DE19811732A1 - Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit - Google Patents

Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit

Info

Publication number
DE19811732A1
DE19811732A1 DE19811732A DE19811732A DE19811732A1 DE 19811732 A1 DE19811732 A1 DE 19811732A1 DE 19811732 A DE19811732 A DE 19811732A DE 19811732 A DE19811732 A DE 19811732A DE 19811732 A1 DE19811732 A1 DE 19811732A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
microtiter plate
cavities
coating
molecule
plastic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE19811732A
Other languages
German (de)
Inventor
Wolf Bertling
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
November AG Novus Medicatus Bertling Gesellschaft fuer Molekular Medizin
Original Assignee
November AG Novus Medicatus Bertling Gesellschaft fuer Molekular Medizin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by November AG Novus Medicatus Bertling Gesellschaft fuer Molekular Medizin filed Critical November AG Novus Medicatus Bertling Gesellschaft fuer Molekular Medizin
Priority to DE19811732A priority Critical patent/DE19811732A1/en
Publication of DE19811732A1 publication Critical patent/DE19811732A1/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase

Abstract

The coating has oligonucleotide (P1) covalently-bonded to the plastic surface (M). An Independent claim is included for the corresponding method of detecting biomolecules.

Description

Die Erfindung betrifft eine Mikrotiterplatte nach dem Oberbe­ griff des Anspruchs 1. Sie betrifft ferner ein Verfahren zum Nachweis von Molekülen, insbesondere Biomolekülen, nach dem Oberbegriff des Anspruchs 10.The invention relates to a microtiter plate according to the Oberbe handle of claim 1. It also relates to a method for Detection of molecules, especially biomolecules, after Preamble of claim 10.

Eine solche Mikrotiterplatte wird beispielsweise von der Fir­ ma Boehringer Mannheim GmbH, unter der Bezeichnung "Streptavidin-coated Microtiter Plates, nuclease free No. 1 768 000" vertrieben. Innerhalb der Kavitäten ist eine Streptavidin- oder Avidinbeschichtung vorgesehen. An diese Beschichtung kann zur Durchführung einer Nachweisreaktion ein spezifisches Biomolekül, z. B. ein Antikörper, gebunden wer­ den. Damit eignet sich die Mikrotiterplatte z. B. zum Nachweis eines spezifischen Antigens.Such a microtiter plate is for example from Fir ma Boehringer Mannheim GmbH, under the name "Streptavidin-coated microtiter plates, nuclease free No. 1 768 000 ". Inside the cavities is one Streptavidin or avidin coating provided. To this Coating can be used to perform a detection reaction specific biomolecule, e.g. B. an antibody bound who the. The microtiter plate is therefore suitable for. B. for proof of a specific antigen.

Eine solche Mikrotiterplatte kann auch zum Nachweis von mit­ tels der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) oder Ligase-Ket­ tenreaktion (LCR) hergestellten Produkten benutzt werden. In diesem Fall wird an diese Beschichtung eine mit einem bio­ tinylierten Primer amplifizierte Probe gebunden. Die Proben­ lösung wird entfernt und die Beschichtung gewaschen. An­ schließend wird ein weiteres Reagenz mit der gebundenen Probe in Kontakt gebracht, mit dem mittels einer Farbreaktion die Bindung nachweisbar ist.Such a microtiter plate can also be used to detect means of the polymerase chain reaction (PCR) or ligase ket tenreaction (LCR) products. In this case, a bio tinylated primer amplified sample bound. The samples solution is removed and the coating is washed. On finally another reagent with the bound sample brought into contact with which by means of a color reaction Binding is detectable.

Insbesondere im Hinblick auf den Nachweis von PCR- oder LCR-Pro­ dukten ist das vorgenannte Verfahren sowie die bekannte Mikrotiterplatte nachteilig. Aufgrund mangelnder Temperatur­ beständigkeit der Beschichtung ist es erforderlich, die Probe in einem unbeschichteten Behälter zu amplifizieren und danach in die Kavitäten der Mikrotiterplatte zu überführen. Weiter ist es erforderlich die Probenlösung zu entfernen und die Be­ schichtung anschließend zu waschen. Die Schritte des Überfüh­ rens, Entfernens und Waschens bergen ein Kontaminationsrisi­ ko. Sie sind zeit- und kostenaufwendig.Especially with regard to the detection of PCR or LCR-Pro products is the aforementioned method and the known Adverse microtiter plate. Due to lack of temperature Resistance of the coating requires the sample amplify in an uncoated container and afterwards  transfer into the cavities of the microtiter plate. Further it is necessary to remove the sample solution and the loading Wash the layer afterwards. The steps of the transfer Rens, removal and washing pose a risk of contamination knockout They are time and cost consuming.

