Meßwellenlänge 492 nm, Meßtemperatur 25 C.
Küvette Nr. 1
Phosphatpuffer, pH 5,2, 0,25 M 2,77 SMBTH 0,1 M
Ascorbinsäure-Lösung 10 mM Wasser
Ascorbat-Oxidase 500 U/ml Tyrosinase 60 U/ml
2,77 2,77 2,77
0,05 0,05 0,05
- 0,1 0,1
0,12 0,02 -
- - 0,02
0,05 0,05 0,05
1 Min. bei 25 0C inkubieren, E1 ablesen, starten 05 mit
Tyrosin 2 mM 0,05 0, «2- 0,05
1 Std. bei
berechnen
25 °C inkubieren, E2 ablesen, aus 728 S1 das AE
A E 1 ,113 0, 1,100
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung, in Küvette 2 erniedrigt 1 /tMol Ascorbat den theoretischen Wert um 35%, in Küvette 3 ist diese Störung durch 10 U Ascorbat-Oxidase völlig beseitigt.
Beispiel 7;
Bestimmung von Brenzcatechin mit SMBTH und Diphenol-Oxidase
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Küvette Nr.
Phosphatpuffer, 0,25 M,
pH 5,2 2O mM 2 ,8O 2, 7O 2 ,68
SMBTH o,1 5OO U/ml 0 ,05 o, O5 0 ,05
Ascorbat-Lösung - 1 0 ,1
Ascorbat-Oxidase 0 ,02
1 Min. bei 25°C inkubieren, E1 ablesen. starten ,05 mit
Diphenol-Oxidase 200 U/ml 0,05 0 =2" 0,05
17 Min. bei 25°C
berechnen
inkubieren, r E2 ablesen , aus ,485 E1 das ^\ E
0,890 0 0,896
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung. In Küvette 2 erniedrigen 2 ju-Viol Ascorbat den theoretischen Wert um 47%, diese Störung ist in Küvette 3 durch 1OU Ascorbat-Oxidase völlig beseitigt.
Beispiel 8
Harn
Filterpapier wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung getränkt und bei 50° getrocknet:
1,2 m Citratpuffer pH 5
9—(y-Dimethylaminopropy1)-6-chlor-3-amino carbazol-dihydrochlorid
Glucoseoxidase (104 U/mg) Peroxidase (63 U/mg)
50,0 ml
0,75 g 0,25 g O,O5 g
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- 16 -
Ascorbatoxidase (100 U/mg) 1,00g
Wasser 100,O ml.
Das Testpapier reagiert mit glucosehaltigen Urinen mit rotorangen bis schwärzlich-roten Farbtönen. Nach einer Reaktionszeit von 2 Min. geben Urine gleichen Glucosegehaltes mit Ascor binSäuregehalten bis zu 150 mg/dl praktisch gleiche Reaktionsfarben.
Mit Testpapieren analoger Zusammensetzung, aber ohne Ascorbatoxidase, sind je nach Glucosegehalt die Reaktionsfarben bei Ascorbinsäurekonzentrationen ab 50 mg/dl abgeschwächt oder völ lig unterdrückt.
Beispiel 9
Filterpapier wird nacheinander mit folgenden Lösungen imprägniert und bei 40° getrocknet.
Lösung 1
1,2 m Citratpuffer pH 5,25 35,0 ml
Äthylendiamintetraessigsäure, Dinatriumsalz
Dioctylnatriumsulfosuccinat
2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid (ca. 70%ig)
Phosphorsäuretrimorpholid
As corbatoxidase (100 U/mg) Methanol Wasser
- 17 "
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0,1 g
0,5 g
1,6 g
12,7 g
0,3 g
30,0 ml
ad 100,O ml
Lösung 2
3,3', 5,5'-Tetramethylbenzidin 0,3 g
Phenanthridin 0,2 g
Toluol/Petroläther (30 : 70) ad 100,0 ml
Mit diesem Testpapier kann die Anwesenheit von 5 Erythrozyten/mm^ im Harn auch in Gegenwart von 30 bis 50 mg Ascorbinsäure/100 ml nachgewiesen werden. Mit einem Testpapier gleicher Zusammensetzung, aber ohne Ascorbatoxidase gelingt dieser Nachweis schon in Gegenwart von 10 - 20 mg Ascorbinsäure/100 ml nicht mehr.
