CN1354668A - 分离的与hla－b35分子结合的肽 - Google Patents

分离的与hla－b35分子结合的肽 Download PDF

Info

Publication number
CN1354668A
CN1354668A CN99806794A CN99806794A CN1354668A CN 1354668 A CN1354668 A CN 1354668A CN 99806794 A CN99806794 A CN 99806794A CN 99806794 A CN99806794 A CN 99806794A CN 1354668 A CN1354668 A CN 1354668A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peptide
hla
molecule
cell
nucleic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN99806794A
Other languages
English (en)
Inventor
安妮·奥姆斯
杰勒德·德乔万尼
桑德拉·莫里尔
贝努特·范登艾恩德
西里·布恩－法勒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LUDWIG INST OF CANCER RESEARCH
Universite de Liege ULG
Original Assignee
Ludwig Institute for Cancer Research New York
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ludwig Institute for Cancer Research New York filed Critical Ludwig Institute for Cancer Research New York
Publication of CN1354668A publication Critical patent/CN1354668A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
    • C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
    • C12N9/0059—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

本发明涉及与HLA－B35分子结合,而导致所形成的复合物被细胞毒性T细胞识别并裂解的肽。本发明还涉及编码这些肽的核酸分子,以及它们各自的应用。所述核酸分子在部分实例中衍生自酪氨酸酶,此外,酪氨酸酶的一部分以及编码酪氨酸酶的核酸分子的一部分也包括在本发明中。