Aufgabe der Erfindung ist es, die Nachteile nach dem Stand der Technik zu beseitigen. Insbesondere sollen eine Mikroti­ terplatte und ein Verfahren zum Nachweis von Biomolekülen an­ gegeben werden, mit denen ein einfacher und schneller Nach­ weis von PCR- oder LCR-Produkten möglich ist.The object of the invention is to overcome the disadvantages of the prior art of technology to eliminate. In particular, a microti terplatte and a method for the detection of biomolecules be given with which a simple and quick after of PCR or LCR products is possible.

Diese Aufgabe wird durch die Merkmale der Ansprüche 1 und 10 gelöst. Zweckmäßige Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus den Merkmalen der Ansprüche 2 bis 9 und 11 bis 25.This object is achieved by the features of claims 1 and 10 solved. Appropriate embodiments of the invention result from the features of claims 2 to 9 and 11 to 25.

Zur Lösung der Aufgabe weist die Beschichtung kovalent an die Kunststoffoberfläche gebundene Oligonukleotide auf. Eine sol­ che Beschichtung ist temperaturbeständig. Der Amplifizie­ rungsschritt einer PCR kann in den Kavitäten der Mikrotiter­ platte erfolgen. Das Überführen der bereits amplifizierten Probenlösung entfällt. Der Nachweis erfolgt unmittelbar unter Zuhilfenahme des kovalent ausgebildeten Oligonukleotids.To solve the problem, the coating covalently points to the Plastic surface bound oligonucleotides. A sol surface is temperature-resistant. The amplification A PCR step can be carried out in the microtiter wells plate made. Transferring the already amplified No sample solution. Evidence is provided immediately at With the help of the covalently formed oligonucleotide.

Die gebundenen Oligonukleotide können aus DNA, PNA, PTO oder Chimären davon bestehen, wobei vorteilhafterweise an die Oli­ gonukleotide fluorophore Moleküle oder Quencher gebunden sind oder im Laufe der Reaktion gebunden werden. Dadurch kann eine Hybridisierung der Probe mittels einer, an der Beschichtung beobachtbaren Fluoreszenzreaktion nachgewiesen werden.The bound oligonucleotides can be made from DNA, PNA, or PTO Chimeras consist of it, advantageously to the oli gonucleotides fluorophoric molecules or quencher are bound or be bound in the course of the reaction. This can cause a Hybridization of the sample using a, on the coating observable fluorescence reaction can be detected.

Zweckmäßigerweise erstreckt sich die Beschichtung nur über einen Abschnitt der Oberfläche innerhalb der Kavitäten. Eine an der Beschichtung erfolgende Fluoreszenzreaktion ist so be­ sonders einfach und schnell erkennbar.The coating expediently only extends over a section of the surface within the cavities. A  fluorescence reaction taking place on the coating is so be particularly easy and quick to recognize.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal kann der Kunststoff elektrisch leitfähig sein. Er ist vorzugsweise aus Polypropy­ len oder Polycarbonat hergestellt. Aufgrund der elektrischen Leitfähigkeit ist es möglich, die vorzugsweise 96 Kavitäten aufweisende Mikrotiterplatte zu polarisieren. In der Proben­ lösung enthaltende geladene Biomoleküle können so in Richtung der Beschichtung bewegt werden. Das beschleunigt die Nach­ weisreaktion.According to a further design feature, the plastic be electrically conductive. It is preferably made of polypropy len or polycarbonate. Because of the electrical Conductivity is possible, preferably 96 cavities polarizing microtiter plate. In rehearsals charged biomolecules containing solution can thus move in the direction the coating can be moved. That speeds up the night white reaction.

Nach einem weiteren Ausgestaltungsmerkmal kann jede Kavität eines Satzes von n Kavitäten mit einer unterschiedlichen Be­ schichtung eines Satzes von n unterschiedlichen spezifischen Beschichtungen vorgesehen sein. So kann beispielsweise eine 96 Kavitäten aufweisende Mikrotiterplatte mit 96 verschiede­ nen Beschichtungen versehen sein. Jede Kavität dient in die­ sem Fall einer anderen Nachweisreaktion. Es ist aber auch möglich, auf einer Mikrotiterplatte zwei Sätze von jeweils 48 Kavitäten mit jeweils 48 verschiedenen Beschichtungen vorzu­ sehen. Auf diese Weise kann jede Nachweisreaktion zur Erhö­ hung der Nachweissicherheit unter Verwendung einer einzigen Mikrotiterplatte zweifach durchgeführt werden oder eine Nega­ tivkontrolle mitgeführt wird. Die zweckmäßigerweise einstüc­ kig ausgebildete Mikrotiterplatte kann Perforationen aufwei­ sen, so daß sie in kleine Einheiten zerbrochen werden kann.According to a further design feature, each cavity can a set of n cavities with a different loading stratification of a set of n different specific ones Coatings may be provided. For example, a 96-well microtiter plate with 96 different NEN coatings are provided. Each cavity serves in the case of another detection reaction. It is also possible, two sets of 48 on a microtiter plate Cavities with 48 different coatings each see. In this way, any detection reaction can increase detection security using a single Microtiter plate can be performed twice or a nega active control is carried out. The expediently one piece The microtiter plate can have perforations so that it can be broken up into small units.

