CN1191861C - 含有抗Fas抗体的药物组合物 - Google Patents

含有抗Fas抗体的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN1191861C
CN1191861C CNB008107807A CN00810780A CN1191861C CN 1191861 C CN1191861 C CN 1191861C CN B008107807 A CNB008107807 A CN B008107807A CN 00810780 A CN00810780 A CN 00810780A CN 1191861 C CN1191861 C CN 1191861C
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
diaminourea
pyrimidine
apoptosis
glutamic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB008107807A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1364090A (zh
Inventor
芹泽伸记
市川公久
好田宏子
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sankyo Co Ltd
Original Assignee
Sankyo Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co Ltd filed Critical Sankyo Co Ltd
Publication of CN1364090A publication Critical patent/CN1364090A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1191861C publication Critical patent/CN1191861C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/20—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups containing any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom, e.g. acylguanidines
    • C07C279/24—Y being a hetero atom
    • C07C279/26—X and Y being nitrogen atoms, i.e. biguanides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
    • C07D475/06—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with a nitrogen atom directly attached in position 4
    • C07D475/08—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with a nitrogen atom directly attached in position 4 with a nitrogen atom directly attached in position 2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Abstract

本发明提供作为自身免疫疾病或类风湿性关节炎的预防或治疗剂有用的含抗Fas抗体的新型药物组合物。具体而言，本发明提供含有具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体和具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物作为有效成分的药物组合物。根据本发明，由于可降低含有抗Fas抗体的自身免疫疾病和类风湿性关节炎的预防或治疗剂中抗Fas抗体的使用量，因此可降低由于患者体内表达针对抗Fas抗体的抗体而表现耐受性的可能性，进而可提供可经受长时间施用的优异的预防或治疗剂。