Beispiel 10
Testpapier wie Beispiel 9, ohne Ascorbatoxidase
Wasserlösliches Papier aus Carboxymethylcellulose (Flächen-
2
gewicht 60 g/m ) wird mit einer Lösung von 20% Eisessig in Methanol zwecks Neutralisation getränkt und getrocknet. Danach wird mit einer wäßrigen Lösung von Ascorbatoxidase (10 U/ml) besprüht und gleich getrocknet.
Testpapier B wird auf Testpapier A gelegt und beide werden zusammen zwischen einer Polyesterfolie und einem Nylonnetz eingesiegelt. Der zu untersuchende Urin wird auf den so hergestellten Teststreifen aufgetropft.
Die Ergebnisse entsprechen denen von Beispiel 9.
- 18 -
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Beispiel 11
Filterpapier wird nacheinander mit folgenden Lösungen imprägniert und bei 40° getrocknet.
Lösung 1
1,2 m Citratpuffer, pH 5,25 10 ml
Ascorbatoxidase 100 U/mg 0,3 g
Wasser ad 100,0 ml
Lösung 2
Guajakharz 3 g
Toluol ad 100,0 ml
Die Lösung wird filtriert und nur das Filtrat zur Imprägnierung verwendet.
Man erhält ein Testpapier, welches mit Stuhl bestrichen wird. Wird auf die Rückseite eine 3%-ige wäßrige Lösung von Wasserstoffperoxid getröpfelt, so erhält man eine blaue Färbung wenn der Stuhl ca. 2% Blut enthält. Diese Färbung tritt auch bei ascorbinsäurehaltigen Stühlen (ca. 15 mg/100 g) auf, während sie in diesen Fällen bei einem Testpapier ohne Ascorbatoxidase ausbleibt.
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Claims (19)

  1. , t j,ρ?/^ ei 4
    Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten unter Anwendung einer Redox-Reaktion als Meßreaktion, dadurch gekennzeichnet , daß in Anwesenheit von Ascorbatoxidase gearbeitet wird.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß 0,002 bis 100 U Ascorbatoxidase/ml Testansatz eingesetzt werden.
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die Ascorbatoxidase zusammen mit einem H0O9 bildenden Enzym eingesetzt wird.
  4. 4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die Ascorbatoxidase zusammen mit einem Tetrazoliumsalz eingesetzt wird.
  5. 5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die Ascorbatoxidase zusammen mit einem Phenol, welches mit nucleophilen Reagenzien oxidativ gekuppelt werden kann, eingesetzt wird.
  6. 6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet , daß es bei pH-Werten zwischen 4,0 und 8,5 durchgeführt wird.
  7. 7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet , daß eine Ascorbatoxidase aus Zucchini (Cucurbita pepo medullosa) verwendet wird.
  8. 8. Reagens zur enzymatischen Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten, enthaltend ein System zur Bestimmung
    - 20 -
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    ORK&NÄL INSPECTED
    eines Substrats oder Enzyms mit einer Redox-Reaktion als Meßreaktion, dadurch gekennzeichnet , daß es zusätzlich Ascorbatoxidase enthält.
  9. 9. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats für die Glucosebestimmung dient und Peroxidase, Glucoseoxidase, o-Dianisidin oder 2-Azino-di-3-äthylbenzthiazolinsulfonat(6) und Puffer enthält.
  10. 10. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Harnsäurebestimmung dient und Peroxidase, Uricase, ein Phenol wie 2,4-Dichlorphenol, Aminoantipyrin und Puffer enthält.
  11. 11. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Glucosebestimmung dient und Hexokinase, Glucose-6-Phosphatdehydrogenase, Nicotinamid-Adenin-Dinucleotidphosphat (NADP) Diaphorase, Tetrazoliumsalz und Puffer enthält.
  12. 12. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Glutamatbestimirtung dient und Glutamatdehydrogenase, Diaphorase, Nicotinamid-adenin-dinucleotid, Tetrazoliumsalz und Puffer enthält.
  13. 13. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Tyrosinbestimmung dient und Tyrosinase, 3-Methyl-6-kaliumsulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) und Puffer enthält.