Zur Lösung der Aufgabe ist ferner vorgesehen, daß als Biomo­ leküle kovalent an die Kunststoffoberfläche gebundene Oligo­ nukleotide verwendet werden. Die Verwendung einer solchen Be­ schichtung ermöglicht die Amplifizierung des nachzuweisenden Biomoleküls in der Kavität. Es kann auf eine Überführung ei­ ner vorher amplifizierten Probenlösung verzichtet werden. Das vereinfacht und beschleunigt das Verfahren.To solve the problem it is also provided that as Biomo read oligo covalently bound to the plastic surface nucleotides are used. The use of such Be stratification enables the amplification of the detected Biomolecule in the cavity. There may be an overpass  ner previously amplified sample solution. The simplifies and speeds up the process.

Nach einem vorteilhaften Ausgestaltungsmerkmal sind an die Oligonukleotide fluorophore Moleküle oder Quencher gebunden. Der Probenlösung kann ein Primer zugesetzt sein, der mit ei­ nem fluorophoren Molekül markiert ist. Auch können der Pro­ benlösung Nukleotide zugesetzt werden, die mit einem fluoro­ phoren Molekül markiert sind. Eine Hybridisierung der nachzu­ weisenden Biomoleküle mit den Oligonukleotiden wird so vor­ teilhafterweise durch eine Fluoreszenzreaktion angezeigt.According to an advantageous design feature, the Oligonucleotides bound to fluorophoric molecules or quenchers. A primer can be added to the sample solution a fluorophoric molecule is marked. Even the pro Solution nucleotides can be added with a fluoro phosphoric molecule are marked. A hybridization of the So pointing biomolecules with the oligonucleotides partially indicated by a fluorescence reaction.

Zur Beschleunigung der Nachweisreaktion kann die Kunststoff­ oberfläche elektrisch so polarisiert werden, daß geladene nachzuweisende Biomoleküle in Richtung der Beschichtung ange­ zogen werden.The plastic can be used to accelerate the detection reaction surface are polarized electrically so that charged Biomolecules to be detected in the direction of the coating be drawn.

Die in der Kavität aufgenommene Probenlösung wird zweckmäßi­ gerweise wiederkehrend erhitzt und abgekühlt, so daß das nachzuweisende Biomolekül amplifiziert wird. Um dabei eine Verdampfung von Probenlösung zu vermeiden, werden die Kavitä­ ten mittels eines, vorzugsweise beheizbaren, Deckelelements verschlossen.The sample solution taken up in the cavity is expedient recurrently heated and cooled, so that the biomolecule to be detected is amplified. To do one To avoid evaporation of sample solution, the cavities ten by means of a, preferably heatable, cover element locked.

Insbesondere zur Durchführung des Verfahrens ist ein Kit mit einer erfindungsgemäßen Mikrotiterplatte und mindestens einem Primer vorgesehen. Der Kit kann ferner Nukleotide, Pufferbe­ standteile und Enzyme sowie eine Heiz-/Kühleinrichtung umfas­ sen. Zweckmäßigerweise liegen die Komponenten Primer, Nukleo­ tide, Pufferbestandteile und Enzyme in gefriergetrockneter Form vor. In diesem Fall kann die PCR oder LCR durch Zugabe von Wasser gestartet werden. Gleichfalls ist es möglich, daß die Komponenten Primer, Nukleotide, Pufferbestandteile und Enzyme in aus Kunststoff oder Wachs hergestellten Kapseln eingeschlossen sind. In diesem Fall kann die Reaktion nach Zugabe der Probe durch Temperaturerhöhung gestartet werden.A kit is included in particular for carrying out the method a microtiter plate according to the invention and at least one Primer provided. The kit can also nucleotides, Pufferbe components and enzymes as well as a heating / cooling device sen. The components are advantageously primer, nucleo tide, buffer components and enzymes in freeze-dried Form before. In this case the PCR or LCR can be added be started by water. It is also possible that the components primer, nucleotides, buffer components and  Enzymes in capsules made of plastic or wax are included. In this case, the reaction can follow Sample addition can be started by increasing the temperature.

Ausführungsbeispiele des erfindungsgemäßen Verfahrens werden anhand der Zeichnung näher erläutert. Hierin zeigen:Embodiments of the method according to the invention explained in more detail with reference to the drawing. Show here:

Fig. 1 eine schematische Ansicht einer an dem ersten Pri­ mer hybridisierten Probe, Fig. 1 is a schematic view of a, at the first Pri mer hybridized probe

Fig. 2 eine schematische Ansicht nach Fig. 1 mit einem er­ sten Gegenstrang, Fig. 2 is a schematic view of FIG. 1 with a he sten strand,

Fig. 3 eine schematische Ansicht gemäß Fig. 2 mit einem zweiten Gegenstrang, Fig. 3 is a schematic view of FIG. 2 with a second strand,

Fig. 4 eine schematische Ansicht gemäß Fig. 2 mit einem dritten Gegenstrang, wobei der erste Primer mit ei­ nem fluorophoren Molekül markiert ist, Fig. 4 is a schematic view of FIG. 2 with a third strand, wherein the first primer is labeled with NEM ei fluorophore molecule,

Fig. 5 die Synthese eines Strangs ausgehend von einem zweiten mit einem zweiten fluorophoren Molekül mar­ kierten Primer, Fig. 5 synthesis of a strand from a second to a second fluorophore molecule mar-labeled primer,

Fig. 6 die Anregung des zweiten fluorophoren Moleküls, Fig. 6, the excitation of the second fluorophore molecule,

Fig. 7 die Anregung des zweiten fluorophoren Moleküls ge­ mäß Fig. 6, wobei am ersten Primer ein erstes fluo­ rophores Molekül vorgesehen ist und FIG. 7 shows the excitation of the second fluorophoric molecule according to FIG. 6, a first fluorophoric molecule being provided on the first primer and

Fig. 8 die Anregung von an Nukleotiden gebundenen zweiten fluorophoren Molekülen. Fig. 8, the excitation of bound nucleotides second fluorophore molecules.

In Fig. 1 ist ein erster Primer P1 kovalent an eine Oberflä­ che M innerhalb der Kavität einer Mikrotiterplatte gebunden. Ein nachzuweisendes Biomolekül N bindet mit einem zum ersten Primer P1 korrespondierenden Sequenzabschnitt A1 an den er­ sten Primer P1. Unter Vermittlung einer Taq-Polymerase er­ folgt ausgehend vom ersten Primer P1 in Pfeilrichtung die Synthese eines Gegenstrangs G.In Fig. 1, a first primer P1 is covalently bound to a surface M within the cavity of a microtiter plate. A biomolecule N to be detected binds with a sequence section A1 corresponding to the first primer P1 to the first primer P1. With the intermediation of a Taq polymerase, starting from the first primer P1, the synthesis of a counter strand G follows in the direction of the arrow.

Bei der Synthese des Gegenstrangs G werden in der Probenlö­ sung befindliche Nukleotide eingebaut. Die Nukleotide können mit einem ersten fluorophoren Molekül F1 markiert sein. In diesem Fall reichen sich in der Nähe der Oberfläche M erste fluorophore Moleküle F1 an. Das ist in Fig. 2 gezeigt.In the synthesis of the counter strand G, nucleotides located in the sample solution are incorporated. The nucleotides can be labeled with a first fluorophoric molecule F1. In this case, first fluorophoric molecules F1 accumulate near the surface M. This is shown in Fig. 2.

Gemäß Fig. 3 kann eine erste Gruppe von Nukleotiden mit einem ersten fluorophoren Molekül F1 und eine zweite Gruppe von Nu­ kleotiden mit einem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert sein. Beim ersten fluorophoren Molekül F1 kann es sich um ei­ ne Donor-Gruppe beim zweiten fluorophoren Molekül F2 um eine Akzeptor-Gruppe handeln. Aufgrund von zwischen dem ersten fluorophoren Molekül F1 und dem zweiten fluorophoren Molekül F2 sich ausbildenden Wechselwirkungen kann es nach dem För­ ster-Effekt zu einer verstärkten Fluoreszenz durch strah­ lungslosen oder auch direkten Energieübergang am zweiten flu­ orophoren Molekül F2 kommen.According to FIG. 3, a first group of nucleotides can be labeled with a first fluorophoric molecule F1 and a second group of nucleotides with a second fluorophoric molecule F2. The first fluorophoric molecule F1 can be a donor group and the second fluorophoric molecule F2 can be an acceptor group. Because of interactions that develop between the first fluorophoric molecule F1 and the second fluorophoric molecule F2, the fluorescence or radiation energy transfer to the second fluorophoric molecule F2 can increase after the Förster effect.

Eine solche die Fluoreszenz verstärkende oder schwächende Wechselwirkung kann auch dadurch erzeugt werden, daß am er­ sten Primer P1 das erste fluorophore Molekül F1 vorgesehen ist und die Nukleotide mit dem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert sind. Durch Energieübergang kann es am zweiten fluorophoren Molekül F2 bei entsprechender Anregung zu einer Fluoreszenzreaktion kommen. Auch das ist schematisch in Fig. 4 gezeigt.Such a fluorescence-enhancing or weakening interaction can also be generated in that the first fluorophoric molecule F1 is provided on the first primer P1 and the nucleotides are labeled with the second fluorophoric molecule F2. Due to the energy transfer, a fluorescence reaction can occur at the second fluorophoric molecule F2 with appropriate excitation. This is also shown schematically in FIG. 4.

Fig. 5 zeigt die Situation nach einem ersten Amplifizierungs­ zyklus. Dabei wird ein Strang S ausgehend von einem zweiten Primer P2 in Pfeilrichtung synthetisiert. Der zweite Primer P2 ist mit dem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert. Bei einer Anregung des zweiten fluorophoren Moleküls F2 kommt es - wie in Fig. 6 gezeigt ist - zur Fluoreszenz. Fig. 5 shows the situation after a first amplification cycle. A strand S is synthesized from a second primer P2 in the direction of the arrow. The second primer P2 is labeled with the second fluorophoric molecule F2. When the second fluorophoric molecule F2 is excited, as shown in FIG. 6, fluorescence occurs.

Wie in Fig. 7 gezeigt ist, kann es zu einer Wechselwirkung mit einem am ersten Primer P1 befindlichen ersten fluoropho­ ren Molekül F1 und dem am zweiten Primer 2 gebundenen zweiten fluorophoren Molekül F2 kommen. Dabei kommt es zu einer Ver­ stärkung der Fluoreszenzreaktion oder zu einer Verschiebung des Fluoreszenzspektrums.As shown in FIG. 7, there may be an interaction with a first fluorophore molecule F1 located on the first primer P1 and the second fluorophore molecule F2 bound to the second primer 2 . This leads to an intensification of the fluorescence reaction or a shift in the fluorescence spectrum.

In Fig. 8 ist der zweite Primer P2 mit dem ersten fluoropho­ ren Molekül F1 markiert. Sowohl im Gegenstrang G als auch im Strang S sind Nukleotide eingebaut, welche mit dem zweiten fluorophoren Molekül F2 markiert sind. Durch Energieübergang vom ersten F1 auf das zweite fluorophore Molekül F2 wird am zweiten fluorophoren Molekül F2 eine verstärkte oder verän­ derte Fluoreszenzreaktion erzeugt. In Fig. 8, the second primer P2 is labeled with the first fluorophore molecule F1. Both in the opposite strand G and in strand S, nucleotides are incorporated which are labeled with the second fluorophoric molecule F2. An energy transfer from the first F1 to the second fluorophoric molecule F2 produces an enhanced or changed fluorescence reaction on the second fluorophoric molecule F2.

BezugszeichenlisteReference list

M Oberfläche der Kavität
P1 erster Primer
P2 zweiter Primer
A1 korrespondierender Abschnitt
N nachzuweisendes Molekül
F1 erstes fluorophores Molekül
F2 zweites fluorophores Molekül
G Gegenstrang
S Strang
M surface of the cavity
P1 first primer
P2 second primer
A1 corresponding section
N molecule to be detected
F1 first fluorophore molecule
F2 second fluorophore molecule
G counter strand
S strand

Claims (25)

1. Mikrotiterplatte mit einer Mehrzahl an Kavitäten, wobei die Mikrotiterplatte aus Kunststoff hergestellt und in­ nerhalb der Kavitäten eine aus Biomolekülen gebildete Be­ schichtung vorgesehen ist, dadurch gekennzeichnet, daß die Beschichtung kovalent an die Kunststoffoberfläche (M) gebundene Oligonukleotide (P1) aufweist.1. A microtiter plate with a plurality of cavities, the microtiter plate being made of plastic and a coating formed from biomolecules being provided within the cavities, characterized in that the coating has oligonucleotides (P1) covalently bonded to the plastic surface (M). 2. Mikrotiterplatte nach Anspruch 1, wobei die Oligonukleo­ tide (P1) aus DNA, PNA, PTO oder Chimären davon bestehen.2. A microtiter plate according to claim 1, wherein the oligonucleo tide (P1) consist of DNA, PNA, PTO or chimeras thereof. 3. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei an die Oligonukleotide (P1) fluorophore Moleküle (F1, F2) oder Quencher gebunden sind.3. microtiter plate according to one of the preceding claims, where on the oligonucleotides (P1) fluorophoric molecules (F1, F2) or quencher are bound. 4. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Beschichtung sich nur über einen Abschnitt der Kunststoffoberfläche (M) innerhalb der Kavitäten er­ streckt.4. Microtiter plate according to one of the preceding claims, the coating covering only a portion of the Plastic surface (M) inside the cavities stretches. 5. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Kunststoff elektrisch leitfähig ist.5. microtiter plate according to one of the preceding claims, the plastic being electrically conductive. 6. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Kunststoff aus Polypropylen oder Polycarbonat hergestellt ist.6. microtiter plate according to one of the preceding claims, the plastic made of polypropylene or polycarbonate is made. 7. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Mikrotiterplatte 96 Kavitäten aufweist.7. microtiter plate according to one of the preceding claims, the microtiter plate has 96 cavities. 8. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei jede Kavität eines Satzes von n Kavitäten mit einer Beschichtung eines Satzes von n unterschiedlichen spezi­ fischen Beschichtungen versehen ist, so daß bei Zugabe der Probenlösung in die n Kavitäten n unterschiedliche Nachweisreaktionen gleichzeitig durchführbar sind.8. microtiter plate according to one of the preceding claims, where each cavity of a set of n cavities with one Coating a set of n different spec fish coatings is provided so that when added  the sample solution into the n cavities n different Detection reactions can be carried out simultaneously. 9. Mikrotiterplatte nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei ein, vorzugsweise beheizbares, Deckelelement zum Verschließen der Kavitäten vorgesehen ist.9. microtiter plate according to one of the preceding claims, a, preferably heatable, cover element for Closing the cavities is provided. 10. Verfahren zum Nachweis von Biomolekülen, wobei eine das nachzuweisende Molekül enthaltende Probenlösung herge­ stellt und mit einer in einer Kavität einer aus Kunst­ stoff hergestellten Mikrotiterplatte vorgesehenen aus Biomolekülen gebildeten Beschichtung in Kontakt gebracht wird, dadurch gekennzeichnet, daß als Biomoleküle kova­ lent an die Kunststoffoberfläche (M) gebundene Oligonu­ kleotide (P1) verwendet werden.10. Method for the detection of biomolecules, one of which Sample solution containing the molecule to be detected poses and with one in a cavity one made of art fabricated microtiter plate provided Biomolecules formed coating brought into contact is characterized in that kova as biomolecules lent Oligonu bound to the plastic surface (M) kleotide (P1) can be used. 11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei die Oligonukleotide (P1) aus DNA, PNA, PTO oder Chimären davon gebildet sind.11. The method of claim 10, wherein the oligonucleotides (P1) are formed from DNA, PNA, PTO or chimeras thereof. 12. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 oder 11, wobei an die Oligonukleotide (P1) fluorophore Moleküle (F1, F2) oder Quencher gebunden sind.12. The method according to any one of claims 10 or 11, wherein the oligonucleotides (P1) fluorophoric molecules (F1, F2) or quencher are bound. 13. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 12, wobei der Probenlösung ein Primer (P2) zugesetzt wird, der mit ei­ nem fluorophoren Molekül (F1, F2) markiert ist.13. The method according to any one of claims 10 to 12, wherein the A sample primer (P2) is added to the sample solution a fluorophoric molecule (F1, F2) is marked. 14. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 13, wobei der Probenlösung Nukleotide zugesetzt werden, die mit einem fluorophoren Molekül (F1, F2) markiert sind.14. The method according to any one of claims 10 to 13, wherein the Nucleotides can be added to the sample solution using a fluorophoric molecule (F1, F2) are marked. 15. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 14, wobei eine Hybridisierung der nachzuweisenden Moleküle mit den Oli­ gonukleotiden (P1) durch eine Fluoreszenzreaktion ange­ zeigt wird. 15. The method according to any one of claims 10 to 14, wherein a Hybridization of the molecules to be detected with the oli gonucleotides (P1) by a fluorescence reaction shows.   16. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 15, wobei die Kunststoffoberfläche (M) elektrisch so polarisiert wird, daß geladene nachzuweisende Moleküle in Richtung der Be­ schichtung angezogen werden.16. The method according to any one of claims 10 to 15, wherein the Plastic surface (M) is electrically polarized so that charged molecules to be detected in the direction of the loading layered. 17. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 16, wobei die in der Kavität aufgenommene Probenlösung durch wiederkeh­ rend erhitzt und abgekühlt wird, so daß das nachzuweisen­ de Molekül amplifiziert wird.17. The method according to any one of claims 10 to 16, wherein the sample solution taken up in the cavity by return rend is heated and cooled so that it can be demonstrated de molecule is amplified. 18. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 17, wobei die Kavitäten mittels eines, vorzugsweise beheizbares, Decke­ lelements verschlossen werden.18. The method according to any one of claims 10 to 17, wherein the Cavities by means of a, preferably heatable, blanket l elements are closed. 19. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 18, wobei das nachzuweisende Molekül (N) in der Beschichtung angerei­ chert werden.19. The method according to any one of claims 10 to 18, wherein the Molecule (N) to be detected in the coating be saved. 20. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 19, wobei jede Kavität eines Satzes von n Kavitäten mit einer Beschich­ tung eines Satzes von n unterschiedlichen spezifischen Beschichtungen versehen ist, so daß bei Zugabe der Pro­ benlösung in die n Kavitäten n unterschiedliche Nachweis­ reaktionen gleichzeitig durchgeführt werden.20. The method according to any one of claims 10 to 19, wherein each Cavity of a set of n cavities with a coating a set of n different specific ones Coatings is provided so that when adding the Pro solution in the n cavities n different detection reactions are carried out simultaneously. 21. Kit mit einer Mikrotiterplatte nach einem der Ansprüche 1 bis 9 und mindestens einem Primer (P2)21. Kit with a microtiter plate according to one of claims 1 up to 9 and at least one primer (P2) 22. Kit nach Anspruch 21, umfassend ferner Nukleotide, Puf­ ferbestandteile und Enzyme.22. The kit of claim 21, further comprising nucleotides, puf ingredients and enzymes. 23. Kit nach Anspruch 21 oder 22, umfassend ferner eine Heiz-/Kühleinrichtung. 23. The kit of claim 21 or 22, further comprising one Heating / cooling device.   24. Kit nach einem der Ansprüche 22 bis 23, wobei die Kompo­ nenten Primer (P2), Nukleotide, Pufferbestandteile und Enzyme in gefriergetrockneter Form vorliegen.24. Kit according to one of claims 22 to 23, wherein the compo nent primers (P2), nucleotides, buffer components and Enzymes are in freeze-dried form. 25. Kit nach einem der Ansprüche 22 bis 24, wobei die Kompo­ nenten Primer (P2), Nukleotide, Pufferbestandteile und Enzyme in aus Kunststoff oder Wachs hergestellte Kapseln eingeschlossen sind.25. Kit according to any one of claims 22 to 24, wherein the compo nent primers (P2), nucleotides, buffer components and Enzymes in capsules made of plastic or wax are included.
DE19811732A 1998-03-18 1998-03-18 Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit Ceased DE19811732A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19811732A DE19811732A1 (en) 1998-03-18 1998-03-18 Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19811732A DE19811732A1 (en) 1998-03-18 1998-03-18 Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE19811732A1 true DE19811732A1 (en) 1999-09-30

Family

ID=7861308

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19811732A Ceased DE19811732A1 (en) 1998-03-18 1998-03-18 Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE19811732A1 (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10002666A1 (en) * 2000-01-21 2001-08-02 Greiner Bio One Gmbh Containers for the storage of biological material
WO2001059159A2 (en) * 2000-02-10 2001-08-16 Instastain Molecular biological kit apparatus and method
DE10018788A1 (en) * 2000-04-15 2001-10-25 Bruker Daltonik Gmbh Preparation of small protein samples for mass-spectroscopic analysis comprises enzymatic digestion of protein-containing gel pieces in vessels with lyophobic porous bottoms
DE19960076C2 (en) * 1999-12-13 2002-12-05 November Ag Molekulare Medizin Method and device for the detection and quantification of biomolecules

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE8806604U1 (en) * 1988-05-20 1988-12-15 Schulz, Peter, Dr.Med., 7140 Ludwigsburg, De
EP0336454A1 (en) * 1984-06-01 1989-10-11 Miles Inc. Nucleic acid hybridization assay
EP0420260A2 (en) * 1989-09-29 1991-04-03 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Biotin-labelled DNA by polymerase chain reaction and detection thereof
WO1993009250A1 (en) * 1991-11-01 1993-05-13 Adelaide Children's Hospital Solid phase amplification process
WO1993015228A1 (en) * 1992-01-29 1993-08-05 Hitachi Chemical Co., Ltd. Polynucleotide immobilized support
WO1993016194A1 (en) * 1992-02-05 1993-08-19 Diagen Institut Für Molekular-Biologische Diagnostik Gmbh Process for determining in vitro amplified nucleic acids
WO1995015970A1 (en) * 1993-12-06 1995-06-15 Molecular Tool, Inc. Method for the immobilization of nucleic acid molecules
US5545531A (en) * 1995-06-07 1996-08-13 Affymax Technologies N.V. Methods for making a device for concurrently processing multiple biological chip assays
WO1997010056A2 (en) * 1995-09-12 1997-03-20 Becton Dickinson And Company Device and method for dna amplification and assay

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0336454A1 (en) * 1984-06-01 1989-10-11 Miles Inc. Nucleic acid hybridization assay
EP0339686A1 (en) * 1984-06-01 1989-11-02 Miles Inc. Nucleic acid hybridization assay
DE8806604U1 (en) * 1988-05-20 1988-12-15 Schulz, Peter, Dr.Med., 7140 Ludwigsburg, De
EP0420260A2 (en) * 1989-09-29 1991-04-03 F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft Biotin-labelled DNA by polymerase chain reaction and detection thereof
US5232829A (en) * 1989-09-29 1993-08-03 Hoffmann-La Roche Inc. Detection of chlamydia trachomatis by polymerase chain reaction using biotin labelled lina primers and capture probes
WO1993009250A1 (en) * 1991-11-01 1993-05-13 Adelaide Children's Hospital Solid phase amplification process
WO1993015228A1 (en) * 1992-01-29 1993-08-05 Hitachi Chemical Co., Ltd. Polynucleotide immobilized support
WO1993016194A1 (en) * 1992-02-05 1993-08-19 Diagen Institut Für Molekular-Biologische Diagnostik Gmbh Process for determining in vitro amplified nucleic acids
WO1995015970A1 (en) * 1993-12-06 1995-06-15 Molecular Tool, Inc. Method for the immobilization of nucleic acid molecules
US5545531A (en) * 1995-06-07 1996-08-13 Affymax Technologies N.V. Methods for making a device for concurrently processing multiple biological chip assays
WO1997010056A2 (en) * 1995-09-12 1997-03-20 Becton Dickinson And Company Device and method for dna amplification and assay

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Nature, 364, 1993, S. 555-556 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19960076C2 (en) * 1999-12-13 2002-12-05 November Ag Molekulare Medizin Method and device for the detection and quantification of biomolecules
DE10002666A1 (en) * 2000-01-21 2001-08-02 Greiner Bio One Gmbh Containers for the storage of biological material
WO2001059159A2 (en) * 2000-02-10 2001-08-16 Instastain Molecular biological kit apparatus and method
WO2001059159A3 (en) * 2000-02-10 2002-04-18 Instastain Molecular biological kit apparatus and method
DE10018788A1 (en) * 2000-04-15 2001-10-25 Bruker Daltonik Gmbh Preparation of small protein samples for mass-spectroscopic analysis comprises enzymatic digestion of protein-containing gel pieces in vessels with lyophobic porous bottoms
DE10018788B4 (en) * 2000-04-15 2004-02-26 Bruker Daltonik Gmbh Processing proteins from gels for mass spectrometric analysis

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE60125312T2 (en) microarray
DE60127939T2 (en) Nucleic acid detection method with universal priming
DE60012511T2 (en) MICROFLUIDIC SYSTEMS WITH MICROBALL MICRICATES FOR THE DETECTION OF TARGET ANALYSTS
DE69927113T2 (en) Method for gene duplication
EP0892070B1 (en) Integrated process and system for the amplification and detection of nucleic acids
WO2017216270A1 (en) Single molecule detection or quantification using dna nanotechnology
WO2013113889A1 (en) Multiplexed digital pcr
EP2167685B1 (en) Method and probe/primer system for the "real time" detection of a nucleic acid target
DE69839235T2 (en) Fluorometric method for monitoring and detecting nucleic acid amplification
DE19811731A1 (en) Detecting nucleic acid by amplification, with use of third, immobilized primer
EP1565569A2 (en) Method for the detection of mutations
EP1456417A2 (en) Method for determining nucleic acid analytes
EP1246945B1 (en) Method for identifying a mark applied on a solid body
EP2035143B1 (en) Method for analysing amplified nucleic acids
DE19811732A1 (en) Plastic micro-titration plate with biomolecular coating inside cavities, forming part of biomolecule detection kit
EP1064409B1 (en) Method and device for identifying a tag
EP1453975B1 (en) Method for detecting hybridization events in nucleic acids
DE19811729A1 (en) Detecting nucleic acid using interaction between fluorophores, with increased sensitivity and decreased risk of contamination
DE102006005287B4 (en) Method for the detection of target nucleic acids
WO1997021832A1 (en) Process for determination of low concentration of nucleic acid molecules
DE602004004758T2 (en) Personalized microarrays and their use for the detection of target molecules
DE10327756B4 (en) Method for real-time quantification of a nucleic acid
WO2003066884A2 (en) Method for labeling articles
DE10159904A1 (en) Oligonucleotide arrangement, method for nucleotide detection and device therefor
DE10207918A1 (en) Method for detecting nucleic acid mutations, useful e.g. for diagnosis and HLA typing, based on the force required to separate matched and mismatched hybrids

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8131 Rejection