Description

含有抗Fas抗体的药物组合物
技术领域
本发明涉及自身免疫疾病或类风湿性关节炎的预防或治疗中有效的新型药物组合物。
背景技术
生物体内因正常细胞世代交替引起的生理性细胞死亡称为细胞凋亡(apoptosis)，这有别于病理性细胞死亡的坏死(necrosis)(参照Kerr，et a1.(1972)Br.J.Cancer 26，239)。程序性细胞死亡是在生物体内某种细胞发生的预先程序化的细胞主动死亡过程，细胞凋亡也属于其中一种。细胞凋亡过程中可以特征性地观察到细胞表面的弯曲、核染色质的凝聚、染色体DNA的片断化等现象。
细胞凋亡在淋巴细胞(T细胞和B细胞)的分化过程中起到了排除识别自身抗原的细胞的作用。自身免疫疾病的起因被认为是淋巴细胞分化过程中细胞凋亡功能不全、并由此生成自身反应性淋巴细胞而引起的(参照中山敬一等，(1995)Mebio 12(10)，79-86)。
参与这种细胞凋亡过程的分子已鉴定出多种，包括Fas(参照Yonehara，s.et al.(1989)J.Exp.Med.169，1747-1756)，肿瘤坏死因子受体(Tumor Necrosis Factor Receptor)(参照Loetscher，H.et al.(1990)Cell 61，351-359)，CD40(参照Tsubata，T.et al.(1993)Nature 364，645-648)，穿孔素/粒酶A(参照Jenne，D.E.et al.(1988)Immunol.Rev.103，53-57)等。Fas为存在于细胞表面的跨膜蛋白质，其细胞外区域与称为“Fas配体”的蛋白质结合时则可诱导该细胞的细胞凋亡。
已有报道称，抗Fas单克隆抗体中存在着与Fas配体同样可诱导细胞凋亡的、具有细胞毒性的物质，因此可作为自身免疫疾病、AIDS及肿瘤的治疗剂(参照特开平2-237935号及特表平5-503281号)。
另一方面，风湿、特别是类风湿性关节炎是伴随着由内因及外因引起的种种免疫学异常，以滑膜细胞的增殖为基础病变的疾病，并被认为是伴随着炎症性细胞浸润及骨的侵蚀的滑膜细胞的增殖损伤。类风湿性关节炎中的以患病关节为中心的组织破坏，其成因被认为是由炎症性滑膜细胞的细胞因子生成异常导致的。在调查风湿患者的关节的状态时，可观察到滑膜细胞的异常增殖、滑膜绒毛的增生和滑膜细胞的多层化等(参照Daniel J.McCarty(1985)in“Arthritis andallied conditions，A textbook of rheumatology”10th Edition，Lea & Febiger)。目前实施的风湿的药物疗法中，主要采用的是类固醇等抗炎症剂或免疫调节剂等，但如果可用药物抑制这种滑膜细胞的异常增殖的话，可以认为该药物将是风湿的有效治疗剂。
然而，已知风湿的滑膜细胞的增殖并非是不受限制的产生，而是被自发抑制(参照Daniel J.McCarty(1985)in“Arthritis andallied conditions，A textbook of rheumatology”10th Edition，Lea & Febiger)。并且，最近已明确风湿患者的滑膜细胞引起细胞凋亡，且滑膜细胞膜上表达Fas抗原。中岛等(参照Nakajima，T.，etal.(1995)Arthritis Rheum.38，485-491)及青野等(参照第38届日本风湿学会抄录集(1994)487页，及参照平成6年日本癌症学会总会记事(1994)338页)对于将具有细胞毒性的抗人Fas抗体加入到源自风湿患者的异常增殖的滑膜细胞中，是否可诱导滑膜细胞的细胞凋亡进行了研究，结果发现与源自风湿患者以外的滑膜细胞相比，风湿患者的异常增殖的滑膜细胞引发细胞凋亡的比例要高。因此，抗人Fas抗体不仅可诱导淋巴细胞的细胞凋亡，也可选择性地诱导异常增殖的滑膜细胞的细胞凋亡，进而可作为有效的风湿治疗剂。
目前已得到数种抗人Fas小鼠单克隆抗体(参照Yonehara，S.，etal(1989)J.Exp.Med.169，1747-1756，(1989)；SCIENCE，245，301-305，(1989)等)，并且如前所述，对该抗体的体外诱导风湿患者的滑膜细胞的细胞凋亡方面也有报道(参照第38届日本风湿学会抄录集(1994)487页，及参照平成6年日本癌症学会总会记事(1994)338页)。并且，也发现了一些抗Fas抗体对自身免疫疾病模型动物和类风湿性关节炎模型动物表现出其治疗效果以及安全性(参照欧洲专利公开0909816号公报)。
另一方面，已知针对肿瘤坏死因子α(TNFα)的单克隆抗体cA2通过和氨甲蝶呤的并用可提高对类风湿性关节炎患者的治疗效果(Carden，第7届国际风湿病讨论会概要(1998)12-13页)，但对抗Fas抗体和氨甲蝶呤等的协同作用却完全不了解。
如果有一种化合物，该化合物可增强作为自身免疫疾病和类风湿性关节炎有效的预防或治疗剂的抗Fas抗体的效果的话，通过并用该化合物和抗Fas抗体，则可减少抗Fas抗体的使用量。由此，可降低由于患者体内针对该抗Fas抗体的抗体表达等而表现出耐受性的可能性，进而可期待开发出将上述可增强抗Fas抗体效果的化合物和抗Fas抗体进行组合的、可经受长时间施用的优异的预防或治疗剂。
发明内容
本发明涉及含有具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体及具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物作为有效成分的药物组合物。优选以抗人Fas抗体是单克隆抗体CH11、小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A(FERM BP-5828)生成的抗人Fas单克隆抗体HFE7A或它们的人源化抗体为特征。另外，上述具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物优选选自氨甲蝶呤、依达曲沙、依匹普林、iometrexol、pyritrexim、三甲曲沙、溴莫普林、MX-68、N-[4-[3-(2，4-二氨基-6，7-二氢-5H-环戊[d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸、(R)-N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸、N-((2，4-二氨基-3，4，5，6，7，8-六氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基)-2-噻吩基羰基-L-谷氨酸、(S)-2-[[[4-羧基-4-[[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]氨基]丁基]氨基]羰基]苯甲酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、2，4-二氨基-6-(N-(4-(苯基磺酰基)苄基)甲基氨基)喹唑啉、2，4-二氨基-5-[4-[3-(4-氨基苯基-4-磺酰基苯基氨基)丙氧基]-3，5-二甲氧基苄基]嘧啶、N-[4-[4-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丁基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[2-(2，4-二氨基-6-蝶啶基)乙基]苯甲酰基]-4-亚甲基-DL-谷氨酸和N-(1-甲基乙基)-N’[3-(2，4，5-三氯苯氧基)丙氧基]亚氨二碳亚氨二酰胺盐酸盐(PS15)构成的组，其中最优选氨甲蝶呤。
本发明人等发现具有细胞凋亡诱导活性的抗Fas单克隆抗体的效果，通过与具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物共存而提高，进而完成了本发明。
本发明中“细胞凋亡诱导活性”是指，针对细胞膜表面表达有Fas的细胞，通过与其Fas的结合可诱导该细胞的细胞凋亡的活性。
作为本发明药物组合物的第一有效成分应用的抗人Fas抗体只要可与人Fas特异性结合，且具有细胞凋亡诱导活性即可。作为此类抗人Fas抗体，优选抗人Fas单克隆抗体CH11及小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A(FERM BP-5828)生成的抗人Fas单克隆抗体HFE7A或它们的人源化抗体(欧洲专利公开0909816号公报)，但本发明并不限定于此。此外，这些抗人Fas单克隆抗体的重组体由于可达到与这些单克隆抗体同等的效果，故也包含在本发明的抗人Fas单克隆抗体中。并且，在本发明中也可应用经基因重组技术修饰而降低对人的免疫原性的、但没有减低上述抗Fas单克隆抗体对Fas的结合能力和细胞凋亡诱导活性的、即所谓的人源化抗体。
本发明中“具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物”是指，对细胞内DNA合成中必须过程的叶酸代谢具有拮抗性抑制活性的可药用化合物。例如，优选以下所述的化合物。
氨甲蝶呤(下述通式(I))
Figure C0081078000091
依达曲沙(参照英国专利公报GB 2058770 B，下述通式(II))
依匹普林(参照国际专利申请WO92/8461号公报，下述通式(III))
Figure C0081078000102
Iometrexol(参照国际专利申请WO86/5181号公报，下述通式(IV))
pyritrexim(参照欧洲专利21292号公报，下述通式(V))
三甲曲沙(参照英国专利公报GB 1345502，下述通式(VI))
溴莫普林(参照英国专利公报GB 1449387，下述通式(VII))
MX-68(参照国际专利申请WO97/34606号公报，下述通式(VIII))
Figure C0081078000122
N-[4-[3-(2，4-二氨基-6，7-二氢-5H-环戊[d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸(J.Med.Chem.(1994)37，1616-1624，下述通式(IX))
N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸(参照欧洲专利343801号公报，下述通式(X))
Figure C0081078000132
N-((2，4-二氨基-3，4，5，6，7，8-六氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基)-2-噻吩基羰基-L-谷氨酸(参照美国癌症研究学会第88届年会(1997)概要序号660，下述通式(XI))
Figure C0081078000133
(S)-2-[[[4-羧基-4-[[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]氨基]丁基]氨基]羰基]苯甲酸(参照欧洲专利345308号公报，下述通式(XII))