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  14. 14. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Brenzcatechinbestimmung dient und Diphenoloxidase, S-Methyl-e-kaliumsulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) und Puffer enthält.
  15. 15. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zum Nachweis eines Substrates und die Ascorbatoxidase auf einem saugfähigen Trägermaterial, vorzugsweise Papier, imprägniert vorliegen.
  16. 16. Reagens nach Anspruch 15, bestehend aus einem mit Glucoseoxidase, Peroxidase, Ascorbatoxidase, 9-(y-dimethylaminopropyl)-ö-chlor-S-aminocarbazolsalz und Puffer imprägnierten Trägerpapier.
  17. 17. Reagens nach Anspruch 15, bestehend aus mit Athylendiamintetraessigsäuresalz, Dioctylnatriumsulfosuccinat, 2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid, Phosphorsäuretrimorpholid, Ascorbatoxidase, 3,3', 5,5'Tetramethylbenzidin, Phenanthridin und Puffer imprägniertem Papier.
  18. 18. Reagens nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Ascorbatoxidase auf einem wasserlöslichen blattförmigen Trägermaterial, das System zur Bestimmung eines Substrats auf einem wasserunlöslichen blattförmigenr saugfähigen Trägermaterial imprägniert vorliegt und das wasserlösliche und/das wasserunlösliche Trägermaterial aufeinandergeschichtet sind.
  19. 19. Reagens nach Anspruch 15, bestehend aus mit Ascorbatoxidase, Guajakharz und Puffer imprägniertem Papier.
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IE764/77A IE45546B1 (en) 1976-06-09 1977-04-13 Process for the determination of substrates or enzyme activities
CA276,113A CA1084393A (en) 1976-06-09 1977-04-13 Process for the determination of substrates or enzyme activities
AR267337A AR212763A1 (es) 1976-06-09 1977-04-25 Reactivo para la determinacion enzimatica de substractos o actividades enximaticas empleando una reaccion redox como reaccion de medicion
NLAANVRAGE7704591,A NL169503C (nl) 1976-06-09 1977-04-27 Werkwijze ter bepaling van substraten of enzymactiviteiten en werkwijze ter bereiding van een reagens voor de enzymatische bepaling van substraten en enzymactiviteiten.
FI771356A FI60719C (fi) 1976-06-09 1977-04-28 Foerfarande foer bestaemning av substrat eller enzymaktiviteter
US05/792,073 US4168205A (en) 1976-06-09 1977-04-28 Method for the determination of substrates or enzyme activities
GB17993/77A GB1519134A (en) 1976-06-09 1977-04-29 Process for the determination of substrates or enzyme activities
IT77@@A IT1075527B (it) 1976-06-09 1977-05-03 Procedimento per la determinazione di substrati oppure di attivita' enzimatiche
YU01144/77A YU114477A (en) 1976-06-09 1977-05-05 Method of defining substrates or enzymatic activity
CS781874A CS235068B2 (en) 1976-06-09 1977-05-06 Agent for enzymatic determination of substrates
ZA00772716A ZA772716B (en) 1976-06-09 1977-05-06 Process for the determination of substrates or enzyme activities
PL1977197927A PL109224B1 (en) 1976-06-09 1977-05-06 Method of determining enzymatic substrates or enzymaticactivity
HU77BO00001667A HU172931B (hu) 1976-06-09 1977-05-06 Sposob i reagent dlja opredelenija substratov ili aktivnosti enzimov
ES458544A ES458544A1 (es) 1976-06-09 1977-05-06 Procedimiento para la determinacion de substratos o activi- dades de enzimas.
CH571277A CH633887A5 (de) 1976-06-09 1977-05-06 Verfahren und reagens zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten.
SU772481956A SU797592A3 (ru) 1976-06-09 1977-05-06 Способ определени субстрата или фер-МЕНТАТиВНОй АКТиВНОСТи B биОлОгичЕСКОММАТЕРиАлЕ
PL1977217830A PL114343B1 (en) 1976-06-09 1977-05-06 Preparation for determining enzymatic substrates or enzyme activity
CS773018A CS207453B2 (en) 1976-06-09 1977-05-06 Method of determination of substrates or enzymatic effectiveness
NO771599A NO148340C (no) 1976-06-09 1977-05-06 Fremgangsmaate og reagens for bestemmelse av substrater eller enzymaktiviteter i naervaer av ascorbinsyre.
