DE10115590A1 - Scanmikroskop - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung offenbart ein Scanmikroskop (1) mit einem Laser (2), der einen Lichtstrahl einer ersten Wellenlänge (5, 43, 53) emittiert und der auf ein optisches Element (9) gerichtet ist, das die Wellenlänge des Lichtstrahles zumindest zum Teil verändert. Es sind Mittel zur Unterdrückung (16) des Lichtes der ersten Wellenlänge in dem in der Wellenlänge veränderten Lichtstrahl (5, 47, 57) vorgesehen.
Description
Die Erfindung betrifft ein Scanmikroskop mit einem Laser, der einen
Lichtstrahl einer ersten Wellenlänge emittiert, der auf ein optisches Element
gerichtet ist, das die Wellenlänge des Lichtstrahles zumindest zum Teil
verändert.
In der Scanmikroskopie wird eine Probe mit einem Lichtstrahl abgerastert.
Hierzu werden oft Laser als Lichtquelle eingesetzt. Aus der EP 0 495 930:
"Konfokales Mikroskopsystem für Mehrfarbenfluoreszenz" ist beispielsweise
eine Anordnung mit einem einzelnen, mehrere Laserlinien emittierenden Laser
bekannt. Derzeit werden hierfür meist Mischgaslaser, insbesondere ArKr-
Laser, eingesetzt.
Als Probe werden beispielsweise mit Fluoreszenzfarbstoffen präparierte,
biologische Gewebe oder Schnitte untersucht. Im Bereich der
Materialuntersuchung wird oft das von der Probe reflektierte Beleuchtungslicht
detektiert.
Auch Festkörperlaser und Farbstofflaser sowie Faserlaser und Optisch-
Parametrische-Oszillatoren (OPO), denen ein Pumplaser vorgeordnet ist,
werden verwendet.
Aus der Offenlegungsschrift DE 198 53 669 A1 ist eine Ultrakurzpulsquelle mit
steuerbarer Mehrfachwellenlängenausgabe offenbart, die insbesondere in
einem Multiphotonenmikroskop Anwendung findet. Das System weist einen
Ultrakurzimpulslaser zur Erzeugung ultrakurzer, optischer Impulse einer festen
Wellenlänge und zumindest einen Wellenlängenumwandlungskanal auf.
Aus der Patentschrift US 6,097,870 ist eine Anordnung zur Generierung eines
Breitbandspektrums im sichtbaren Spektralbereich bekannt. Die Anordnung
basiert auf einer mikrostrukturierten Faser, in die das Licht eines Pumplasers
eingekoppelt wird. Die Wellenlänge des Pumplichtes wird in der
mikrostrukturierten Faser derart verändert, dass das resultierende Spektrum
sowohl Wellenlängen oberhalb-, als auch Wellenlängen unterhalb der
Wellenlänge des Pumplichtes aufweist.
Als mikrostrukturiertes Material findet auch sogenanntes Photonic-band-gap-Material
oder "photon crystal fibres", "holey fibers" oder "microstructured fibers"
Verwendung. Es sind auch Ausgestaltungen als sog. "Hollow fiber" bekannt.
Festkörperlaser, wie beispielsweise die häufig in der Scanmikroskopie
eingesetzten Ti:Saphir-Laser, weisen meist einen gefalteten Resonator in x-
oder z-Geometrie auf, der aus zwei Endspiegeln und zwei Faltspiegeln
gebildet ist. Das Licht eines Pumplasers wird hierbei durch einen der
Faltspiegel, die für Licht der Wellenlänge des Pumplichtes transparent sind,
longitudinal in der Resonator eingekoppelt. Dieses konvertiert im optisch
aktiven Medium (im Beispiel Ti:Saphir) zu einer anderen Wellenlänge und
verlässt den Resonator als Ausgangslicht durch einen der Endspiegel, der für
das Ausgangslicht teildurchlässig ausgebildet ist. Da die Resonatorspiegel für
die Wellenlänge des Pumplichtes nicht vollständig transparent sind, enthält
das Ausgangslicht zu kleinen Bruchteilen noch Licht der Wellenlänge des
Pumplichtes. Dies ist ganz besonders in der Mehrfarbfluoreszenzmikroskopie
störend, da die Probe nicht ausschließlich mit Licht der gewünschten
Wellenlänge, sondern auch mit Licht der Wellenlänge des Pumplichtes
beleuchtet und angeregt wird. Dies verursacht unerwünschtes
Fluoreszenzleuchten, Artefakte und führt letztlich, da auch Anteile des
Pumplichtes durch Reflexion und Streuung zum Detektor gelangen, zu
falschen Untersuchungsergebnissen.
