Search Images Maps Play YouTube News Gmail Drive More »
Sign in
Screen reader users: click this link for accessible mode. Accessible mode has the same essential features but works better with your reader.

Patents

  1. Advanced Patent Search
Publication numberDE10108680 A1
Publication typeApplication
Application numberDE2001108680
Publication date26 Sep 2002
Filing date23 Feb 2001
Priority date23 Feb 2001
Publication number01108680, 2001108680, DE 10108680 A1, DE 10108680A1, DE-A1-10108680, DE01108680, DE10108680 A1, DE10108680A1, DE2001108680
InventorsWilhelmina A Kaptein, Reinhard Renneberg
ApplicantBiognostic Ag
Export CitationBiBTeX, EndNote, RefMan
External Links: DPMA, Espacenet
Test strips for the assay of biological materials, for clinical diagnosis etc. carry affinity molecules and can take or support a flow to give time-related reactions
DE 10108680 A1
Abstract
Assay system (I) comprising at least two test strips which are of flowable or flow supporting materials, is new. In (I) the test strips have either a common start point, or separate start points to take up one or more samples. The test strips have identical or different affinity molecules in increasing, decreasing or the same concentrations. The strips are preferred in the form of a barcode array in bands, points, point sequences or other geometric shapes. The end points of the lateral reaction flows can be in a direct relationship. The affinity molecules are A and G proteins or lectine or enzymes, receptors, ligands, single- and double-strand DNA or RNA or their fragments.
Claims(32)  translated from German
1. Universeller Assay zur Untersuchung von vorzugsweise biologischen Materialien, bestehend aus mindestens 2 Teststreifen aus fließfähigen oder flussunterstützendem Material, die 1. Universal assay for the analysis of biological materials, preferably consisting of at least two test strip of flowable material or flussunterstützendem that
entweder einen gemeinsamen Startpunkt oder getrennte Startpunkte zur Aufnahme von einer oder mehreren Proben haben, either have a common starting point or separate starting points for receiving one or more samples
mit gleichen oder unterschiedlichen Affinitätsmolekülen in aufsteigender, absteigender oder gleicher Konzentration präpariert sind, are prepared with the same or different affinity molecules in ascending, descending or the same concentration,
bevorzugt in Form eines strichcodeähnlichen-Arrays in Form von Strichen, Punkten, Punktfolgen oder anderen geometrischen Formen und so angeordnet sind, daß vorzugsweise die Endpunkte der in lateralem Fluß auf den Teststreifen verlaufenden Reaktionen in eine direkte Beziehung gesetzt werden können. preferably in the form of a barcode-like array in the form of dashes, dots, dot sequences or other geometric shapes and are arranged so that, preferably, the end points in the lateral flow test strip extending to the reactions can be set in a direct relationship.
2. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er aus 2 Teststreifen besteht. 2. Universal assay according to claim 1, characterized in that it consists of two test strips.
3. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er aus 3 oder mehr Teststreifen besteht. 3. Universal assay according to claim 1, characterized in that it consists of three or more test strips.
4. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Teststreifen aus Cellulose oder modifizierter Cellulose bestehen. 4. Universal assay according to claim 1, characterized in that the test strips are made from cellulose or modified cellulose.
5. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die bevorzugten Materialien für die Teststreifen Glasfiber, Nylon, andere Flüssigkeitsträger, wie Papier, oder streifenähnliche Strukturen aus Glas, Silicon, Plastik, Metall mit eingeätzten oder eingebrachten Kanälen oder poröse Materialien sind. 5. Universal assay according to claim 1, characterized in that the preferred materials for the test strips of glass fiber, nylon, another liquid carrier, such as paper, or strip-like structures made of glass, silicone, plastic, metal having etched or introduced channels or porous materials.
6. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Teststreifen einen gemeinsamen Startpunkt zur Aufnahme von Proben haben. 6. Universal assay according to claim 1, characterized in that the test strips have a common starting point for receiving samples.
7. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Teststreifen einen getrennten Startpunkt zur Aufnahme verschiedener Probe haben. 7. Universal assay according to claim 1, characterized in that the test strips have a separate starting point for accommodating various sample.
8. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Teststreifen mit gleichen Affinitätsmolekülen in aufsteigender, absteigender oder gleicher Konzentration präpariert sind. 8. Universal assay according to claim 1, characterized in that the test strips are prepared with the same affinity molecules in ascending, descending or the same concentration.
9. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Teststreifen mit unterschiedlichen Affinitätsmolekülen in aufsteigender, absteigender oder gleicher Konzentration präpariert sind. 9. Universal assay according to claim 1, characterized in that the test strips are prepared with different affinity molecules in ascending, descending or the same concentration.
10. Universeller Assay nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der strichcodeähnliche Array auf dem Streifenchip mindestens 2 Linien, Punkte, Punktfolgen oder andere geometrische Figuren oder Flächen unterschiedlicher Größe enthält, die durch Affinitätsmoleküle gebildet werden. 10. Universal assay according to claim 1, characterized in that the barcode-like array contains on the strip chip least 2 lines, points, point sequences or other geometrical figures or faces of different sizes, which are formed by affinity molecules.
11. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß der strichcodeähnliche Array auf dem Streifenchip 3 bis 200 Linien, Punkte, Punktfolgen oder andere geometrische Figuren oder Flächen unterschiedlicher Größe enthält. 11. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the barcode-like array on the strip chip 3 to 200 lines, points, point sequences or other geometric shapes or areas of different size contains.
12. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Linien, Punkte, Punktfolgen oder andere geometrische Figuren oder Flächen unterschiedlicher Größe des strichcodeähnlichen Arrays in gleichen Abständen angeordnet sind. 12. Universal assay according to claim 1 or 10, characterized in that the lines, points, point sequences or other geometric shapes or areas of different size of the barcode-like arrays are arranged at equal intervals.
13. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Linien oder anderen Figuren oder Flächen unterschiedlicher Größe des strichcodeähnlichen Arrays in unterschiedlichen Abständen angeordnet sind. 13. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the lines or other figures, or areas of different size of the barcode-like arrays are disposed at different distances.
14. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration der Affinitätsmoleküle per Linie, Punkt, Punktfolge oder anderer geometrischer Figur oder Fläche gleich ist. 14. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the concentration of the affinity molecules by line, point, point sequence or other geometric figure or surface is the same.
15. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration der Affinitätsmoleküle per Linie, Punkt, Punktfolge oder anderer geometrischer Figur oder Fläche unterschiedlich ist. 15. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the concentration of the affinity molecules by line, point, point sequence or other geometric figure or surface is different.
16. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle in allen Linien, Punkten, Punktfolgen oder anderen geometrischen Figuren oder Flächen die gleichen sind. 16. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the affinity molecules are the same in all the lines, points, point sequences, or other geometrical figures or surfaces.
17. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle in verschiedenen Linien, Punkte, Punktfolgen oder andere geometrische Figuren oder Flächen unterschiedlich oder gemischt kombiniert sind. 17. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the affinity molecules are combined in different ways, or mixed in different lines, points, point sequences, or other geometric shapes or surfaces.
18. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, dass jeweils eine Art von Affinitätsmoleküle oder verschiedene Kombinationen von Affinitätsmolekülen für die Teststreifen verwendet werden. 18. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that in each case a sort of affinity molecules, or various combinations of affinity molecules for the test strips can be used.
19. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10 dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle gleiche oder verschiedene monoklonale oder polyklonale Antikörper oder deren Fragmente oder Fusionsprodukte sind. 19. Universal assay according to claim 1 and 10 characterized in that the affinity molecules are identical or different monoclonal or polyclonal antibodies or their fragments or fusion products.
20. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle Protein A und G oder Lectine sind. 20. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the affinity molecules Protein A and G, or lectins are.
21. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle Enzyme oder deren Substrate, Pseudosubstrate, Inhibitoren, Aktivatoren oder Cofaktoren sind. 21. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the affinity molecules enzymes or their substrates, pseudosubstrates, inhibitors, activators or cofactors.
22. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle Rezeptoren, Liganden, ein- und doppelsträngige DNA oder RNA oder deren Fragmente sind. 22. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the affinity molecules receptors, ligands, single and double stranded DNA or RNA or fragments thereof are.
23. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß die Affinitätsmoleküle Aptamere oder sogenannte Imprinted Polymers sind. 23. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the affinity molecules are aptamers or so-called imprinted polymers.
24. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, dass zur Markierung und Visualisierung der Affinitätsmoleküle kolloidales Gold, Enzyme, Latexpartikel, Mikro- oder Nanokapseln, Farbstoffe jeglicher Art verwendet werden. 24. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that colloidal gold, enzymes, latex particles, micro- or nanocapsules, dyes are used to mark any type and visualization of affinity molecules.
25. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß 2 bis 12 Teststreifen in einem bestimmten Winkel zueinander angeordnet sind. 25. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that 2 to 12 test strips are arranged at a certain angle to each other.
26. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 27, dadurch gekennzeichnet, daß 2 bis 4 Teststreifen rechtwinklig zueinander angeordnet sind. 26. Universal assay according to claim 1 and 27, characterized in that 2 to 4 test strips are arranged at right angles to each other.
27. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 27, dadurch gekennzeichnet, daß 2 Teststreifen parallel zueinander angeordnet sind, wobei diese Teststreifen voneinander getrennt oder ueberlagert sind. 27. Universal assay according to claim 1 and 27, characterized in that two strips are arranged parallel to each other, wherein these strips are separated from each other or superimposed.
28. Universeller Assay nach Anspruch 1 und 10, dadurch gekennzeichnet, dass als Assayformen Sandwich-, Konkurrenz- oder Verdrängungs-(displacement) Assays verwendet werden. 28. Universal assay according to claim 1 and 10, characterized in that the assay forms sandwich, competitive or predatory (displacement) assays are used.
29. Verfahren zur Analyse von biologischen Flüssigkeiten mittels des Assays nach Anspruch 1-28, dadurch gekennzeichnet, daß eine, zwei oder mehrere Proben der biologischen Flüssigkeit an der Verbindungsstelle des Teststreifen-Winkels (Startpunkt) aufgetragen werden, die nach Ablauf der Reaktion auf den Teststreifen entstehenden Markierungen verbunden werden und eine Messung des entstandenen Winkels und Vergleich mit einer kalibrierten Skala erfolgt. 29. A method for the analysis of biological fluids by means of the assay of claim 1-28, characterized in that one, two or more samples of biological fluid at the junction of the test strip angle (starting point) to be applied, after the expiration of the response to the test strips resulting marks are connected and a measurement of the resulting angle and comparison with a calibrated scale.
30. Verfahren zur Analyse von biologischen Flüssigkeiten mittels des Assays nach Anspruch 1-28, dadurch gekennzeichnet, daß eine, zwei oder mehrere Proben der biologischen Flüssigkeit an der Verbindungsstelle des Teststreifen-Winkels (Startpunkt) aufgetragen werden, die nach Ablauf der Reaktion auf dem Teststreifen entstehenden Markierungen ausgezählt bzw. mit einer tabellenartigen Matrix verglichen werden. 30. A method for the analysis of biological fluids by means of the assay of claim 1-28, characterized in that one, two or more samples of biological fluid at the junction of the test strip angle (starting point) to be applied, after completion of the reaction on the counted test strips resulting markings or be compared to a table-like matrix.
31. Verfahren zur Analyse von Körperflüssigkeiten mittels des Assays nach Anspruch 1- 28, dadurch gekennzeichnet, daß Proben der biologischen Flüssigkeit an der einer Verbindungsstelle des Teststreifen-Winkels (Startpunkt) aufgetragen werden und die Teststreifen sich unterscheiden. 31. A method for the analysis of body fluids by means of the assay according to claim 1- 28, characterized in that samples of biological fluid be applied at a joint of the test strip angle (starting point) and the test strip are different.
32. Verfahren zur Analyse von biologischen Flüssigkeiten mittels des Assays nach Anspruch 1-28 und 29-31, dadurch gekennzeichnet, daß Proben auf getrennten Startpunkten zeitlich versetzt aufgetragen werden und die Teststreifen identisch sind. 32. A method for the analysis of biological fluids by means of the assay according to claim 1-28 and 29-31, characterized in that samples are plotted on separate staggered starting points and test strips are identical.
Description  translated from German