IL52047A IL52047A (en) 1976-06-09 1977-05-06 Process for the determination of substrates or enzyme activities with the use of redox reaction as measurement reaction and reagents therefor
JP5195377A JPS52150692A (en) 1976-06-09 1977-05-06 Activity measuring method of substrate or enzyme and reagent for carrying out the method
SE7705303A SE426601B (sv) 1976-06-09 1977-05-06 Forfarande for bestemning av substrat eller enzymaktivitet som paverkas av nervaro av askobinsyra och ett reagens for utforande av forfarandet
DD7700198825A DD130178A5 (de) 1976-06-09 1977-05-09 Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten
DK202677A DK144949C (da) 1976-06-09 1977-05-09 Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter
AU25021/77A AU500988B2 (en) 1976-06-09 1977-05-09 Determination of enzyme activities in presence of ascorbic acid
BE177392A BE854407A (fr) 1976-06-09 1977-05-09 Procede pour le dosage des substrats ou la mesure des activites enzymatiques
LU77290A LU77290A1 (de) 1976-06-09 1977-05-09
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ZA (1) ZA772716B (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104131765A (zh) * 2014-07-22 2014-11-05 哈尔滨盛世华林科技有限公司 一种门底自动密封条

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2834705B1 (de) * 1978-08-08 1980-01-24 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und Reagenz zur Durchfuehrung enzymatischer Bestimmungen
DE2907628C2 (de) * 1979-02-27 1981-02-05 C.A. Greiner Und Soehne Gmbh & Co Kg, 7440 Nuertingen Proberöhrchen für die Untersuchung von Proben im klinischen Bereich, insbesondere von Urinproben
DE2914487A1 (de) * 1979-04-10 1980-10-30 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und mittel zur entfernung von ascorbinsaeure aus waessrigen fluessigkeiten
JPS56109595A (en) * 1980-02-01 1981-08-31 Wako Pure Chem Ind Ltd Removal of reductive inhibitor
DE3012368C2 (de) * 1980-03-29 1982-04-15 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen
DE3012314A1 (de) * 1980-03-29 1981-10-15 W. Schlafhorst & Co, 4050 Mönchengladbach Offenend-spinnvorrichtung
US4310626A (en) * 1980-06-02 1982-01-12 Miles Laboratories, Inc. Interference-resistant composition, device and method for determining a peroxidatively active substance in a test sample
DE3046741A1 (de) * 1980-12-11 1982-07-15 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Nachweis von nad(p)h oder salicylat
DE3249743C2 (de) * 1982-02-18 1990-10-04 Amano Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Aichi, Jp
US4587220A (en) * 1983-03-28 1986-05-06 Miles Laboratories, Inc. Ascorbate interference-resistant composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances
DE3313178A1 (de) * 1983-04-12 1984-10-18 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur enzymatischen bestimmung von sulfit
JPS59230161A (ja) * 1983-06-13 1984-12-24 Wako Pure Chem Ind Ltd 還元性物質の分解方法及び分解用試薬
US5002893A (en) * 1985-09-19 1991-03-26 Isolab, Inc. Single color reading method for determining fructosamine
DE3611227A1 (de) * 1986-04-04 1987-10-08 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagenz zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten
US5196314A (en) * 1986-04-04 1993-03-23 Boehringer Mannheim Gmbh Process and reagent for the determination of substrates or enzyme activities
DE3620817A1 (de) * 1986-06-21 1987-12-23 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch
US4885240A (en) * 1986-09-04 1989-12-05 Eastman Kodak Company Use of organic buffers to reduce dehydroascorbic acid interference in analytical methods
US5387431A (en) * 1991-10-25 1995-02-07 Fuisz Technologies Ltd. Saccharide-based matrix
US5456932A (en) * 1987-04-20 1995-10-10 Fuisz Technologies Ltd. Method of converting a feedstock to a shearform product and product thereof