Alle genannten Anordnungen zur Wellenlängenveränderung weisen diesen
Nachteil auf.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Scanmikroskop zu schaffen, das
die aufgezeigten Probleme löst.
Die objektive Aufgabe wird durch eine Anordnung gelöst, die die Merkmale
des kennzeichnenden Teils des Patentanspruchs 1 beinhaltet.
Die Erfindung hat den Vorteil, dass die unerwünschte Beleuchtung der Probe
mit Licht der ersten Wellenlänge vermieden ist.
In einer einfachen Ausgestaltung ist zur Unterdrückung des Lichtes der ersten
Wellenlänge ein Filter vorgesehen. Dieser ist vorzugsweise als dielektrischer
Kantenfilter oder als Farbglasfilter ausgebildet. Insbesondere bei der
Verwendung von mikrostrukturiertem Material, wie Photonic-Band-Gap-
Material, zur Veränderung der Wellenlänge in der Art, dass ein breites
Spektrum entsteht, ist es von Vorteil, den Filter, beispielsweise durch
entsprechende Beschichtung, derart auszugestalten, dass die erste
Wellenlänge nicht vollständig unterdrückt wird, sondern innerhalb des in der
Wellenfänge veränderten Lichtstrahles dieselbe Leistung aufweist, wie die
übrigen Komponenten gleicher spektraler Breite.
Das Mittel zur Unterdrückung des Lichtes der ersten Wellenlänge beinhaltet in
einer anderen Ausgestaltungsform ein Prisma oder ein Gitter zum räumlich
spektralen Auffächern, dem eine Blendenanordnung nachgeschaltet ist, die
nur Licht der gewünschten Beleuchtungswellenlänge passieren lässt und
Licht, das die erste Wellenlänge aufweist, blockiert.
Das Mittel zur Unterdrückung ist an beliebigen Stellen innerhalb des
Strahlenganges des Scanmikroskops anbringbar. Es ist von besonderem
Vorteil, die Mittel zur Unterdrückung direkt hinter dem optischen Element
anzuordnen, um eine Aufstreuung und Reflexion der Anteile des Lichtes der
ersten Wellenlänge an anderen optischen Bauteilen zu vermeiden, da diese
hierdurch zum Detektor gelangen können.
Das optische Element ist in einer bevorzugten Ausgestaltung des
Scanmikroskops aus einer Vielzahl von mikrooptischen Strukturelementen
aufgebaut, die zumindest zwei unterschiedliche optische Dichten aufweisen.
Ganz besonders bevorzugt ist eine Ausgestaltung, bei der das optische
Element einen ersten Bereich und einen zweiten Bereich beinhaltet, wobei der
erste Bereich eine homogene Struktur aufweist und in dem zweiten Bereich
eine mikroskopische Struktur aus mikrooptischen Strukturelementen gebildet
ist. Von Vorteil ist es außerdem, wenn der erste Bereich den zweiten Bereich
umschließt. Die mikrooptischen Strukturelemente sind vorzugsweise Kanülen,
Stege, Waben, Röhren oder Hohlräume.
Das optische Element besteht in einer anderen Ausgestaltung aus
nebeneinander angeordnetem Glas- oder Kunststoffmaterial und Hohlräumen
und ist als Lichtleitfaser ausgestaltet.
Eine ganz besonders bevorzugte und einfach zu realisierende
Ausführungsvariante beinhaltet als optisches Element eine herkömmliche
Lichtleitfaser mit einem Faserkern, die zumindest entlang eines Teilstücks
eine Verjüngung aufweist. Lichtleitfasern dieser Art sind als sog. "tapered
fibers" bekannt. Vorzugsweise ist die Lichtleitfaser insgesamt 1 m lang und
weist eine Verjüngung auf einer Länge von 30 mm bis 90 mm auf. Der
Durchmesser der Faser beträgt in einer bevorzugten Ausgestaltung 150 µm
außerhalb des Bereichs der Verjüngung und der des Faserkerns in diesem
Bereich ca. 8 µm. Im Bereich der Verjüngung ist der Durchmesser der Faser
auf ca. 2 µm reduziert. Der Faserkerndurchmesser liegt entsprechend im
Nanometerbereich.
Das optische Element ist in einer anderen Ausführungsform ein weiterer
Laser. Dieser kann als Festkörper-, Gas- oder Farbstofflaser oder als Optisch-
Parametrischer-Oszillator (OPO) ausgeführt sein.
In einer besonderen Ausführungsvariante beinhaltet das optische Element
einen Kristall zur Frequenzvervielfachung, wie zum Beispiel KDP-Kristalle
oder LBO-Kristalle.
Eine weitere Ausgestaltungsform beinhaltet ein weiteres, optisches Element,
das dem optischen Element nachgeordnet ist und das die Wellenlänge des in
der Wellenlänge veränderten Lichtstrahles erneut verändert. Bei dieser
Ausführungsform ist es von besonderem Vorteil, sowohl das Licht der
ersten Wellenlänge, als auch das primär in der Wellenlänge veränderte Licht
zu unterdrücken. Im Konkreten beinhaltet eine solche Ausgestaltungsform
beispielsweise eine Hintereinanderanordnung von einem Argon-Ionen-Laser,
einem Farbstofflaser und einem Kristall zur Frequenzverdopplung. Ganz
besonders vorteilhaft ist eine Hintereinanderschaltung von einem Argon-
Ionenlaser, einem Ti:Saphir-Laser und einer als Lichtleitfaser ausgestalteten,
mikrooptischen Struktur aus Photonic-Band-Gap-Material.
Das Scanmikroskop kann als Konfokalmikroskop ausgestaltet sein.
In der Zeichnung ist der Erfindungsgegenstand schematisch dargestellt und
wird anhand der Figuren nachfolgend beschrieben. Dabei zeigen:
Fig. 1 ein erfindungsgemäßes, konfokales Scanmikroskop,
Fig. 2 einen Teil des Beleuchtungsstrahlenganges eines
Scanmikroskops,
Fig. 3 einen Teil des Beleuchtungsstrahlenganges eines
anderen Scanmikroskops und
Fig. 4 einen Teil des Beleuchtungsstrahlenganges eines
weiteren Scanmikroskops,
Fig. 5 eine Ausführungsform der Lichtleitfaser aus Photonic-Band-
Gap-Material.
Fig. 1 zeigt ein konfokales Scanmikroskop 1, das einen Laser 2 zur
Erzeugung eines Lichtstrahles 5 einer ersten Wellenlänge von 800 nm
beinhaltet. Der Laser ist als modengekoppelter Titan-Saphir-Laser 3
ausgeführt. Der Lichtstrahl 5 wird mit einer Einkoppeloptik 7 in das Ende eines
optischen Elements 9 zur Wellenlängenveränderung fokussiert, das als
Lichtleitfaser aus Photonic-Band-Gap-Material 11 ausgebildet ist. Zum
Kollimieren des aus der Lichtleitfaser aus Photonic-Band-Gap-Material 11
austretenden, in der Wellenlänge veränderten Lichtstrahles 15 ist eine
Auskoppeloptik 13 vorgesehen. Das Spektrum des in der Wellenlänge
veränderten Lichtstrahles ist über den Wellenlängenbereich von 300 nm bis
1600 nm nahezu kontinuierlich, wobei die Lichtleistung über das gesamte
Spektrum weitgehend konstant ist; lediglich im Bereich der ersten Wellenlänge
von 800 nm ist eine drastische Leistungsüberhöhung zu verzeichnen. Der in
der Wellenlänge veränderte Lichtstrahl 15 durchläuft als Mittel zur
Unterdrückung 16 einen dielektrischen Filter 17, der in dem in der
Wellenlänge veränderten Lichtstrahl 15 die Leistung des Lichtanteiles im
Bereich der ersten Wellenlänge auf das Niveau der übrigen Wellenlängen des
in der Wellenlänge veränderten Lichtstrahles reduziert. Anschließend wird der
in der Wellenlänge veränderte Lichtstrahl mit der Optik 19 auf eine
Beleuchtungsblende 21 fokussiert und gelangt über den Hauptstrahlteiler 23
zum Scanspiegel 25, der den in der Wellenlänge veränderten Lichtstrahl 15
durch die Scanoptik 27, die Tubusoptik 29 und das Objektiv 31 hindurch über
die Probe 33 führt. Das von der Probe 33 ausgehende Detektionslicht 35, das
in der Zeichnung gestrichelt dargestellt ist, gelangt durch das Objektiv 31, die
Tubusoptik 29 und die Scanoptik 27 hindurch zurück zum Scanspiegel 25 und
dann zum Hauptstrahlteiler 23, passiert diesen und wird nach Durchlaufen der
Detektionsblende 37 mit dem Detektor 39, der als Photomultiplier ausgeführt
ist, detektiert.
