CN1232401A

CN1232401A - 抗衣原体的方法和材料

Info

Publication number: CN1232401A
Application number: CN97198452A
Authority: CN
Inventors: L·H·小兰伯特
Original assignee: Xoma Corp
Current assignee: Xoma Technology Ltd USA
Priority date: 1996-08-09
Filing date: 1997-08-07
Publication date: 1999-10-20
Also published as: DE69716605T2; EP0918533B1; WO1998006415A2; AU741480B2; US6583116B1; JP2001500117A; WO1998006415A3; NZ334041A; US6162788A; CA2263181C; ATE226442T1; DE69716605D1; AU3909497A; CA2263181A1; EP0918533A2; US5888973A

Abstract

本发明涉及治疗衣原体感染的方法,包括给遭受衣原体感染的患者施用杀菌/诱导透性(BPI)的蛋白质产物。

Description

抗衣原体的方法和材料

发明背景

本发明通常涉及治疗衣原体感染的方法，包括施用杀菌/增强透性(BPI)的蛋白质产物。

BPI是从哺乳动物多型核白细胞(PMN或嗜中性白细胞)的颗粒中分离的，这些白细胞是在防御入侵的微生物中非常重要的血液细胞。已经从PMN，通过酸提取结合离子交换层析[Elsbach，生物化学杂志，254:11000(1979)]或大肠杆菌亲和层析[Weiss，等人，血液，69:652(1987)]中分离出人BPI蛋白质。本文将用这样的方法得到的BPI称为天然BPI，并且这样的BPI已经显示具有潜在的抗广谱革兰氏阴性细菌的杀菌活性。人BPI的分子量约为55,000道尔顿(55千道尔顿)。在Gray等人，生物化学杂志，264:9505(1989)的图1中已经报道了整个人BPI蛋白质的氨基酸序列和编码该蛋白质的DNA的核酸序列，该杂志引入本文作为参考。在本文的SEQ ID NO:1中列出了Gray等人的氨基酸序列。

BPI是强的阳离子蛋白质。BPI的N末端一半带高正静电荷；该分子的C末端一半带-3价的静电荷。[Elsbach和Weiss(1981)，出处同上]。分子量约为25千道尔顿的BPI的蛋白酶水解的N末端片段具有两亲性特征，含有交替疏水和亲水区域。这一人BPI的N-末端片段具有天然起源的55千道尔顿人BPI全蛋白质的抗菌效力。[Ooi等人，生物化学杂志，262:14891～14894(1987)]。与N末端部分相反，分离的人BPI蛋白质的C末端区域只展示了稍微可检测的抵抗革兰氏阴性微生物的抗细菌活性。[Ooi等人，实验方法杂志，174:649(1991)]。将分子量约为23千道尔顿的N末端BPI片段称为“rBPI₂₃”，该片段已经通过重组手段产生并保留了抵抗革兰氏阴性微生物的抗细菌活性。Gazzano-Santoro等人，免疫感染60:4754-4761(1992)。

已经有人报道BPI的杀菌作用对革兰氏阴性种类是高度特异的，例如，在Elsbach和Weiss，炎症：基本原理和临床关系中，Gallin等人编辑，第30章，Raven出版有限公司(1992)。我们确信这一报道的靶细胞特异性是脂多糖(LPS)强烈吸引BPI的结果，脂多糖是革兰氏阴性有机体的外膜(或包膜)独有的。虽然通常认为BPI对于其它微生物包括酵母和对于高等真核细胞是非毒性的，最近已经发现BPI蛋白质产物如下面定义，展示了抗革兰氏阳性细菌，支原体，分枝菌，真菌和原生动物的活性。[参见批准的，共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号08/372,783,1995年1月13日递交，该公开物引入本文作为参考；共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号08/626,646，该公开物引入本文作为参考；共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号08/372,105，该公开物引入本文作为参考；和共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号08/273,470，该公开物引入本文作为参考]。同时发现BPI蛋白质产物具有增强抗生素抵抗细菌的活性的能力。[参见美国专利号5,523,288，该公开物引入本文作为参考，和批准的，共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号08/372,783]。

BPI杀死革兰氏阴性细菌的准确机制还没有完全阐明，但可以确信BPI必定首先通过带阳离子的BPI蛋白质和LPS上的带负电位点之间的静电和疏水反应与细菌表面结合。有人将LPS称为“内毒素”，因为它刺激了潜在的炎症应答，即宿主炎症细胞释放的介体可能最终导致不可逆转的内毒素休克。BPI与脂A结合，脂A据报道是最具毒性的，是LPS中最具生物活性的成分。

在敏感的革兰氏阴性细菌中，认为BPI结合破坏LPS结构，导致细菌酶的活化，降解磷脂和肽聚糖，改变了细胞外膜的透性，和启动了最终导致细胞死亡的事件。[Elsbach和Weiss(1992)，出处同上]。可以认为BPI在两个时期起作用。第一个时期是亚致死时期，特征是即时生长停滞，外膜的透化和水解磷脂和肽聚糖的细菌酶的选择性活化。这一时期的细菌可以通过在血清白蛋白补充的培养基中生长而复原[Mannion等人，临床研究杂志，85:853-860(1990)]。第二个时期，由不能通过血清白蛋白逆转的生长抑制定义，发生在延长细菌与BPI的接触后，特征是大范围的生理和结构变化，包括明显地损坏细胞质内膜。

BPI与LPS最初的结合导致机体的变化，这可能是由于与LPS的阴离子基团结合，LPS通过结合Mg⁺⁺和Ca⁺⁺正常地固定了外膜。BPI附着于革兰氏阴性细菌的外膜使外膜对于疏水试剂如放线菌素D是快速可渗透的。BPI的结合和随后的革兰氏阴性细菌的杀死至少部分地依赖于LPS聚多糖链的长度，带有长的O链的“光滑”的有机体比带有短的O链的“粗糙”的有机体对BPI的杀菌作用更具抗性[Weiss等人，临床研究杂志，65:619-628(1980)]。BPI作用的第一个时期，革兰氏阴性细菌外膜的透化在BPI的解离基础上是可逆转的，BPI的解离是需要高浓度的二价阳离子和新LPS的合成的过程[Weiss等人，免疫学杂志132:3109-3115(1984)]。但是，革兰氏阴性细菌失去生活力是不能通过恢复外膜的完整性的过程逆转的，表明杀菌作用是通过在靶有机体中诱导的其它损害介导的，这种损害可能定位于细胞质膜(Mannion等人，临床研究杂志，86:631-641(1990))。对这一可能性的具体研究表明在摩尔基础上，BPI至少是如多粘菌素B一样的细胞质膜泡囊功能的抑制剂(In’t Veld等人，感染和免疫56:1203-1208(1988))，但是，准确的机制以及这样的泡囊与完整的有机体的研究的关系仍然没有阐明。