US5264104A (en) * 1989-08-02 1993-11-23 Gregg Brian A Enzyme electrodes
US5264105A (en) * 1989-08-02 1993-11-23 Gregg Brian A Enzyme electrodes
US5320725A (en) * 1989-08-02 1994-06-14 E. Heller & Company Electrode and method for the detection of hydrogen peroxide
CA2028625A1 (en) * 1990-07-05 1992-01-06 Daniel S. Daniel Ethanol analytical element
US5262305A (en) * 1991-03-04 1993-11-16 E. Heller & Company Interferant eliminating biosensors
US5593852A (en) 1993-12-02 1997-01-14 Heller; Adam Subcutaneous glucose electrode
JPH04278450A (ja) * 1991-03-04 1992-10-05 Adam Heller バイオセンサー及び分析物を分析する方法
HUT68509A (en) * 1991-05-17 1995-06-28 Fuisz Technologies Ltd New thermoplastic polymeric material and process for making same
US5576042A (en) * 1991-10-25 1996-11-19 Fuisz Technologies Ltd. High intensity particulate polysaccharide based liquids
JP3802555B2 (ja) * 1991-12-17 2006-07-26 フイズ テクノロジーズ リミテッド 潰瘍予防及び治療組成物並びに方法
US5346377A (en) * 1993-10-07 1994-09-13 Fuisz Technologies Ltd. Apparatus for flash flow processing having feed rate control
US5445769A (en) * 1994-06-27 1995-08-29 Fuisz Technologies Ltd. Spinner head for flash flow processing
US5582855A (en) * 1994-07-01 1996-12-10 Fuisz Technologies Ltd. Flash flow formed solloid delivery systems
US5556652A (en) * 1994-08-05 1996-09-17 Fuisz Technologies Ltd. Comestibles containing stabilized highly odorous flavor component delivery systems
JP2838866B2 (ja) * 1995-05-10 1998-12-16 株式会社同仁化学研究所 酸化発色分析における還元物質の活性抑制方法
US5587198A (en) * 1995-05-31 1996-12-24 Fuisz Technologies Ltd. Positive hydration method of preparing confectionery and product therefrom
US6040151A (en) * 1998-03-10 2000-03-21 Mercury Diagnostics, Inc. Diagnostic compositions and devices utilizing same
US5776719A (en) * 1997-07-07 1998-07-07 Mercury Diagnostics, Inc. Diagnostic compositions and devices utilizing same
US5989845A (en) 1996-04-05 1999-11-23 Mercury Diagnostics, Inc. Diagnostic compositions and devices utilizing same
US5824491A (en) * 1996-05-17 1998-10-20 Mercury Diagnostics, Inc. Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound
EP0958495B1 (de) * 1997-02-06 2002-11-13 Therasense, Inc. Kleinvolumiger sensor zur in-vitro bestimmung
US6103033A (en) 1998-03-04 2000-08-15 Therasense, Inc. Process for producing an electrochemical biosensor
US6134461A (en) * 1998-03-04 2000-10-17 E. Heller & Company Electrochemical analyte
US8688188B2 (en) 1998-04-30 2014-04-01 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US8974386B2 (en) 1998-04-30 2015-03-10 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US6949816B2 (en) 2003-04-21 2005-09-27 Motorola, Inc. Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same
US9066695B2 (en) 1998-04-30 2015-06-30 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US8480580B2 (en) 1998-04-30 2013-07-09 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US8346337B2 (en) 1998-04-30 2013-01-01 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US8465425B2 (en) 1998-04-30 2013-06-18 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US6175752B1 (en) 1998-04-30 2001-01-16 Therasense, Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US6251260B1 (en) 1998-08-24 2001-06-26 Therasense, Inc. Potentiometric sensors for analytic determination
US6338790B1 (en) 1998-10-08 2002-01-15 Therasense, Inc. Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator
US6591125B1 (en) 2000-06-27 2003-07-08 Therasense, Inc. Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator
WO2000078992A2 (en) 1999-06-18 2000-12-28 Therasense, Inc. Mass transport limited in vivo analyte sensor
US6616819B1 (en) 1999-11-04 2003-09-09 Therasense, Inc. Small volume in vitro analyte sensor and methods