Description

分离的与HLA-B35分子结合的肽
发明领域
本发明涉及由MHC分子提呈，从而导致被细胞毒T细胞识别的肽。更具体地，本发明涉及与HLA-B35分子结合的肽，其为九聚体。
发明背景及现有技术
哺乳动物免疫系统识别外来或外源物质并与之反应的过程比较复杂。此系统的一个重要方面是T细胞应答。该应答要求T细胞识别被称之为人类白细胞抗原(“HLA”)或主要组织相容性复合体(“MHC”)的细胞表面分子与肽形成的复合物并与之相互作用。肽是从大分子经同样呈现HLA/MHC分子的细胞加工而成。这方面参见Male等，高级免疫学(Advanced Immunology)(J.P.Lipincott Company，1987)，特别是第6-10章。T细胞与HLA/肽复合体之间的相互作用是受限的，它需要特异性针对HLA分子与肽的特定组合的T细胞。若没有特异性T细胞，则即使有其对应的复合体存在也不会发生T细胞应答。类似地，如果有T细胞存在但缺乏特异性复合体也没有应答。该机制与免疫系统对外来物质的应答、自身免疫病理状况、以及对细胞异常的应答相关。很多研究关注的是蛋白质被加工成HLA结合肽的机制。这方面参见Barinaga，科学257：880(1992)；Fremont等，科学257：919(1992)；Matsumura等，科学257：927(1992)；Latron等，科学257：964(1992)。
癌症中也涉及T细胞识别细胞异常的机制。例如，在1992年5月22日提交、并于1992年11月26日公开的PCT申请PCT/US92/04354(已引入本文作为参考)中，公开了一个被加工成肽并被表达在细胞表面，导致肿瘤被特异性CTL裂解的基因家族。现称这些基因编码“肿瘤排斥抗原前体”或“TRAP”分子，由它们衍生的肽被称为“肿瘤排斥抗原”或“TRA”。参见Traversari等，免疫遗传学35：145(1992)；van der Bruggen等，科学254：1643(1991)，这两篇文献均引入本文作为该基因家族的更详细资料的参考。
在已引入本文作为参考的美国专利第5,405,940号中阐述了与HLA-A1分子结合的九肽。该专利指出，如果已知特定肽对特定HLA分子的特异性，则希望特定肽优先与其中一种特定HLA分子结合，而不是优先与其它分子结合。这一点很重要，因为不同个体具有不同的HLA表型。结果是，尽管对作为某种特定HLA分子或某类HLA分子之配偶体的特定肽的鉴定具有诊断和治疗意义，但这些意义仅涉及具有该特定HLA表型的个体。对该领域仍需作进一步研究，因为很多细胞异常并不限于一种特定HLA表型，而靶向治疗也要求对目标异常细胞的表型有一定了解。
酪氨酸酶催化酪氨酸转变成脱羟基苯丙氨酸即“DOPA”而且似乎选择性表达在黑色素细胞中(Muller等，欧洲分子生物学组织杂志7：2715(1988))。对这一人类酶的cDNA的早期报道见Kwon，美国专利第4,898,814号。其后Bouchard等，实验医学杂志169：2029(1989)报道了一种略有差异的序列。大量工作是对该酶的抑制物进行鉴定，因为这与色素沉着疾病有关。这方面的部分实例包括Jinbow，WO9116302；Mishima等，美国专利第5,077,059号以及Nazzaropor，美国专利第4,818,768号。本领域人员应对阐述类似物质的其它文献很熟悉。
已引入本文作为参考的各种美国专利指出，酪氨酸酶可能以类似于对外来抗原或TRAP分子的处理方式受到处理一即，有人发现在某些细胞异常情况如黑色素瘤中，酪氨酸酶受到加工，由它衍生的肽与某些异常细胞上的HLA分子形成复合体。这些复合体可被细胞毒T细胞(“CTL”)识别，随后这些CTL裂解提呈细胞。
例如，得到准许的专利申请流水号08/583,238(1996年1月5日提交)阐述了衍生自酪氨酸酶的肽，以及与HLA-A2和HLA-B44分子结合成复合体的肽。衍生自酪氨酸酶并由HLA分子提呈的肽的其它资料可参考美国专利第5,487,974号，以及于1994年2月28日提交的美国专利申请流水号08/203,054，于1993年6月23日提交的流水号08/081,673，于1992年12月22日提交的流水号07/994,928，其目前已被放弃。所有这些文献均引入本文作为参考。
已知HLA-B35分子可提呈肽，所形成的复合体被CTL识别。这方面参见已于1996年9月26日提交并得到准许的美国专利申请流水号08/718,964，其已引入本文作为参考。关于HLA-B35分子所实施的提呈的其它资料参见如Rammensee等，免疫遗传学41：171(1995)，具体在第207页，已引入作为参考。亦参见已引入作参考的Mason等，组织抗原51：417-465(1998)。第458页列出了HLA-B35的已知等位基因的氨基酸序列，并显示它们之间存在很大的同一性。
已鉴定出结合至HLA-B35分子随后被CTL识别的新的肽。本发明包括这些肽，以及它们的应用。
本发明的肽因衍生自酪氨酸酶，故无需再从酪氨酸酶衍生，对这一点本领域技术人员应能理解，亦可见于在下文中。
优选实施方案详述
实施例1
如Degiovanni等，欧洲免疫学杂志18：671-676(1988)所述的黑色素瘤细胞系LG2-MEL由自体细胞毒T淋巴细胞识别。至少有三种抗原呈现在LG2-MEL细胞表面并由这些CTL识别；但尚未对这些抗原中的任何一种进行分离或描述。这些实验描述了如何对“CTL 35-24”所识别的肽进行鉴定。
首先，在本文未描述的实验中，将两种抗HLA-B和HAL-C分子的单克隆抗体与CTL 35-24以及细胞系LG2-MEL结合。这些抗体述于Rebai等，组织抗原22：107-117(1983)和Yang等，免疫遗传学19：217-231(1984)，这两篇文献均引入本文作参考。已发现这些抗体可抑制CTL 35-24对LG2-MEL的裂解。本质上，这是通过将稀释的抗体(1/3-1/8)加至细胞毒性试验中而实现的。由于此前的HLA分型已将HLA-A24、A32、B35、B44以及Cw*04鉴定为黑色素瘤细胞系所提呈的HLA分子，显然提呈分子可以是B35、B44、Cw*04中的任何一种。
众所周知，提呈亲代癌症细胞系上部分HLA分子的癌症细胞亚系可衍化生成。LG2-MEL的这样一种亚系，即LG2-MEL 220现为已知，它已不再表达HLA-B35。CTL 35-24不能裂解该亚系，提示其中的提呈分子是HLA-B35。
随后，分离HLA-B35分子的cDNA并对其测序，发现其为等位基因亚型HLA-B*3503。该亚型与其它已知的HLA亚型之间存在微小差异，见Mason等，出处同上。因此认为该等位基因亚型同样可用于肽的提呈。