Figure C0081078000141
N-[4-[3-(2，4-二氨基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸(参照欧洲专利334636号公报，下述通式(XIII))
Figure C0081078000142
2，4-二氨基-6-(N-(4-(苯基磺酰基)苄基)甲基氨基)喹唑啉(参照美国癌症研究会年会(1992)概要序号2458，下述通式(XIV))
2，4-二氨基-5-[4-[3-(4-氨基苯基-4-磺酰基苯基氨基)丙氧基]-3，5-二甲氧基苄基]嘧啶(参照欧洲专利231888号公报，下述通式(XV))
Figure C0081078000152
N-[4-[4-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丁基]苯甲酰基]-L-谷氨酸(参照国际专利申请WO95/9845号公报，下述通式(XVI))
N-[4-[3-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸(参照国际专利申请WO95/9845号公报，下述通式(XVII))
N-[4-[2-(2，4-二氨基-6-蝶啶基)乙基]苯甲酰基]-4-亚甲基-DL-谷氨酸(参照国际专利申请WO91/10666号公报，下述通式(XVIII))
Figure C0081078000162
及N-(1-甲基乙基)-N’[3-(2，4，5-三氯苯氧基)丙氧基]亚氨二碳亚氨二酰胺盐酸盐(PS15)(参照国际专利申请WO93/16037号公报，下述通式(XIX))
已知这些化合物均具有叶酸拮抗作用及二氢叶酸还原酶抑制作用。上述化合物组中，作为包含于本发明药物组合物中的化合物最优选氨甲蝶呤。
本发明药物组合物可通过将抗Fas单克隆抗体和具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物适宜混合并制剂化来得到，其中抗Fas单克隆抗体对表达Fas的细胞具有细胞凋亡诱导活性。
抗Fas单克隆抗体例如可通过将含有人Fas的细胞外区域的分子作为抗原，应用该技术领域内众所周知的方法来制备。例如，作为本发明药物组合物中含有的抗Fas单克隆抗体优选对象之一的单克隆抗体HFE7A，可通过用人Fas免疫Fas敲除小鼠，随后将该小鼠的脾脏细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合制得杂交瘤，并通过培养所得杂交瘤来得到。具体地说，可按以下所述的方法制备。
单克隆抗体的制备过程中，至少以下操作步骤是必要的。即包括，
(a)纯化作为抗原使用的生物高分子；
(b)制备抗体生成细胞的步骤，其过程包括通过注射抗原免疫动物后，取血并测定其抗体效价以决定脾脏摘除的时间；
(c)制备骨髓瘤细胞；
(d)抗体生成细胞与骨髓瘤细胞的融合；
(e)筛选生成目的抗体的杂交瘤组；
(f)分离单细胞克隆(克隆)；
(g)根据需要，培养杂交瘤细胞或培育转移植杂交瘤细胞的动物，以大量制备单克隆抗体；
(h)测定通过以上步骤得到的单克隆抗体的生理活性及其识别特异性，或测试作为标记试剂时的特性等。
以下，按上述步骤详细阐述抗Fas单克隆抗体的制备方法，但该抗体的制备方法并不限定于此，例如也可使用脾细胞以外的抗体生成细胞及骨髓瘤。
(a)抗原的纯化
作为有效的抗原，将人Fas的细胞外区域和小鼠白介素3受体(以下，略作IL3R)的细胞外区域[参照Nishimura，Y.et al.(1995)J.Immunol.154，4395-4403]的融合蛋白的表到载体phFas-AIC2转染猴源细胞株COS-1并进行表达，通过部分纯化得到重组蛋白(以下，略作重组人Fas)。phFas-AIC2可通过将人Fas和小鼠IL3R的融合蛋白的编码基因整合到动物细胞用表达载体pME18S来构建。但是，编码Fas的DNA、载体、宿主等并不限定于此。
具体地说，首先培养用phFas-AIC2转染COS-1细胞得到的转化株，其培养上清中生成的人Fas和小鼠IL3R的融合蛋白用ResourceQ柱子(商标名：pharmacia公司制)进行离子交换色谱，进而部分纯化重组Fas。
另外，人细胞株的细胞膜上存在的Fas的纯化物也可作为抗原来使用。再者，由于Fas的一级结构已知(参照Itoh，N.，et al.(1991)Ce11 66，233-243)，业内人士可应用已知的方法化学合成含有已知氨基酸序列的多肽，并将此作为抗原使用。
(b)抗体生成细胞的制备
将步骤(a)得到的抗原和弗氏完全或不完全佐剂、或钾明矾等辅剂混合并作为免疫原免疫实验动物。作为实验动物，最优选使用Fas敲除小鼠，这种小鼠可按照千住等文献中所述的方法进行制备(参照Senju，S.，et al.(1996)International Immunology 8，423)。
免疫小鼠时的免疫原施用法可采用皮下注射、腹腔内注射、静脉内注射、皮内注射、肌肉内注射中的任何一种，优选皮下注射或腹腔内注射。
免疫可采用一次性操作或以适当的间隔(优选1周到5周间隔)反复进行操作。随后，测定对于免疫动物血清中抗原的抗体效价，并将抗体效价足够高的动物作为抗体生成细胞的供给原，即可提高以后操作的效率。一般来说，优选将最终免疫后3～5天后的动物来源的抗体生成细胞用于随后的细胞融合。
作为在此采用的抗体效价的测定方法，例如放射性同位素免疫定量法(以下，略作RIA法)、固相酶免疫定量法(以下，略作ELISA)、荧光抗体法、被动血凝反应法等种种已知技术，但从检测灵敏度、迅速性、正确性、及操作自动化的可能性等角度考虑，更优选采用RIA法或ELISA法。
本发明中抗体效价的测定，例如根据ELISA法，可按照以下所述的顺序进行。首先，将纯化或部分纯化的Fas吸附于ELISA用96孔平板等的固相表面上，再将未吸附抗原的固相表面用与抗原无关的蛋白质，例如用牛血清白蛋白(以下，略作BSA)封闭，洗涤该表面后，与作为一抗的系列稀释试样(例如小鼠血清)接触，使试样中的抗Fas抗体结合于上述抗原。随后，作为二抗加入酶标记的抗小鼠抗体，使其与小鼠抗体结合，洗涤后加入该酶的底物，并通过测定底物分解后生色现象引起的吸光度的变化等计算出抗体效价。
(c)骨髓瘤的制备步骤
作为骨髓瘤，一般应用源自小鼠的细胞株，例如优选应用8-氮鸟嘌呤抗性小鼠(源自BALB/c)骨髓瘤株P3X63Ag8U.1(P3-U1)[Yelton，D.E.et al.Current Topics in Microbiology andImmunology，81，1-7(1978)]、P3/NST/1-Ag4-1(NS-1)[Kohler，G.etal.European J.Immunology，6，511-519(1976)]、Sp2/0-Ag14(SP-2)[Shulman，M.et al.Nature，276，269-270(1978)]、P3X63Ag8.653(653)[Kearney，J.F.et al.J.Immunology，123，1548-15501979)]、P3X63Ag8(X63)[Horibata，K.and Harris，A.W.Nature，256，495-497(1975)]等。这些细胞株在适当的培养基，例如8-氮鸟嘌呤培养基[RPMI-1640培养基中加入谷氨酰胺、2-巯基乙醇、庆大霉素、及胎牛血清(以下，略作FCS)后，再补加8-氮鸟嘌呤的培养基]、Iscove改进Dulbecco培养基(Iscove’s Modified Dulbecco’sMedium；以下，略作IMDM)、或Dulbecco改进Eagle培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium；以下，略作DMEM)中进行传代培养，在进行细胞融合的3～4天前用正常培养基[例如，含10％FCS的ASF104培养基(味之素(株)社制)]传代培养，并确保融合当天细胞数在2×107以上。
(d)细胞融合
抗体生成细胞为浆细胞、及其前体细胞即淋巴细胞，这些细胞可从个体任一部位获得，一般是从脾、淋巴结、外周血、或它们适当组合的物质等获得，其中，最通用的是脾细胞。
最终免疫结束后，从得到所定抗体效价的小鼠摘除存在抗体生成细胞的部位，例如摘除脾脏，以制备作为抗体生成细胞的脾细胞。作为将此脾细胞与步骤(c)得到的骨髓瘤融合的手段，目前最普遍采用的是使用聚乙二醇的方法，该方法细胞毒性相对小且融合操作简便。该方法例如包含以下操作步骤。
用无血清培养基(例如RPMI 1640)或磷酸缓冲生理盐水液(以下，略作PBS)充分洗涤脾细胞和骨髓瘤，并按脾细胞和骨髓瘤的细胞数之比为5∶1～10∶1程度相互混合，进行离心。去除上清，沉积的细胞群充分分散后，边搅拌边滴加含1ml 50％(w/v)聚乙二醇(分子量1000～4000)的无血清培养基。随后，缓慢加入10ml无血清培养基，然后进行离心。再次去除上清，将沉积的细胞悬浮于含适量的次黄嘌呤·氨基蝶呤·胸苷(以下，略作HAT)和小鼠白介素-2(以下，略作IL-2)的正常培养基(以下，略作HAT培养基)中，然后分别加入到培养用平板(以下，略作平板)的各孔中，并在5％二氧化碳存在下，37℃培养两周左右。培养过程中可适当补加HAT培养基。
(e)杂交瘤组的筛选
上述骨髓瘤细胞为8-氮鸟嘌呤抗性株时，即为次黄嘌呤·鸟嘌呤·磷酸核糖基转移酶(HGPRT)缺失株时，未融合的该骨髓瘤细胞、及骨髓瘤细胞之间的融合细胞不能在含HAT的培养基中生长。另一方面，抗体生成细胞之间的融合细胞、或抗体生成细胞和骨髓瘤细胞之间的杂交瘤虽可以生存，但抗体生成细胞之间的融合细胞有一定的寿限。因此，随着在含HAT培养基中的持续培养，只有抗体生成细胞和骨髓瘤细胞之间的杂交瘤可以继续生存，其结果可筛选出杂交瘤。
将集落状生长的杂交瘤由HAT培养基转移至除去氨基蝶呤的培养基(以下，略作HT培养基)中，即更替培养基。随后，取一部分培养上清，例如用ELISA法测定抗Fas抗体的效价。但是，将上述融合蛋白作为ELISA用抗原使用时，为了不筛选出生成与小鼠IL3受体特异性结合的抗体的克隆，有必要进行排除该克隆的操作。是否存在该种克隆，例如可通过将小鼠IL3受体或其细胞外区域作为抗原的ELISA等来进行确认。
以上，举例说明了应用8-氮鸟嘌呤抗性细胞株的方法，但其他细胞也可相应于杂交瘤的筛选方法而应用，该情况下所使用的培养基组成也需进行改变。
(f)克隆
通过用与步骤(b)同样的方法测定抗体效价，已确定可生成特异性抗体的杂交瘤转移到另一平板中，并进行克隆。作为这种克隆方法，例如按平板的每孔含1个杂交瘤而进行稀释并培养的极限稀释法；在软琼脂培养基中进行培养并回收集落的软琼脂法；利用显微操作器分离出单细胞并培养的方法；利用细胞分选仪分离出单细胞的“分选单克隆”等，其中极限稀释法由于操作简便而被普遍采用。