衣原体是非移动的，革兰氏阴性的，专性的细胞内细菌，具有一般的生物学特性，这些特性可以从系统发育上将它们与其它科的细菌区分开来。目前，将衣原体以它们自己的级别分类，衣原体目，衣原体科，具有一个属，衣原体属。[Schachter和Stamm，临床微生物手册，衣原体，669-677页，美国微生物协会，华盛顿，DC(1995)]。有四个种，砂眼衣原体，肺炎衣原体，鹦鹉热衣原体和猫心衣原体，它们能引起广谱的人类疾病。在发展中国家，砂眼衣原体引起砂眼，砂眼是世界范围的可预防的盲眼的主导原因。1.5亿以上的小孩患有活性砂眼，6百万以上的人目前由于这一疾病而盲眼。在工业化国家，砂眼衣原体是最流行的性传播疾病，引起尿道炎，子宫颈炎，副睾炎，异位妊娠和骨盆炎症。仅去年一年，估计3亿人得了性传播的衣原体感染。在美国每年250,000倒骨盆炎症疾病病例中，每年约25,000个妇女因此不育。从感染的母亲，在出生时得的新生儿砂眼衣原体感染每年引起成千上百的结膜炎，其中这些感染的婴儿约一半发展成肺炎。最近，有迹象表明肺炎衣原体是人流行性肺炎的通常原因。该属的成员不仅是重要的人致病原，而且在其它哺乳动物和鸟类中引起明显的发病。所以，衣原体在动物王国是最普遍存在的致病原之一[Zhang等人，细胞69:861-869(1992)]。

它们独特的发育周期将它们与所有其它微生物区别开来。它们是专性的细胞内寄生物，不能合成ATP，所以依赖于宿主细胞的能量生存。不象病毒，它们总是含有DNA和RNA，二均分裂，含有核糖体，可以合成蛋白质。衣原体具有在结构上与革兰氏阴性细菌相似的细胞壁，该属的所有成员携带独特的LPS状抗原，称为补体结合(CF)抗原，该抗原可能类似于某些革兰氏阴性细菌的LPS。[Schachter和Stamm，出处同上]。衣原体也携带主要的外膜蛋白质(MONMP)，该蛋白质含有种和亚种特异抗原。

衣原体的感染形式是原生小体(EB)，它通过附着于宿主细胞，并进入宿主起源的吞噬泡囊(核内体)感染哺乳动物细胞，在核内体中完成了整个生长周期。体内的靶宿主细胞通常是柱状上皮细胞，可以确信进入的主要方式是受体介导的包吞作用。一旦EB进入细胞，它再构成网状体(RB)，它比EB大，是代谢活性的，合成DNA,RNA和蛋白质。EB特别适合于细胞外生存，而代谢活性RB在宿主细胞外不能很好地生存，似乎是适合于细胞内环境。约8小时后，RB开始二均分裂。由于它们在宿主细胞的核内体中复制，它们形成光学显微镜能看到的特征性细胞内内含体。在生长和分裂时期后，RB再组织和凝聚，形成感染性EB。当发生宿主细胞溶解或衣原体包吐时，发育周期即完成。正如在细胞培养模型中研究的，完全的发育周期的时间长度是48到72小时，并随着感染菌株，宿主细胞和环境条件而变化[Beatty等人，微生物学综述58(4):686-699(1994)]。

已经证明，至少对于砂眼衣原体，衣原体有机体附着于宿主细胞是通过存在于衣原体表面上的类似硫酸肝素的葡糖胺聚糖(GAG)介导的。用纯化的肝素，硫酸肝素，或肝素受体类似物(如血小板因子4和血纤维凝聚素，已知两者都结合硫酸肝素)处理衣原体抑制衣原体附着和感染宿主细胞。利用非肝素GAG，如透明质酸，硫酸软骨素，或硫酸角蛋白没有看到抑制。利用类肝素酶处理砂眼衣原体使附着和感染降低90％以上；随后用外源硫酸肝素处理能够以依赖剂量的方式恢复处理的有机体附着于宿主细胞的能力。其它GAG如透明质酸，硫酸软骨素，或硫酸角蛋白不能恢复附着能力。这些资料表明类似硫酸肝素的GAG通过在宿主细胞表面和衣原体外膜表面桥接交互GAG受体介导衣原体附着于宿主细胞[Zhang等人，细胞，69:861-869(1992)]。

砂眼衣原体几乎唯一地是人致病原，导致砂眼，内含体结膜炎，毒性淋巴肉芽肿(LGV)，和生殖道疾病。[Schachter和Stamm，出处同上]。在这个种中，血清型A,B,Ba，和C与地方性砂眼，世界上最常见的可预防的盲眼形式相关。砂眼是结膜和角膜的慢性炎症，它不是性传播的。砂眼的潜在盲眼后遗症包括眼睑破坏，倒睫(睫毛方向颠倒)，和内翻(睑缘向内变形)。这些可以引起角膜溃疡，接着失去视力。砂眼衣原体的血清型L1,L2,和L3与LGV相关。未治疗的毒性淋巴肉芽肿通过三个时期发展，每个比前一时期更严重。如果存在，最初的损害出现在生殖器上。第二个时期是腹股沟淋巴结炎状态，特征是局部性淋巴结病，在这一时期，腹股沟淋巴结炎可能化脓并且发展成滴水瘘管。在第三个时期可能出现直肠狭窄和淋巴阻塞。毒性淋巴肉芽肿在热带或亚热带气候的发展中国家，特别是在社会经济较低的阶层是普遍的问题。

砂眼衣原体也是性传播疾病最普遍的动因。在男人中，血清型D到K是非淋菌尿道炎的主要可鉴定原因，它们也引起副睾炎，Reiter综合症，和直肠炎。在男人中单独由临床症状不容易鉴定衣原体感染，因为该感染可能是无症状的，并且因为其它致病原引起的症状可能与此相似。在一些人群中衣原体尿道炎的发生频率是淋菌尿道炎(淋病)的两倍，它的发病率在增加。甚至当显示存在淋病奈瑟氏球菌时，尿道炎可能是由于第二个有机体参与的双重或多重感染。在约25％的患有淋病的男人中有报道砂眼衣原体和淋病奈瑟氏球菌的共存的感染。副睾炎在男人中是最重要的衣原体尿道炎并发症。在美国的年轻男人中，砂眼衣原体导致每两例中一例的副睾炎，而不育是可能的结果。Reiter综合症是男性中另一种衣原体感染的现象。这是一种痛苦的全身性疾病，典型地包括尿道炎，结膜炎和关节炎的症状。迄今，尿道炎和关节炎是最常见的合并症；似乎是衣原体尿道感染可以引发关节炎。特别是在同性恋的男性中，砂眼衣原体同时可能引起直肠炎(肛门炎症)。

在妇女中，性传播的血清型衣原体感染导致子宫颈炎，尿道炎，子宫内膜炎，输卵管炎，和直肠炎；严重的输卵管炎后遗症包括管疼痛，不育，和异位妊娠。在妇女中，没有认识到的衣原体感染是常见的。约50％感染衣原体的妇女是无症状的。砂眼衣原体引起粘液脓性的子宫颈炎和尿道综合症，以及子宫内膜炎和输卵管炎。这些上生殖道衣原体感染可能引起不育或易感染成异位妊娠，并且是妇女中最严重的衣原体感染并发症。所有死亡的孕妇中10％是死于异位妊娠。砂眼衣原体引起30％以上的粘液脓性子宫颈炎病例。在患有淋球菌子宫颈炎的妇女中有一半以上同时患有衣原体感染。如果用青霉素治疗淋球菌感染，伴随的衣原体子宫颈炎仍然检测不到并得不到治疗，并且可能发展成骨盆炎症(输卵管炎)，可能导致不育和异位妊娠。砂眼衣原体是妇女中尿道综合症的起因。衣原体感染可能从子宫颈上升到子宫内膜，其中在尿道腔的上皮衬里中已经发现砂眼衣原体。估计约一半的患有子宫颈炎的妇女患有子宫内膜炎。输卵管炎是异位妊娠和不育的主要起因，是最严重的女性生殖道感染并发症。上腹部疼痛是肝周炎的主要症状。砂眼衣原体和淋病奈瑟氏球菌可以引起肝周炎。这一症状差不多只发生在妇女中，其中感染性有机体从发炎的输卵管传播到肝脏的表面。