US6560471B1 (en) 2001-01-02 2003-05-06 Therasense, Inc. Analyte monitoring device and methods of use
US7041468B2 (en) 2001-04-02 2006-05-09 Therasense, Inc. Blood glucose tracking apparatus and methods
US7381184B2 (en) 2002-11-05 2008-06-03 Abbott Diabetes Care Inc. Sensor inserter assembly
PT2284266E (pt) * 2002-11-14 2013-12-17 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc Siarn contra tp53
EP1578262A4 (de) 2002-12-31 2007-12-05 Therasense Inc Kontinuierliches blutzuckerüberwachungssystem und anwendungsverfahren
US8066639B2 (en) 2003-06-10 2011-11-29 Abbott Diabetes Care Inc. Glucose measuring device for use in personal area network
USD914881S1 (en) 2003-11-05 2021-03-30 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte sensor electronic mount
WO2005089103A2 (en) 2004-02-17 2005-09-29 Therasense, Inc. Method and system for providing data communication in continuous glucose monitoring and management system
US7731657B2 (en) 2005-08-30 2010-06-08 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte sensor introducer and methods of use
US9398882B2 (en) 2005-09-30 2016-07-26 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing analyte sensor and data processing device
US9743862B2 (en) 2011-03-31 2017-08-29 Abbott Diabetes Care Inc. Systems and methods for transcutaneously implanting medical devices
US7697967B2 (en) 2005-12-28 2010-04-13 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing analyte sensor insertion
US9259175B2 (en) 2006-10-23 2016-02-16 Abbott Diabetes Care, Inc. Flexible patch for fluid delivery and monitoring body analytes
US8512243B2 (en) 2005-09-30 2013-08-20 Abbott Diabetes Care Inc. Integrated introducer and transmitter assembly and methods of use
US8571624B2 (en) 2004-12-29 2013-10-29 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for mounting a data transmission device in a communication system
US8333714B2 (en) 2006-09-10 2012-12-18 Abbott Diabetes Care Inc. Method and system for providing an integrated analyte sensor insertion device and data processing unit
US9788771B2 (en) 2006-10-23 2017-10-17 Abbott Diabetes Care Inc. Variable speed sensor insertion devices and methods of use
US10226207B2 (en) 2004-12-29 2019-03-12 Abbott Diabetes Care Inc. Sensor inserter having introducer
US9572534B2 (en) 2010-06-29 2017-02-21 Abbott Diabetes Care Inc. Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices
US7883464B2 (en) 2005-09-30 2011-02-08 Abbott Diabetes Care Inc. Integrated transmitter unit and sensor introducer mechanism and methods of use
US20090105569A1 (en) 2006-04-28 2009-04-23 Abbott Diabetes Care, Inc. Introducer Assembly and Methods of Use
US8112240B2 (en) 2005-04-29 2012-02-07 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing leak detection in data monitoring and management systems
US9521968B2 (en) 2005-09-30 2016-12-20 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte sensor retention mechanism and methods of use
US7766829B2 (en) 2005-11-04 2010-08-03 Abbott Diabetes Care Inc. Method and system for providing basal profile modification in analyte monitoring and management systems
EP1968432A4 (de) 2005-12-28 2009-10-21 Abbott Diabetes Care Inc Einführung eines medizinischen gerätes
US11298058B2 (en) 2005-12-28 2022-04-12 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing analyte sensor insertion
US7885698B2 (en) 2006-02-28 2011-02-08 Abbott Diabetes Care Inc. Method and system for providing continuous calibration of implantable analyte sensors
US8226891B2 (en) 2006-03-31 2012-07-24 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring devices and methods therefor
US7620438B2 (en) 2006-03-31 2009-11-17 Abbott Diabetes Care Inc. Method and system for powering an electronic device