实施例2
如“背景”部分所述(见上文)，已知黑色素瘤细胞表达很多在正常细胞中不表达或只有少数正常细胞表达的基因。这些基因包括MAGE基因、BAGE、GAGE(1-6)、RAGE(1-4)、LAGE、PRAME、酪氨酸酶、Melan-A、NY-ESO-1、pme/17、CASP-8、MUM-1和gp100。已进行了试验，以确定由HLA-B35分子提呈的抗原是否自这些基因加工而成。为此，按标准方法获得了上述各种基因的cDNA，并制备了载体。将载体用于转染COS细胞，对这些细胞还用LG2-MEL所表达的HLA-B*3503的cDNA转染。所用cDNA(即HLA-B*3503的cDNA)从BB 49-SCCHN细胞所制备的cDNA文库获得。该细胞系由Mandruzzato等，实验医学杂志186(5)：785-793(1997)描述，该文献已引入本文作参考。用50ng上述各种构建体以众所周知的DEAE/葡聚糖方法实施转染。转染后24小时，加入CTL 35-24(1500个细胞)，24小时后用标准方法测定TNF的产生。参见Traversari等，免疫遗传学35：145-152(1992)。所用对照包括LG2-MEL 5-35细胞系(阳性对照)，和仅用HLA-B*3503或黑色素瘤相关基因转染的COS细胞。只有同时表达酪氨酸酶和HLA-B*3503的细胞能刺激TNF的产生。
实施例3
将酪氨酸酶鉴定为已加工的分子后，便进行研究以确定HLA-B*3503所提呈的肽的特性。为此，按Wofel等，欧洲免疫学杂志24：759-764(1994)，和Brichard等，欧洲免疫学杂志26：224-230(1996)，以及美国专利第5,487,974号所述制备酪氨酸酶的cDNA片段(以上三篇文献均引入本文作参考)。在上述专利中的SEQ ID NO：1即本申请中的SEQ ID NO：40。
使用上文实施例2中所述的TNF试验，不同的是用酪氨酸酶cDNA片段而不用完整cDNA分子。这些片段为阳性，它们对应于酪氨酸酶cDNA中编码区的1-1086位、427-1134位、以及703-1134位核苷酸。对应于574-831位的片段为阴性，从中得出结论：831-1086位核苷酸编码所提呈的抗原。这些对应于已知氨基酸序列的酪氨酸酶的270-362位氨基酸。将该氨基酸序列与结合HLA-B*3501的已知肽、以及它的结合基元进行比较，如Rammensee等，出处同上所述，已引入本文作参考。该文献描述了HLA-B35的一种九肽的结合基元，其中Pro在第2位，而Tyr在第9位。Ramensee等所述的十肽以P2和Y10为结合点。用HLA-B*3501是因为本领域未见关于HLA-B*3503的任何资料。Ramensee等还将Phe，Met，Leu，和Ile作为P9位的辅助结合点。由氨基酸序列LPSSADVEF(SEQ ID NO：1)所定义的肽满足这些要求，并出现在酪氨酸酶的312-320位氨基酸上。对其刺激裂解的能力通过合成该肽，将该肽加入表达HLA-B*3503的自体淋巴母细胞样细胞系LG2-EBV，然后加CTL 35-24进行检验。还检验了细胞系HA7-EBV。该细胞系表达HLA-B*3501。用到51Cr释放试验，其中将细胞与不同浓度的SEQ IDNO：1肽一起温育。该试验的细节参见美国专利第5,519,117号，已引入本文作参考。将51Cr标记的细胞与所述肽一起温育30分钟，然后以5∶1的效应物(CTL)靶(LG2-EBV)比加入CTL 35-24。3.5小时后测定51Cr的释放。
结果示于图1。显然所述肽激发了对两类细胞的裂解，这表明所述肽与HLA-B*3501和B*3503均可以结合。1nM肽使对LG2-EBV细胞的裂解达到最高水平的一半，约10nM肽使对HA7-EBV细胞的裂解达到最高水平的一半。
在前实施例描述了本发明，其为结合HLA-B35分子的肽。这些肽具有通式
Leu Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe(SEQ ID NO：2)
在这类肽中，优选那些第3位为Ser，第4位为Ser，第5位为Ala，或第6位为Asp的肽(SEQ ID NO：3-6)。根据本发明的肽可能具有如上定义的第3-6位中的一或多个。第7和第8位可以是任何氨基酸。本发明还包括对应于以上参照肽，但在N和C末端侧翼不超过酪氨酸酶的270-312位和321-362位氨基酸。或者说，所述肽为所含氨基酸由不多于第270-311位的氨基酸，连接SEQ ID NO：2，后者再连接第321-362位的氨基酸而组成。因此，由例如酪氨酸酶的290-311位氨基酸，后随SEQ ID NO：2，接着为酪氨酸酶的321-340位氨基酸所组成的肽也为本发明的一部分。优选地，长度不超过约16个氨基酸且包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1，或SEQ ID NO：4-6之任一的肽亦为本发明的一部分。
本发明还包括肽组合，其含有至少SEQ ID NO：2的肽，优选SEQ IDNO：1和3-6中任一个的肽，并同时另含有一或多个MHC或HLA结合肽。已知不同个体在其细胞表面通常表达六种不同的HLA分子。如“背景”部分对本领域的回顾所指出，结合其它HLA分子的肽均为已知，结合HLA-B35分子的其它肽也已知。可据此“定制”包含两种或多种MHC结合肽的组合物，其中至少这些结合肽中的一种为SEQ ID NO：1-6所定义的肽。
本发明还包括编码本发明所述肽的核酸分子，如由编码不超过酪氨酸酶270-362位的氨基酸，且不少于SEQ ID NO：2所定义的肽，或更优选不少于SEQ ID NO：1和3-6中任一所定义的肽的核苷酸组成的核酸分子。可将这些核酸分子插入表达载体中，所述核酸分子或载体可用于转化或转染细胞、细胞系、以及细胞株，这些细胞可以是真核或原核细胞。它们还可与编码MHC分子(如象HLA-B*3501或HLA-B*3503这样的HLA-B35分子)的核酸分子联合应用。
本发明的肽和核酸分子具有各种用途，这些用途也是本发明的一部分。例如，除了它们可用于治疗，如体外或体内产生特异性裂解病原菌细胞的细胞毒T细胞以外，所述肽还可用于鉴定HLA-B35阳性细胞，或从含有HLA-B35阳性细胞的混合物中取出这些细胞。特别是所述核酸分子可作为探针用于鉴定表达酪氨酸酶的细胞。