对于已确定抗体效价的孔，例如采用极限稀释法反复进行2～4次克隆操作，并将具有稳定抗体效价的克隆选为抗Fas单克隆抗体生成杂交瘤株。其次，通过采用同样的方法筛选生成与小鼠Fas结合的抗体的杂交瘤，得到抗Fas单克隆抗体生成细胞。此时使用的小鼠Fas，例如将表达质粒载体pME18S-mFas-AIC[参照Nishimura，Y.etal.(1995)J.Immunol.154，4395-4403]导入培养动物细胞后表达的融合蛋白，该表达质粒载体中具有编码小鼠Fas细胞外区域和小鼠I L3受体细胞外区域的融合蛋白的DNA；纯化小鼠Fas；或可使用将小鼠Fas表达于细胞表面的细胞。
另外，作为本发明药物组合物中含有的有效成分而优选的抗Fas单克隆抗体的生成细胞小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A，国际保藏委托于日本国茨城县筑波市东1丁目1-3号的工业技术院生命工学工业研究所，保藏日期1997年2月20日，保藏编号FERM BP-5828。因此，如用小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A制备抗体时，至步骤(f)的以上步骤可省略，并可由以下所述步骤(g)入手制备抗体。
(g)培养杂交瘤以制备单克隆抗体
将培养基由HT培养基更换为正常培养基后，培养克隆出的杂交瘤。大量培养可使用大型培养瓶进行滚瓶培养或旋动培养。该大量培养的上清，可通过凝胶过滤等业内人士已知的方法进行纯化，进而得到作为本发明预防或治疗剂的有效成分的抗Fas单克隆抗体。另外，通过在同源小鼠(例如，上述BALB/c)、或Nu/Nu小鼠的腹腔中增殖该杂交瘤，可得到大量含有本发明预防或治疗剂的有效成分抗Fas单克隆抗体的腹水。简便的纯化方法可采用市售的单克隆抗体纯化试剂盒(例如MAbTrap GII试剂盒；Pharmacia公司制)等。
由上述步骤得到的单克隆抗体对于人或小鼠Fas具有高的抗原特异性。
(h)单克隆抗体的测定
由上述步骤得到的单克隆抗体的同型物及亚类的测定如下所述。首先，作为鉴定方法，例如奥脱洛尼(Ouchterlony)法、ELISA法、或RIA法。奥脱洛尼法虽然简便，但在单克隆抗体浓度低时需进行浓缩操作。另一方面，采用ELISA法或RIA法时，将培养上清直接和抗原吸附固相反应，再加入作为二抗的对应于各种免疫球蛋白同型物、亚类的抗体，由此可对单克隆抗体的同型物或亚类进行鉴定。另外，作为更为简便的方法，可采用市售的鉴定用试剂盒(例如MouseTyper试剂盒；Bio-Rad公司制)等。
其次，蛋白质的定量可应用Folin-Lowry法、及用280nm吸光度[1.4(OD280)＝免疫球蛋白1mg/ml]进行计算。
其次，作为本发明药物组合物所含有效成分而优选的抗Fas单克隆抗体的重链或轻链的编码DNA，可由生成上述抗Fas单克隆抗体的杂交瘤细胞制备mRNA，该mRNA用逆转录酶转换成cDNA后，分别分离纯化该抗体的重链或轻链的编码DNA来得到。
提取mRNA时，可采用硫氰酸胍-热酚法、硫氰酸胍-盐酸胍法等，优选硫氰酸胍-氯化铯法。由细胞制备mRNA的步骤为，先制备总RNA，然后用寡聚(dT)纤维素和寡聚(dT)乳胶珠子等poly(A)+RNA纯化用载体从该总RNA中进行纯化，或通过在细胞裂解物中用该载体直接纯化的方法来实施。作为总RNA的制备方法，可采用碱性蔗糖密度梯度离心法[参照Dougherty，W.E.and Hiebert，E.(1980)Viology 101，466-474]、硫氰酸胍-酚法、硫氰酸胍-三氟化铯法、酚-SDS法等，优选使用硫氰酸胍及氯化铯的方法[参照Chirgwin，J.M.，et al.(1979)Biochemistry 18，5294-5299]。
将从上述步骤得到的poly(A)+RNA作为模板，通过逆转录酶反应合成单链cDNA后，可由单链cDNA合成双链cDNA。作为该方法，可采用S1核酸酶法[参照Efstratiadis，A.，et al.(1976)Cell 7，279-288]、Gubler-Hoffman法[参照Gubler，U.and Hoffman，B.J.(1983)Gene 25，263-269]、Okayama-Berg法[参照Okayama，H.andBerg，P.(1982)Mol.Cell.Biol.2，161-170]等，在本发明中，以单链cDNA为模板进行聚合酶链反应(以下，略作PCR)[参照Saiki，R.K.，et al.(1988)Science 239，487-49]，即优选RT-PCR法。
将由上述步骤得到的双链cDNA整合到克隆载体中，得到的重组载体导入大肠杆菌等微生物中进行转化，以四环素抗性或氨苄青霉素抗性等作为筛选标记可筛选出转化体。大肠杆菌的转化可采用Hanahan法[参照Hanahan，D.(1983)J.Mol.Biol.166，557-580]，即将上述重组DNA载体加入到由氯化钙和氯化镁或氯化铷共存体系制备的感受态细胞中来进行。另外，将质粒作为载体使用时，需具有上述药剂抗性基因。并且，可应用质粒以外的克隆载体，如λ体系的噬菌体等。
由上述步骤得到的转化株筛选具有编码目的抗人Fas抗体各亚基的cDNA的细胞株的方法，例如可采用以下所示的各种方法。另外，由上述RT-PCR法特异性扩增目的cDNA时，可省略这些操作。
(1)应用聚合酶链反应的方法
当目的蛋白的全部或部分氨基酸序列已知时，合成对应于部分该氨基酸序列的有义链和反义链寡核苷酸引物，并将它们组合起来进行聚合酶链反应[参照Saiki，R.K.，et al.(1988)Science 239，487-49]，以扩增编码目的抗人Fas抗体重链或轻链亚基的DNA片断。在此使用的模板DNA，可以是由生成抗人Fas单克隆抗体HFE7A的杂交瘤的mRNA通过逆转录酶反应合成的cDNA。
由上述步骤制备的DNA片断可利用市售的试剂盒直接整合到质粒载体中，也可用32P、35S或生物素等标记该片断，将此作为探针通过进行集落杂交或蚀斑杂交筛选目的克隆。
例如，作为本发明药物组合物所含有效成分而优选的单克隆抗体HFE7A为免疫球蛋白G1(以下，略作IgG1)分子，并且是由重链(γ1链)、轻链(κ链)的各亚基构成的复合体。这些各亚基的部分氨基酸序列的分析方法，优选先用电泳和柱色谱等已知方法分离纯化各亚基后，用自动蛋白质测序仪(例如，岛津制作所(株)制PPSQ-10)等解析各个亚基的N末端氨基酸序列的方法。
由上述步骤得到的目的转化株提取编码抗人Fas单克隆抗体蛋白各亚基的cDNA的方法，可按已知的方法[参照Maniatis，T.，et al.(1982)in“Molecular Cloning A Laboratory Manual”Cold SpringHarbor Laboratory，NY.]来进行。例如，可由细胞分离出相当于载体DNA的组分，并由该质粒DNA切出编码目的亚基的DNA区域来进行。
(2)应用合成寡核苷酸探针的筛选法
当目的蛋白的全部或部分氨基酸序列已知时(该序列只要是多个连续的特异性序列，就可以是目的蛋白的任一区域)，合成对应于该氨基酸序列的寡核苷酸(此时，可任意采用参考密码子使用频率而推测出的核酸序列、或将可能的核酸序列组合后的多个核酸序列；采用后者时，可含有肌苷以减少其种类)，并以此作为探针(用32P、35S或生物素等标记)，与固定有转化株的DNA的硝酸纤维素膜杂交，以筛选阳性细胞株。
由上述步骤得到的DNA的序列测定，例如可用Maxam-Gilbert化学修饰法[参照Maxam，A.M.and Gilbert，W.(1980)in“Methods inEnzymology”65，499-576]和双脱氧链终止法[参照Messing，J.andVieira，J.(1982)Gene 19，269-276]等来进行。
另外，近年来已普遍采用应用荧光色素的碱基序列自动测定系统(例如，Perkin-Elmer日本公司制自动测序仪“CATALYST 800”及其373A型号DNA测序仪等)。
由于利用了这种系统，可高效且安全地进行DNA核酸序列的测定。由这种方法测定的本发明DNA的各核酸序列、及重链及轻链的各N末端氨基酸序列数据，可确定本发明单克隆抗体重链及轻链的全部氨基酸序列。
制备氨基酸序列中缺失任意一个或两个以上氨基酸的突变体时，可按盒式诱变法[参照岸本利光，“新生化学实验讲座2·核酸III重组DNA技术”242-251]等进行。
上述各种DNA，例如可按亚磷酸三酯法[参照Hukapiller，M.，etal.(1984)Nature 310 105-111]等常规方法，通过核酸的化学合成来制备。另外，相对于所期望氨基酸的密码子，其自身已知且可以任意选择，例如可根据所使用宿主的密码子使用频率并按常规方法来确定。这些核酸序列密码子的部分突变可按常规方法，通过合成含有编码所期望突变的寡核苷酸的引物并利用定点诱变法(sitespecific mutagenesis)[参照Mark，D.F.，et al.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81，5662-5666]等进行。
另外，确定某种DNA是否与作为本发明药物组合物中所含有效成分而优选的抗Fas单克隆抗体重链或轻链的编码DNA杂交，例如可将该DNA按随机引物法[参照Feinberg，A.P.and Vogelstein，B.(1983)Anal.Biochem.132，6-13]和切口转译法[参照Maniatis，T.，et al.(1982)in“Molecular Cloning A Laboratory Manual”Cold SpringHarbor Laboratory，NY]，应用[α-32P]dCTP等标记过的探针DNA，通过进行以下所示的实验来测定。
首先，将欲进行测定的DNA吸附于硝酸纤维素膜和尼龙膜等，根据需要在进行碱变性等处理后，通过加热或紫外线等固相化。将此膜浸于含6×SSC(1×SSC为0.15M氯化钠、0.015M柠檬酸三钠溶液)、5％Denhardt溶液、0.1％十二烷基硫酸钠的预杂交液中，55℃保温4小时以上，随后将先前制备好的探针加入到同样的预杂交液中并使其最终比活性为1×106cpm/ml，60℃保温一晚。随后，室温下用6×SSC将膜洗涤5分钟并重复该操作数次，再用2×SSC洗涤20分钟后，进行放射自显影。
利用上述方法，可从任一cDNA文库或基因组文库中分离纯化出与作为本发明药物组合物所含有效成分而优选的抗Fas单克隆抗体重链或轻链的编码DNA杂交的DNA[参照Maniatis，T.，et al.(1982)in“Molecular Cloning A Laboratory Manual”Cold Spring HarborLaboratory，NY.]。
由上述步骤得到的各DNA分别整合到表达载体中，以导入原核生物或真核生物的宿主细胞，并在它们的宿主细胞中表达各基因。
作为原核细胞的宿主，例如大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)等。为了在这些宿主细胞内表达目的基因，可用源自与宿主相适应的物种的复制子，即含有复制起点及lacUV5等启动子序列的质粒载体转化宿主细胞。并且，优选载体具有可赋予转化细胞选择性表现性状的序列。例如大肠杆菌常用源自E.ColiK12株的JM109株等，载体通常应用pBR322和pUC系列的质粒，但并不局限于此，已知的各种菌株及质粒均可应用。对于大肠杆菌适宜的启动子，例如色氨酸(trp)启动子、乳糖(lac)启动子、色氨酸·乳糖(tac)启动子、脂蛋白(lpp)启动子、源自噬菌体的λPL启动子、肽链延伸因子Tu(tufB)启动子等，但并不局限于此。