US20080071158A1 (en) 2006-06-07 2008-03-20 Abbott Diabetes Care, Inc. Analyte monitoring system and method
US8732188B2 (en) 2007-02-18 2014-05-20 Abbott Diabetes Care Inc. Method and system for providing contextual based medication dosage determination
US8930203B2 (en) 2007-02-18 2015-01-06 Abbott Diabetes Care Inc. Multi-function analyte test device and methods therefor
US8123686B2 (en) 2007-03-01 2012-02-28 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing rolling data in communication systems
US8461985B2 (en) 2007-05-08 2013-06-11 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring system and methods
US8665091B2 (en) 2007-05-08 2014-03-04 Abbott Diabetes Care Inc. Method and device for determining elapsed sensor life
US8456301B2 (en) 2007-05-08 2013-06-04 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring system and methods
US7928850B2 (en) 2007-05-08 2011-04-19 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring system and methods
WO2008150917A1 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Diabetes Care, Inc. Insertion devices and methods
JP5216968B2 (ja) * 2007-08-07 2013-06-19 株式会社シノテスト テトラゾリウム化合物を色原体として用いる試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤
US8103456B2 (en) 2009-01-29 2012-01-24 Abbott Diabetes Care Inc. Method and device for early signal attenuation detection using blood glucose measurements
US9402544B2 (en) 2009-02-03 2016-08-02 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte sensor and apparatus for insertion of the sensor
US20100213057A1 (en) 2009-02-26 2010-08-26 Benjamin Feldman Self-Powered Analyte Sensor
WO2010127050A1 (en) 2009-04-28 2010-11-04 Abbott Diabetes Care Inc. Error detection in critical repeating data in a wireless sensor system
US8993331B2 (en) 2009-08-31 2015-03-31 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring system and methods for managing power and noise
EP2473098A4 (de) 2009-08-31 2014-04-09 Abbott Diabetes Care Inc Analytsignalverarbeitungsvorrichtung und -verfahren
WO2011041469A1 (en) 2009-09-29 2011-04-07 Abbott Diabetes Care Inc. Method and apparatus for providing notification function in analyte monitoring systems
WO2011041531A1 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Abbott Diabetes Care Inc. Interconnect for on-body analyte monitoring device
USD924406S1 (en) 2010-02-01 2021-07-06 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte sensor inserter
WO2011162843A1 (en) 2010-03-24 2011-12-29 Abbott Diabetes Care Inc. Medical device inserters and processes of inserting and using medical devices
US11064921B2 (en) 2010-06-29 2021-07-20 Abbott Diabetes Care Inc. Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices
WO2013070794A2 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte monitoring device and methods
US9402570B2 (en) 2011-12-11 2016-08-02 Abbott Diabetes Care Inc. Analyte sensor devices, connections, and methods
US10213139B2 (en) 2015-05-14 2019-02-26 Abbott Diabetes Care Inc. Systems, devices, and methods for assembling an applicator and sensor control device
CA2984939A1 (en) 2015-05-14 2016-11-17 Abbott Diabetes Care Inc. Compact medical device inserters and related systems and methods
WO2018136898A1 (en) 2017-01-23 2018-07-26 Abbott Diabetes Care Inc. Systems, devices and methods for analyte sensor insertion
CN108872220B (zh) * 2018-07-11 2020-03-24 深圳华创生物医药科技有限公司 一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用
JP6703722B1 (ja) * 2019-10-16 2020-06-03 株式会社エンザイム・センサ L−グルタミンの測定方法、及びそのためのキット
US11878381B2 (en) 2020-08-06 2024-01-23 Mate Precision Technologies Inc. Tooling base assembly
US11759914B2 (en) 2020-08-06 2023-09-19 Mate Precision Technologies Inc. Vise assembly

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3411887A (en) * 1964-06-15 1968-11-19 Miles Lab Diagnostic composition