本发明还包括一种多组分复合体，其可用于如从样品中分离特异性针对特定靶的细胞毒T细胞。该复合体包含一个第一结合配偶体和一个第二结合配偶体，其中所述第一和第二结合配偶体互为特异。它们可以是如亲和素或链亲和素和生物素、特异性针对生物素的抗体或抗体的结合部分等。关键特征是所述第二结合配偶体需结合由MHC分子、β2微球蛋白分子以及特异性结合该MHC分子的肽组成的多个复合体，且所述多组分复合体需被标记。MHC分子优选为HLA分子，如HLA-B35分子，但本领域普通技术人员应理解：任何HLA分子均可利用。就目的肽而言，很多参考文献包括综述文章、美国和非美国专利等描述了除SEQ ID NO：2-6以外的肽以及它们的结合配偶体HLA分子。所有这些均包括在本发明中。肽以及它们的HLA分子配偶体的实例在本申请的后文中呈现。
优选地，所述第二结合配偶体为生物素，但也可以是如特异性针对HLA/β2微球蛋白/肽复合体的一个组分的抗体，如HLA特异性抗体、或一种β2微球蛋白特异性抗体。类似地，所述第一结合配偶体可以是如重组或天然蛋白L、重组或天然蛋白A、或甚至一种第二抗体。该复合体可以是可溶形式，或结合形式，如结合在可除去的固相如磁珠上。
本发明大分子的HLA/β2微球蛋白/肽复合体数可以变化。它包含至少两个复合体，优选至少四个，但也可能更多。
利用本领域已知的任何标记技术可以对结合配偶体与HLA/β2微球蛋白/肽的复合体进行标记。荧光标记的实例已在上文给出。酶标记如碱性磷酸酶、金属颗粒、由合成材料制成的着色塑料、放射性标记等等全都可以使用。
还可使用一种特异性结合上述第一结合配偶体的第三结合配偶体。例如，如果第一结合配偶体为链亲和素，第二结合配偶体为生物素，那么第三结合配偶体可以是链亲和素特异性抗体。当用到三个或更多个结合配偶体时，上述标记可附着于任一种结合配偶体，只要与HLA/β2微球蛋白/肽复合体的结合不受损即可。
所述复合体可用于，如鉴定或分离样品中出现的特异性针对HLA/β2微球蛋白/肽复合体的细胞毒T细胞。如实施例所示，这类细胞毒T细胞可结合本发明的免疫复合体。在一优选实施方案中，待检样品用特异性结合细胞毒T细胞的反应物处理，其中所述标记提供一种可检测的信号。然后使含有标记的CTL的样品与复合体接触，发生结合，然后可通过任何标准的、众所周知的细胞分离方法分离该样品。优选地，用FACS，但本领域技术人员还知晓其它分离方法。所用肽留待技术人员需要时用，并将取决于如所研究的特定MHC系统的性质，其CTL为已知的肽的非限制性实例列表如下。它们也示于SEQ ID NO：7-38。
 基因           MHC           肽           序列号
MAGE-1          HLA-A1      EADPTGHSY         7
                HLA-Cw16    SAYGEPRKL         8
MAGE-3          HLA-A1      EVDPIGHLY         9
                HLA-A2      FLWGRPALV        10
                HLA-B44     MEVDPIGHLY       11
BAGE            HLA-Cw16    AARAVFLAL        12
GAGE-1，2       HLA-Cw16    YRPRPRRY         13
RAGE            HLA-B7      SPSSNRIRNT       14
GntV            HLA-A2      VLPDVFIRC(V)     15
MUM-1           HLA-B44     EEKLIVVLF        16
                            EEKLSVVLF        17
CDK4            HLA-A2      ACDPHSGHFV       18
                            ARDPHSGHFV       19
B-catenin       HLA-A24     SYLDSGIHF        20
                            SYLDSGIHF        21
Tyrosinase      HLA-A2      MLLAVLYCL        22
               HLA-A2           YMNGTMSQV         23
               HLA-A2           YMNGTMSQV         24
               HLA-A24          AFLPWHRLF         25
               HLA-B44          SEIWRDIDF         26
               HLA-B44          YEIWRDIDG         27
               HLA-DR4          QNILLSNAPLGPGFP   28
               HLA-DR4          DYSYLQDSDPDSFQD   29Melan-AMart-1      HLA-A2           (E)AAGIGILTV      30
               HLA-A2           ILTVILGVL         31gp100Pme1117        HLA-A2           KTWGQYWQV         32
               HLA-A2           ITDQVPFSV         33
               HLA-A2           YLEPGPVTA         34
               HLA-A2           LLDGTATLRL        35
               HLA-A2           VLYRYGSFSV        36DAGE               HLA-A24          LYVDSLFFL         37MAGE-6             HLA-Cw16         KISGGPRISYPL      38
可能会发现其它肽，如在美国专利申请流水号08/672,351、08/669,590、08/487,135，以及目前的美国专利08/530,569、08/880,693、08/718,964号，目前的美国专利第＿＿＿＿＿号，所有这些均引入本文作参考。