Die Erfindung betrifft einen Assay zur schnellen und einfachen Analyse von Proben vorzugsweise biologischen Materials. The invention relates to an assay for rapid and simple analysis of samples preferably biological material. Anwendungsgebiete der Erfindung sind vor allem die medizinische Diagnostik, die pharmazeutische Industrie und der Umweltschutz. Areas of application of the invention are especially medical diagnostics, pharmaceutical and environmental protection.

Stand der Technik State of the art

Die Verwendung spezifischer Affinitätsassays, zum Beispiel Immunoassays; The use of specific affinity assays, for example immunoassays; Rezeptor- und DNA-Assays, ist von immer größerer Bedeutung für klinische und zahlreiche andere Anwendungen. Receptor and DNA assays, is becoming increasingly important for clinical and numerous other applications. Zur Analyse von biologischen Materialien, insbesondere von Körperflüssigkeiten, sind zahlreiche Verfahren bekannt. For the analysis of biological materials, particularly body fluids, numerous methods are known. Sehr gebräuchlich ist der "Immuno- Lateral-Flow-Test". Very common is the "immuno lateral flow test". Der bei dieser Untersuchung angewendete Assay setzt sich aus vier Teilen auf einem Teststreifen zusammen: einem Probenfeld, einem Konjugatfeld, einem Analysenfeld (üblicherweise eine Nitrocellulosemembran) und einem Absorptionsfeld. The assay employed in this study is composed of four parts on a test strip together: a sample box, a conjugate pad, an analytical field (usually a nitrocellulose membrane) and an absorption field. Die Probenflüssigkeit fließt durch das Probenfeld mittels Kapillarkräfte in das Konjugatfeld. The sample liquid flowing through the specimen by means of capillary forces in the conjugate pad. In und auf dem Konjugatfeld sind markierte Antikörper (z. B. mit kolloidalem Gold markiert, was eine Rotfärbung ergibt, oder mit Enzymen) gespeichert. In and on the conjugate pad labeled antibodies (z. B. labeled with colloidal gold, which gives a red color, or with enzymes) are stored. Die Probenflüssigkeit fließt durch dieses Konjugatfeld und löst somit die markierten Antikörper ab. The sample liquid flows through this conjugate pad and thus solves the labeled antibodies from. Die Probenlösung fließt dann, die markierten Antikörper und den Analyten mitführend, von dem Konjugatfeld in das Analysenfeld, auf dem Fängerantikörper adsorbiert sind. The sample solution flows, the labeled antibody and the analyte mitführend, of the conjugate pad in the field of analysis are adsorbed on the capture antibody. Schließlich fließt sie durch die Membran des Analysenfeldes zum Absorptionsfeld. Finally, it passes through the membrane of the analysis field to the absorption field. Zusammen bilden sie den Teststreifen. Together they form the test strip.

Gewöhnlich sind zwei immun-reaktive Linien auf dem Analysenfeld fixiert: eine für die Feststellung des interessierenden Analyten (z. B. Antikörper gegen einen Herzinfarktsmarker wie Troponin I) und eine dahinter gelegene Linie als positive Kontrolle für den Test (z. B. Antimaus-Antikörper). Usually two immuno-reactive lines are fixed on the analysis field: one for the determination of the analyte of interest (. For example, antibodies against a heart attack markers such as troponin I) and situated behind line as a positive control for the assay (eg anti-mouse. antibody). Der Teststreifen kann sich in einem zusätzlichen Plastikhalter befinden oder direkt in die Flüssigkeit getaucht werden. The test strip can be directly immersed in the liquid are in a plastic holder or additional. In einem Teststreifen für mehr als einen Parameter vergrößert sich dieser doppelte Bindebereich um die Zahl der Analyten, die mehr gemessen werden, z. B. gibt es für 3 Analyten drei Bindebereiche, die für den Analyten spezifisch sind, und einen zur Kontrolle, dass die verwendeten Antikörper intakt sind. In a test strip for more than one parameter, this double binding region is increased by the number of analytes that are more measured, z. B. there for 3 analytes three binding regions which are specific for the analyte, and to verify that the antibodies used are intact.

Ist kein Analyt in der Probe enthalten, fließen die markierten Antikörper ungehindert zum Absorbtionsfeld und binden lediglich am Kontrollantikörper. If no analyte present in the sample, the labeled antibody to flow freely Absorbtionsfeld and bind only the control antibody. Über die rote Farbe des kolloidalen Goldmarkers zeigen sie, daß der Assay prinzipiell funktioniert. About the red color of colloidal gold marker to show that the assay works in principle. Ist dagegen Analyt (z. B. Troponin I) in der Probe, bindet er zuerst im Konjugatfeld an die goldmarkierten Antikörper und fließt mit ihnen in die Analysenfeld. If, however analyte (eg. As troponin I) in the sample, he first binds the conjugate pad to the gold-labeled antibodies and flows with them in the field of analysis. Dort bindet der Komplex aus Analyt (Troponin I) und markierten Antikörpern an die fixierten Fängerantikörper gegen den Analyten (Troponin I). There, the complex of analyte (troponin I) and labeled antibodies bind to the fixed capture antibody against the analyte (troponin I). Der nichtgebundene Rest der markierten Antikörper (ohne Analyt) bindet an die dahintergelegenen Kontrollantikörper. The rest of the unbound labeled antibody (without analyte) binds to the lying behind control antibody. Die zwei roten Linien zeigen somit das Analytsignal und das Kontrollsignal. The two red lines thus show the analyte signal and the control signal.

Ähnliche Assays sind für Rezeptoren und DNA möglich, wenngleich auch noch nicht weitpraktiziert wie bei Immunoassays. Similar assays are possible for receptors and DNA, although not as weitpraktiziert in immunoassays.

RF Zuk et al. RF Zuk et al. (Clinical Chemistry 31, 1144-1150, 1985) beschreiben einen "immunografischen" Assay in Streifenform fuer den niedermolekularen Analyten Theophyllin. (Clinical Chemistry 31, 1144-1150, 1985) describe a "immunografischen" assay in strip form for the low molecular weight analytes theophylline. Ein Streifen, der ueber die volle Länge mit Antiköpermolekuelen gegen Theophyllin beschichtet ist, wird mit einem Ende in eine Loesung eingetaucht, die den Analyten (Theophyllin) und ein Theophyllin-Enzym-Konjugat enthaelt. A strip, which is coated over the full length with Antiköpermolekuelen to theophylline is immersed with one end in a solution containing the analyte (theophylline) and a theophylline-enzyme conjugate. Beide bewegen sich durch Kapilarkraefte aufwärts und konkurrieren um die Bindung an die Antikoerper. Both move upward by capillary forces and compete for binding to the antibodies. Nach Eintauchen in eine Enzymsubstratlösung entwickelt sich an den Bindungsstellen des Theophillin-Enzym-Konjugats ein gefaerbtes Produkt. After immersion in an enzyme substrate solution developed at the binding sites of the theophylline-enzyme conjugate to a colored product. Der Assay wird quantifiziert ohne zusätzliche Geräte, indem die Höhe der gefärbten Zone gemessen wird. The assay is quantified without any additional equipment by making the height of the colored zone is measured. Bei geringer Theophyllinkonzentration werden die Enzym-Konjugate bereits vollständig an den ersten Antikörpern gebunden. At low concentration of theophylline enzyme conjugates are already completely bound to the first antibody. Bei hoher Theophyllinkonzentration binden sich dagegen Theophyllin und Enzymkonjugate konkurrierend an den Antikörpern und eine grössere gefärbte Zone entsteht. At high concentration of theophylline contrast, theophylline and enzyme conjugates bind competitively to the antibodies and a larger colored zone is formed. Nachteilig sind die zwei umständlichen Inkubationsschritte, die einen Einsatz beispielsweise in der Notfallmedizin unmöglich machen, und die lange Wartezeit zur Entwicklung der Farbreaktion. Disadvantages are the two cumbersome incubation, which make a bet, for example in emergency medicine impossible, and the long wait for the development of the color reaction. Korrekturfaktoren sind nicht vorhanden. Correction factors are not present. Im US-Patent 4,435,504 wird von Zuk et al. In U.S. Patent 4,435,504 is of Zuk et al. zudem beschrieben, dass der Test auch ohne Enzym-Analyt- Konjugat erfolgen kann, dieses spaeter erst als Entwicklerloesung zugesetzt wird und danach eine zweite Inkubation mit dem Enzymsubstrat stattfindet. also described that the test can be carried out also without enzyme-analyte conjugate, the latter is added later only as a developing solution and then a second incubation takes place with the enzyme substrate.