US3862885A (en) * 1970-11-25 1975-01-28 Ono Pharmaceutical Co Determination of uric acid in blood with uricase
DE2532918A1 (de) * 1974-07-23 1976-02-05 Eastman Kodak Co Integrales analytisches element fuer die analyse von fluessigkeiten

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT308049B (de) * 1970-08-28 1973-06-25 Boehringer Mannheim Gmbh Reagens zur Glucosebestimmung
US3791988A (en) * 1972-03-23 1974-02-12 Hoffmann La Roche Diagnostic test for glucose
US3992158A (en) * 1973-08-16 1976-11-16 Eastman Kodak Company Integral analytical element

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3411887A (en) * 1964-06-15 1968-11-19 Miles Lab Diagnostic composition
US3862885A (en) * 1970-11-25 1975-01-28 Ono Pharmaceutical Co Determination of uric acid in blood with uricase
DE2532918A1 (de) * 1974-07-23 1976-02-05 Eastman Kodak Co Integrales analytisches element fuer die analyse von fluessigkeiten

Non-Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Advances in Chemistry Series 200, 1982, Top 10 Ascorbat Oxidase : Molekular Properties and Catalytic Activity, S. 224-248
Biochem. 4, 1965, S. 1362-1370
Biochimica et Biophysica Acta 56, 1962, S. 427- 439 *
Chemical Abstracts, Bd. 79, 1973, S. 172, Nr. 1823p *
DAWSON, C.R. und TOKUYAMA, K.: in Annals New York Academy of Sciences, Bd. 92, 1961, S. 213
DAWSON, C.R.: Ascorbate Oxidase, A Review, in The Biochemistry of Copper, Proceedings of the Symposium on Copper in Biological Systems Held at Arden House, Harriman, New York, Sept. 8-10, 1965, Academic Press, New York and London 1966, S. 305-337 *
DIXON: Enzymes, 2. Aufl., Verlag Academic Press, Inc. New York, 1964, S. 373-375 *
LEE, M.H. und DAWSON, C.R.: in The Journal of Biological Chemistry, 1973, Bd. 248, Nr. 19, S. 6596-6602 *
LEVETT-JANISON, P.L. und NELSON, J.M.: in JACS 62, 1940, S. 1409-1412
PENTON, Z.G. und DAWSON, C.R.: On the Apoenzyme of Ascorbat Oxidase in T.E. King u.a., Heraus- geber, Oxidases and Related Redox Systems, 1965, John Wiley & Sons, Inc., New York, S. 222-239 *
STARK, G.R., DAWSON, C.R.: in P.D. Boyer, H. *
STARK,G.R., DAWSON,C.R.: in P.D.Boyer, H. Lardy und K.Myrbäck, Herausgeber, The Enzymes, Bd. VIII, Academic Press Inc., New York, 1963, S.297-311

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104131765A (zh) * 2014-07-22 2014-11-05 哈尔滨盛世华林科技有限公司 一种门底自动密封条

Also Published As

Publication number Publication date
SE7705303L (sv) 1977-12-10
IL52047A (en) 1981-09-13
FI60719B (fi) 1981-11-30
AT354640B (de) 1979-01-25
IL52047A0 (en) 1977-07-31
ZA772716B (en) 1978-05-30
IE45546B1 (en) 1982-09-22
CH633887A5 (de) 1982-12-31
ES458544A1 (es) 1978-04-16
BE854407A (fr) 1977-11-09
ATA234077A (de) 1979-06-15
FR2354561A1 (fr) 1978-01-06
CS207453B2 (en) 1981-07-31
NO148340C (no) 1986-11-06
BR7703008A (pt) 1978-04-18
DE2625834C3 (de) 1989-11-23
CA1084393A (en) 1980-08-26
HU172931B (hu) 1979-01-28
NO148340B (no) 1983-06-13
AU500988B2 (en) 1979-06-07
US4168205A (en) 1979-09-18
IT1075527B (it) 1985-04-22
AU2502177A (en) 1978-11-16
NO771599L (no) 1977-12-12
DK202677A (da) 1977-12-10
LU77290A1 (de) 1977-12-13
DK144949B (da) 1982-07-12
JPS52150692A (en) 1977-12-14
AR212763A1 (es) 1978-09-29
SE426601B (sv) 1983-01-31
NL7704591A (nl) 1977-12-13
PL197927A1 (pl) 1978-01-02
PL114343B1 (en) 1981-01-31
YU114477A (en) 1982-08-31
DD130178A5 (de) 1978-03-08
PL109224B1 (en) 1980-05-31
DE2625834B2 (de) 1978-10-12
NL169503B (nl) 1982-02-16
FI60719C (fi) 1982-03-10
DK144949C (da) 1982-11-29
JPS5639198B2 (de) 1981-09-11
CS235068B2 (en) 1985-04-16
FI771356A (de) 1977-12-10
GB1519134A (en) 1978-07-26
NL169503C (nl) 1982-07-16
FR2354561B1 (de) 1981-10-30
SU797592A3 (ru) 1981-01-15
IE45546L (en) 1977-12-09

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