本发明的另一方面是所谓的“小基因”，其携有由这类小基因所转染的细胞直接合成肽所必需的信息。可将小基因设计为编码一或多种抗原肽，还可进一步将小基因通过质粒转染、或通过克隆至痘苗病毒或腺病毒而转移至宿主细胞基因组。参见如Zajac等，国际癌症杂志71：496(1997)，已引入本文作参考。
本发明的肽可与来自其它肿瘤排斥抗原的肽一起形成“polytope”。肽的实例包括本申请上文中所列的那些。
其它可利用的肽为以下参考文献中所述的肽，所有文献均引入本文作参考：美国专利5,405,940；5,487,974；5,519,117；5,530,096；5,554,506；5,554,724；5,558,995；5,585,461；5,589,334；5,648,226；和5,683,886；PCT国际公开号92/20356；94/14459；96/10577；96/21673；97/10837；97/26535；97/31017以及悬而未决的美国申请流水号08/713,354。这些肽也可组合与MHC-II类分子形成复合体的肽，诸如如下所述的衍生自肿瘤排斥抗原前体的肽：流水号08/927,015，以及Knuth等人于1998年10月2日提交的作为CIP的流水号09/062,422的部分连续申请。这篇新提交的CIP已引入本文作为参考。
polytope是两条或更多条有潜在免疫原性或免疫刺激性的肽，可将它们以各种方式连接，从而确定这类分子是否刺激和/或激发免疫应答。
可将这些肽直接或通过应用侧翼序列进行连接。参见Thompson等，美国国家科学院学报92(13)：5845-5849(1995)，指示了相关表位序列的直接连接。polytope作为疫苗的应用已众所周知。参见如Gilbert等，自然生物技术(Nat.Biotechnol.)15(12)：1280-1284(1997)；Thompson等，出处同上：Thompson等，免疫学杂志157(2)：822-826(1996)；Tam等，实验医学杂志171(1)：299-306(1990)，所有文献均已引入本文作参考。Tam的文章特别指出polytope应用于小鼠模型时，对产生抗体和保护性免疫力很有效。该文章还指出，polytope消化后产生可以并确实是由MHC提呈的肽。Tam通过显示由CTL对加工自polytope“链(string)”的各表位的识别而说明这一点。此方法可用于如确定在一个polytope中可连接多少个表位而仍然能激发识别作用，还可用于确定表位的不同组合的效力。不同组合对表达肿瘤排斥抗原中特定亚群的病人而言可能是“特制的”。可将这些polytope作为多肽结构导入，或通过应用核酸运送系统导入。为了详细说明，本领域有不同方式用于将编码单个表位的DNA，或诸如上述文献所述的某种polytope导入。参见如Allsopp等，欧洲免疫学杂志26(8)：1951-1959(1996)，已引入作参考。腺病毒、痘病毒、Ty-病毒样颗粒、质粒、细菌等均可使用。可在小鼠模型中对这些系统进行检测以确定哪个系统最适于所选的、类似于人体的情况。还可在人体临床试验中对它们进行检测。
本发明的另一特点是包含至少一种本发明的肽，并组合至少一种佐剂的组合物。这类组合物可用于如产生免疫应答，优选在人体内作为某治疗方案的一部分，也可在非人类动物体中，产生随后可用于治疗人类或用于诊断的免疫组分。本领域普通技术人员很熟悉这类佐剂，因而不必在此展示。
这些组合物还可包括所谓的协同刺激分子。这些分子包括或可编码与T细胞表面分子相互作用的蛋白质，从而对已因MHC分子/抗原/T细胞受体相互作用的形成而受到刺激的T细胞进行协同刺激。这类协同刺激分子促进了抗肿瘤免疫力，以及CTL增殖。这些协同刺激分子的实例包括分别被称为“B7-1”和“B7-2”，或CD80和CD86的分子。参见Zhang等，美国国家科学院学报95(11)：6284-6289(1998)，已引入本文作参考。
这类协同刺激分子可与如IL-6和IL-12这样的白细胞介素组合。参见Gajewski等，免疫学杂志154：5637-5648(1995)。如上述文献指出，所述协同刺激分子可以以核酸分子的形式给药。这类方法与过继转移免疫治疗中的CTL扩增联合使用将很有效(Wang等，J.Immunother.Emphasis TumorImmunol.19：1-8(1996))。必需的核酸分子可以以“裸”DNA的形式给药(Kim等，自然生物技术15(7)：641-646(1997))，也可以以重组载体如腺病毒和痘病毒载体的形式给药。参见Wendtner等，基因治疗4(7)：726-735(1997)。所有这些系统都可改造，以使所述协同刺激分子与其它所选分子，包括肽、佐剂分子等一起表达。
除上述以外，抗体可作为协同刺激分子发挥功能，因为它们可作为细胞受体的配体而刺激该细胞。上文所述B7分子是CD28分子的配体。因此，多克隆、单克隆、人源化等的抗CD28抗体都能以这种方式发挥作用。
除了B7分子以外，淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD40L和抗CD40抗体也可作为协同刺激分子使用。这些都是协同刺激分子家族的实例，且不应被认为是唯一可能的选择对象。
本发明还有一个特点是这些肽在确定样品中细胞毒T细胞的存在时的应用。上文已指出：样品中的CTL将与肽/MHC复合体反应。因此若已知样品中有CTL，将本发明的肽加入到HLA-B35阳性细胞如HLA-B*3503阳性细胞中可使HLA-B35阳性细胞“裂解”，随后用诸如放射性铬释放、TNF生成等，或测定T细胞活性的任何其它方法进行测定。类似地，可在样品中加入要求保护的肽中的一条以及HLA-B35阳性细胞，并通过如51Cr释放、TNF存在等确定HLA-B35阳性细胞的裂解，从而确定样品中是否存在特异性肿瘤浸润淋巴细胞(“TIL”)。此外，可通过ELI-SPOT分析对CTL进行检测。参见如Schmittel等(1997)。免疫学方法杂志210：167-174和Lalvani等，实验医学杂志126：859(1997)或通过对MHCI类分子/肽的可产生荧光的四聚体复合体进行FACS分析(Dunbar等(1998)，现代生物学(CurrentBiology)8：413-416)。都引入本文作参考。
当然，所述肽也可用于激发CTL的产生。如在上文已指出，CTL前体与适当复合体相遇时可发育成CTL。通过引起这样一种本应如此的“相遇”可以产生CTL。这对于体内或体外产生这类CTL是十分有效的。
本发明的其它特点是本领域技术人员显而易见的，无需在此赘述。
所用术语和表达方式均用作说明性、而非限制性术语，并非想用这类术语和表达方式排除所述特点或其部分的任何等价形式，应认识到各种改变都包括在本发明的范围内。