Fig. 2 zeigt den Teil des Beleuchtungsstrahlenganges eines Scanmikroskops
bis zum Hauptstrahlteiler 23. In diesem Ausführungsbeispiel erzeugt ein Laser
2, der als Argon-Ionen-Laser 41 ausgestaltet ist, einen Lichtstrahl 43 einer
ersten Wellenlänge von 514 nm, der auf einen Titan-Saphir-Laser 45, der als
optisches Element 9 zur Wellenlängenveränderung dient, gerichtet ist. Der
vom Titan-Saphir-Laser 45 ausgehende, in der Wellenlänge veränderte
Lichtstrahl 47 weist eine Wellenlänge von ca. 830 nm auf und trifft
nachfolgend auf das Mittel zur Unterdrückung 16 der ersten Wellenlänge, das
als Farbfilter 49 ausgeführt ist und die Anteile der ersten Wellenlänge nahezu
gänzlich herausfiltert, so dass der in der Wellenlänge veränderte Lichtstrahl im
Wesentlichen nur aus Licht von 830 nm Wellenlänge besteht.
Fig. 3 zeigt den Teil des Beleuchtungsstrahlenganges eines weiteren
Scanmikroskops bis zum Hauptstrahlteiler 23. In diesem Ausführungsbeispiel
erzeugt ein Laser 2, der als Nd-YAG-Laser 51 ausgestaltet ist, einen
Lichtstrahl 53 einer ersten Wellenlänge von 1064 nm, der auf einen, der als
optisches Element 9 zur Wellenlängenveränderung dient, gerichtet ist. Der
vom Optisch-Parametrischen-Oszillator 55 ausgehende, in der Wellenlänge
veränderte Lichtstrahl 57, beinhaltet neben dem Licht der gewünschten
Signal-Wellenlänge, Licht der Idler-Wellenlänge und Licht der ersten
Wellenlänge; er wird mit Hilfe eines Prismas 59 als Mittel zur räumlich
spektralen Aufspaltung 60 aufgefächert und trifft anschließend auf eine
Blendenanordnung 61, deren Blendenbacken 63, 65 derart positioniert sind,
dass das Licht der Idler-Wellenlänge und Licht der ersten Wellenlänge
blockiert wird, so dass der die Blendenanordnung 61 passierende Lichtstrahl
im Wesentlichen nur Licht der Signalwellenlänge beinhaltet.
Fig. 4 zeigt den Teil des Beleuchtungsstrahlenganges eines anderen
Scanmikroskops bis zum Hauptstrahlteiler 23, der in weiten Teilen dem in Fig.
3 gezeigten Aufbau entspricht. Als Mittel zur räumlich spektralen Aufspaltung
60 ist hier jedoch ein Gitter 67 eingesetzt.
Fig. 5 zeigt eine Ausführungsform der Lichtleitfaser aus Photonic-Band-Gap-
Material, die eine besondere wabenförmige Mikrostruktur 69 aufweist. Die
gezeigte Wabenstruktur ist für die Generierung von breitbandigem Licht
besonders geeignet. Der Durchmesser der Glasinnenkanüle 71 beträgt ca. 1,9 µm.
Die innere Kanüle 71 ist von Glasstegen 73 umgeben. Die Glasstege 73
formen wabenförmige Hohlräume 75. Diese mikrooptischen Strukturelemente
bilden gemeinsam einen zweiten Bereich 77, der von einem ersten Bereich
79, der als Glasmantel ausgeführt ist, umgeben ist.
Die Erfindung wurde in Bezug auf eine besondere Ausführungsform
beschrieben. Es ist jedoch selbstverständlich, dass Änderungen und
Abwandlungen durchgeführt werden können, ohne dabei den Schutzbereich
der nachstehenden Ansprüche zu verlassen.
1
Scanmikroskop
2
Laser
3
Titan-Saphir-Laser
5
Lichtstrahl
7
Einkoppeloptik
9
optisches Element
11
Lichtleitfaser aus Photonic-Band-Gap-Material
13
Auskoppeloptik
15
in der Wellenlänge veränderter Lichtstrahl
16
Mittel zur Unterdrückung
17
dielektrischer Filter
19
Optik
21
Beleuchtungsblende
23
Hauptstrahlteiler
25
Scanspiegel
27
Scanoptik
29
Tubusoptik
31
Objektiv
33
Probe
35
Detektionslicht
37
Detektionsblende
39
Detektor
41
Argon-Ionen-Laser
43
Lichtstrahl
45
Titan-Saphir-Laser
47
in der Wellenlänge veränderter Lichtstrahl
49
Farbfilter
51
Nd-YAG-Laser
53
Lichtstrahl einer ersten Wellenlänge
55
Optisch-Parametrischer Oszillator
57
in der Wellenlänge veränderter Lichtstrahl
59
Prisma
60
Mittel zur räumlich-spektralen Aufspaltung
61
Blendenanordnung
63
Blende
65
Blende
67
Gitter
69
Mikrostruktur
71
Kanüle
73
Steg
75
Hohlraum
77
zweiter Bereich
79
erster Bereich
Claims (18)
1. Scanmikroskop (1) mit einem Laser (2), der einen
Lichtstrahl einer ersten Wellenlänge (5, 43, 53) emittiert, der auf ein optisches
Element (9) gerichtet ist, das die Wellenlänge des Lichtstrahles zumindest
zum Teil verändert, dadurch gekennzeichnet, dass Mittel zur Unterdrückung
(16) des Lichtes der ersten Wellenlänge in dem in der Wellenlänge
veränderten Lichtstrahl (15, 47, 57) vorgesehen sind.
2. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das optische Element (9) aus einer Vielzahl von
mikrooptischen Strukturelementen aufgebaut ist, die zumindest zwei
unterschiedliche, optische Dichten aufweisen.
3. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1 oder 2, dadurch
gekennzeichnet, dass das optische Element (9) einen ersten Bereich (79) und
einen zweiten Bereich (77) beinhaltet, wobei der erste Bereich (79) eine
homogene Struktur aufweist und in dem zweiten Bereich (77) eine
Mikrostruktur (69) aus mikrooptischen Strukturelementen gebildet ist.
4. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 3, dadurch
gekennzeichnet, dass der erste Bereich (79) den zweiten Bereich (77)
umschließt.
5. Scanmikroskop (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 4,
dadurch gekennzeichnet, dass das optische Element (9) aus nebeneinander
angeordnetem Glas- oder Kunststoffmaterial und Hohlräumen (75) besteht.
6. Scanmikroskop (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 4,
dadurch gekennzeichnet, dass die mikrooptischen Strukturelemente Kanülen
(71), Stege (73), Waben, Röhren oder Hohlräume (75) sind.
7. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das optische Element (9) aus Photonic-Band-Gap-
Material besteht.
8. Scanmikroskop (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 7,
dadurch gekennzeichnet, dass das optische Element als Lichtleitfaser (11)
ausgestaltet ist.
9. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das optische Element (9) ein Laser (3, 45) ist.
10. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das optische Element ein Optisch-Parametrischer Oszillator
(55) ist.
11. Scanmikroskop (1), nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das optische Element eine Kristallstruktur zur
Frequenzvervielfachung beinhaltet.
12. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass dem optischen Element mindestens ein weiteres,
optisches Element nachgeordnet ist, das die Wellenlänge des in der
Wellenlänge veränderten Lichtstrahles verändert.
13. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das Mittel zur Unterdrückung (16) ein Filter ist.
14. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 13, dadurch
gekennzeichnet, dass das Mittel zur Unterdrückung (16) ein dielektrischer Filter
(17) ist.
15. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, dass das Mittel zur Unterdrückung (16) ein Mittel zur räumlich
spektralen Aufspaltung (60) und mindestens eine Blende (63, 65) beinhaltet.
16. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 15, dadurch
gekennzeichnet, dass das Mittel zur räumlich spektralen Aufspaltung (60) ein
Prisma (59) ist.
17. Scanmikroskop (1) nach Anspruch 15, dadurch
gekennzeichnet, dass das Mittel zur räumlich spektralen Aufspaltung (60) ein
Gitter (67) ist.
18. Scanmikroskop (1) nach einem der vorherigen
Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Scanmikroskop (1) ein
Konfokalmikroskop ist.
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