Eine Vielzahl von Immuntests ist heute verfügbar (Uebersicht in P. Tijssen: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, Elsevier Amsterdam 1985, S. 9-20; DS Hage, Immunoassays. Analytical Chemistry 71 (12) 1999, S. 294R-304R). A variety of immunoassays is now available (overview in P. Tijssen: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, Elsevier Amsterdam 1985, pp 9-20; DS Hage, immunoassays, Analytical Chemistry 71 (12) 1999, pp 294R-304R.) , Sie alle nutzen die einzigartigen Eigenschaften der Antikörper, die spezifische Erkennung und Bindung von Molekülen, zur Analyse. They all use the unique properties of the antibodies, the specific recognition and binding of molecules for analysis. Diese Bindungsmöglichkeiten sind jedoch stark von Variablen wie Expositionszeit, von umgebenden Moleküle, die stören oder die Viskosität erhöhen, abhängig oder phasenabhängig (z. B. eine feste Phase, an die ein Antikörper gebunden ist). However, this bonding possibilities are heavily influenced by variables such as exposure time of surrounding molecules that disrupt or increase the viscosity, depending or phase-dependent (eg. As a solid phase to which an antibody is bound). Die Bindung eines Antikörpers an ein Antigen hängt daher von verschiedenen Faktoren ab. The binding of an antibody to an antigen, therefore, depends on various factors. Assays, die eine Quantifizierung eines Analyten zum Ziel haben, müssen deshalb einen internen oder externen Korrekturfaktor enthalten. Assays that have a quantification of analyte aim must therefore contain an internal or external correction factor.

Ähnliches gilt für andere Affinitätsassays wie DNA-Assays. The same applies to other affinity assays such as DNA assays. Hier werden meist an eine Oberfläche fixierte DNA-Bruchstücke durch Oligonucleotid-Sonden (probes) erkannt, die sich binden und markiert sind. Here fixed to a surface of DNA fragments by oligonucleotide probes (probes) are usually recognized that bind and are marked. Auch diese Assays und wie auch Rezeptor-Assays brauchen Korrekturfaktoren, um quantifizierbar zu sein. These assays and receptor assays, as well as correction factors need to be quantified.

Bei vielen klinischen Analysatoren und automatisierten Assays werden die og Probleme durch eine Kombination verschiedener Methoden gelöst. In many clinical analyzers and automated assays, the above-mentioned problems are solved by a combination of methods. Häufig ist eine Verdünnungsstufe in die Assays einbezogen, um den sog. "Matrixeffekt" (z. B. Viskosität, störende Verbindungen) zu minimieren. Often a dilution step is included in the assay to the so-called. "Matrix effect" (eg., Viscosity, interfering compounds) to be minimized. Für die Kalibrierung des Signals werden Standardproben verwendet. For calibration of the signal standard samples are used. Das macht erforderlich, daß Spezialisten den Test durchführen und es kann häufig nur mit einer großen Probenreihe erfolgen (z. B. im Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). This requires that specialists do the test and it can often be carried out with a large set of samples (z. B. in enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). Daher sind die meisten klinischen Analysatoren und automatisierten Assays für die "Point-of-care"- Notfalltestung nicht geeignet. Therefore, most clinical analyzers and automated assays for the "point-of-care" are - Emergency testing is not suitable.

Aufgrund fehlender Korrekturfaktoren für signalgenerierende Parameter sind bisher nur qualitative oder halbquantitative (dh, eine Konzentration oberhalb eines bestimmten Wertes anzeigende) für Lateral-flow-Teststreifen bzw. Teststreifens möglich gewesen. Due to lack of correction factors for signal-generating parameters are only qualitative or semi-quantitative previously (ie, a concentration above a certain value indicating) for lateral flow test strips or test strip have been possible. Daher ist es bei den gegenwärtig verfügbaren Methoden nicht möglich, ein und denselben Assay z. B. sowohl für Serum als auch Plasma zu verwenden, da sie eine sehr unterschiedliche Viskosität aufweisen. Therefore, it is not possible with the methods currently available to use one and the same assay z. B. both serum and plasma, since they have a very different viscosity. Darüber hinaus erfordert die Auswertung eines "quantitativen" Lateral-flow- Assays (Teststreifen) ein Spezialgerät (Reader) für das "Lesen". In addition, the evaluation of "quantitative" lateral flow assay (test strip) requires a special device (reader) for the "Read". Visuell kann nur eine qualitative Bestimmung durch Festlegung eines Schwellenwertes erfolgen. Visually can be done by setting a threshold only a qualitative determination.

Ein wichtiges Anwendungsgebiet für diese Assays ist die Diagnose von Herzinfarkten. An important application for this assay is the diagnosis of heart attack. Während das klassische EKG nur in etwa 40-50% der Fälle bei Ankunft im Krankenhaus eine klare diagnostische Aussage trifft, kann ein "früher" biochemischer Herzinfarkt-Marker wie Fatty Acid-Binding Protein (FABP) die Frühdiagnose wesentlich verbessern (Renneberg, R., Cheng, S., Kaptein, WA, McNeil, CJ, Rishpon, J., Gründig, B., Sanderson, J., Chu, A., Glatz, JFC Novel immunosensors for rapid diagnosis of acute myocardial infarction: A case report, Advances in Biosensors ed. APF Turner, R. Renneberg, Biosensors: a Chinese perspective, Vol 4 (1999).) While the classic ECG only about 40-50% of the cases on arrival at the hospital makes a clear diagnostic value, can substantially improve the early diagnosis of an "early" heart attack biochemical markers such as Fatty Acid-Binding Protein (FABP) (Renneberg, R. Cheng, S., Kaptein, WA, McNeil, CJ, Rishpon, J., Gründig, B. Sanderson, J., Chu, A. Glatz, JFC novel immunosensor for rapid diagnosis of acute myocardial infarction: A case report Advances in Biosensors ed APF Turner, R. Renneberg, Biosensors: a. Chinese perspective, Vol 4 (1999)).