感染了砂眼衣原体的妇女也可以当通过感染的产道时将疾病传给新生儿。这些新生儿最常见的是发展成内含体结膜炎或衣原体肺炎，但也可以发展成阴道，咽部，或肠道感染。虽然，没有盲眼，但如果不治疗，内含体结膜炎可以变成慢性，引起轻度疼痛和形成血管翳。在通过产道过程中，多达三分之二的从生殖道衣原体感染的母亲出生的婴儿将受到感染。在世界的一些地方，有十分之一之多的怀孕妇女患有衣原体子宫颈炎，因此新生儿的危险是相当大的。在感染的母亲出生的婴儿中有10％到20％发生衣原体肺炎。在出生的开始6个月中，砂眼衣原体是20％到60％的所有肺炎的成因。

砂眼衣原体菌株对四环素，大环内酯和磺胺的作用是敏感的，并在用碘染色的内含体液泡内产生糖原状物质。

鹦鹉热衣原体菌株感染许多鸟类和哺乳动物，导致这样的疾病如鹦鹉热，鸟疫，猫肺炎，和小牛流产。[Schachter和Stamm，出处同上]。鹦鹉热衣原体在鸟类中是普遍存在的，鸟类中的感染通常包括在肠道中。该有机体排出在排泄物中，污染环境，通过气雾传播。鹦鹉热衣原体也常见于家养的哺乳动物中。在世界的一些地方，这些感染具有重要的经济后果，如鹦鹉热衣原体是家养哺乳动物中许多全身性和导致虚弱的疾病的成因，最重要的是，可以导致流产。由这一菌株导致的人衣原体感染通常是由于与感染的鸟类接触，但也可以发生在与感染的家养哺乳动物接触后。这一菌种能抵抗磺胺的作用，产生不能用碘染色的内含物。

肺炎衣原体与其它物种的DNA相关性小于10％，具有梨形而不是圆形的原生小体(EB)。象砂眼衣原体一样，它只是人致病原，而没有动物储主。已经鉴定肺炎衣原体是各种呼吸道疾病的成因，遍布全世界[Schachter和Stamm，出处同上]。感染似乎通常是在儿童后期，青春期，和成年早期获得的，导致在30到40岁的人中40％到50％血清阳性率。感染的症状包括咽炎，支气管炎，和温性肺炎，传播主要是通过呼吸道分泌物。在血清流行病学研究中，这些感染已经与冠状动脉疾病相联系，它们在动脉粥样硬化中的作用目前正受到强烈的关注。

猫心衣原体作为致病原的作用还不清楚，需要专门的试剂对其进行鉴定。

初步分离衣原体的推荐方法是细胞培养。衣原体将生长在具胚的母鸡鸡蛋的蛋黄囊中，以及细胞培养物(有一些变异性)中。砂眼衣原体可以感染几个细胞系，如McCoy’s多倍体鼠细胞，HeLa 229细胞，BHK-21细胞，或L-929细胞。HL细胞和Hep-2细胞可能对肺炎衣原体的恢复更加敏感。最常用的技术包括将临床样品接种到环放线菌酮处理的McCoy细胞中。基本原理包括将接种物离心到细胞单层上，温育单层48到72小时，通过适当的免疫荧光，碘或Giemsa染色方法显示典型胞质内的内含体。细胞培养通常需要2到6天完成，因为需要温育时间。

通过直接的荧光抗体(DFA)测试，也可以检测样品中的衣原体，其中将载玻片与荧光素缀合的单克隆抗体一起温育，利用荧光显微镜检测发荧光的原生小体。当两个测试是在理想的条件下进行时，这一测试与细胞培养相比具有约80％到90％的敏感度和98％到99％的特异性[Schachter和Stamm，出处同上]。

利用酶免疫测定(EIA)方法，许多商业可得产品可以在临床样品中检测衣原体抗原。这些产品中的大多数可以检测衣原体LPS,LPS比MOMP更加可溶。没有确认，这些测试的特异性是97％[Schachter和Stamm，出处同上]。几个核酸探针也是商业可得的。一个商业可得探针测试(GenProbe)为了通过检测衣原体RNA增强敏感性利用了DNA-RNA杂交。

补体结合(CF)测试是最通常进行的血清测试，并且测量了补体结合抗体(针对CF群抗原的抗体)的血清水平。这在诊断鹦鹉热时是有用的，在这种病中，配对的急性和恢复期血清经常显示效价增加4倍或更高。对于许多肺炎衣原体感染似乎有同样的情况。这些感染中约50％是CF-阳性的，虽然这可能需要24个星期的时间检测血清转换。CF测试在诊断LGV中也可以是有用的，其中单点效价大于1∶64，大大支持了这一临床诊断。[Schachter和Stamm，出处同上]。在衣原体结膜炎或生殖道感染中没有发现高效价的补体结合抗体，所以，这些抗体对这些感染是不敏感的。

为了测量抗衣原体抗体，微量免疫荧光(micro-IF)方法是更加敏感的方法。这一间接荧光抗体技术利用了各个衣原体血清型感染可育的鸡胚的蛋黄囊制备的抗原。在制备的抗原中加入病人血清的系列稀释液，利用免疫荧光确定血液样品中抗体的水平。如果得到适当定时配对的血清，通过微量IF技术可以诊断砂眼，内含体结膜炎，和生殖道感染，但是该方法的临床用途是有限的，因为诊断需要证明在配对的样品中抗体效价变化了四倍或更高，并且因为患有表面性生殖道感染如尿道炎的病人可能没有效价的变化。但是，来自患有Reiter综合症的病人的单个血清样品中的高抗体效价和患有肺炎的婴儿的血清中的高IgM效价在确定诊断中是有用的。

在抗微生物敏感性的分布中菌株到菌株的变化和新获得的药物抗性在衣原体中是非常少见的。在药物中，体外抵抗砂眼衣原体，肺炎衣原体，和鹦鹉热衣原体活性最强的是四环素类，如四环素和强力霉素，大环内酯，如红霉素和阿齐红霉素，2-羟基喹啉，如环丙沙星和氧氟沙星，氯霉素，利福平，克林霉素和磺胺。四环素和大环内酯通常是治疗衣原体感染的主要依靠。[Schachter和Stamm，出处同上，Goodman和Gilman,治疗的药理学基础，第9版，McGraw-Hill，纽约，NY(1996)]。

对于衣原体感染，抗微生物敏感性测试是不经常进行的，但可以如下进行。在收获之前，用于测试的有机体在于无抗生素的培养基中培养的细胞中至少生长两代。然后，利用每微滴孔约100个内含体形成单位的调整接种物感染无抗生素的细胞单层。在将接种物离心到单层上后，可以马上或在后面24小时的各种时间间隔加入测试抗生素的系列稀释液。在48小时后，利用荧光素缀合的单克隆抗体鉴定最小抑制浓度(MIC)，即，抑制细胞内内含体形成的最高抗生素稀释液。通常也将单层破裂并进一步传代以确定最小杀菌浓度(MBC)，即，防止在传代中检测到存活的衣原体的抗生素的最高稀释液(MBC)。

发明概要

本发明提供了治疗患有衣原体感染的患者的方法，包括施用治疗有效量的BPI蛋白质产物。该治疗方法的基础是惊人地发现BPI蛋白质产物能够抑制衣原体的感染性和抑制确定的细胞内感染中衣原体的增殖。BPI蛋白质产物可以单独给药或与其它已知抗衣原体剂共同给药。当对患者进行辅助治疗时，施用BPI蛋白质产物可以减少有效治疗需要的非BPI抗衣原体剂的量，所以限制了潜在的毒性反应和/或治疗的高费用。施用BPI蛋白质产物也可以增强这样的药剂的作用，加速这样的剂的作用，或逆转衣原体对这样的药剂的抗性。

另外，本发明提供了杀死或抑制衣原体生长的方法，包括使衣原体与BPI蛋白质产物接触。该方法可以在体内或体外各种用途中实施，如用于清除液体和表面的污染，和灭菌外科和其它医疗器械和植入装置，包括假关节和埋藏侵入装置。

本发明的另一方面包括使用BPI蛋白质产物制造治疗衣原体感染的药物。除了BPI蛋白质产物，药物可以包括其它化学治疗剂如非BPI抗衣原体剂。

考虑了本发明下面的详细说明，本发明的许多其它的方面和优点对本领域技术人员来说将变得显而易见。下面的详细说明中叙述的是本发明优选的实施方案。

本发明的详细说明

本发明涉及的惊人发现是可以施用BPI蛋白质产物以治疗患有衣原体感染的患者，并提供预防性或治疗性治疗这样的感染的方法。出乎意料地，证明了BPI蛋白质产物具有抗衣原体活性，例如，由在宿主细胞中所看到的生殖体数目的减少所测得的。根据本发明，可以治疗各种衣原体感染，包括由砂眼衣原体，肺炎衣原体，鹦鹉热衣原体和猫心衣原体引起的感染。

如本文所用，术语“治疗”包括了预防性和治疗性治疗。

BPI蛋白质产物可以系统地或局部地给药。系统的给药途径包括口服，静脉内，肌肉内或皮下注射(包括长期释放的储藏体)，眼内或眼球后，膜内，腹膜内(例如，通过腹膜内灌洗)，利用气雾化或烟雾化药物的经肺，或经皮给药。局部途径包括以油膏剂，乳剂，凝胶，滴眼液或眼膏，滴耳液，栓剂如阴道栓剂，或冲洗液(如冲洗伤口)形式给药。

当肠胃外给药时，BPI蛋白质产物组合物通常以每天1微克/公斤到100毫克/公斤的剂量注射，优选地，剂量为每天0.1毫克/公斤到20毫克/公斤，更优选地，剂量为每天1到20毫克/公斤。可以连续输注或间隔注射或输注，或它们的联合连续地治疗，同时，只要治疗医师决定，可以减少或增加每天的剂量。当局部给药时，BPI蛋白质产物组合物通常应用的单位剂量范围是1微克/毫升到1克/毫升，优选地，剂量范围为1微克/毫升到100微克/毫升。本领域技术人员可以容易地使BPI蛋白质产物和/或其它抗衣原体剂的有效剂量和单一治疗或同时给药方案最佳化，正如由良好的医学实践和个别病人的临床症状决定的。

BPI蛋白质产物可以与目前已知有效的其它抗衣原体药物共同给药。用于这一目的优选的抗衣原体剂包括四环素，如四环素和强力霉素，大环内酯如红霉素和阿齐红霉素，2-羟基喹啉，如环丙沙星和氧氟沙星，氯霉素，利福平，克林霉素和磺胺。将BPI蛋白质产物与抗衣原体药物同时给药可以期望提高抗衣原体剂的治疗有效性。这可以通过减少根除或抑制衣原体生长如复制所需要的抗衣原体药物的浓度进行。由于一些药剂的使用受到它们的系统毒性或惊人的费用的限制，降低治疗有效性所需要的抗衣原体剂的浓度可减少治疗的毒性和/或费用，从而可以广泛地使用该药剂。BPI蛋白质产物和另一种抗衣原体剂同时给药可以产生比其中的药剂单个获得的杀菌或制菌作用更快速或更完全。BPI蛋白质产物的给药可以逆转衣原体对抗衣原体剂的抗性。BPI蛋白质产物的给药也可以将制菌剂转变成杀菌剂。

本发明的优点是BPI蛋白质产物抵抗各种有机体的广谱活性，和使用BPI蛋白质产物作为辅助治疗可以增强抗生素的活性使BPI蛋白质产物成为治疗衣原体和另一个有机体如革兰氏阴性细菌淋病奈瑟氏球菌的双重或多重感染的良好选择。所以，BPI蛋白质产物尤其可以用于抑制性传播疾病的传播，这种疾病经常包括淋球菌/衣原体双重感染。因此，应该考虑的是将BPI蛋白质产物掺入避孕组合物和装置中，例如包括在杀精子的乳剂或凝胶中，或包衣在避孕套的表面上。

另一个优点是能够治疗已经获得对已知抗衣原体剂抗性的衣原体。BPI与具有不良副作用的抗衣原体剂的同时给药的另一个优点是能够减少有效治疗所需要的抗衣原体剂的量。本发明也可以提供生活质量的益处，由于，例如，缩短了治疗的持续时间，减少了在特护单位中的停留时间或减少了整个住院的时间，并且伴随着严重的医院(医院获得的)感染的危险的降低。

如本文所用，“同时给药”包括将药物一起，或相互有前后给药。BPI蛋白质产物和抗衣原体剂可以通过不同途径给药。例如，当抗衣原体剂肌肉内，静脉内，皮下，口服或腹膜内给药时，BPI蛋白质产物可以静脉内给药。可选择地，当抗衣原体剂腹膜内或静脉内给药时，BPI蛋白质产物可以腹膜内给药，或者，当抗衣原体剂例如静脉内给药时，BPI蛋白质产物可以以气雾剂或烟雾剂形式给药。BPI蛋白质产物和抗衣原体药物可以都静脉内给药。BPI蛋白质产物和抗衣原体剂可以在同一静脉线中，在间隔注射后连续给药，或在不同静脉线中给药。BPI蛋白质产物和抗衣原体剂可以同时或顺序给药，只要它们的给药方式足以允许两种药物在感染部位达到有效浓度。

BPI蛋白质产物和抗生素的同时给药可以期望提供更有效的衣原体感染的治疗方法。两种药剂的同时给药可以在体内提供比两种药剂单个给药更大的治疗效果。例如，同时给药可以允许减少一种或两种药物的剂量，而获得同样的治疗效果。可选择地，同时给药可以产生比任一药物单独获得的更快速或更完全的杀菌/制菌效果。

治疗有效性的基础是成功的临床后果，不需要抗衣原体药剂杀死100％的参与感染的有机体。成功取决于在感染部位获得一定水平的抗衣原体活性，该活性足够以有利于宿主的方式抑制衣原体。当宿主防御是最有效的时候，所需要的抗衣原体作用可能是最小的。使有机体负载降低甚至1个log(10倍)就能使宿主自身的防御控制感染。另外，增强早期杀菌/制菌作用可能比长期杀菌/制菌作用更重要。这些早期的事件是成功治疗的重要和关键部分，因为它们为宿主防御机制的活化提供了时间。

可以认为BPI蛋白质产物与存在于全血或血清中的各种宿主防御成分，包括补体，p15和LBP，和免疫系统的其它细胞和成分相互作用。这样的相互作用可以导致增强BPI蛋白质产物的活性。由于这些相互作用，BPI蛋白质产物可以期望在体内发挥比体外更大的活性。所以，体外测试预示着有体内用途，但缺乏体外活性并不一定表示缺乏体内活性。例如，已经观察到BPI在全血或血浆测定中比利用常规介质的测定中显示对革兰氏阴性细菌更大的杀菌作用。[Weiss等人，临床研究杂志，90:1120-1130(1992)]。这可能是因为在体外的常规系统中缺乏促进或增强体内BPI功能的血液成分，或者因为常规介质含有比生理浓度更高浓度的镁和钙，镁和钙通常是BPI蛋白质产物活性的抑制剂。另外，在宿主中，BPI蛋白质产物可用于抑制革兰氏阴性细菌的转移和伴随着的内毒素的释放，这是体外测试中没有看到或预示的另一个临床优点。

同时受到关注的是BPI蛋白质产物与其它增强BPI蛋白质产物活性，包括BPI蛋白质产物的抗衣原体活性的产物一起给药。例如，血清补体增强BPI蛋白质产物杀死革兰氏阴性细菌的活性；BPI蛋白质产物与血清补体组合提供了协同杀菌/抑制生长作用。参见例如，Ooi等人，生物化学杂志，265:15956(1990)和Levy等人，生物化学杂志，268:6038-6083(1993)，他们报道了天然存在的15千道尔顿的蛋白质增强了BPI抗菌活性。同时参见1994年7月13日递交的共同拥有的，共同未决的PCT申请号US94/07834，该申请对应于作为1993年7月14日递交的美国专利申请系列号08/093,201的部分继续申请的1994年7月11日递交的美国专利申请系列号08/274,303。这些申请都引入本文作为参考，它们叙述了通过施用脂多糖结合蛋白质(LBP)和LBP蛋白质产物增强BPI蛋白质产物的杀死革兰氏阴性细菌的活性的方法。1994年6月17日递交的PCT申请号US94/06931中叙述了缺乏CD-14免疫刺激特性的LBP蛋白质衍生物和衍生物杂合体，该申请对应于1994年6月17日递交的共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号08/261,660，该申请系列号是1993年6月17日递交的美国专利申请系列号08/079,510的部分继续申请，所有这些公开物都引入本文作为参考。同时观察到的是泊咯沙姆表面活性剂增强了BPI蛋白质产物的抗菌活性，如Lambert 1996年1月12日递交的美国申请系列号08/586,133中所述，该申请系列号是1995年9月19日递交的美国专利申请系列号08/530,599的部分继续申请，上面申请是1995年1月13日递交的美国申请系列号08/372,104的部分继续申请，所有这些都对应于PCT申请号PCT/US96/01095；泊咯沙姆表面活性剂也可以增强抗衣原体剂的活性。

另外，本发明提供了杀死或抑制衣原体生长的方法，包括将衣原体与BPI蛋白质产物接触。这一方法可以在体内或在各种体外用途中实施，如对液体和表面去污染，或者灭菌外科和其它医疗器械和移植装置，包括假体和子宫内装置。这些方法也可以用于原位灭菌埋藏侵入装置，如静脉内线和导管，它们经常是感染的焦点。

本发明的其它方面包括利用BPI蛋白质产物制造治疗衣原体感染的药物，该药物除了BPI蛋白质产物，可以包括其它化学治疗剂如抗衣原体剂。有选择地，该药剂可以包括药物可接受的稀释剂，佐药或载体。

如本文所用，“BPI蛋白质产物”包括天然和重组产生的BPI蛋白质；天然，合成和重组生物学活性BPI蛋白质多肽片段；BPI蛋白质的生物学活性多肽变异体或其片段，包括杂合融合蛋白质和二聚体；BPI蛋白质的生物学活性多肽类似物或其片段或变异体，包括半胱氨酸取代类似物；和BPI起源的肽。根据本发明给药的BPI蛋白质产物可以通过本领域已知的任何方法产生和/或分离。引入本文作为参考的美国专利号5,198,541公开了编码包括重组BPI全蛋白的BPI蛋白质的重组基因和表达的方法，该重组BPI全蛋白产物称为rBPI和BPI的重组片段。共同拥有，共同未决的1993年5月19日递交的美国专利申请系列号07/885,501和其部分继续申请，1993年5月19日递交的美国专利申请系列号08/072,063，和1993年5月19日递交的相应的PCT申请号93/04752,上面全部引入本文作为参考，公开了纯化重组BPI蛋白质产物的新方法，该蛋白质产物是在培养物中的遗传转化哺乳动物宿主细胞中表达并从其中分泌的，并且公开了怎样生产大量的适于掺入稳定的，均一的药物制剂的重组BPI产物。

BPI的生物活性片段(BPI片段)含有生物活性分子，该分子具有与天然的人BPI全蛋白相同或相似的氨基酸序列，除了该片段分子缺乏全蛋白的氨基末端的氨基酸，内部氨基酸和/或羧基末端的氨基酸。这样的片段的非局限性的例子包括约25千道尔顿的天然人BPI的N末端片段，这在Ooi等人，实验方法杂志，174:649(1991)中有叙述，和编码天然人BPI的1到约193到199的N末端氨基酸的DNA的重组表达产物，这在Gazzano-Santoro等人，免疫感染60:4754-4761(1992)中有叙述，并称为rBPI₂₃。在该公开物中，将表达载体用作编码重组表达产物(rBPI₂₃)的DNA的来源，该表达产物具有31个残基的信号序列和成熟人BPI的N末端的开始199个氨基酸，正如Gray等人的图1中阐述，出处同上，除了位置151的缬氨酸由GTG而不是GTC规定，和残基185是谷氨酸(由GAG规定)而不是赖氨酸(由AAG规定)。重组全蛋白(rBPI)也已经产生，具有Gray等人的图1中阐述的序列(SEQ ID NOS:145和146)，出处同上，除了对于rBPI₂₃所提到的情况，并且除了残基417时丙氨酸(由GCT规定)而不是缬氨酸(由GTT规定)。其它例子包括BPI片段的二聚体形式，正如共同拥有和共同未决的1994年3月11日递交的美国专利申请系列号08/212,132，和相应的PCT申请号PCT/US95/03125中所述，上面的公开物全部引入本文作为参考。优选的二聚体产物包括二聚体BPI蛋白质产物，其中单体是具有从BPI全蛋白的约1到175到约1到199的N末端的残基的氨基末端的BPI片段。特别优选的二聚体产物是BPI片段的二聚体形式，该片段具有1到193个N-末端残基，命名为rBPI₄₂二聚体。

BPI的生物学活性变异体(BPI变异体)包括但不限于重组杂合融合蛋白，包括BPI全蛋白或其生物活性片段，和至少一个其它多肽的至少一部分，和BPI变异体的二聚体形式。这样的杂合融合蛋白和二聚体形式的例子，Theofan等人在共同拥有，共同未决的美国专利申请系列号07/885,911和其部分继续申请，1993年5月19日递交的美国专利申请系列号08/064,693和1993年5月19日递交的相应的PCT申请号US93/04754中叙述了，上面全部引入本文作为参考。BPI的生物活性变异体也包括杂合融合蛋白，该蛋白含有在氨基末端的BPI蛋白质或其生物活性片段，和在羧基末端的免疫球蛋白重链或其等位变异体的至少一个恒定区。

BPI的生物活性类似物(BPI类似物)包括但不限于BPI蛋白质产物，其中一个或多个氨基酸残基已经被不同的氨基酸置换。例如，共同拥有，共同未决的1993年2月2日递交的美国专利申请系列号08/013,801和1994年2月2日递交的相应的PCT申请号US94/01235，上面全部引入本文作为参考，公开了BPI和BPI片段的多肽类似物，其中不同的氨基酸替代了半胱氨酸残基。本申请叙述的稳定的BPI蛋白质产物是编码BPI全蛋白的N末端氨基酸的氨基酸1到约193或199的DNA的表达产物，但其中在残基号132的半胱氨酸被丙氨酸取代了，该表达产物命名为rBPI₂₁Δcys或rBPI₂₁。其它例子包括BPI类似物的二聚体形式；例如共同拥有和共同未决的1994年3月11日递交的美国专利申请系列号08/212,132，和相应的PCT申请号PCT/US95/03125，上面的公开物引入本文作为参考。

在本发明的方法中有用的其它BPI蛋白质产物是起源于或基于由重组或合成手段产生的BPI的肽(BPI起源的肽)，如共同拥有和共同未决的1994年9月15日递交的PCT申请号US94/10427中叙述的那些，该申请对应于1994年9月15日递交的美国专利申请系列号08/306,473和1994年3月11日递交的PCT申请号US94/02465，该申请对应于1994年3月11日递交的美国专利申请系列号08/209,762，它是1994年1月14日递交的美国专利申请系列号08/183,222的部分继续申请，上面的申请是1993年7月15日递交的美国专利申请系列号08/093,202的部分继续申请(它对应的国际申请是1994年3月11日递交的PCT申请号US94/02401)，上面是1993年3月12日递交的美国专利申请系列号08/030,644的部分继续申请，上面所有的公开物引入本文作为参考。

目前，优选的BPI蛋白质产物包括BPI的重组生产的N末端片段，特别是那些分子量约为21到25千道尔顿的，如rBPI₂₁或rBPI₂₃，或这些N末端片段的二聚体形式(例如，rBPI₄₂二聚体)。另外，优选的BPI蛋白质产物包括rBPI和起源于BPI的肽。

优选地利用含有BPI蛋白质产物和药物上可接受的稀释剂，佐药，或载体的药物组合物进行BPI蛋白质产物的给药。BPI蛋白质产物可能含有或与已知表面活性剂，其它化学治疗剂，或其它已知的抗衣原体剂共同给药。含有BPI蛋白质产物(例如，rBPI,rBPI₂₃)的稳定的药物组合物含有的BPI蛋白质产物在含有0.1％(重量)的泊咯沙姆(Pluronic F-68,BASF Wyandotte,Parsippany,NJ)和0.002％(重量)的聚山梨酸酯80(Tween80,ICI美国公司，Wilmington,DE)的柠檬酸盐缓冲盐水(5或20毫摩尔柠檬酸盐，150毫摩尔NaCl,pH5.0)中的浓度为1毫克/毫升。另一种含有BPI蛋白质产物的稳定的药物组合物含有的BPI蛋白质产物在5毫摩尔柠檬酸盐，150毫摩尔NaCl,0.2％泊咯沙姆和0.002％聚山梨酸酯80中的浓度为2毫克/毫升。这样的优选的组合在共同拥有，共同未决的1994年2月2日递交的PCT申请号US94/01239，该申请对应于1994年2月2日递交的美国专利申请系列号08/190,869和1993年2月2日递交的美国专利申请系列号08/012,360中有所叙述，上面所有公开物引入本文作为参考。

本发明的其它方面和优点在考虑下面的说明性实施例后将得到理解。实施例1说明了使用BPI蛋白质产物抑制衣原体对宿主细胞的感染，这时该蛋白质产物是在衣原体攻击的同时给药的。实施例2说明了BPI蛋白质产物在衣原体感染的宿主细胞中抗衣原体的活性。

实施例1

利用BPI蛋白质产物抑制衣原体对宿主细胞的感染A．制备衣原体储备物

如下制备砂眼衣原体(Ct)血清变型L2储备物。在含有1％丙酮酸钠(S-8636，西格玛)和10％胎牛血清(FBS,A115-L,Hyclone,Logan,VT)的生长培养基(Eagles培养基营养混合物(MEM),M-3786，西格玛，圣路易斯，MO)中过夜培养McCoy细胞(ATCC登记号，CRL1696)。抽吸培养基，快速融化Ct的小瓶，与30毫升Dulbecco的磷酸盐缓冲盐水(PBS,西格玛)和7％蔗糖(DPBS-7)混合。在每个3T150烧瓶中加入10毫升悬浮液，在37℃温育烧瓶，在接着的2小时中定期振摇烧瓶，从而均匀分配接种物。从烧瓶中吸出DPBS-7，在每个烧瓶中加入50毫升生长培养基。在37℃,5％CO₂中温育3天后，如下收集Ct。从烧瓶中吸出生长培养基，在烧瓶中加入玻璃珠到约0.25英寸的深度。在每个烧瓶中加入10毫升Eagles MEM(没有FBS)，在单层上振摇小珠直到所有的细胞都移动。在50毫升的有螺旋帽的离心管中收集小珠和细胞碎片，用PBS洗涤烧瓶两次，洗液加入小珠悬浮液。将每个管置于冰上，超声波处理60秒破碎细胞。在低速(约800rpm)下离心破碎细胞/小珠悬浮液。移走上清液并收集于250毫升聚碳酸酯离心瓶中，然后在高速(约25,000×g)下离心1小时。将沉淀通过#16计量的针头和注射器重复抽吸再悬浮于FBS(40毫升)中。在NUNC^(Naperville,IL)低温小瓶中分配1毫升的等分试样，并在-70℃下冷冻。B．衣原体储备物的滴定

如上面部分A中所述制备的三个小瓶的Ct储备物在37℃快速融化，在Eagles MEM或没有血清的DPBS-7中以10倍浓度系列稀释。制备具有盖玻片的24孔平板，每孔含有24小时的McCoy细胞单层。吸出培养基，用PBS洗涤孔一次，在McCoy细胞的一式四份的组中加入1毫升Eagles MEM或DPBS-7中的每种Ct稀释液。在37℃,5％CO₂中温育平板2小时，吸出培养基，加入2毫升生长培养基。然后在27℃,5％CO₂中再温育平板3天，在甲醇中固定，用FITC-标记的小鼠单克隆抗衣原体抗体(Syva MicroTrak^砂眼衣原体培养物确认测试)在潮湿的室中染色30分钟。将染色的盖玻片在水中洗涤，空气干燥，倒置于一滴显微镜固定液(50％甘油；50％PBS)中，并利用Leitz荧光显微镜，在25×的物镜(激发波长480纳米，发射波长520纳米)下观察。计数内含体，在Eagles MEM和DPBS-7中测试的10^-2到10^-7的浓度范围内中得到可比较的结果。10^-5储备制剂的稀释液给出100-300个内含体形成单位/毫升；选择这一稀释液用于利用这一Ct储备物的所有随后的研究。用于研究的其它培养基是Basal Medium Eagle(BME，西格玛)，Eagles MEM(E-MEM，西格玛)，含有HEPES的RPMI-1640(西格玛)，没有HEPES的RPMI-1640(西格玛)，F-12(Gibco)和Dulbecco改良的Eagle培养基营养混合物F-12 Ham(DMEM/F-12,Gibco)。选择没有FBS的DMEM/F-12用于随后的衣原体感染研究。选用没有FBS的培养基是因为在上面测试的培养基中加入10％的PBS抑制Ct对McCoy细胞的感染。C．在存在或缺乏BPI蛋白质产物时衣原体的感染

测试的PBI蛋白质产物是rBPI₂₁[2毫克/毫升于含有0.2％PLURONIC^P123(BASF Wyandotte,Parsippany,NJ),0.002％聚山梨酸酯89(Tween^80,ICI美国公司，Wilmington,DE)和0.05％EDTA的5毫摩尔柠檬酸钠，150毫摩尔氯化钠，pH5.0中]。将同等体积的配方缓冲液[含有0.2％PLURONIC^P123,0.002％聚山梨酸酯80和0.05％EDTA的5毫摩尔柠檬酸钠，150毫摩尔氯化钠，pH5.0]用作对照。利用DMEM/F-12(没有FBS)制备rBPI₂₁或配方缓冲液的系列稀释液，从而当将系列稀释液以9∶1的比例加入1ml的Ct储备液的10^-4稀释液中，Ct的最终浓度是Ct储备液的10^-5稀释液，rBPI₂₁的最终浓度是128,64,32,16和8微克/毫升。同时制备了可比较的(体积)配方缓冲液对照。将最后的悬浮液在37℃，在水浴中温育30分钟。

在24孔的组织培养平板(Corning#25820)中以2×10⁵个细胞/孔接种DMEM/F-12/10％FBS中的McCoy细胞，温育24小时，并抽吸培养基。在一式两份的孔中以每种rBPI₂₁浓度加入1毫升含有和没有BPI的Ct。在2500rpm下离心平板30分钟，在37℃，在5％CO₂中温育2小时，并抽吸孔。每个孔接收2毫升DMEM/F-12/10％FBS和1微克/毫升放线菌酮(西格玛)，将平板再温育3天。在除去培养基后，利用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤孔，空气干燥，用甲醇固定，用革兰氏碘染色。如上面的部分B所述，利用FITC标记的抗衣原体抗体可以选择性地染色细胞。

利用倒置显微镜，仔细观察100％的每个孔，检查内含体的存在，用革兰氏碘染成棕色的是由于生殖体产生的液泡中高浓度的糖原。下面的表1显示了结果。

表1

每个孔中内含体的数目

含有rBPI₂₁ 没有rBPI₂₁

(4个孔的平均值) (1个孔的值)128微克/毫升 0 11064微克/毫升 0 11532微克/毫升 0 11516微克/毫升 1.5 1148微克/毫升 59 124正对照 151(只有Ct)负对照(没有Ct) 0

来自三项研究之一的这些代表性结果表明rBPI₂₁可以抑制受纳细胞的感染。

实施例2

抵抗衣原体感染的宿主细胞的BPI蛋白质产物的抗衣原体活性

将如实施例1所述制备的砂眼衣原体(Ct)血清变型L2储备物利用含有10％胎牛血清(FBS)的Dulbecco改良的Eagles培养基营养混合物F-12Ham(DMEM/F-12)稀释到10^-5。

在24孔的组织培养平板(Corning#25820)中以1×10⁵个细胞/孔接种DMEM/F-12/10％FBS中的McCoy细胞，温育24小时，抽吸培养基。在四个平板的每个孔中加入Ct(1毫升10^-5储备物)，除了各个平板的2个负对照孔。在2500rpm下离心平板30分钟，在37℃,5％CO₂中温育24小时，抽吸孔。

如实施例1中所述将rBPI₂₁稀释到最终浓度为在DMEM/F-12中128,64,32,16和8微克/毫升，在每个平板的适当重复孔中加入1.0毫升上面的稀释液。可比较的配方缓冲液对照如实施例1中所述同时制备。将平板温育2小时，在所有的孔中加入1毫升DMEM/F-12/20％FBS和2微克/毫升放线菌酮，导致rBPI₂₁的浓度降低2倍。再温育平板长达5天。

在24,48,72和120小时时，从一个平板中除去培养基，利用PBS洗涤孔，空气干燥，利用甲醇固定，利用革兰氏碘染色。利用倒置显微镜，仔细观察100％的各个孔，检查内含体的存在。下面的表2显示了结果。

表2起始rBPI₂₁浓度^* 每个孔中内含体的数目

24小时 48小时 72小时

0 285.5 398 335.75

8 194.5 180 108

16 138 140.5 109.5

32 112.5 95 57.5

64 119.5 81 39

128 113 77.5 5

*这一起始浓度，存在于温育的开始2小时，在5天温育的余下的时间中降低到起始值的一半。

来自两项研究之一的这些代表性的结果表明起始浓度为16微克/毫升到128微克/毫升的rBPI21能够减少Ct感染的细胞中细胞内内含体的数目，这是在Ct攻击后24小时给药的。

考虑了前面对目前优选的实施方案的叙述后，本领域技术人员可以预期在本发明的实践中可以有许多修改和变化。结果，可以对本发明的范围构成限制的仅仅是附加的权利要求。

序列表(1)一般信息：

(Ⅰ)申请人：XOMA公司

(ⅱ)发明名称：抗衣原体的方法和材料

(ⅲ)序列数目：2

(ⅳ)收信人地址：

(A)收信人：Marshall,O’Toole,Gerstein,Murray&Borun

(B)街道：南Wacker大道233号，Sears大楼6300

(C)城市：芝加哥

(D)州：伊利诺斯

(E)国家：美国

(F)邮编：60606-6402

(ⅴ)计算机可读形式：

(A)介质类型：软盘

(B)计算机：IBM PC兼容机

(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

(D)软件：PatentIn Release#1.0,#1.25版

(ⅵ)目前的申请资料：

(A)申请号：

(B)递交日期：

(C)分类：

(ⅶ)在先的申请资料：

(A)申请号：

(B)递交日期：

(C)分类：

(ⅷ)律师/代理人信息：

(A)姓名：Borun,Michael F.

(B)登记号：25,447

(C)参考/档案号：27129/33433

(ⅸ)电信资料：

(A)电话：312/474-6300

(B)传真：312/474-0448

(C)电传：(2)SEQ ID NO:1的信息：

(Ⅰ)序列特征：

(A)长度：1813碱基对

(B)类型：核酸

(C)链数：单链

(D)几何结构：线性

(ⅱ)分子类型：cDNA

(ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)定位：31..1491

(ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：mat-肽

(B)定位：124..1491

(ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：misc-特征

(D)其它信息：“rBPI”

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:1:CAGGCCTTGA GGTTTTGGCA GCTCTGGAGG ATG AGA GAG AAC ATG GCC AGG GGC 54

Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly

-31 -30 -25CCT TGC AAC GCG CCG AGA TGG GTG TCC CTG ATG GTG CTC GTC GCC ATA 102Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile

-20 -15 -10GGC ACC GCC GTG ACA GCG GCC GTC AAC CCT GGC GTC GTG GTC AGG ATC 150Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile

-5 1 5TCC CAG AAG GGC CTG GAC TAC GCC AGC CAG CAG GGG ACG GCC GCT CTG 198Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu10 15 20 25CAG AAG GAG CTG AAG AGG ATC AAG ATT CCT GAC TAC TCA GAC AGC TTT 246Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe

30 35 40AAG ATC AAG CAT CTT GGG AAG GGG CAT TAT AGC TTC TAC AGC ATG GAC 294Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp

45 50 55ATC CGT GAA TTC CAG CTT CCC AGT TCC CAG ATA AGC ATG GTG CCC AAT 342Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn

60 65 70GTG GGC CTT AAG TTC TCC ATC AGC AAC GCC AAT ATC AAG ATC AGC GGG 390Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly

75 80 85AAA TGG AAG GCA CAA AAG AGA TTC TTA AAA ATG AGC GGC AAT TTT GAC 438Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp90 95 100 105CTG AGC ATA GAA GGC ATG TCC ATT TCG GCT GAT CTG AAG CTG GGC AGT 486Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser

110 115 120AAC CCC ACG TCA GGC AAG CCC ACC ATC ACC TGC TCC AGC TGC AGC AGC 534Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser

125 130 135CAC ATC AAC AGT GTC CAC GTG CAC ATC TCA AAG AGC AAA GTC GGG TGG 582His Ile Asn Ser Val His Val His Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp

140 145 150CTG ATC CAA CTC TTC CAC AAA AAA ATT GAG TCT GCG CTT CGA AAC AAG 630Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys

155 160 165ATG AAC AGC CAG GTC TGC GAG AAA GTG ACC AAT TCT GTA TCC TCC AAG 678Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys170 175 180 185CTG CAA CCT TAT TTC CAG ACT CTG CCA GTA ATG ACC AAA ATA GAT TCT 726Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser

190 195 200GTG GCT GGA ATC AAC TAT GGT CTG GTG GCA CCT CCA GCA ACC ACG GCT 774Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala

205 210 215GAG ACC CTG GAT GTA CAG ATG AAG GGG GAG TTT TAC AGT GAG AAC CAC 822Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His

220 225 230CAC AAT CCA CCT CCC TTT GCT CCA CCA GTG ATG GAG TTT CCC GCT GCC 870His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala

235 240 245CAT GAC CGC ATG GTA TAC CTG GGC CTC TCA GAC TAC TTC TTC AAC ACA 918His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr250 255 260 265GCC GGG CTT GTA TAC CAA GAG GCT GGG GTC TTG AAG ATG ACC CTT AGA 966Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg

270 275 280GAT GAC ATG ATT CCA AAG GAG TCC AAA TTT CGA CTG ACA ACC AAG TTC 1014Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe

285 290 295TTT GGA ACC TTC CTA CCT GAG GTG GCC AAG AAG TTT CCC AAC ATG AAG 1062Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys

300 305 310ATA CAG ATC CAT GTC TCA GCC TCC ACC CCG CCA CAC CTG TCT GTG CAG 1110Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln

315 320 325CCC ACC GGC CTT ACC TTC TAC CCT GCC GTG GAT GTC CAG GCC TTT GCC 1158Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala330 335 340 345GTC CTC CCC AAC TCC TCC CTG GCT TCC CTC TTC CTG ATT GGC ATG CAC 1206Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His

350 355 360ACA ACT GGT TCC ATG GAG GTC AGC GCC GAG TCC AAC AGG CTT GTT GGA 1254Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly

365 370 375GAG CTC AAG CTG GAT AGG CTG CTC CTG GAA CTG AAG CAC TCA AAT ATT 1302Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile

380 385 390GGC CCC TTC CCG GTT GAA TTG CTG CAG GAT ATC ATG AAC TAC ATT GTA 1350Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val

395 400 405CCC ATT CTT GTG CTG CCC AGG GTT AAC GAG AAA CTA CAG AAA GGC TTC 1398Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe410 415 420 425CCT CTC CCG ACG CCG GCC AGA GTC CAG CTC TAC AAC GTA GTG CTT CAG 1446Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln

430 435 440CCT CAC CAG AAC TTC CTG CTG TTC GGT GCA GAC GTT GTC TAT AAA 1491Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys

445 450 455TGAAGGCACC AGGGGTGCCG GGGGCTGTCA GCCGCACCTG TTCCTGATGG GCTGTGGGGC 1551ACCGGCTGCC TTTCCCCAGG GAATCCTCTC CAGATCTTAA CCAAGAGCCC CTTGCAAACT 1611TCTTCGACTC AGATTCAGAA ATGATCTAAA CACGAGGAAA CATTATTCAT TGGAAAAGTG 1671CATGGTGTGT ATTTTAGGGA TTATGAGCTT CTTTCAAGGG CTAAGGCTGC AGAGATATTT 1731CCTCCAGGAA TCGTGTTTCA ATTGTAACCA AGAAATTTCC ATTTGTGCTT CATGAAAAAA 1791AACTTCTGGT TTTTTTCATG TG 1813(2)SEQ ID NO:2的信息：

(Ⅰ)序列特征：

(A)长度：487个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)几何结构：线性

(ⅱ)分子类型：蛋白质

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:2:Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val-31 -30 -25 -20Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val-15 -10 -5 1Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala

5 10 15Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys

20 25 30Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly

35 40 45His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser50 55 60 65Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser

70 75 80Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe

85 90 95Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile

100 105 110Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr

115 120 125Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser His Ile Asn ser Val His Val His130 135 140 145Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys

150 155 160Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys

165 170 175Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu

180 185 190Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu

195 200 205Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys210 215 220 225Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro

230 235 240Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly

245 250 255Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala

260 265 270Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser

275 280 285Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val290 295 300 305Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser

310 315 320Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro

325 330 335Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala

340 345 350Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser

355 360 365Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu370 375 380 385Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu

390 395 400Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val

405 410 415Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val

420 425 430Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe

435 440 445Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys450 455

Claims

1．治疗衣原体感染的方法，包括给遭受衣原体感染的患者施用治疗有效量的杀菌/增强透性(BPI)蛋白质产物。

2．根据权利要求1所述的方法，其中BPI蛋白质产物是BPI的N末端片段或其二聚体形式。

3．根据权利要求2所述的方法，其中N末端片段具有的分子量约为21千道尔顿到25千道尔顿。

4．根据权利要求1所述的方法，其中BPI蛋白质产物是BPI全蛋白，rBPI₂₃或rBPI₂₁。

5．根据权利要求1所述的方法，其中BPI蛋白质产物以1微克/公斤到100毫克/公斤每天的剂量口服或肠胃外给药。

6．根据权利要求1所述的方法，其中BPI蛋白质产物以1微克/毫升到1克/毫升的单位剂量局部给药。

7．根据权利要求1所述的方法，其中衣原体感染包括选自包括砂眼衣原体，肺炎衣原体，鹦鹉热衣原体和猫心衣原体的组中的衣原体种类。

8．根据权利要求6所述的方法，其中衣原体种类是砂眼衣原体。

9．根据权利要求1所述的方法，包括施用非BPI抗衣原体剂的附加步骤。

10．杀死或抑制衣原体复制的方法，包括使衣原体与杀菌/增强透性(BPI)蛋白质产物接触。

11．根据权利要求10所述的方法，进一步包括使衣原体种类与非BPI抗衣原体剂接触。