Claims (27)

1.一种分离的肽，其包括氨基酸序列Leu Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa XaaPhe(SEQ ID NO：2)，其中每一Xaa为任意氨基酸。
2.权利要求1的分离的肽，其至少符合以下标准之一：
第一个Xaa为Ser(SEQ ID NO：3)
第二个Xaa为Ser(SEQ ID NO：4)
第三个Xaa为Ala(SEQ ID NO：5)
第四个Xaa为Asp(SEQ ID NO：6)
3.权利要求1的分离的肽，其中所述肽由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。
4.权利要求2的分离的肽，其中所述第五个氨基酸为Val，或第六个氨基酸为Glu。
5.一种分离的肽，其氨基酸序列至少由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成，最多由酪氨酸酶第270-311位氨基酸连接至SEQ ID NO：2，最多连接至酪氨酸酶的第321-362位氨基酸组成。
6.权利要求5的分离的肽，由酪氨酸酶第270-362位氨基酸组成。
7.包含权利要求1的分离的肽，以及一种佐剂的组合物。
8.包含权利要求2的分离的肽，以及一种佐剂的组合物。
9.包含权利要求3的分离的肽，以及一种佐剂的组合物。
10.包含权利要求4的分离的肽，以及一种佐剂的组合物。
11.包含权利要求5的分离的肽，以及一种佐剂的组合物。
12.包含权利要求6的分离的肽，以及一种佐剂的组合物。
13.包含权利要求1的分离的肽，以及一种结合MHC II类分子的肽的组合物。
14.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1的分离的肽。
15.一种分离的核酸分子，其编码权利要求3的分离的肽。
16.一种分离的核酸分子，其编码权利要求5的分离的肽。
17.一种分离的核酸分子，其编码权利要求6的分离的肽。
18.表达载体，其包含权利要求14的分离的核酸分子，可操作连接至一种启动子。
19.表达载体，其包含权利要求15的分离的核酸分子，可操作连接至一种启动子。
20.表达载体，其包含权利要求16的分离的核酸分子，可操作连接至一种启动子。
21.表达载体，其包含权利要求17的分离的核酸分子，可操作连接至一种启动子。
22.重组细胞、细胞系、或细胞株，其包含权利要求14、15、16、或17的分离的核酸分子。
23.重组细胞、细胞系、或细胞株，其包含权利要求18、19、20、或21的表达载体。
24.权利要求22的重组细胞、细胞系、或细胞株，其进一步包含编码HLA-B35分子的核酸分子。
25.权利要求23的重组细胞、细胞系、或细胞株，其进一步包含编码HLA-B35分子的核酸分子。
26.包含权利要求1的肽的组合物，并至少包含另一种MHC结合肽。
27.有效产生细胞毒T细胞的试剂盒，其中每一种权利要求14的分离的核酸分子和一种编码HLA-B35分子的分离的核酸分子包含在该试剂盒的一个可分离的部分中。
CN99806794A 1998-10-09 1999-10-04 分离的与hla－b35分子结合的肽 Pending CN1354668A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/169,717 1998-10-09
US09/169,717 US6667037B1 (en) 1998-10-09 1998-10-09 Isolated peptides which bind to HLA-B35 molecules, larger peptides which contain these, nucleic acid molecules encoding peptides, and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1354668A true CN1354668A (zh) 2002-06-19