枯草杆菌例如优选207-25株，适宜的载体为pTUB228[参照Ohmura，K.，et al.(1984)J.Biochem.95，87-93]等，但并不局限于此。并且作为启动子，通常应用枯草杆菌α淀粉酶基因调节序列，另外根据需要，也可通过连接α淀粉酶信号肽序列的编码DNA使表达产物分泌到菌体外。
真核生物的宿主细胞包括脊椎动物、酵母等的细胞，作为脊椎动物细胞，例如可应用猴源的细胞株COS-1[参照Gluzman，Y.(1981)Cell 23，175-182]等。作为酵母，可应用面包酵母(Saccharomycescerevisiae)、甲基营养酵母(Pichia pastoris)、裂殖酵母(Schizossaccharomyces pombe)等。在此所示的细胞为通常应用的宿主细胞，但并不局限于此。
脊椎动物细胞的表达载体通常可应用具有位于欲表达基因上游的启动子、RNA剪接位点、聚腺苷化位点及转录终止序列的载体，根据需要还可具有复制起点。作为该表达载体，例如具有SV40早期启动子的pSV2dhfr[参照Subramani，S.，et al.(1981)Mol.Cell.Bio.1，854-864]等，但并不局限于此。
作为酵母的表达载体，例如可应用醇脱氢酶基因的启动子[参照Bennetzen，J.L.and Hall，B.D.(1982)J.Biol.Chem.257，3018-3025]、半乳糖代谢酶基因(gal 10等)的启动子[参照Ichikawa，K.，et al.(1993)Biosci.Biotech.Biochem.57，1686-1690]等，根据需要也可通过连接酵母基因中编码信号肽序列的DNA使表达产物分泌到细胞外，但并不局限于此。
作为宿主细胞应用COS-1时，表达载体可应用具有SV40复制起点、可在COS-1中自主复制，还具备转录启动子、转录终止信号、及RNA剪接位点的表达载体。该表达载体可通过DEAE-葡聚糖法[参照Luthman，H.and Magnusson，G.(1983)Nucleic Acids Res.11，1295-1308]、磷酸钙-DNA共沉淀法[参照Graham，F.L.and van derEb，A.J.(1973)Virolory 52，456-457]及电穿孔法[参照Neumann，E.，et al.(1982)EMBO J.1，841-845]等整合到COS-1中，进而得到所希望的转化细胞。
尤其是通过将含有重链的编码DNA的表达载体及含有相应轻链的编码DNA的表达载体共转染COS-1，可同时表达这些DNA，并得到生成重组抗Fas抗体的转化体。但是，生成重组抗Fas抗体的方法不局限于上述方法，例如，也可采用构建携有分别编码重链及单链的两种DNA，且可同时表达两者的单一表达载体，并将该载体转染COS-1细胞的方法等。
由上述步骤得到的所希望的转化体，可按业内人士已知的方法进行培养，由该培养得到转化细胞或在细胞外生成重组抗Fas抗体。作为该培养过程中使用的培养基，可与采用的宿主细胞相应地适宜选择惯用的各种培养基，例如对于上述COS-1，可使用RPMI 1640培养基和Dulbecco改进Eagle培养基(DEME)等培养基，根据需要还可添加胎牛血清(FCS)等血清成分。
培养该转化体时的培养温度，只要是不显著降低细胞内蛋白质合成能力的温度即可，优选32～42℃。最优选在37℃进行培养。并且根据需要，可在含1～10％(v/v)二氧化碳的空气中培养。
含有生成于上述转化体的细胞内或细胞外的抗Fas抗体蛋白质的组分，可通过利用该蛋白质的物理性质和化学性质等的各种已知的蛋白质分离操作方法进行分离纯化。具体来说这些方法有，例如用通常的蛋白质沉淀剂进行处理，超滤，分子筛色谱(凝胶过滤)、吸附色谱、离子交换色谱、亲合色谱、高效液相色谱(HPLC)等各种色谱，透析法，及可组合应用上述方法。
由上述方法可方便地制备高产率、高纯度的重组抗Fas抗体。
确认由上述步骤制备的重组抗Fas抗体特异性结合于Fas的方法，例如优选与免疫小鼠时的测定抗体效价过程中同样的ELISA方法。
另一方面，具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用、如上述通式(I)乃至(XIX)所示的化合物，可按各自化合物说明中所参照文献的记载来得到。对于其他化合物是否具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用，可利用各自文献中所采用的叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的确认方法进行测定。
包含上述化合物作为有效成分的本发明的药物组合物，可作为自身免疫疾病患者或类风湿性关节炎患者的预防或治疗剂来使用。预防或治疗剂可以多种方式给药，作为它们的给药方式，例如片剂、胶囊剂、粒剂、粉剂、糖浆剂等口服给药，或注射剂、点滴剂、栓剂等非口服给药。
本发明药物组合物中抗人Fas抗体及具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物的用量，可根据所用抗体和化合物各自固有的作用强度等而进行改变。例如，作为抗人Fas抗体使用CH11或HFE7A，作为具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物使用氨甲蝶呤时，优选将本发明的药物组合物调制成含CH11或HFE7A0.1乃至100ng/ml、含氨甲蝶呤0.05乃至5nM的溶液，但本发明并不局限于这一范围。
其给药量根据症状、年龄、体重等而不同，通常以一次0.1mg乃至1000mg抗人Fas抗体的量进行皮下注射、肌肉注射或静脉注射的方式给药。
由上述步骤制备的本发明药物组合物在自身免疫疾病或类风湿性关节炎治疗中的有效性，可通过在添加本发明药物组合物的培养基中培养细胞(例如，人淋巴细胞株HPB-ALL(参照Morikawa，S.，et al.(1978)Int.J.Caneer 26，166-170)、Jurkat(American TypeCulture No.TIB-152)、源自类风湿性关节炎患者的滑膜细胞等)，并用MTT测定方法(参照Green，L.M.，et al.(1984)J.Immunological Methods 70，257-268)和下述实施例中记载的XTT测定方法等测定其存活率来进行确认。对于自身免疫疾病主要病因之一的自身反应性淋巴细胞和类风湿性关节炎病患部位的异常增殖的滑膜细胞，只施用抗Fas抗体也可在低用量的抗Fas抗体前提下诱导细胞凋亡，因此本发明的药物组合物在这些自身免疫疾病或类风湿性关节炎的治疗中是有效的。在利用这些培养细胞的实验中确认为有效的含抗Fas抗体的组合物，对于实际的自身免疫疾病症状和类风湿性关节炎也有效的情况，可从欧洲专利公开0909816号公报中利用动物实验模型的实验结果加以肯定。
附图的简单说明
图1是说明抗人Fas单克隆抗体CH11和氨甲蝶呤在诱导细胞凋亡过程中协同效果的图。
图2是说明抗人Fas单克隆抗体HFE7A和氨甲蝶呤在诱导细胞凋亡过程中协同效果的图。
图3是说明存在氨甲蝶呤的条件下细胞存活率的图。
实施发明的最佳方案
以下例举实施例，对本发明进行更为详细的说明，但本发明并不局限于此。
实施例1
作为抗Fas抗体使用了欧洲专利公开0909816号公报记载的抗人Fas单克隆抗体HFE7A或CH11((株)医学生物学研究所制)。
将人淋巴细胞株HPB-ALL(参照Morikawa，S.，et al.(1978)Int.J.Cancer 21，166-170)在含10％FCS(Gibco B.R.L.公司制)的RPMI 1640培养基中，37℃、5％二氧化碳存在下培养3天，然后在96孔微型培养板的各孔中分别注入50μl(2.5×105细胞/50μl)。随后，在各孔中添加含氨甲蝶呤(Sigma公司制)和抗Fas抗体(CH11或HFE7A，从0.001mg/ml做3倍的系列稀释)的RPMI培养基50μl，37℃进行培养。
将CH11作为抗Fas抗体添加的培养板直接在37℃培养过夜。另一方面，对于添加HFE7A的培养板，培养1小时后用RPMI培养基洗涤细胞，随后每孔加入100μl用RPMI培养基调配成1μg/ml的抗小鼠IgG抗体(Biosource公司制)。37℃培养1小时后，用无血清RPMI培养基洗涤细胞，随后每孔加入100μl含0.05nM氨甲蝶呤的RPMI培养基，并于37℃培养过夜。
随后，每孔中加入50μl含1mg/ml XTT(2，3-双[2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基]-2H-四唑鎓-5-羧酰苯胺两性离子：Sigma公司制)的25μM PMS(吩嗪硫酸二甲酯：Sigma公司制)(终浓度：250μg/ml XTT，5μM PMS)。37℃培养3小时后，测定各孔的450nm的吸光度，并以线粒体的还原能力为指标，计算细胞的存活率。
各孔的细胞存活率用下述通式进行计算：
存活率(％)＝100×(a-b)/(c-b)
(式中，a表示被测孔的测定值，b表示无细胞孔的测定值，c表示未添加抗体的孔的测定值)。
由其结果可知，CH11的细胞凋亡诱导活性，随着添加0.05nM以上的氨甲蝶呤而显著上升(图1：另外，图中“MTX”表示氨甲蝶呤。以下相同)。并且，HFE7A的细胞凋亡诱导活性，也随着添加0.05nM以上的氨甲蝶呤而上升(图2)。另外，未加入抗Fas抗体，单独添加氨甲蝶呤的条件下，细胞的存活率几乎不发生变化(图3)。
由以上结果可知，通过添加氨甲蝶呤，可增强抗Fas抗体的细胞凋亡诱导活性，并且施用与以往相比低用量的抗Fas抗体，也可减少自身免疫疾病病因细胞的个数。
制剂例
本发明的预防或治疗剂是将抗人Fas抗体和具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物溶解于水或其他可药用溶液的无菌性溶液或悬浮液以安瓿剂的形式提供使用。具体而言，将0.5mg抗人Fas抗体及终浓度为0.05nM的氨甲蝶呤溶解于1升注射用水，然后在无菌条件下分装于安瓿瓶中并封存。
另外，也可将无菌粉末制剂(优选将抗人Fas抗体和具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物进行冷冻干燥)充填于安瓿瓶中，临用时再用可药用的溶液进行稀释。
产业上的实用性
如上所述，本发明可提供在自身免疫疾病和类风湿性关节炎的预防或治疗中有用的新型药物组合物。本发明通过并用具有叶酸拮抗作用或二氢叶酸还原酶抑制作用的化合物和抗人Fas抗体，可降低抗Fas抗体的使用量。由此，可降低由于患者体内表达针对抗Fas抗体的抗体而表现耐受性的可能性，进而本发明的药物组合物可有效地用作于可经受长时间施用的优异的自身免疫疾病和类风湿性关节炎的预防或治疗剂。