Die bisher verfügbaren Tests für "späte" Herzinfarkt-Marker sind jedoch entweder Labortests, die somit gutausgebildetes Personal, teuere Apparate und eine lange Verweilzeit erfordern, oder es sind Schnelltests. However, the currently available tests for "late" heart attack markers are either laboratory tests, thus requiring the gutausgebildetes staff, expensive equipment and a long residence time, or there are rapid tests. Diese messen verschiedene Markermoleküle mit einem kalibrierten Lesegerät quantitativ erst Stunden nach dem Infarktereignis (z. B. den "späten" Marker Troponin T von Roche, Patent EP 00394819A2) oder nur qualitativ (z. B. Jackowski, George von Spectral, US-Patent 5604105). This measure different marker molecules with a calibrated reader quantitatively until hours after the infarction event (eg. As the "late" marker troponin T, Roche patent EP 00394819A2) or qualitatively (eg. B. Jackowski, George Spectral US Patent 5604105).

Aufgabe der Erfindung The object of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, einen schnellen und zuverlässigen Assay zur Untersuchung von vorzugsweise biologischen Materialien zu entwickeln. The invention is based is to develop a fast and reliable assay for the study of biological materials preferably the task. Er soll einfach zu handhaben sein (möglichst ohne Meßinstrumente) und zu weitgehend quantitativen Ergebnissen führen. It is easy to be lead (if possible without meters) and largely quantitative results.

Wesen der Erfindung Summary of the Invention

Die Erfindung wird gemäß den Ansprüchen realisiert. The invention is realized according to the claims. Die Hauptidee besteht darin, zum einen mindestens 2 Messungen einer Probe gleichzeitig oder zum anderen gleichzeitig oder zeitlich versetzt Messungen von mindestens 2 verschiedenen Proben durchzuführen und deren Ergebnisse zu vergleichen. The main idea is for a minimum of 2 measurements of one sample simultaneously or concurrently or chronologically offset to the other measurements of at least two different samples must be performed and compare the results.

Der erfindungsgemäße universelle Affinitätsassay zur Untersuchung von biologischen Materialien besteht dem gemäß aus mindestens 2 Teststreifens aus fließfähigen oder flussunterstützendem Material, die The inventive universal affinity assay for the investigation of biological materials, consisting of at least 2 according to the test strip of flowable material or flussunterstützendem that

  • - entweder einen gemeinsamen Startpunkt oder getrennte Startpunkte zur Aufnahme von einer oder mehreren Proben haben, - Have either a common starting point or separate starting points for receiving one or more samples
  • - mit gleichen oder unterschiedlichen Affinitätsmolekülen in aufsteigender, absteigender oder gleicher Konzentration, bevorzugt in Form strichcode-ähnlicher Arrays präpariert sind und - Are preferably prepared by identical or different affinity molecules in ascending, descending or the same concentration in the form of barcode-like arrays and
  • - so angeordnet sind, dass vorzugsweise die Endpunkte der auf den Teststreifen verlaufenden Reaktionen in eine direkte Beziehung gesetzt werden können. - Are arranged so that, preferably, the end points of the runs on the test strip reaction can be set in a direct relationship.

Bevorzugt ist die Verwendung von 2 Teststreifen, aber auch 3 und mehr Teststreifen sind für die Lösung bestimmter Aufgabenstellungen durchaus von Vorteil. Preference is given to using 2 test strips, as well as 3 and more test strips are for solving certain tasks quite beneficial.

Bevorzugte Materialien für die Teststreifen sind Cellulosemembranen, aber auch Glasfiber, Nylon, andere Flüssigkeitsträger, wie Papier, Baumwolle oder teststreifenähnliche Strukturen aus Glas, Silicon, Plastik, Metall mit eingebrachten Kanälen oder poröse Materialien. Preferred materials for the test strips are cellulose membranes, as well as fiberglass, nylon, other liquid carrier, such as paper, cotton or test strip-like structures made of glass, silicone, plastic, metal with inserted channels or porous materials.

Wenn man den erfindungsgemäßen Assay zur parallelen Messung einer einzigen Probe benutzen will, empfiehlt sich, daß die Teststreifen einen gemeinsamen Startpunkt zur Aufnahme der Probe haben. If you want to use the assay of the invention for parallel measurement of a single sample is recommended that the test strips have a common starting point for receiving the sample. Wenn dagegen mehr als eine Probe gleichzeitig oder zeitlich versetzt gemessen werden soll, sind räumlich getrennte Startpunkte erforderlich. In contrast, if more than one sample is to be measured simultaneously or temporally, spatially separate starting points are required.

Die erfindungsgemäßen Teststreifen können mit identischen oder unterschiedlichen Affinitätsmolekülen in "Strichcode"-Form präpariert sein, wobei die Konzentration im Normalfall gleich bleibt. The test strips according to the invention can be prepared with identical or different affinity molecules in "bar code" form, wherein the concentration normally remains the same. Sie kann jedoch auch aufsteigend oder absteigend sein. However, it can also be ascending or descending order. Die Abstände und Dicke der Affinitätsmolekül-"Striche" oder Linien (engl. bands) können gleichmässig oder ungleichmässig sein. The spacing and thickness of the Affinitätsmolekül- "strokes" or lines (engl. Bands) can be uniformly or non-uniformly.

Die wichtigste Ausführungsform der Assays sind Teststreifen mit strichcode-ähnlichen Arrays, die auf der Oberfläche mindestens 2 Linien, Punkte oder andere geometrische Flächen verschiedener Groesse enthalten, die durch fixierte Affinitätsmoleküle gebildet sind. The most important embodiment of the assay are test strips with barcode-like arrays that hold on the surface at least 2 lines, dots or other geometric surfaces of various sizes, which are formed by fixed affinity molecules. In den meisten Fällen sind 3 bis 10 Linien notwendig. In most instances from 3 to 10 lines are necessary. Es koennen aber auch bis 200 Linien verwendet werden. But it can also be used to 200 lines. Im Normalfall sind die Linien des Strichcode-Arrays in gleichen Abständen angeordnet, aber auch unterschiedliche Abstände und Dicken können in bestimmten Fällen zweckmäßig sein. Normally, the lines of the bar code array are arranged at equal intervals, but also different distances and thicknesses may be advantageous in certain cases. Variationen je nach konkreter Aufgabe sind auch bezüglich der Konzentration der Affinitätsmoleküle per Linie möglich. Variations depending on the specific task are also possible with respect to the concentration of the affinity molecules per line. Es können aber auch unterschiedliche Affinitätsmoleküle kombiniert werden. But it may also have different affinity molecules are combined. Anstelle von Linien können auch Punkte (dots) oder andere geometrische Formen und Flächen verwendet werden. Instead of lines and points (dots), or other geometric shapes and surfaces can be used.

Die Art der Affinitätsmoleküle ist variabel, z. B. können verschiedene monoklonale oder polyklonale Antikörper oder deren Fragmente oder Fusionsprodukte eingesetzt werden, Protein A und G, Lectine, ferner Enzyme oder deren Substrate, Pseudosubstrate, Inhibitoren oder Aktivatoren, Cofaktoren, Rezeptoren, Liganden, ein- und doppelsträngige DNA oder RNA oder deren Fragmente, Aptamere oder sogenannte imprinted polymers. The type of affinity molecules is variable, z. B. Various monoclonal or polyclonal antibodies or their fragments or fusion products are used, protein A and G, lectins, further enzymes or their substrates, pseudosubstrates, inhibitors or activators, cofactors, receptors, ligands, single and double-stranded DNA or RNA or fragments thereof, aptamers or so-called imprinted polymers.

Wichtig ist die gewinkelte Anordnung der mindestens 2 Teststreifen, wobei eine rechtwinklige Anordnung bevorzugt wird. Important is the angled arrangement of at least 2 test strips with a rectangular arrangement is preferred. Auch andere Winkel können erfindungsgemäß gewählt werden. Other angles can be chosen according to the invention. Ebenfalls möglich ist eine parallele Anordnung: zwei Teststreifen sind im Winkel von null Grad angeordnet, verlaufen also parallel oder sind zu einem Streifen ueberlagert und somit verschmolzen sind. Also possible is a parallel arrangement: two test strips are arranged at an angle of zero degrees, so run parallel or are superimposed over to a strip and are thus merged.

Nach Durchführung der Testreaktion können die Endpunkte auf vielerlei Weise abgelesen werden: Eine Methode ist die Bestimmung der Winkel zwischen den Endpunkten. Abb. 1 zeigt eine schematische Darstellung. After carrying out the test reaction, the end points can be read in various ways: One method is the determination of the angle between the endpoints Figure 1 shows a schematic representation of... Die Ergebnisse werden vom Anwender mit einer kalibrierten Skala verglichen.. Es ist ebenfalls möglich, die verschiedenen Signale zu vergleichen und auf einer matrixähnlichen Tabelle zu vergleichen. The results are compared by the user with a calibrated scale .. It is also possible to compare the various signals and to compare on a matrix-like table. Es kann auch die Anzahl der gefärbten Linien ausgezählt werden. It can also be the number of the colored lines to be counted.

Im speziellen Fall der Ueberlagerung von Teststreifen oder des Verschmelzens zu einem Streifen (Winkel null Grad) sind die Signale fuer die verschiedenen Reaktionen farblich unterscheidbar (z. B. blau und rot und weitere Farben) und die Endpunkte werden ausgezaehlt. In the special case of superposition of test strips or fusing into a strip (zero degree angle), the signals for the various reactions color coded (z. B. blue and red and other colors) and the endpoints are counts.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Analyse von Flüssigkeiten mittels des beschriebenen Assays ist also dadurch gekennzeichnet, daß Proben der Flüssigkeit am Startpunkt des Teststreifen-Winkels aufgetragen werden, die nach Ablauf der Reaktion auf dem Streifen entstehenden Markierungen verbunden werden und eine Messung des entstandenen Winkels und Vergleich mit einer kalibrierten Skala oder der Matrixtabelle erfolgt. The inventive method for analysis of liquids by means of the described assays is thus characterized in that the liquid at the start point of the test strip angle samples are plotted, the resulting after the reaction on the strip markers are connected and a measurement of the resulting angle and comparison with carried a calibrated scale or the matrix table. Der Vergleich kann auch dadurch erfolgen, daß die erste Probe als "Kalibrator" für die zweite Probe fungiert. The comparison may also take place in that the sample first acts as a "calibrator" for the second sample.

Das Verfahren kann so gestaltet werden, daß Proben einer Flüssigkeit an der Verbindungsstelle des Teststreifen-Winkels aufgetragen werden und die Teststreifen sich unterscheiden. The method may be configured so that a sample liquid can be applied at the junction of the test strip angle and the test strip are different. Dabei kann ebenfalls einer der Teststreifen als "Kalibrator" für die anderen dienen. It can also serve as one of the test strips "calibrator" for the other.

Ein dazu alternatives Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß verschiedene Proben auf verschiedenen Startpunkten aufgetragen werden und die Teststreifen identisch sind. An alternative method to is characterized in that different samples are applied to different starting points and the test strips are identical.

Wichtig ist auch die Möglichkeit, Proben zeitlich versetzt auf räumlich getrennte Startpunkte aufzutragen und dann die Endpunkte zu bestimmen. Also important is the possibility to apply samples on a time offset spatially separate starting points, and then to determine the endpoints. Das ist z. B. bei der Untersuchung von Herzinfarktpatienten vorteilhaft. This is such. As beneficial in the study of heart attack patients. Man trägt von einem Patienten in zeitlichem Abstand entnommene aufeinanderfolgende Proben auf und analysiert damit den Krankheitsverlauf. One carries from a patient taken at a time interval on successive samples, and thus analyzes the course of the disease.

Die mit blossem Auge oder ein Messinstrument auswertbaren farbigen Endpunkte bzw. Endlinien entstehen durch markierte Antikörper, die über Analyten (Antigene) an streifenfixierten Fängerantikörpern gebunden sind. The evaluated by eye or by a measuring instrument colored endpoints and end lines are caused by labeled antibodies, which analytes (antigens) are bound to roam fixed capture antibodies.

Durch die visuelle Auswerung mit nacktem Auge oder Auswertung mit einem optischen oder optoelektronischen Instrument ist eine quantitative Bestimmung der Analytkonzentration möglich. The visual evaluation purposes with the naked eye or evaluation with an optical or opto-electronic instrument the quantitative determination of the analyte concentration is possible.

Der hier vorgeschlagene Assay erlaubt eine genaue quantitative Analyse für Analyte auch ohne die notwendige Verwendung eines zusätzlichen Gerätes. The proposal for assay permits accurate quantitative analysis of analytes without the need to use an additional device. Des weiteren ermöglicht es, die Spezifizität durch Bestimmung der Quelle der weniger spezifischen Marker zu erhöhen (durch Anwendung der Verhältnisanalyse, zum Beispiel des FABP/Myoglobin-Verhältnisses) und/oder einer Zeitfolge eines Markers (und ermöglicht es somit einem Patienten, seine eigene "Negativkontrolle" zu sein). Further, it allows to increase the specificity by determining the source of the less specific marker (by applying the relationship analysis, for example of FABP / myoglobin ratio) and / or a time sequence of a marker (and thus enables a patient his own " negative control "to be).

Die Vorteile des neuen Assays gemäß der Erfindung sind: The advantages of the new assay of the invention are:
Der Assay ist billig und sehr einfach zu handhaben. The assay is inexpensive and very easy to handle.

Er kann mit einer minimalen Probemenge durchgeführt werden, dh, es werden keine so großen Probemengen wie in ELISAs werden benötigt. It can be carried out with a minimum amount of sample, that is, there are not so large numbers of samples as in ELISAs are needed.

Man hat nach wenigen Minuten bereits das Resultat. It has been the result after a few minutes.

Besonders vorteilhaft ist, daß er von technischen Kräften (z. B. Krankenschwestern) oder sogar von Laien durchgeführt werden kann. It is particularly advantageous in that it can be performed by laymen of technical staff (eg. As nurses) or even.

Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher erläutert werden. The invention is illustrated by the following examples.

Ausführungsbeispiele Embodiments

Technische Möglichkeiten für Auswertung (siehe Abb. 1) Technical possibilities for analysis (see Fig. 1)

  • 1. Winkelmessung 1. Angle Measurement
  • 2. Tabellarische Matrix Table 2. Matrix
  • 3. Flächenmessung 3. Area measurement
Beispiel 1 Example 1 Quantifizierung des Signals; Quantification of the signal; Korrektur der Matrixeffekte Correction of matrix effects

In den Lateral-flow-tests, insbesondere in den unverdünnten Vollbluttests, spielt die Matrix eine wichtige Rolle für das gesamte Signal am Ende der Messung. In the lateral flow tests, especially in the undiluted whole blood testing, the matrix plays an important role for the whole signal at the end of the measurement.

Hohe Viskosität erhöht z. B. das gesamte Signal auf einem einzigen Linie, da es die Strömungsgeschwindigkeit auf dem Teststreifen herabsetzt und es somit dem Antikörper ermöglicht, Antigen in größeren Mengen zu binden. High viscosity increased z. B. the entire signal on a single line, since it reduces the flow velocity on the test strip and thus allows the antibody to bind antigen in large amounts. Im Lateral-flow-test mit mehr als einer Linie bedeutet höhere Viskosität ein höheres Signal in der ersten Linie, jedoch weniger gefärbte Linien, da die gesamte Antigenmenge schneller erschöpft ist. In the lateral flow test with more than one line higher viscosity means a higher signal in the first line, but less colored lines, since the total amount of antigen is exhausted faster.

Um diesen Effekt zu korrigieren, kann man den Test mit einem Kontrollstreifen kombinieren. To correct for this effect, one can combine the test with a control strip. Dieser Streifen korrigiert den Test bezueglich der Matrixeffekte. This corrects the test strip in respect of the matrix effects. Dabei ist eine bestimmte Menge eines (direkt oder indirekt) nachweisbaren markierten Analyten vorhanden, die an ein Affinitätsmolekül binden kann. It is a certain amount of (directly or indirectly) detectable labeled analyte present, which can bind to an affinity molecule. Andere Elemente, die die Bindung beeinflußen können, sind z. B. spezifische Arzneimittel (Heparin), die Fettkonzentration im Blut, nach Hämolyse. Other elements which can affect the binding, for. Example, specific drug (heparin), the fat concentration in the blood, by hemolysis.

Eine Probe, die beispielsweise auf den frühen Herzinfarktmarker Fettsäurebindungsprotein (FABP) untersucht werden soll, wird am gleichen Startpunkt zwischen zwei gewinkelten Teststreifen (Analysestreifen 1 und Kontrollstreifen 2) aufgegeben und teilt ihren Fluss. A sample to be studied, for example, the early heart attack marker fatty acid binding protein (FABP) is at the same starting point between two angled strips (strips 1 Analysis and Control Strip 2) abandoned and shares its flow. Die Konjugatfelder der beiden Streifen tragen die gleichen goldmarkierten Anti-FABP- Antikörper. The Konjugatfelder the two strips have the same gold-labeled anti-FABP antibody. Auf der Analysenfeld des Analysenteststreifens (1) sind Anti-FABP-Antikörper, auf der Analysenfeld des Kontrollteststreifens (2) dagegen Anti-Maus-Antikörper fixiert. In the field of analysis of the analytical test strip (1) anti-FABP antibody, on the analysis field of the check strip (2), however, are fixed anti-mouse antibody. Eine grafische Darstellung dieses Beispiels ist in Abb. 2 zu sehen. A graphical representation of this Example is shown in Fig. 2.

Wenn bei einem Herzinfarkt und einer gleichgrossen Menge an FABP die Probe eine hohe Viskosität hat (A), werden weniger Linien des Analyseteststreifens (A1) gefärbt sein als bei geringer Viskosität (B1). If during a heart attack and an equal amount of FABP, the sample has a high viscosity (A), will be less colored lines of the analytical test strip (A1) than at a low viscosity (B1). Da Analyse- und Kontrollstreifen aber die gleichen Bedingungen haben, bleibt der Winkel zwischen in beiden Fällen A und B zwischen den Endpunkten unverändert. Since the study and control strips but have the same conditions, the angle between remains unchanged in both cases A and B between the endpoints.

Wenn kein Herzinfarkt vorliegt und somit die Konzentration an FABP in der Probe sehr niedrig ist (C und D), werden auf dem Analysestreifen (C1) bei hoher Viskosität weniger Linien sichtbar werden als bei niedriger Viskosität (D1). If no heart attack is present, and thus the concentration of FABP in the sample is very low (C and D) lines are less visible than in the case of low viscosity (D1) on the analytical strip (C1) at a high viscosity. Auch hier bleibt der Winkel gleich und ist unabhängig von der Viskosität der Probe. Again, the angle remains the same and is independent of the viscosity of the sample.

Der Winkel bei Herzinfarkt unterscheidet sich jedoch vom Winkel bei Nichtvorliegen eines Infarktes. However, the angle at heart attack is different from the angle in the absence of infarction.

Wenn der Winkel zwischen den Teststreifen null Grad betraegt (Abb 2E bis H), somit die Teststreifen parallel vorliegen oder letztlich zu einem Streifen ueberlagert sind, kann durch unterschiedliche farbliche Markierung die Analysereaktion von der Kontrollreaktion unterschieden werden. When the angle between the test strip zero degrees (Fig 2e-H), thus the present test strips parallel or are ultimately superimposed to form a strip, the assay reaction can be distinguished from the control reaction due to different colored marking. Durch Auszaehlen der Linien kann eine eindeutige Aussage ueber das Vorliegen eines Herzinfarktes, unabhaengig von Matrixeffekten wie Viskositaet, erfolgen. By counting the lines, a clear statement about the existence of a heart attack, regardless of matrix effects such Viscosity, take place.

Beispiel 2 Example 2 Erhöhung der Spezifizität des Assays, des Verhältnisses zwischen Herzmuskelschaden und Skeletmuskelschaden (FABP und Myoglobin) Increasing the specificity of the assay, the relationship between heart muscle damage and Skeletmuskelschaden (FABP and myoglobin)

Viele im Blut enthaltene Analyte sind für bestimmte Krankheiten nicht spezifisch, während sie in verschiedenen physiologischen oder pathologischen Situationen erhöht sein können. Many analytes contained in the blood are not specific for certain diseases, while they may be increased in various physiological and pathological situations. Zum Beispiel sind Myoglobin und FABP im Blut relativ zeitig nach einem Herzanfall erhöht, da sie von dem sterbenden Herzmuskelgewebe schnell freigesetzt werden. For example, myoglobin and FABP in the blood are increased relatively early after a heart attack because they are rapidly released from the dying heart muscle tissue. Sie sind jedoch auch im Skelettmuskel vorhanden und daher auch im Fall einer Skelettmuskelschädigung erhöht, z. B. im Fall von übermäßigem Training. However, they are also present in skeletal muscle and therefore also increases in the case of skeletal muscle damage, eg. As in the case of excessive training. Im Herzmuskel beträgt allerdings das Verhältnis FABP zu Myoglobin 1 : 4.5 und im Skelettmuskel 1 : 20 bis 1 : 70. In cardiac muscle, however, the ratio FABP to myoglobin 1: 4.5 and skeletal muscle 1: 20 to 1: 70th

Durch eine Analyse beider Parameter in einem Test ist es daher möglich, die zwei verschiedenen Quellen (Herz- und Skelettmuskel) zu trennen. Through an analysis of both parameters in a test, it is therefore possible to separate the two different sources (heart and skeletal muscle). Eine Darstellung wird in Abb. 3 gegeben. An illustration is given in Fig. 3. Dabei tragen der eine (1) der gewinkelten Teststreifen auf dem Konjugatfeld goldmarkierte Antikörper gegen FABP und auf dem analysenfeld fixierte Antikörper gegen FABP der andere (2) auf den Konjugat- und Analysefeldern goldmarkierte Antikörper gegen Myoglobin und fixierte Antikörper gegen Myoglobin. Here, take one (1) of the angled strips on the conjugate pad gold-labeled antibodies against FABP and on the analysis of field-fixed antibodies against FABP the other (2) on the conjugate and analysis fields gold-labeled antibodies against myoglobin and fixed antibodies against myoglobin.

Bei Herzinfarkt (A) entsteht ein völlig anderer Winkel zwischen den Endpunkten als bei Skelettmuskel-Schaden (B). In a heart attack (A) a completely different angle between the endpoints in skeletal muscle damage (B) is formed. Dieser Winkel ist wiederum nur abhängig vom FABP: Myoglobin-Verhältnis, nicht von Matrixeffekten. This angle is in turn dependent only on the FABP: myoglobin ratio, not to matrix effects.

Beispiel 3 Example 3 Zeitdifferenz, um dem Patienten eine eigene Kontrolle zu ermöglichen; Time difference, to allow the patients own control; Differenz zwischen Herzinfarkt, Angina pectoris und nicht-herzbedingten Brustschmerzen Difference between heart attack, angina pectoris and non-cardiac related chest pain

Wenn ein Patient mit Brustschmerzen zum Arzt kommt, kann das durch einen Herzinfarkt, Angina pectoris oder durch andere Prozesse (nicht-herz bedingten Brustschmerzen) verursacht sein. When a patient comes in with chest pain to the doctor, which may be caused by a heart attack, angina pectoris or by other processes (non-heart-related chest pain).

Wenn von diesem Patienten zwei aufeinanderfolgende Proben (1 und 2) genommen werden, z. B. 30 Minuten nacheinander, kann die erste Probe als Standard (Kontrolle) für die andere genommen werden. Are taken from said patient if two successive samples (1 and 2), for. Example, 30 minutes of each other, the first sample can be taken as a standard (control) for the other. Dazu werden 2 identische Teststreifen mit getrennten Startpunkten kombiniert. These 2 identical test strips are combined with separate starting points.

Wenn kein Herzinfarkt vorliegt ( Abb. 4A), sondern nicht-herzbedingte Brustschmerzen, dann ist nach 30 min keine Veränderung zur Kontrolle auf dem Streifen sichtbar (in der Abbildung beispielsweise ein 6 : 6 Verhältnis). If a heart attack is present (Fig. 4A), but not heart-related chest pain, then after 30 min no change to the control on the strip visible (in the figure, for example, a 6: 6 ratio).

Im Falle eines Herzinfarktes (B) ist jedoch der erste Wert schon deutlich über normal und der zweite erheblich höher sein sollte, als ersten Probe (zum Beispiel ein 6 : 13 Verhältnis). In the case of myocardial infarction (B), however, the first value is already well above normal and the second should be significantly higher than the first sample (for example, a 6: 13 ratio). Bei dem Warnzeichen Angina pectoris (anhaltende Brustbeinschmerzen) (C) ist nach 30 min ein geringfügiger Anstieg der FABP-Konzentration zu sehen (zum Beispiel 6 : 8). The warning signs of angina pectoris (chest persistent leg pain) (C) after 30 min a slight increase in FABP concentration is seen (for example, 6: 8).

Diese Methode ermöglicht es, die Zeit zu verkürzen, bevor gewisse Analyte diagnostiziert werden, während der Patient durch eigene Werte sich selbst kontrollieren zw. standardisieren kann. This method makes it possible to shorten the time before certain analytes are diagnosed while the patient with your own values themselves control btw. Can standardize. Zusaetzlich werden mit dieser Teststreifenkombination Matrixeffekte korrigiert. Be in addition to these test strips combination matrix effects corrected.

Patent Citations
Cited PatentFiling datePublication dateApplicantTitle
DE3237046C2 *6 Oct 19824 Aug 1988Lance A. Bethesda Md. Us LiottaTitle not available
DE4229591C1 *4 Sep 199224 Mar 1994Draegerwerk AgImmunoassay using test strip with immobilised antibody - based on displacement of tracer from antibody by analyte, esp. for determn. of pollutants
US4518565 *6 Jun 198321 May 1985Miles Laboratories, Inc.Reagent test device holder
US4956275 *14 Apr 198711 Sep 1990Molecular Devices CorporationMigratory detection immunoassay
WO1997031268A1 *24 Feb 199728 Aug 1997Universal Healthwatch, Inc.Chromatographic strip having detection and control zones oriented parallel to the direction of flow
Referenced by
Citing PatentFiling datePublication dateApplicantTitle
WO2008104081A1 *29 Feb 20084 Sep 2008Biolytical Laboratories Inc.Parallel immunoassay device
Classifications
International ClassificationC12Q1/68, G01N33/543
Cooperative ClassificationC12Q1/6816, G01N33/54386, C12Q1/6834
European ClassificationG01N33/543K4, C12Q1/68B2, C12Q1/68B10
Legal Events
DateCodeEventDescription
26 Sep 2002OP8Request for examination as to paragraph 44 patent law
3 Jul 20038131Rejection