Family

ID=22616897

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN99806794A Pending CN1354668A (zh) 1998-10-09 1999-10-04 分离的与hla－b35分子结合的肽

Country Status (10)

Country Link
US (1) US6667037B1 (zh)
EP (1) EP1123108A4 (zh)
JP (1) JP2002527050A (zh)
KR (1) KR20010043984A (zh)
CN (1) CN1354668A (zh)
AU (1) AU764550B2 (zh)
CA (1) CA2326675A1 (zh)
HK (1) HK1040485A1 (zh)
NZ (1) NZ510902A (zh)
WO (1) WO2000021551A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105008399A (zh) * 2013-03-08 2015-10-28 大鹏药品工业株式会社 新型的具有5个连接的ctl表位的肽

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001053833A1 (en) * 2000-01-20 2001-07-26 Ludwig Institute For Cancer Research Mage antigenic peptides which bind hla-b35 and hla-b44
FR2836684B1 (fr) * 2002-03-04 2004-12-17 Inst Nat Sante Rech Med Peptides ras mutes et leur utilisation en immunotherapie
DE10313819A1 (de) * 2003-03-24 2004-10-07 Immatics Biotechnologies Gmbh An MHC-Moleküle bindende Tumor-assoziierte Peptide
US20050032208A1 (en) * 2003-06-18 2005-02-10 Oh Steve Kah Weng Materials and methods to produce stem cells
US20050233448A1 (en) * 2003-06-18 2005-10-20 Oh Steve K W Materials and methods to produce stem cells
BRPI0817008A2 (pt) 2007-09-17 2017-05-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa oligonucleotídeo, inciador ou sonda, par de iniciadores, kit, métodos para detectar a presença e/ou a quantidade do gene mage-a3 não metilado e metilado em uma amostra a contendo dna, para diagnosticar câncer ou predisposição ao câncer ou predisposição ao câncer, para identificar e/ou selecionar um paciente adequado para tratamento com um imunoterapêutico de mage-a3, para predizer a probabilidade de tratamento bem sucedido do câncer, para selecionar um regime de tratamento adequado para câncer, para tratar câncer em um paciente, para tratar um paciente suscetível á recorrência de um tumor expressando mage-a3, e, uso de uma composição
DK3061771T3 (da) 2013-10-21 2020-07-13 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Nyt Fire-CTL-epitopforbundet peptid