Claims (20)

1.一种药物组合物，它含有具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体和具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物作为有效成分，并且所述有效成分的相对量可使它们表现出协同的细胞凋亡诱导活性，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为单克隆抗体CH11、HFE7A或它们的人源化抗体。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为单克隆抗体CH11或其人源化抗体。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A(FERM BP-5828)生成的抗人Fas单克隆抗体HFE7A或其人源化抗体。
4.根据权利要求1至3任一项所述的药物组合物，其中，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物选自氨甲蝶呤、依达曲沙、依匹普林、iometrexol、pyritrexim、三甲曲沙、溴莫普林、MX-68、N-[4-[3-(2，4-二氨基-6，7-二氢-5H-环戊[d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸、(R)-N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸、N-((2，4-二氨基-3，4，5，6，7，8-六氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基)-2-噻吩基羰基-L-谷氨酸、(S)-2-[[[4-羧基-4-[[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]氨基]丁基]-氨基]羰基]苯甲酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、2，4-二氨基-6-(N-(4-(苯基磺酰基)苄基)-甲基氨基)喹唑啉、2，4-二氨基-5-[4-[3-(4-氨基苯基-4-磺酰基苯基氨基)-丙氧基]-3，5-二甲氧基苄基]嘧啶、N-[4-[4-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丁基]-苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[2-(2，4-二氨基-6-蝶啶基)乙基]苯甲酰基]-4-亚甲基-DL-谷氨酸和N-(1-甲基乙基)-N’[3-(2，4，5-三氯苯氧基)丙氧基]亚氨二碳亚氨二酰胺盐酸盐(PS15)构成的组。
5.根据权利要求1至4任一项所述的药物组合物，其中，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物为氨甲蝶呤。
6.溶液形式的权利要求1所述的药物组合物，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为0.1至100ng/ml浓度的单克隆抗体CH11、HFE7A或它们的人源化抗体，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物为0.05至5nM浓度的氨甲蝶呤。
7.一种具有细胞凋亡诱导活性的制剂，它含有具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体和具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物作为有效成分，并且所述有效成分的相对量可使它们表现出协同的细胞凋亡诱导活性，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为单克隆抗体CH11、HFE7A或它们的人源化抗体。
8.根据权利要求7所述的制剂，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为单克隆抗体CH11或其人源化抗体。
9.根据权利要求7所述的制剂，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A(FERM BP-5828)生成的抗人Fas单克隆抗体HFE7A或其人源化抗体。
10.根据权利要求7至9任一项所述的制剂，其中，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物选自氨甲蝶呤、依达曲沙、依匹普林、iometrexol、pyritrexim、三甲曲沙、溴莫普林、MX-68、N-[4-[3-(2，4-二氨基-6，7-二氢-5H-环戊[d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]-羰基]-L-谷氨酸、(R)-N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸、N-((2，4-二氨基-3，4，5，6，7，8-六氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基)-2-噻吩基羰基-L-谷氨酸、(S)-2-[[[4-羧基-4-[[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]氨基]丁基]-氨基]羰基]苯甲酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、2，4-二氨基-6-(N-(4-(苯基磺酰基)苄基)-甲基氨基)喹唑啉、2，4-二氨基-5-[4-[3-(4-氨基苯基-4-磺酰基苯基氨基)-丙氧基]-3，5-二甲氧基苄基]嘧啶、N-[4-[4-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丁基]-苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[2-(2，4-二氨基-6-蝶啶基)乙基]苯甲酰基]-4-亚甲基-DL-谷氨酸和N-(1-甲基乙基)-N’[3-(2，4，5-三氯苯氧基)丙氧基]亚氨二碳亚氨二酰胺盐酸盐(PS15)构成的组。
11.根据权利要求7至10任一项所述的制剂，其中，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物为氨甲蝶呤。
12.溶液形式的权利要求7所述的制剂，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为0.1至100ng/ml浓度的单克隆抗体CH11、HFE7A或它们的人源化抗体，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物为0.05至5nM浓度的氨甲蝶呤。
13.根据权利要求9至12任一项所述的制剂，它可用于自身免疫疾病或类风湿性关节炎的预防和/或治疗。
14.具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体和具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物在制备具有细胞凋亡诱导活性的药物中的应用，并且所述有效成分的相对量可使它们表现出协同的细胞凋亡诱导活性，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为单克隆抗体CH11、HFE7A或它们的人源化抗体。
15.根据权利要求14所述的用途，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为单克隆抗体CH11或其人源化抗体。
16.根据权利要求14所述的用途，其中，具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为小鼠-小鼠杂交瘤HFE7A(FERM BP-5828)生成的抗人Fas单克隆抗体HFE7A或其人源化抗体。
17.根据权利要求14至16任一项所述的用途，其中，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物选自氨甲蝶呤、依达曲沙、依匹普林、iometrexol、pyritrexim、三甲曲沙、溴莫普林、MX-68、N-[4-[3-(2，4-二氨基-6，7-二氢-5H-环戊[d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸、(R)-N-[[5-[2-(2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基]-2-噻吩基]-羰基]-L-谷氨酸、N-((2，4-二氨基-3，4，5，6，7，8-六氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-基)乙基)-2-噻吩基羰基-L-谷氨酸、(S)-2-[[[4-羧基-4-[[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰基]氨基]丁基]氨基]羰基]苯甲酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、2，4-二氨基-6-(N-(4-(苯基磺酰基)苄基)甲基氨基)喹唑啉、2，4-二氨基-5-[4-[3-(4-氨基苯基-4-磺酰基苯基氨基)丙氧基]-3，5-二甲氧基苄基]嘧啶、N-[4-[4-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丁基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[3-(2，4-二氨基-5-嘧啶基)丙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸、N-[4-[2-(2，4-二氨基-6-蝶啶基)乙基]-苯甲酰基]-4-亚甲基-DL-谷氨酸和N-(1-甲基乙基)-N’[3-(2，4，5-三氯苯氧基)丙氧基]亚氨二碳亚氨二酰胺盐酸盐(PS15)构成的组。
18.根据权利要求14至17任一项所述的用途，其中，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物为氨甲蝶呤。
19.根据权利要求14所述的用途，其中，所述药物为溶液形式，并且具有细胞凋亡诱导活性的抗人Fas抗体为0.1至100ng/ml浓度的单克隆抗体CH11、HFE7A或它们的人源化抗体，具有叶酸拮抗活性或二氢叶酸还原酶抑制活性的化合物为0.05至5nM浓度的氨甲蝶呤。
20.根据权利要求14至19任一项所述的用途，其中，所述药物可用于自身免疫疾病或类风湿性关节炎的预防和/或治疗。
CNB008107807A 1999-05-24 2000-05-24 含有抗Fas抗体的药物组合物 Expired - Fee Related CN1191861C (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP143033/99 1999-05-24
JP143033/1999 1999-05-24
JP14303399 1999-05-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1364090A CN1364090A (zh) 2002-08-14
CN1191861C true CN1191861C (zh) 2005-03-09

Family

ID=15329357

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB008107807A Expired - Fee Related CN1191861C (zh) 1999-05-24 2000-05-24 含有抗Fas抗体的药物组合物

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6746673B2 (zh)
EP (1) EP1180369A4 (zh)
KR (1) KR20020008197A (zh)
CN (1) CN1191861C (zh)
AU (1) AU761544C (zh)
BR (1) BR0010909A (zh)
CA (1) CA2373992A1 (zh)
CZ (1) CZ20014181A3 (zh)
HK (1) HK1042049A1 (zh)
HU (1) HUP0201333A3 (zh)
IL (1) IL146566A0 (zh)
MX (1) MXPA01012206A (zh)
NO (1) NO20015711L (zh)
NZ (1) NZ515598A (zh)
PL (1) PL352159A1 (zh)
RU (1) RU2222347C2 (zh)
TR (1) TR200103396T2 (zh)
WO (1) WO2000071160A1 (zh)
ZA (1) ZA200109575B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102170905A (zh) * 2008-08-01 2011-08-31 阿克西斯股份有限公司 骨关节炎治疗剂及预防剂

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE391136T1 (de) 1998-06-18 2008-04-15 Imed Ab Fas peptide und antikörper zur modulierung von apoptosis
GB0201896D0 (en) * 2002-01-28 2002-03-13 Ice Biolog Ltd Treatment
EA013517B1 (ru) * 2001-07-02 2010-06-30 Эймско Лимитед Применение козьей сыворотки, полученной иммунизацией козы вич, для изготовления лекарственных средств
PE20030340A1 (es) * 2001-08-28 2003-04-05 Sankyo Co Metodo para el tratamiento o prevencion de desgaste oseo
CA2473754C (en) * 2002-01-28 2012-04-10 Aimsco Limited Treatment of ms with goat serum
US6989386B2 (en) * 2002-04-30 2006-01-24 Dana-Farber Cancer Institute Pharmaceutically active ornithine derivatives, ammonium salts thereof and methods of making same
WO2003103710A1 (ja) * 2002-06-07 2003-12-18 三共株式会社 骨破壊の治療または予防剤組成物の併用効果
US20050032807A1 (en) * 2003-08-06 2005-02-10 Rosenwald Lindsay A. Methods of treating inflammatory diseases with ammonium salts of ornitihine derivatives
GB0427568D0 (en) * 2004-12-16 2005-01-19 Resolution Chemicals Ltd Particle-size reduction apparatus, and the use thereof
US8052971B2 (en) * 2005-11-21 2011-11-08 MG Biologics Oral use of specific antibodies for intestinal health
CN101092417B (zh) * 2006-06-19 2011-04-27 上海金色医药科技发展有限公司 一种叶酸类似物及用于医疗的叶酸类似物的盐
CN101820879B (zh) * 2007-10-08 2013-01-02 疟疾药物投资公司 具有柔性侧链的抗疟用化合物
JP6146949B2 (ja) 2008-06-20 2017-06-21 ノバルティス アーゲー 凝集が低減された免疫グロブリン
ES2417781T3 (es) 2008-06-20 2013-08-09 Novartis Ag Procedimientos para identificar regiones de unión a macromolécula y propensas a la agregación en proteínas y usos de los mismos
US8834885B2 (en) * 2009-06-04 2014-09-16 Novartis Ag Methods for identification of sites for IgG conjugation
EP2266984A1 (en) * 2009-06-26 2010-12-29 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Pyrido[2,3-d]pyrimidines as Wnt antagonists for treatment of cancer and arthritis
KR101138460B1 (ko) 2009-10-12 2012-04-26 한국생명공학연구원 항-ｆａｓｎ 자가면역 항체를 포함하는 간암 진단 마커 및 이의 항원을 포함하는 간암 진단용 조성물
WO2011046309A2 (en) * 2009-10-12 2011-04-21 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology A diagnostic marker for hepatocellular carcinoma comprising anti-fasn autoantibodies and a diagnostic composition for hepatocellular carcinoma comprising antigens thereof
US10431325B2 (en) 2012-08-03 2019-10-01 Novartis Ag Methods to identify amino acid residues involved in macromolecular binding and uses therefor

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI66866C (fi) * 1979-06-14 1984-12-10 Wellcome Found Foerfarande foer framstaellning av antiproliferativa 2,4-diamino-6-(dialkoxibensyl)pyrido(2,3-d)pyrimidiner
ZA861235B (en) * 1985-03-08 1986-10-29 Univ Princeton Pyrido(2,3-d)pyrimidine derivatives
DE3603577A1 (de) * 1986-02-06 1987-08-13 Joachim K Prof Dr Seydel Neue substituierte 2,4-diamino-5-benzylpyrimidine, deren herstellung und deren verwendung als arzneimittel mit antibakterieller wirksamkeit
NO169490C (no) * 1988-03-24 1992-07-01 Takeda Chemical Industries Ltd Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive pyrrolopyrimidinderivater
JPH02237935A (ja) 1989-03-10 1990-09-20 Bio Kagaku Kenkyusho:Kk エイズ処置剤
US5008391A (en) * 1989-07-07 1991-04-16 Eli Lilly And Company Enantioselective synthesis of antifolates
US4996207A (en) * 1990-01-18 1991-02-26 Nair Madhavan G Three new non-polyglutamatable deazaaminopterins
WO1991010448A1 (en) 1990-01-19 1991-07-25 German Cancer Research Center A cell surface antigen associated with cellular apoptosis
JP2963535B2 (ja) 1990-01-19 1999-10-18 ジヤーマン・キヤンサー・リサーチ・センター Ｈｔｌｖ−１ウイルス感染細胞の増殖阻害用組成物
WO1992008461A1 (en) * 1990-11-14 1992-05-29 Protos Corporation Specific inhibition of dihydrofolate reductase and compounds therefor
WO1993013079A1 (en) * 1991-12-20 1993-07-08 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Antifolate quinazolines
US5877176A (en) * 1991-12-26 1999-03-02 Cornell Research Foundation, Inc. Blocking induction of tetrahydrobiopterin to block induction of nitric oxide synthesis
US5426110A (en) * 1993-10-06 1995-06-20 Eli Lilly And Company Pyrimidinyl-glutamic acid derivatives
CA2158822C (en) * 1994-09-27 2008-12-23 Kusuki Nishioka Therapeutic agent for rheumatic disease
JPH11502509A (ja) * 1995-01-16 1999-03-02 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼーション 治療用化合物 − 脂肪酸抱合体
US6221615B1 (en) * 1995-05-12 2001-04-24 Apoptosis Technology, Inc. Peptides and compositions which modulate apoptosis
EP0861092A4 (en) * 1995-08-30 2002-04-10 Univ California THERAPY FOR CELL ACCUMULATION IN CHRONIC INFLAMMATORY DISEASES
WO1997034606A1 (fr) * 1996-03-19 1997-09-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Medicament contre l'uveite
US6544523B1 (en) * 1996-11-13 2003-04-08 Chiron Corporation Mutant forms of Fas ligand and uses thereof
US6001962A (en) * 1996-11-15 1999-12-14 The Regents Of The University Of California Modified Fas ligands
ZA982371B (en) * 1997-03-21 1998-09-28 Sankyo Co Humanized anti-human fas antibody
IL123888A0 (en) * 1997-04-01 1998-10-30 Sankyo Co Anti-fas antibodies
US6098631A (en) * 1998-01-21 2000-08-08 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating autoimmune disease

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102170905A (zh) * 2008-08-01 2011-08-31 阿克西斯股份有限公司 骨关节炎治疗剂及预防剂
CN102170905B (zh) * 2008-08-01 2016-08-03 阿克西斯股份有限公司 骨关节炎治疗剂及预防剂

Also Published As

Publication number Publication date
TR200103396T2 (tr) 2002-04-22
NO20015711D0 (no) 2001-11-23
NZ515598A (en) 2004-05-28
BR0010909A (pt) 2002-02-19
HK1042049A1 (zh) 2002-08-02
NO20015711L (no) 2002-01-11
ZA200109575B (en) 2003-04-30
AU4948600A (en) 2000-12-12
RU2222347C2 (ru) 2004-01-27
CZ20014181A3 (cs) 2002-03-13
KR20020008197A (ko) 2002-01-29
US6746673B2 (en) 2004-06-08
AU761544B2 (en) 2003-06-05
PL352159A1 (en) 2003-07-28
CN1364090A (zh) 2002-08-14
CA2373992A1 (en) 2000-11-30
US20020103212A1 (en) 2002-08-01
HUP0201333A2 (en) 2002-08-28
IL146566A0 (en) 2002-07-25
MXPA01012206A (es) 2002-06-21
EP1180369A1 (en) 2002-02-20
WO2000071160A1 (fr) 2000-11-30
HUP0201333A3 (en) 2004-11-29
AU761544C (en) 2004-02-12
EP1180369A4 (en) 2002-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1191861C (zh) 含有抗Fas抗体的药物组合物
US6972323B1 (en) Anti-Fas antibodies
JP6345787B2 (ja) 抗ａｎｇ２抗体とｃｄ４０アゴニストとの併用療法
JP2024023225A (ja) 抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び癌の治療における使用方法
JP2020520671A (ja) 抗体−サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
CN1849135A (zh) 治疗白介素－6相关疾病的方法
AU757961B2 (en) Anti-Fas antibodies
TW526205B (en) Anti-Fas antibodies
WO2003020768A1 (en) A method for the treatment or prevention of bone erosion
JP2003146903A (ja) 骨破壊の治療又は予防剤組成物
Brosh et al. Treatment of induced murine SLE with a peptide based on the CDR3 of an anti-DNA antibody reverses the pattern of pathogenic cytokines
JP2001039892A (ja) 抗Ｆａｓ抗体を含有する医薬組成物
WO2023208990A1 (en) Combination therapy for the treatment of cancer comprising a fas axis antagonist and a t-reg cell depleting agent antagonist,
EP4072586A1 (en) Bcg car constructs and methods of their manufacture and use
JP2000169393A (ja) 抗Ｆａｓ抗体を含有する医薬
JP2000166573A (ja) ヒト化抗Ｆａｓ抗体
JPH11171900A (ja) 抗Ｆａｓ抗体
JP2000166574A (ja) ヒト化抗Ｆａｓ抗体
MXPA98002536A (en) Antibodies anti-
JP2004000228A (ja) 抗Ｆａｓ抗体
CZ9903452A3 (cs) Polidštěná molekula typu protilátky proti FAS, molekula typu protilátky s vybraným jedním nebo více těžkými řetězci a lehkými řetězci, profylaktický a léčebný přípravek, DNA kódující protilátku, rekombinantní DNA vektor, transformovaná hostitelská buňka, způsob výroby protilátky proti FAS, transformační kmen E. COLI, polypeptid, jeho kódující DNA, rekombinantní DNA vektor a transformovaná hostitelská buňka

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee