DE2541308C2 - Proteinimmobilisierende Membran und Verfahren zu deren Herstellung - Google Patents

Description

a) ein hydrophobes, polymeres Substrat mit einem Lösungsmittelsystem behandelt, das ein zur Anquellung des polymeren Substrats befähigtes Lösungsmittelsystem und eine aliphatische Verbin dung mit einer mindestens sechs Kohlenstoffatome von einem Ende der aliphatischen Verbindung entfernten, reaktiven Stelle enthält,

b) das lösungsmittelbeladene, polymere Substrat unter im wesentlichen vollständiger Entfernung des Lösungsmittels trocknet, wobei ein Substrat mit partiell in der Oberfläche absorbierten, aliphati sehen Ketten, die jeweils eine reaktive Stelle aufweisen, gebildet wird and

c) eine proteinreaktive Verbindung, die eine Kupplungsstelle aufweist, mit den reaktiven Stellen der aliphatischen Ketten unter Bildung eines Substrats mit anhängenden, proteinreaktiven Gruppen umsetzt.

Die Erfindung betrifft eine proteinimmobilisierende Membran gemäß Oberbegriff von Patentanspruch 1. Die spezifische Reaktion eines speziellen Proteins mit einem anderen ist allgemein bekannt und eine solche tritt beispielsweise bei der Entwicklung spezifischer Antikörper zur Bekämpfung eines speziellen Antigens im Tierkörper auf. Dieses spezifische eines Proteins auf ein anderes wird in der Affinitätschromatographie zur Abtrennung eines spezifischen Proteins ausgenutzt, das in einer speziellen Lösung anwesend ist.

Eine solche selektive Reaktion zwischen zwei Verbindungen existiert bei zahlreichen Substanzen; so reagieren Proteine einschließlich Hormone und Enzyme sowie Poly- und Monosaccharide selektiv mit spezifischen Verbindungen, und alle diese Reaktionen werden im Rahmen der vorliegenden Beschreibung als immunochemische Reaktionen bezeichnet.

Affinitätschromatographsiche Materialien wie z. B. Säulenpackungen werden ausgehend von hydrophilen polymeren Oberflächen hergestellt, die in Anbetracht ihres polaren Charakters reaktive Stellen besitzen, an die eine proteinreaktive Verbindung angefügt werden kann. Der hydrophile Charakter des Substrats wird durch die Proteinanlagerung nicht beeinträchtigt.

Ein Proteinmolekül wie ein Antikörper oder Antigen in einer Pufferlösung hat eine deutliche elektrische Ladung, deren Höhe und Polarität vom isoclckirischen Punkt des Proteins und der Zusammensetzung des Puffers abhängt. Diese Ladung wird durch Antikörper-Antigen-Reaktionen verändert. Obgleich nun die resultierende Änderung der elektrischen Ladung von einer nachzuweisenden Größe ist, ist die Protcinimmobilisierung auf einer hydrophilen Membran unbefriedigend, da die ionische Wirkung von Wasser auf die polaren Gruppen des hydrophilen Substrats so stark ist, daß sie die durch die immunochcmischc Reaktion induzierte geringe Änderung des elektrischen Potentials überdeckt.

Aus der DE-OS 22 47 163 ist eine proteinreaklivc Membran aus einem hydrophoben polymeren Substrat mit an anhängende Kohlenwasserstoffketten gebundenen proteinreaktiven Gruppen bekannt. Diese Kohlcnwasserstoffketten sind jedoch kovalcnt über polare Gruppen mi* der Membran verbunden, so daß die Substrate hydrophilen Charakter haben. Diese bekannten Membrane sind daher nrht zum quantitativen Nachweis reaktionsfähiger Verbindungen mittels einer immunochcmischcn Reaktion durch Messung der Potentialänderung geeignet.

Aus der DE-OS 19 15 970 ist ein Verfahren zur Herstellung von Membranen mit immobilisierten, aktiven Proteinen bekannt, bei dem ein Träger mit einer Lösung mindestens einer aktiven Proteinsubstanz in Gegenwart

eines Brückenbildners umgesetzt wird. Als Träger kommen hauptsächlich hydrophile Polymere wie Cellulose,

Polysaccharide und vorzugsweise inerte Proleine in Betracht und als Brückenbildner wird im allgemeinen eine

bifunktionelle Verbindung eingesetzt, so daß an der Oberfläche der Membran polare Gruppen vorhanden sind, die die hydrophilen Eigenschaften der Membran fördern. Mit der bekannten Membran kann die Durchgangsge-

eo schwindigkeit von Gasen durch die Membran gesteigert werden.

Aufgabe der Erfindung besteht darin, eine proteiriimmobilisicrende Membran sowie ein Verfahren zu deren Herstellung zur Verfügung zu stellen, mit dem eine Kohlenwasscrsloffkelte an ein Substrat angefügt werden kann, ohne daß eine Hydrophilierung der Oberfläche des Substrates einiritt, wobei eine befriedigende Protcinimmobilisierung erreicht werden kann, und ein qualitativer insbesondere quantitativer Nachweis eines zu einer to immunochemischen Reaktions reaktionsfähigen Verbindung möglich ist.

Die Aufgabe wird mit der im Patentanspruch I spezifizierten Membran gelöst.

Die Erfindung beruht auf der tirkcnninis, daß die Obcrfläehcnladung der Polymcr/l-ösungsgrcnzflächc von der reinen Ladung des immobilisierten Proleins (Antikörper) abhängt, wenn alle Proteine kovalcnt an die

Oberfläche eines hydrophoben Substrats gebunden sind, das wiederum auf einem Leiter sitzt bzw. abgelagert ist Wenn in der Lösung entsprechendes Antigen anwesend ist und die Bindungsstelle des Antikörpers während der Immobilisierung (Bindung an das Polymere) nicht zerstört wird, findet die immunochemsiche Reaktion an der Grenzfläche mit daraus resultierender Änderung der Oberflächenladung statt. Diese Änderung kann potentiometrisch gegenüber einer Bezugselektrode gemessen werden, die in die gleiche Lösung eintaucht.

Die Membran umfaßt ein Substrat aus einem hydrophoben Polymeren, das durch Lösungsmittelwirkung quellbar ist und in dem eine — üblicherweise aliphatische — Kohlenstoff-Verbindung mit einer geeignet reaktiven Gruppe aus einem Lösungsmittelsystem absorbiert ist. Die resultierende hydrophobe Membran besitzt eine anhängende (im wesentlichen) Kohlenwasserstoffkette, die eine protein-reaktive Gruppe wie eine Epoxidgruppe oder eine andere proteinreaktive Gruppe enthält Die Kette kann von Kohlenstoff-Kohlenstoffbindungen verschiedene Verknüpfungen oder Kettenglieder wie Ätherbindung aufweisen.

Vorzugsweise umfaßt die Membran Kohlenwasserstoffketten, die in einer mit einem Polypeptid spezifisch reaktiven Gruppe enden. Zweckmäßigerweise ist die Membran mit Kohlenwasserstoffketten versehen, die jeweils eine reaktive Gruppe aufweisen, die zur Bindung einer spezifisch protein-reaktiven Gruppe durch Kontakt der reaktiven Gruppe mit der protein-reaktiven Gruppe befähigt ist, wodurch diese protein-reaktiven Gruppe über die Kette an die Membran gebunden wird. Geeignete protein-reaktive Gruppen sind Antigene oder Antikörper.

Die mit einer Proteinimmobilisierungsfähigkeit ausgestattete hydrophobe Membran wird als Hülle einer hochleitfähigen Elektrode wie beispielsweise Platin verwendet Ein Protein, z. B. ein Antikörper, mit einer Selektivität für die Reaktion mit einem speziellen Protein (Antigen) wird mit der proiein-reaktiven Gruppe zur Reaktion gebracht. Durch Eintauchen einer solchen beschichteten Elektrode zusammen mit einer Bezugselektrode in eine das Antigen enthaltende wäßrige Lösung erhält man ein elektrisch empfindliches System, das in der Lage ist, die durch Einfang eines speziellen Proteins (Antigens) durch die mit einem immunoreaktiven Antikörper versehene Elektrode verursachte Änderung der elektrischen Ladung an der Lösung/Polymer-Grenzfläche zu messen.

Zum Nachweis der Anwesenheit und der Konzentration einer unter Ausnutzung einer immunochemischen Reaktion reaktionsfähigen Verbindung in einer Mischung, welche diese Verbindung zusammen mit anderen Molekülen, z. B. Lösungsmittelmolekülen, enthält, wird die Mischung mit einer Elektrode in Kontakt gebracht, die von einer mit der Verbindung spezifisch reaktiven Membran umschlossen wird, wobei irgendeine resultierende Änderung uer elektrischen Ladung an der Membran nachgewiesen wird. Zweckmäßigerweise kann dies durch Vergleich mit einer geeignet? '1 Bezugselektrode erfolgen.

Für die Erzeugung der hydrophoben Polymermembran mit selektiver immunochemischer Wirksamkeit wird eine Membran aus einem hydrophoi· ;n Polymeren erzeugt. Das Polymere ist mit einem organischen Lösungsmittel oder einer Lö.sungsmittelmischung, insbesondere mit aliphatischen Lösungsmitteln, quellbar. Für die praktische Durchführung der Erfindung besonders brauchbare Polymere sind solche hydrophoben Polymeren. die keine anhängenden polaren Gruppen enthalten. Zu typischen Polymeren für diesen Zweck gehören thermoplastische Polymere wie Polyvinylchlorid, Polystyrol, Polyäthylen. Polypropylen, Siliconkautschuk. Polyurethan, Polycarbonat oder Polytetrafluorethylen. Wärmehärtende Polymere wie Epoxyharze und vernetzte Polyester können auch angewandt werden. Bevorzugt werden Polymere, die durch Tauchbeschichtung odsr Aufgießen oder Aufschrumpfen auf eine Elektrode aufgebracht werden können.

Die polymere Membran wird dann mit einem zur Anqjellung der Membran befähigten Lösungsmittelsystem so lange behandelt, daß die Membran zumindest soweit angequollen wird, daß die Kohlenwasserstoffkette in genügender Konzentration, wie nachfolgend beschrieben, in der Oberfläche der Membran absorbiert ist. Das Lösungsmiitelsystcm enthält neben einem geeigneten Lösungsmittel eine Kohlenwasserstoffverbindung mit einer reaktiven Gruppe, die sich vorzugsweise am Ende der Kohlenwasserstoffkette oder in dessen Nähe befindet. Als Lösungsmittel zum Anquellen der polymeren Membran dienen vorzugsweise solche, die durch Trocknen des Polymeren ohne weiteres entfernt werden können. So werden Lösungsmittel mit geringeren Molekulargewichten im allgemeinen gegenüber solchen mit höheren Molekulargewichten bevorzugt. Wie im nachfolgenden angegeben ist, wird bevorzugt, daß das Lösungsmittel einen niedrigeren Siedepunkt hat und leichter abgedampft wird als die Kohlenwasserstoffverbindung mit einer reaktiven Gruppe. Eine typische Lösungsmitlelmischung für PVC umfaßt Petroläthcr mit einem Siedebereich von 30 bis 60°C und Toluol. Andere Lösungsmittel oder Mischungen derselben können zum Anquellen von PVC oder anderen Polymermaterialien benutzt werden, diese sind jedoch dem Fachmann bekannt oder sie können durch einfache Versuche ermittelt werden.

Eine typische Kohlenwasscrsioffvcrbindung mit einer reaktiven Gruppe ist n-Decanol. Weitere im Rahmen der Erfindung besonders brauchbare Verbindungen sind n-Hcxanol, n-Dccylamin, n-Hexyl-amin, n-Decansäure und ähnliche Verbindungen mit beweglichem Wasserstoff.

Nach Tränken der polymeren Membran mit dem Lösungsmittelsystcm für eine ausreichend lange Zeitdauer zur Herbeiführung des erforderlichen Quellungxgfiides wird die Membran bei einer geeigneten Temperatur zur Entfernung des Lösungsmittels ohne Abtrennung wesentlicher Mengen der Kohlenwasserstoffverbindung mit t>o der reaktiven Gruppe getrocknet. Wenn Pctroläthcr, Toluol und Lösungsmittel von ähnlichem Siedebereich benutz werden, liegt eine typische Trockcntumperaiur bei etwa 50 bis 100"C zwcckmaßigcrweise 50 bis 60⁰C (vorzugsweise unter vermindertem Druck). Die Entfernung des Lösungsmittels liefert eine Membran mit einer geringen Konzentration an anhängenden Kohlcnwasscrstoffkenen. von denen jede eine reaktive Gruppe, wie beispielsweise Hydroxyl-, Amin- oder Carboxylgruppe, aufweist. to

Die Auswahl des Lösungsmittels (und damit seines Siedepunkts) und der anzuwendenden Drucke bei seiner F.ntfcrnung erfolgt unter Berücksichtigung der Natur und Eigenschaften der Membran und des Kohlenwasser-Stoffs. Für die hier benutzten Polymeren sind Lösungsmittel, von denen sie angequollen werden, bekannt.

Anschließend an die Absorption der Kohlenwasserstoffkette an die polymere Membran kann eine Serie von Behandlungen zur Erzielung einer proteinimmobilisierenden Membran, d. h. einer Membran mit der Fähigkeit zum Einfang eines Proteins, wie bei einer immunochemischen Reaktion folgen.

Es ist zu bemerken, daß die Kohlenwasserstoffkette mit einer geeigneten proteinreakliven Gruppe versehen werden kann, bevor sie in die Membran eingeführt wird (in diesem Falle sollte natürlich sichergestellt werden, daß die Gruppe eine genügende Freiheit zur Entfaltung ihrer Reaktivität besitzt — nämlich durch Sicherstellung, daß sie nicht weniger als 6 Kohlenstoffatome von der Membran entfernt ist) oder aber die Gruppe kann in die Kette nach deren Absorption an die Membran eingeführt bzw. eingebaut werden. Proteinreaktive Gruppen können dach Kontakt der Membran mit einem geeigneten Material erhalten werden, das zur Reaktion mit der Kohlenwasserstoffkette zur Herbeiführung der erforderlichen spezifischen Aktivität befähigt ist oder es kann die Anwendung einer verknüpfenden Gruppierung notwendig sein, um die reaktive Gruppe an der Kette zur Bindung einer geeigneten proteinreaktiven Gruppe zu befähigen. Derartige Alternativen ergeben sich dem Fachmann ohne weiteres, und die Auswahl der geeigneten Arbeitsfolge wird im Hinblick auf die Eigenart der verschiedenen beteiligten Materialien und Gruppen getroffen werden.

So kann die Anwendung einer verknüpfenden Gruppierung für Protein zu den folgenden Arbeitsschritten führen: Nach dem Trockner* der polymeren Membran wird diese in eine Lösung getaucht, die eine Verbindung mit einer spezifischen protein-reaktiven Gruppe und einer weiteren reaktiven Gruppe eathäJt, die mit der reaktiven Gruppe der nun der Membran angefügten Kohlenwasserstoffkette reagieren kann. Wenn die reaktive Gruppe der Kohlenwasserstoffkette beispielsweise eine Hydroxylgruppe ist, so kann als typische protein-reaktive Verbindung ein Epichlorhydrin angewandt werden, wodurch eine verknüpfende Gruppiert !ig mit Epoxid und Äther gebildet wird. Andere Kohienwasserstofimoieküic können in die Membran eingeführt werden, wie beispielsweise aliphatische Amine, vorzugsweise primäre und sekundäre Amine, carboxylhaltige aliphatische Verbindungen u. dgl, und diese können zur Reaktion mit Epichlorhydrin oder einem Bis-Epoxid befähigt sein, in dem ein Epoxidringpaar für eine Umsetzung vorhanden ist. Erwunschtermaßen sollte eine Vernetzung zwischen einem Paar von anhängenden Gruppen bestehen, die an der Me-nbranoberfläche hängen, ausgeschlossen sein.

Eine geeignete Behandlungsserie für einen an einer polymeren Membran hängenden aliphatischen Alkohol wird nachfolgend skizziert:

Membran / OH + Ci-CH₂CH-CH >

'. aliphatischer Alkohol Epichlorhydrin

Ο —CH₂-CH-CH + HCl

Proteine mit Aminogruppen sind in der Lage, mit der Epoxidgruppe zu reagieren, die der Membran angefügt ist, unter Bildung einer Membran mit einein immobilisierten Protein, das zum Einfang und Nachweis eines spezifischen Proteins in einer Reaktion vom immunochemischen Typ befähigt ist.
Zu weiteren Techniken zur Herstellung einer prolcin-immibilisierenden Membran gehören:

(a) Thiophosgen- oder Isocyanatkopplung

Membran / _{MU rcf},i

/ Nn₂ + CbCI₂ *

/

'/ aliphatisches Amin Phosgen

y N = C=S + 2HCl

/ _N==c__{s +} p_nh₂

', Protein

/	— N —	S
/	H	Il
/	c—\\—ρ
/	H

(b) Azo-Kupplung

'/ aliphatisches Amin

NO₂
para-Nitrobenzoylchlorid

+ NaS₂O₄ ►

Natriumthiosulfat
NO₂

N-C-/ ^ + NaNO₂

_{χ 0}

^{κ NHj}

/ N — C—/N + Protein

N = NH

Kin weiteres Protcinkupplungssysiem umfaßt die Erzeugung einer Diimidvcrknüpiung zwischen der Kohlen· wassersioffkcttc und einem Proteinmolckül; eine aliphatischc Verbindung mit einer Carboxylgruppe wird mit j5 Carbouiimiu umgesetzt, dessen Reakiiünspruuuki mit einem geeigneten Protein /ur Reaktion gebracht wird.

Nach Umsetzung der proiein-rcaktiven verknüpfenden Verbindung (d. h. der eine protein-immobilisierende Gruppe enthaltenden Verbindung wie /. B. Epichlorhydrin) mit dem beweglichen Wasserstoff der in der Membranoberfläche absorbierten Kette zur Bildung der proteinimmobilisierenden Gruppierung wird die Membran vorzugsweise gewaschen und in eine Lösung gebracht, die das zu immobilisierende Protein enthält.

Bei der erfindungsgemäßen Membran wird im allgemeinen die Verwendung einer Kohlenwasserstoffverbindung bevorzugt, die eine so große Kettenlänge hat, daß eine gewisse Entfernung der reaktiven Gruppe von der Membranoberfläche ermöglicht wird. Im allgemeinen hat die erfindungsgemäß angewandte Kohlenwasserstoffvcrbindung zumindest 6 Kohlcnsloffatome in der Hauptkette. Bevorzugt werden Kettenlängen, bei denen die Hauptkette der Kohlcnwasscrstoffverbindung etwa 8 bis 12 Kohlenstoffatome enthält und auf alle Fälle wird die Kettenlänge so gewählt, daß die spezifische reaktive Gruppe von der Membranoberfläche um zumindest 6 oder 8 Kohlenstoffatome entfernt ist. Wenn eine protein-reaktive verknüpfende Verbindung, die mit der reaktiven Gruppe der Kohlenwasserverbindung zur Reaktion gebracht wird, eine größere Kettenlänge besitzt, so daß die am Ende gebildete protein-reaktive Gruppe von der Oberfläche um zumindest 6 Kohlenstoffatome entfernt hängt, braucht die Kettenlänge des Kohlenwasserstoffs nicht so lang zu sein.

Die erfindungsgemäßen Membranen können zum qualitativen und vorzugsweise quantitativen Nachweis der Anwesenheit einer speziellen Verbindung in einer gegebenen Mischung, wie z. B. einer die Verbindung enthaltenden Lösung eingesetzt werden. Die spezielle Verbindung ist eine unter Ausnutzung einer immunochemischen Reaktion reaktionsfähige Verbindung.

Eine Beschichtung oder Hülle aus der eine Kohlenwasscrstoffkctte mit einer reaktiven Gruppe enthaltenden hydrophoben polymeren Membran wird auf der Meßelektrode in einer Dicke von etwa 10 bis 50 μ gebildet, wobei Dicken von etwa 20 bis 40 μ besonders bevorzugt werden. Vorzugsweise ist die Membran nicht dicker als !00 μ und nicht dünner als 5 μ. Ein Protein wird an der Membran immobilisiert. Die Meßelektrode wird in Verbindung mit einer Bezugselektrode verwendet. Die beiden Elektroden werden in eine Mischung, typischerweise eine Lösung, eingetaucht, die ein Protein enthält. Die Meßelektrode und die Bezugselektrode werden mit w> einem Meßgerät verbunden, das auf sehr geringe Änderungen des elektrischen Potentials anspricht Beim Einfang des speziellen Proteins durch die Meßelekirode ändert sich das elektrische Potential an der Polymer/Lösungsgrenzfläche. Diese geringe Änderung wird vom Meßgerät nachgewiesen, das in der elektrischen Schaltung eine hohe impedanz besitzt und die Anwesenheit der Verbindung somit anzeigt Durch Eichung kann das Meßgerät für eine quantitative Bestimmung der in der Lösung anwesenden Verbindungsmenge verwendet werden.

Die Bezugselektrode kann aus irgendeinem von einem weiten Bereich von geeigneten Elektrodenmaterialien bestehen, von denen viele bekannt sind, obgleich gefunden wurde, daß es vorteilhaft ist, als Bezugselektrode eine

zweite Elektrode zu verwenden, die mit der Meßelcktrodc im wesentlichen identisch ist, nur daß die spezifischen reaktiven Stellen durch ein geeignet reaktives Block.ierungsmiticl blockiert sind, so daß die Bezugselektrode nicht mehr ?uf die zu prüfende spezielle Verbindung anspricht. Sie spricht dagegen (wie die Meßclektrode) auf eine nicht-selektive Absorption anderer Moleküle der Testlösung an, so daß der Effekt einer solchen nicht-selek tiven Adsorption, im Falle daß sie auftritt, kompensiert werden kann: durch Messung des Potentials einer aktiven Meßelektrode gegenüber dem Potential einer identischen Bezugselektrode mit blockierten Bindungss'«;llen kann der Einfluß nicht-spezifischer Wechselwirkungen wirksam ausgeschaltet werden.

Das bevorzugte Elektrodenmaterial ist Platin, obgleich irgendwelche anderen geeigneten leitenden Materialien, und zwar entweder Metalle wie z. B. Kupfer oder Silber oder Nicht-Metalle wie z. B. Kohlenstoff angc- wandt werden können. Die Elektrode kann von beliebiger geeigneter Gestalt wie z. B. ein Stab Draht oder Blech sein. Die nicht von der Membran bedeckten oder umhüllten Bereiche der Elektrode sollten erwünschtermaßen isoliert sein, was zweckmäßigerweise durch anderweitige Umhüllung der freiliegenden Teile der Elektrode und (wo angemessen) ihrer zugehörigen Zuleitungen mit einem geeigneten Isoliermaterial erreicht wird; bei Platin wird beispielsweise eine Glasisolicrung bevorzugt, obgleich andere Materialien wie z. B. Polytetrafluoräthylcn

ts angewandt werden können.

Beispiel

Eine proteinimmobilisierende Membran wurde durch Tauchbeschichtung der Elektrode in Polyvinylchloridlösung auf einer Platinelektrode gebildet. Die Beschichtung wurde getrocknet und hatte eine Dicke von etwa 25 μ. Die mit Polyvinylchlorid beschichtete Elektrode wurde 3 Stunden lang bei Zimmertemperatur in eine Lösungsmittellösung getaucht. Das Lösungsmittel wurd«; durch 4,5 Volumenteile Petroläther und 4,5 Volumenteile Toluol gebildet und enthielt 1 Volumenteil des Kohlenwasserstoffs (bzw. der Kohlenwasscrstoffketten von) n-Decanol. Die Elektrode wurde dann etwa 16 Stunden lang in einen Vakuumofen von 50⁰C gebracht. Die getrocknete Elektrode wurde 2 Stunden lang bui etwa 60°C in eine Lösung getaucht, die 10% Epichlorhydrin in I molarer Natriumhydroxydlösung enthielt. Die Elektrode wurde dann mit destilliertem Wasser gewaschen. Die Elektrode kann mit dem Protein Koncanavalin A oder dem Kaninchen-Anlihuman-7S-gamma-Globulin umgesetzt und zum quantitativen Nachweis von Hefc-Mannan bzw. Human-7S-gamma Globulin verwendet werden.

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Claims (2)

Patentansprüche:

1. Proteinimmobilisierende Membran aus einem organischen, polymeren Substrat mit an anhängende Kohlenwasserstoffketten gebundenen, proteinreaktiven Gruppen, dadurch gekennzeichnet, daß die Kohlenwasserstoffketten mindestens sechs linear mit der proteinreaktiven Gruppe verbundene Kohlenstoffatome enthalten und partiell in der Oberfläche des Substrats absorbiert sind und daß es sich bei dem Substrat um ein hydrophobes Substrat handelt, das durch organische Lösungsmittel quellbar ist

2. Membran nach Anspruch 1. dadurch gekennzeichnet, daß die proteinreaktive Gruppe eine Epoxid-Gruppierung ist.

ίο 3. Verfahren zur Herstellung einer hydrophoben, proteinimmobilisierenden, polymeren Membran mit

anhängenden, proteinreaktiven Gruppen nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man