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4898814A (en) 1986-10-06 1990-02-06 Donald Guthrie Foundation For Medical Research, Inc. A cDNA clone for human tyrosinase
US5519117A (en) * 1992-12-22 1996-05-21 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated, tyrosinase derived peptides and uses thereof
US5744316A (en) 1992-12-22 1998-04-28 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated, tyrosinase derived peptides and uses thereof
US5487974A (en) 1992-12-22 1996-01-30 Ludwig Institute For Cancer-Research Method for detecting complexes containing human leukocyte antigen A2 (HLA-A2) molecules and a tyrosinase drived peptide on abnormal cells
US5530096A (en) 1992-12-22 1996-06-25 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated, tyrosinase derived peptides and uses thereof
US5747271A (en) 1992-12-22 1998-05-05 Ludwig Institute For Cancer Research Method for identifying individuals suffering from a cellular abnormality some of whose abnormal cells present complexes of HLA-A2/tyrosinase derived peptides, and methods for treating said individuals
US5633234A (en) * 1993-01-22 1997-05-27 The Johns Hopkins University Lysosomal targeting of immunogens
US5648226A (en) * 1993-07-22 1997-07-15 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated peptides derived from tumor rejection antigens, and their use
WO1995011255A1 (fr) * 1993-10-19 1995-04-27 Ajinomoto Co., Inc. Peptide pouvant induire une reponse immune contre vih et agent contenant ce peptide pour la prevention ou le traitement du sida

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105008399A (zh) * 2013-03-08 2015-10-28 大鹏药品工业株式会社 新型的具有5个连接的ctl表位的肽

Also Published As

Publication number Publication date
KR20010043984A (ko) 2001-05-25
AU764550B2 (en) 2003-08-21
NZ510902A (en) 2002-09-27
CA2326675A1 (en) 2000-04-20
US6667037B1 (en) 2003-12-23
EP1123108A4 (en) 2005-01-26
WO2000021551A1 (en) 2000-04-20
AU6286599A (en) 2000-05-01
JP2002527050A (ja) 2002-08-27
EP1123108A1 (en) 2001-08-16
HK1040485A1 (zh) 2002-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220072113A1 (en) Antigen specific multi epitope vaccines
TWI517859B (zh) 癌抗原輔助肽
Castelli et al. HLA-DP4, the most frequent HLA II molecule, defines a new supertype of peptide-binding specificity
EP2626081B1 (en) Immunogenic control of tumours and tumour cells
JPH09502086A (ja) 完全ｍａｇｅ１遺伝子のクローニング及び特性決定
JP7102430B2 (ja) 糖尿病の治療のためのペプチド及び方法
US20240016914A1 (en) Targeted Neoepitope Vectors And Methods Therefor
CN1354668A (zh) 分离的与hla－b35分子结合的肽
US6156316A (en) Oncogene fusion protein peptide vaccines
JP2022514116A (ja) 新規な癌抗原及び方法
WO2021105371A1 (en) Methods for stratifying diabetes patients
JP4039483B2 (ja) ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球ｍＨＡエピトープペプチド及びその用途
RU2522830C2 (ru) ИСКУССТВЕННЫЙ ГЕН MEL-TCI-A0201, КОДИРУЮЩИЙ ПОЛИЭПИТОПНЫЙ БЕЛОК-ИММУНОГЕН MEL-TCI-A0201, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pMEL-TCI-A0201, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ ЭКСПРЕССИЮ ИСКУССТВЕННОГО ГЕНА MEL-TCI-A0201 И ИСКУССТВЕННЫЙ БЕЛОК-ИММУНОГЕН MEL-TCI-A0201, СОДЕРЖАЩИЙ МНОЖЕСТВЕННЫЕ CTL- И Th-ЭПИТОПЫ АНТИГЕНОВ МЕЛАНОМЫ
Mizote et al. Production of NY-ESO-1 peptide/DRB1* 08: 03 tetramers and ex vivo detection of CD4 T-cell responses in vaccinated cancer patients
JPH10298198A (ja) Ｃｔｌ誘導用抗原ペプチド
Asea et al. The Chaperokine Activity of HSPA1A
Kaur et al. The Chaperokine Activity of HSPA1A

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: LIEGE UNIVERSITY

Free format text: FORMER OWNER: NONE

Effective date: 20030618

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20030618

Address after: American New York

Applicant after: Ludwig Inst. of Cancer Research

Co-applicant after: University of Liege

Address before: American New York

Applicant before: Ludwig Inst. of Cancer Research

C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication