CN1071759C - 来自杀菌性通透性增强蛋白的功能区的生物活性肽及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的肽具有的氨基酸序列为人杀菌/增强通透性蛋白质(BPI)功能区的氨基酸序列或其亚序列，以及该序列的变异体或其亚序列，它们具有至少一种BPI的生物学活性，如肝素结合，肝素中和，LBS结合，LPS中和或杀菌活性，本发明提供了用于各种治疗用途的肽和该肽的药用组合物。

Description

来自杀菌性通透性增强蛋白的功能区的 生物活性肽及其应用
本申请是申请日为1994年3月11日的美国专利申请08/209,762的部分延续，申请08/209,762是申请日为1994年1月14日的美国专利申请08/183,222的部分延续，申请08/183,222是申请日为1993年7月15日的美国专利申请08/093,202的部分延续，申请08/093,202是申请日为1993年3月12日的美国专利申请08/030,644的部分延续。
本发明涉及来自或基于杀菌性通透性增强蛋白质多肽及其在治疗上的应用。
杀菌性通透性增强蛋白质(BPI)是从哺乳动物多形核嗜中性白细胞(PMNs)颗粒中分离出来的一种蛋白质，PMNs是哺乳动物抵抗微生物入侵所必需的血细胞。经酸提取并结合离子交换层析(Elsbach,1979,J.Biol.Chem.254:11000)或E.coli亲合层析(Weiss et al.,1987,Blood 69:652)已从PMNs中分离出人BPI,并对广谱革兰氏阴性细菌具有明显杀菌活性。人BPI分子量约为55,000道尔顿(55KD)。人BPI全部氨基酸序列以及编码BPI的DNA核苷酸序列已由Gray et al.,1989,J.Biol.Chem.264:9505阐明，此处引用以供参考(见Gray et al.图1)。
BPI的杀菌效力表现出对敏感的革兰氏阴性菌具有高度特异性。BPI杀死革兰氏阴性细胞的精确机制尚不清楚，但已知BPI必须先附着到敏感的革兰氏阴性细菌表面。BPI与细菌的这种最初的结合涉及碱性(即带正电荷)蛋白质BPI与脂多糖(LPS)上带负电荷的位点之间的静电相互作用。LPS也称作“内毒素”，因为它具有刺激炎症反应的作用。
BPI也能中和它所结合的LPS之内毒素活性。由于BPI对革兰氏阴性菌的杀菌特性和其结合并中和LPS的能力，BPI可用于治疗由革兰氏阴性细菌引起的哺乳动物疾病，包括败血症，内毒素血症和脓毒血症。BPI的这些双重特性使它对这类治疗给药特别有效并具优势。
相应于人BPI氨基末端部分的一段蛋白质裂解片段具有天然来源的人55KD全蛋白的LPS结合和中和活性及抗菌活性。与氨基末端部分相反，分离的人BPI羧基末端区域仅表现出微量可测的抗菌活性(Ooi et a1.,1991,J.Exp.Med.174:649)。用重组DNA技术生产出含有人NPI全蛋白质氨基末端前199个氨基酸残基的23KD蛋白，命名为“rBPI23”(见Gazzano-Santoro et al.,1992,Infect.Immun.60:4754-4761)。rBPI23的人体临床试验已经开始。当rBPI23与LPS同时注射时，可显著改善内毒素的炎症反应。
其它结合并中和内毒素的多肽在本领域中是已知的。一个例子是来自鲎阿米巴状细胞的鲎属抗脂多糖因子(LALF)(Warren etal.,1992,Imfect.Immunol.60:2506-2513)，另一个例子是来自多粘菌(Bacillas polymyxa)称为多粘菌素B1的环状阴离子脂肽。多粘菌素B1由6个α,γ-二氨基丁酸残基，一个D-苯丙氨酸，一个亮氨酸，一个苏氨酸和一个6-甲基辛酰结构部分组成(Morrison and Jacobs,1976,Immunochem.13:813-818)并且也具杀菌能力。缺失脂肪酸部分的多粘菌素类似物也是已知的，该类似物保留LPS结合能力但不能检测到杀菌活性(Danner et al.,1989,Antimicrob,Agents Chemother,33:1428-1434)。在合成的环化的多粘菌素类似物中也发现相似的特征(Rustici et al.,1993,Science259:361-365)。
已知的抗菌肽包括杀菌肽(cecropins)和爪蟾抗菌肽(maga-inins)。杀菌肽是在鳞翅目昆虫血淋巴中发现的一个抗菌肽家族(Wade et al.,1990,Proc,Natl.Acad.Sci.USA.87:4761-4765)，爪蟾抗菌肽是在非洲爪蟾皮肤和胃粘膜中发现的一个抗菌肽家族(Zasloff et al.,1988,Proc,Natl.Acad.Sci.USA.85:910-913)。这些肽是线型的其长度范围从约20到大约40个氨基酸。已报道了一种来自猪肠粘膜的活性较低的哺乳动物杀菌肽，即杀菌肽P1(Boman et al.,1993,Infect.Immun.61:2978-2984)。据报道杀菌肽与爪蟾抗菌肽相比具有更强的杀菌活性而对哺乳动物细胞的细胞毒性则较弱。杀菌肽和爪蟾抗菌肽具有特征性的连续亲水脂α-螺旋区这一结构区是杀菌活性所不可缺少的。到现在为止发现的具有最高活性的杀菌肽是杀菌肽A．杀菌肽A的前10个氨基酸序列与BPI氨基酸序列90-99有一定的同源性。然而，已证明是其杀菌活性所必需的杀菌肽A其它27个氨基酸则与BPI基本无同源性。爪蟾抗菌肽与BPI序列的同源性更小。
本申请感兴趣的是在PCT国际申请PCT/US91/05758中公开的涉及含BPI和一阴离子化合物的组合物，所说的组合物表现出：(1)无杀菌活性，(2)内毒素中和活性。阴离子化合物优选一种蛋白质如血清白蛋白的但也可以是多糖，如肝素。另外，Weiss et al.(1975,J.Clin,Invest,55:33-42)公开了肝素硫酸盐和LPS能阻断BPI增强通透性活性的表达。然而，没有参考文献公开BIP实际上中和肝素的生物学活性。肝素结合并不一定就意味肝素中和作用。例如：肝素结合生长因子(HBGF)家族需要肝素作为辅助因子来引起生物学反应。GBGF的例子包括：成纤维细胞生长因子(FGF-1,FGF-2)和内皮细胞生长因子(ECGF-1,ECGF-2)。参与凝血过程蛋白酶中的抗凝血酶Ⅲ的抑制作用是另一个例证表明肝素结合蛋白发挥活性需要肝素的结合而同时确实并不中和肝素。其正中和肝素的肝素结合蛋白(例如：血小板因子Ⅳ，鱼精蛋白和凝血酶敏感蛋白)对使用肝素作为辅助因子的肝素结合蛋白所产生的活性一般是抑制性的。
BPI(包括其氨基末端片段)具有一些其它重要的生物学活性。例如：在申请日为1993年3月12日的共同待批和共同转让的美国专利申请08/030,644及其部分延续的申请日为1993年7月15日的美国专利申请08/093,202中已显示BPI具有肝素结合和肝素中和活性，此处引用其公开的内容以供参考。由于肝素近年来的临床应用，BPI的这些肝素结合和中和活性具有重要的意义。在外科手术如心肺旁路，心脏插管和血液透析手术中为防止手术期间的血液凝固，通常以达到400V/kg的剂量注射肝素。当在手术期间为抗凝血效应而注射肝素时，手术后治疗的一个重要方面是迅速中和肝素的效力以便恢复正常的凝血功能。通常，鱼精蛋白用于中和肝素。鱼精蛋白是一类简单，富含精氨酸，强碱性，低分子量的蛋白质。单独给药时，鱼精蛋白(通常以鱼精蛋白硫酸盐的形式)具有抗凝血效力。当有肝素存在的条件下给药时，会形成稳定的复合物并且两种药物的抗血凝活性消失。然而，鱼精蛋白明显的降血压和类过敏副作用限制了其临床应用。因此，由于BPI的肝素结合和中和活性，它有可能作为鱼精蛋白的替代物在临床上用于中和肝素同时避免了限制鱼精蛋白应用的有害副作用。BPI另外的抗菌和抗内毒素效应与鱼精蛋白相比在手术后的肝素中和治疗中也更具有用和更具优势。
另外，部分由于其肝素结合和中和活性，BPI在抑制血管形成方面有用。在成年人中，血管形成生长因子因血管创伤(伤口愈合)，免疫刺激(自身免疫疾病)，炎症介质(前列腺素)或从肿瘤细胞中释放。这些因子经肝素依赖性的受体结合机制诱发内皮细胞的增生(它是血管形成所必需的)(见Yayon et al.,1991,Cell64:841-848)。血管形成也与一些其他病理学状况相关联，包括各种肿瘤的生长，增生和转移，糖尿病性视网膜病，晶状体后纤维组织形成，新生血管青光眼，牛皮癣，血管纤维瘤，免疫和非免疫炎症(包括类风湿性关节炎，游动巩膜斑内的毛细血管增生，血管瘤，子宫内膜异位和卡波济肉瘤)。因此，在这些和其他例子中需要抑制血管形成，而BPI的肝素结合和中和活性对达到这一目标是有用的。
已知一些其它的肝素中和蛋白抑制血管形成。例如，已知鱼精蛋白抑制与肿瘤相关的血管形成和随后的肿瘤生长[见Folkman etal.,1992,Inflammation:Basic Principles and Clinical Correlates,2d ed.,(Galin et al.,eds.,Review Press.N.Y.),Ch.40.pp.821-839]。第二种肝素中和蛋白即血小板因子Ⅳ也抑制血管形成(即具有血管制动性)。已知胶原酶抑制因子也抑制血管形成(见Folkman et al.,1992，出处同上)。另一已知的血管形成抑制因子即凝血酶敏感蛋白与肝素重复性丝氨酸/色氨酸结构域结合而不与碱性氨基酸结构域结合(见Guo et al.,1992,J.Biol.Chem.267:19349-19355)。
BPI的另一用途涉及与慢性炎症相关的病理状态，此时常伴有血管形成。与慢性炎症相关的人类疾病的一个例子是关节炎，它包括外周关节的炎症。在类风湿性关节炎中，炎症是免疫引起的，而在反应性关节炎中，炎症与滑膜组织被化脓菌或其它感染物所感染有关。Folkman等(1992，出处同上)也提出：许多类型的关节炎进展过程是从一种主要在关节内炎症侵润的阶段发展到后期新血管血管翳侵入关节并开始破坏软骨的阶段。在关节炎中血管形成是一种发病因素还是一种伴随现象尚不清楚，有证据表明血管形成在类风湿性关节炎中是维持滑膜炎所必需的。在胶原蛋白诱导的关节炎模型中，一种已知的血管形成抑制因子(AGM1470)已显示出阻止关节炎的发作和抑制关节炎形成的作用(Peacock et al.,1992,J.Exp.Med.175:1135-1138)。虽然非类固醇的抗炎药品，皮质类固醇和其它疗法已为缓解关节炎提供了治疗效果，但同时在本领域仍需要对关节炎和其它发炎疾病更有效的疗法。
在本领域内一直需要用作杀菌剂和内毒素中和剂、以及肝素中和和血管形成抑制(正常的或病理的)的新产品新方法。为此，一个研究途径是确定BPI蛋白质中决定其各个生物学活性的功能区。据此包含有一个或多个BPI活性的BPI功能区多肽可能表现出优越的治疗效果。
发明概述
本发明提供易于生产的小肽，其氨基酸序列是BPI功能区的氨基酸序列，或其亚序列及该序列的变异体，或至少具有BPI生物学活性之一的亚序列，如肝素结合、肝素中和，LPS结合，LPS中和或杀菌活性。此处公开和描述的BPI功能区包括：区段Ⅰ，包含从大约17号氨基酸到大约45号氨基酸的BPI氨基酸序列：区段Ⅱ，包含从大约65号氨基酸到大约99号氨基酸的BPI氨基酸序列；和区段Ⅲ，包含从大约142号氨基酸到大约169号氨基酸的BPI氨基酸顺序。因此，BPI功能区多肽以人BPI氨基末端部分为基础。
本发明的肽包括线型的和环化的肽，以及特定BPI功能区氨基酸序列或其亚序列和该序列或亚序列变异体的内线型，环状和支链组合的肽。组合肽包括具有BPI相同或不同功能区的序列或亚序列和该序列或亚序列变异体共价偶连起来的肽。特别是包括任一特定序列或其亚序列和该序列或亚序列变异体的2个到大约10个肽的组合。本发明还提供与已知BPI生物学活性不同的具有附加生物学活性的肽，包括但不限于具有不同靶细胞种属特异性的杀菌活性。还提供了具有BPI特定的生物学特征但与其相比活性增强或减弱的多肽。
本发明的肽包括线型和环化的肽，以及特定的BPI功能区氨基酸序列或其亚序列的线型、环化和支链氨基酸取代和增加的变异体。对于取代变异体，其特定多肽来源于BPI功能区相应位置上出现每个肽的一个或多个位点的氨基酸残基被不同的氨基酸残基(包括非典型的氨基酸残基)所取代。对于增加变异体的多肽可能含有总数大约达到10个的增加的氨基酸共价连接于此处所述的BPI功能区的肽之氨基末端或羧基末端或其两端。这些增加的氨基酸可能与BPI中邻接功能区的氨基酸重复或可能与BPI氨基酸序列无关并可能包括非典型的氨基酸。与每个前述BPI功能区肽的环化实施例一样，在本发明的肽中还提供了氨基酸取代和增加变异体的线性，环化和支链组合多肽的实施例。另外，本发明的多肽可能提供与其它功能性目标物(如免疫球蛋白片段)形成的融合蛋白。增加变异体包括氨基酸侧链化学基团(如胺、羧酸、烷基和苯基)的衍生物和修饰物。
本发明提供的药用组合物用于治疗哺乳动物中和内毒素杀死革兰氏阴性和革兰氏阳性菌和真菌，中和肝素的抗凝血特性，抑制血管增生，抑制肿瘤和内皮细胞增生，以及治疗慢性炎症疾病。该药用组合物含有本发明的单位剂量的BPI肽，以固态，半固态和液态剂量形式提供，如：片剂药丸，粉末，液体溶液或悬液和可注射及可浸入的溶液。
本发明提供的多肽具有氨基酸序列为含人BPI功能区Ⅰ的从约17位到大约45位的氨基酸序列，其序列为：Ⅰ区ASQQG-TAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKH(SEQIDNO:1)及其具有生物学活性的亚序列，该活性包括但不限于BPI的一种或多种活性，如，杀菌活性，LPS结合，LPS中和，肝素结合或肝素中和。本发明在该方面还提供具有与含有BPI从约17位到45位氨基酸序列功能区I肽的氨基酸序列大体相同的序列或其亚序列的肽。另外，本发明还提供含有两个或多个相同或不同的Ⅰ区肽或亚序列肽共价连接形成的肽。
本发明提供具有氨基酸序列为包含人BPI功能区Ⅱ的，从约65位到约99位的氨基酸序列的多肽，具有序列：Ⅱ区SSQIS-MVPNVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK(SEQIDNO:6)及其具有生物活性的亚序列多肽，该活性包括但不限于BPI的一种或多种活性，例如：杀菌活性，LPS结合，LPS中和，肝素结合或肝素中和活性。本发明在该方面还提供具有与含BPI从约65位到约99位的功能区Ⅱ氨基酸序列大体相同的序列或其亚序列的肽。另外，本发明还提供含两个或多个相同或不同的区段Ⅱ肽或亚序列肽共价连接形成的肽。
本发明还提供具有氨基酸序列为含人BPI从约142位到约169位，包含功能区Ⅲ的氨基酸序列的多肽，具有序列：Ⅲ区VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK(SEQIDNO:12)及其具有生物活性的亚序列的肽，该活性包括但不限于BPI的一种或多种活性，例如杀菌活性，LPS结合，LPS中和，肝素结合或肝素中和活性。本发明在该方面还提供具有与含BPI从约142位到约169位的功能区Ⅲ氨基酸序列大体相同的序列或其亚序列的肽。另外，本发明还提供含2个或多个相同或不同Ⅲ区肽或亚序列肽共价连接形成的肽。
本发明还提供功能区之间互相结合的肽，其中2个或多个来自不同功能区或其亚序列和变异体的肽共价连接起来。提供了这些功能区互相结合的肽线性，环化和支链的实施例。
本发明的肽在其应用方面至少具有BPI一种已知的活性，包括LPS结合，LPS中和，肝素结合，肝素中和和对革兰氏阴性细菌的杀菌活性。另外，令人惊奇的是本发明的一些肽已用作抗革兰氏阳性菌的杀菌剂。本发明的一些肽另一令人惊奇并且未料到的用途是作为杀真菌剂。本发明的肽提供了一类具有中和内毒素和杀死内毒素产生菌双重特征的抗生素分子，它在治疗由革兰氏阴性菌引起的哺乳动物疾病中是有用的。本发明保留该双重活性并另外增加了抗菌谱的肽代表了另一类新的抗微生物制剂。另外，对传统抗生素具抗性而对本发明的增强通透性抗微生物活性的肽敏感的微生物菌株感染时，本发明的肽提供了一类有用的抗微生物治疗制剂。
本发明还提供了本发明肽的药用组合物，它含有存在于药用上可接受的载体或稀释剂中的肽或肽的组合，或两者本身，并用于治疗病理的或疾病状态的方法中或用于其他合适的治疗用途。本发明还提供了这些药用组合物在治疗包括人在内的哺乳动物病理学或疾病状态时的使用方法。本发明还提供了BPI功能区肽用于各种治疗应用的药物制造法。
本发明从下面更详细描述的一些优选实施例和权利要求中特别优选出的实施例将成为证据。
附图简要描述：
图1a和1b描绘了溴化氰和rBPI23蛋白裂解片段的HPLC吸收谱；
图2是rBPI23蛋白裂解片段的LAL抑制试验结果图；
图3是用15残基的BPI肽进行肝素结合试验的结果图；
图4是用15残基的BPI肽进行鲎属阿米巴细胞溶胞产物(LAL)抑制试验的结果图；
图5是用15残基的BPI肽进行环状状扩散杀菌试验的结果图；
图6显示了BPI功能区肽在肝素结合试验中的作用；
图7a和7b显示了BPI功能区肽在凝血酶的ATIII/肝素抑制中的作用；
图8a和8b显示了BPI功能区肽在LAL抑制试验中的结果；
图9a,9b,9c,9d显示了BPI功能区肽在环状扩散杀菌试验中的结果；
图9e和图9f显示了BPI功能区肽在E.coli培养试验中的结果；
图10a,10b,10c,10d和10e显示了BPI功能区组合肽在环状扩散杀菌试验中的结果；
图11a,11b,11c,11d,11e,11f,11g,11h和11i显示了BPI功能区肽在环状扩散杀菌试验中的结果：
图11j和11k显示了用BPI功能区肽对生长于培养基中的细菌细胞进行杀菌试验的结果；
图11l显示了用BPI功能区肽BPI.30在人血清中进行杀菌试验的结果；
图11m和图11n显示了用BPI功能区肽对革兰氏阳性细菌进行环状扩散杀菌试验的结果；
图11o显示了在用S.aureus细胞进行放射状扩散杀菌试验中，BPI功能区肽与庆大霉素和万古霉素的比较结果；
图11p和11q显示了对生长于培养基中的C.albicans细胞用BPI功能区肽进行细胞毒性试验的结果；
图12a,12b,12c,12d,12e,12f和12g显示了用BPI功能区肽进行肝素中和试验的结果；
图13是BPIⅡ区肽BPI.2(BPI序列的85-99氨基酸序列，SEQIDNO:7)的结构示意图；
图14是BPIⅢ区肽BPI.11(BPI序列的148-161氨基酸序列，SEQIDNO:13)的结构示意图；
图15a,15b,15c,15d和15e显示了用BPI功能区取代肽进行肝素结合试验的结果；
图16显示了用各种BPI功能区肽进行肝素结合实验的结果；
图17a和17b显示了合成的BPI功能区肽和放射标记的rBIP23竞争性结合脂A试验的结果；
图18显示了合成的BPI.10肽和放射标记的rBPI23在血液或磷酸缓冲盐溶液中竞争结合脂A试验的结果；
图19显示了合成的BPI肽BPI.7,BPI.29和BPI.30对放射标记的rBPI23进行脂A结合竞争试验的结果；
图20a和图20b显示了BPI功能区肽与放射标记的rLBP25进行脂A结合竞争试验的结果；
图21显示了用预先与HUVEC细胞结合的BPI功能区肽进行放射标记的RaLPS结合实验的结果；
图22a,22b,22c,22d,22e,22f,22g和22h显示了测定BPI的LPS中和活性时影响细胞的TNF细胞毒性试验的各种参数；
图23a,23b和23c显示了在LPS刺激的RAW2647细胞中NO产物对γ-干扰素和LBP存在的依赖以及用rBPI23进行该NO产物的抑制作用；
图24a,24b,24c,24d,24e，和24f显示了用BPI功能区肽进行的LPS中和，它反映了在以酵母多糖或LPS刺激过的RAW264.7细胞中，它们抑制NO产物的能力；
图24g显示了合成的BPI肽用RAW264.7细胞抑制LPS或酵母多糖刺激的NO产物之IC50值；
图25是rBIP23的示意图，显示了它的三个功能区；
图26a显示了LPS介导的RAW264.7细胞增生抑制对rLBP存在的依赖；
图26b和26c用实施例20D的试验显示了BPI功能区肽的模型；
图27用实施例20E的试验显示了以各种BPI功能区肽在全血中进行TNF抑制的比较；
图28显示了用各种BPI功能区肽进行实施例20G所述的凝血酶凝血时间试验的结果。
优选实施例的详细描述
图29(a-h)显示了BPI功能区肽在实施例27所述的径向扩散杀菌试验中的结果。
本发明提供的肽具有BPI至少一个功能区的氨基酸序列或其亚序列以及该序列或亚序列的变异体的氨基酸顺序。为本发明的需要，术语“功能区”用于指定对蛋白质的全部生物学活性有贡献的BPI氨基酸序列的区域，。这些BPI功能区由蛋白质裂解的分裂片段，重叠的15残基肽和其它合成肽的活性来限定。
区段Ⅰ定义为含有BPI从约17位氨基酸到大约45位氨基酸的氨基酸序列。该区段肽在LPS诱导的LAL活性抑制和肝素结合试验中具有中等活性，并且不表现出明显的杀菌活性。区段Ⅱ定义为含有从大约65位氨基酸到大约99位氨基酸的BPI氨基酸序列。该区段肽表现出高LPS和肝素结合能力并具有杀菌力。区段Ⅲ定义为含有从大约142位氨基酸到大约169位氨基酸的BPI氨基酸序列。该区段肽表现出高LPS和肝素结合活性并具有杀菌力。
此处定义的功能区包括连续的区段Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ，即含BPI氨基酸序列连续部分的区域。但本发明也包括含不连续的BPI部分多肽，即分散于BPI序列中。认识到在天然蛋白质中一些不连续的氨基酸序列延伸部分可能折叠起来使这些氨基酸区域变成相近或靠近，将不连续区域以共价连接起来形成的肽可模拟本发明的肽结构。
含有BPI氨基酸序列不连续区域的多肽是本发明所提供的组合肽的一个例子。按本发明的需要，组合肽可以是包括线型，环化的或支链的肽，该肽包含具有来自相同或不同BPI功能区的一段氨基酸序列及其亚序列的2个或多个肽。该范围特别包含的组合体含有2个到10个左右功能区肽或其亚序列，特别是2个到3个功能区肽的组合体(例如，同源二聚体，同源三聚体，异源二聚体和异源三聚体)。含有该组合体的每个组合肽可能具有来自任一特定BPI功能区氨基酸序列或其亚序列的氨基酸序列。
为本发明的需要，术语“BPI的生物学活性”用于包括，但不限于人杀菌通透性增强蛋白质(BPI)的生物学活性，例如包括：重组BPI全蛋白，如rBPI(SEQIDNO:69)；BPI的氨基末端片段，如rBPI23；BPI突变的氨基末端片段，如rBPI21DDYS(在共同待批和共同转让的申请日为1993年2月2日的美国专利申请08/013,801和申请日为1994年2月2日的相应的PCT申请US94/01235中命名为rBPI(1-193)ala132，此处引用以供参考)。按照在共同待批和共同转让的美国专利申请08/093,202(引用以供参考)中所公开的方法生产了具有SEQIDNO:69所列序列的rBPI，除了151位的缬氨酸由GTG而不是GTC编码，185位残基是谷氨酸(由GAG编码)而不是赖氨酸(由AAG)编码)外与在Gray等(出处同上)中所示的一样。另外，除上述来自Gray等(出处同上)的序列外，用含有31个残基信号序列和rBPI前199个氨基酸序列的表达载体生产了rBPI23(也见，Gazzano-Santoroet al.,1992,Infect,Immun,60:4754-4761)。该生物学活性包括LPS结合，LPS中和，肝素结合和肝素中和，以及杀菌活性。特别是包括本发明的任一多肽的生物学活性为BPI或包含BPI相应功能区的相应肽之生物学活性的0.1到10倍。“BPI生物学活性”的定义还特地包括一种生物学活性；如杀菌活性，它与BPI或含有BPI全部相应功能区的相应多肽之活性相比具质量上的差别。例如，该质量差别包括：与BPI相应功能区的氨基酸序列有关多肽能有效杀死的细菌谱或其它微生物谱的差别。因此，该定义包含对BPI以前尚未报道的肽活性，如对革兰氏阳性细菌的杀菌活性和杀真菌活性。
本发明的任一肽具有的氨基酸序列为人BPI一个功能区的氨基酸序列或其亚序列。该肽的实施例包括下面典型的区段Ⅰ多肽[单个字母代表的氨基酸缩写见G.Zubay,Biochemistry(2d.ed.),1988(MacMillen Publishing:N.Y.)P.33]：BPI.1         QQGTAALQKELKRIK                    (SEQIDNO:4)；BPI.4         LQKELKRIKIPDYSDSFKIKHL             (SEQIDNO:3)；BPI.14        GTAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKHLGKGH(SEQIDNO:2)；andBPI.54        GTAALQKELKRIKIP                    (SEQIDNO:5)；下面典型的区段Ⅱ多肽：BPI.2         IKISGKWKAQKRFLK                    (SEQIDNO:7)；BPI.3         NVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK        (SEQIDNO:11)；andBPI.8         KWKAQKRFLK                         (SEQIDNO:8)；和下面典型的区段Ⅲ多肽：BPI.5         VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIE             (SEQIDNO:67)；BPI.11        KSKVWLIQLFHKK                      (SEQIDNO:13)；BPI.12        SVHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK(SEQIDNO:14)；BPI.13        KSKVGWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:15)；andBPI.55        GWLIQLFHKKIESALRNKMNS              (SEQIDNO:61).应认识到BPI.14,BPI.12和BPI.55是增加变异体的例子。本发明还提供了相同或不同多肽的线型和支链组合体，其中，组合体的每个肽具有的氨基酸序列为人BPI功能区之一的氨基酸序列或其亚序列。该肽的实施例包括下面典型的组合体功能区Ⅱ肽：BPI.9.        KRFLKKWKAQKRFLK                    (SEQIDNO:51)；BPI.7.        KWKAQKRFLKKWKAQKRFLK               (SEQIDNO:54)；BPI.10.1      KRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK          (SEQIDNO:55)；和BIP.10.2    QKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK         (SEQIDNO:65)；以及下面典型的支链区段Ⅱ多肽：MAP.1(β-丙氨酰-Na,Ne-取代的-[Na,Ne(BPI.2)赖氨酰]赖氨酸)；和下面典型的组合体区段Ⅲ多肽：BPI.29      KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIQLFHKK(SEQ.ID.NO:56)；和下面典型的支链Ⅲ区段Ⅳ多肽：MAP.2(1β-丙氨酰-Na,Ne-取代的-[Na,Ne(BPI.13)赖氨酰]赖氨酸)；和下面典型的区段Ⅱ-区段Ⅲ之间组合肽：BPI.30     KWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK(SEQIDNO:52)；BPI.60     IKISGKWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK(SEQIDNO:53)；和BPI.74   KSKVGWLIQIFHKKKWKAQKRFLK(SEQIDNO:70)；
还提供了氨基酸取代变异体，其中每个肽在一个或多个位点的氨基酸残基与产生该特定肽的BPI功能区相应位点所发现的氨基酸残基不同。例如：本发明在该方面的一个实施例中，肽的一个位点以缬氨酸残基取代了BPI氨基酸序列相应位点上所发现的氨基酸残基。在另一实施例中，肽的一个位点以诸如苯丙氨酸，亮氨酸，赖氨酸或色氨酸的残基取代了在BPI氨基酸序列相应位点发现的氨基酸。这些肽的实施例包括下列典型的Ⅱ区取代肽：BPI.15     AKISGKWKAQKRFLK       (SEQIDNO:16)；BPI.16     IAISGKWKAQKRFLK       (SEQIDNO:17)；BPI.17     IKASGKWKAQKRFLK       (SEQIDNO:18)；BPI.18     IKIAGKWKAQKRFLK       (SEQIDNO:19)；BPI.19     IKISAKWKAQKRFLK       (SEQIDNO:20)；BPI.20     IKISGAWKAQKRFLK       (SEQIDNO:21)；BPI.21     IKISGKAKAQKRFLK       (SEQIDNO:22)；BPI.22     IKISGKWAAQKRFLK       (SEQIDNO:23)；BPI.23     IKISGKWKAAKRFLK       (SEQIDNO:24)；BPI.24     IKISGKWKAQARFLK       (SFQIDNO:25)；BPI.25     IKISGKWKAQKAFLK       (SEQIDNO:26)；BPI.26     IKISGKWKAQKRALK       (SEQIDNO:27)；BPI.27     IKISGKWKAQKRFAK       (SEQIDNO:28)；BPI.28     IKISGKWKAQKRFLA       (SEQIDNO:29)；BPI.61     IKISGKFKAQKRFLK       (SEQIDNO:48)；BPI.73     IKISGKWKAQFRFLK       (SEQIDNO:62)；BPI.77     IKISGKWKAQWRFLK       (SEQIDNO:72)；BPI.79     IKISGKWKAKKRLK        (SEQIDNO:73)；和BPI.81    IKISGKWKAFKRFLK           (SEQIDNO:75)；和下面典型的Ⅲ区取代肽：BRI.31    ASKVGWLIQLFHKK            (SEQIDNO:33)；BPI.32    KAKVGWLIQLFHKK            (SEQIDNO:34)；BPI.33    KSAVGWLIQLFHKK            (SEQIDNO:35)；BPI.34    KSKAGWLIQLFHKK            (SEQIDNO:36)；BPI.35    KSKVAWLIQLFHKK            (SEQIDNO:37)；BPI.36    KSKVGALIQLFHKK            (SEQIDNO:38)；BPI.37    KSKVGWAIQLFHKK            (SEQIDNO:39)；BPI.38    KSKVGWLAQLFHKK            (SEQIDNO:40)；BPI.39    KSKVGWLIALFHKK            (SEQIDNO:41)；BPI.40    KSKVGWLIQAFHKK            (SEQIDNO:42)；BPI.41    KSKVGWLIQLAHKK            (SEQIDNO:43)；BPI.42    KSKVGWLIQLFAKK            (SEQIDNO:44)；BPI.43    KSKVGWLIQLFHAK            (SEQIDNO:45)；BPI.44    KSKVGWLIQLFHKA            (SEQIDNO:46)；BPI.82    KSKVGWLIQLWHKK            (SEQIDNO:76)；BPI.85    KSKVLWLIQLFHKK            (SEQIDNO:79)；BPI.86    KSKVGWLILFHKK             (SEQIDNO:80)；BPI.87    KSKVGWLIQLFLKK            (SEQIDNO:81)；BPI.91    KSKVGWLIFLFHKK            (SEQIDNO:86)；BPI.92    KSKVGWLIKLFHKK            (SEQIDNO:87)；BPI.94    KSKVGWLIQLFFKK            (SEQIDNO:89)；BPI.95    KSKVFWLIQLFHKK            (SEQIDNO:90)；BPI.96    KSKVGWLIQLFHKF            (SEQIDNO:91)；BPI.97    KSKVKWLIQLFHKK            (SEQIDNO:92).本发明提供的这种单个氨基酸被取代的BPI功能区肽的特定用途是鉴定多肽序列中的关键残基，其中氨基酸序列在特定位置的残基被取代后至少具有肽生物学活性中的一个可检测到的作用。本发明范围尤其包含的实施例是：具有在这种关键残基处被取代的本发明肽无论用任一氨基酸(天然出现的或非典型的)来鉴定，其中所得的取代肽仍具有此处所限定的生物学活性。
此外，还提供的取代肽是多位点的取代体，即，其中在功能区氨基酸序列中的两个或多个不同氨基酸残基分别被另一氨基酸取代。例如：在这种双位点被取代多肽的实施例中，多肽两个位点被诸如缬氨酸，苯丙氨酸或赖氨酸残基取代了在BPI氨基酸序列相应位点所发现的氨基酸。这些肽的实施例的例子包括多位点被取代的区段Ⅱ多肽：BPI.45     IKISGKWKAAARFLK             (SEQIDNO:31)；BPI.56     IKISGKWKAKQRFLK             (SEQIDNO:47)；BPI.59     IKISGAWAAQKRFLK             (SEQIDNO:30)；BPI.60     IAISGKWKAQKRFLA             (SEQIDNO:32)；和BPI.88     IKISGKWKAFFRFLK             (SEQIDNO:82)；和 典型的多处被取代的Ⅲ区段Ⅲ多肽：BPI.100    KSKVKWLIKLFHKK              (SEQIDNO:94)；和下面典型的多处被取代的区段Ⅱ取代体组合肽：BPI.101    KSKVKWLIKLFFKFKSKVKWLIKLFFKF(SEQIDNO:95)；和下面典型的多处被取代的区段Ⅱ-区段Ⅲ之间取代体组合肽：BPI.102    KWKAQFRFLKKSKVGWLILLFHKK    (SEQIDNO:96) 。
这种氨基酸取代变异体的另一方面是那些取代的氨基酸残基是非典型氨基酸。本发明肽在这一方面尤其包含的肽含有D-氨基酸，修饰的或非天然出现的氨基酸，以及改变的氨基酸，它们使多肽的稳定性，活性或生物学利用度提高。这些多肽的实施例包括下列示范的带有非典型氨基酸的区段Ⅱ肽：BPI.66    IKISGKWDKAQKRFLK              (SEQIDNO:49)；BPI.67    IKISGKAβ-(1-萘基)KAQKRFLK      (SEQIDNO:50)；BPI.70    IKISGKAβ-(3-吡啶基)KAQKRFLK     (SEQIDNO:63)；BPI.71    ADADKISGkWKAQKRFLK            (SEQIDNO:66)；BPI.72    IKISGKWKAQKRAβ-(3-吡啶基)LK     (SEQIDNO:64)；BPI.76    IKISGKWKAQFDRFLK             (SEQIDNO:71)；BPI.80    IKISGKWKAQAQAβ-(1-萘基)RFLK    (SEQIDNO:74)；BPI.84    IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK      (SEQIDNO:78)；BPI.89    IKISGKAβ-(1-萘基)KAFKRFLK      (SEQIDNO:84)；BPL.90    IKISGKAβ-(1-萘基)KAFFRFLK      (SEQIDNO:85)；具有非典型氨基酸的示范区段Ⅲ肽：BPI.83    KSKVGAAβ-(1-萘基)LIQLFHKK      (SEQIDNO:77)；和具有非典型氨基酸的示范区段Ⅱ-区段Ⅲ之间组合肽：BPI.93    IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIQLFHKK(SEQIDNO:88)；和 BPI.98    IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIFLFHKK(SEQIDNO:83)。
在多个功能区发生多处置换形成的氨基酸取代变异体多肽的线型和支链组合体实施例也是本发明的一个方面。这些肽的实施例包括下列示范的组合体/取代体区段Ⅱ肽.BPI.46    KWKAAARFLKKWKAQRFLK           (SEQIDNO:57)；BPI.47    KWKAQKRFLKKWKAAARFLK          (SEQIDNO:58)；BPI.48    KWKAAARFLKKWAAAKRFLK          (SEQIDNO:59)；BPI.69    KWKAAARFLKKWKAAARFLKKWKAAARFLK(SEQIDNO:60)；和BPI.99    KWKAQWRFLKKWKAQWRFLKKWKAQWRFLK(SEQIDNO:93)。
本发明还提供了各个上述BPI功能区肽的二聚体形成的和环化的实施例。这些肽的实施例包括下列示范的半胱氨酸被修饰的区段Ⅱ肽：BPI.58         CIKISGKWKAQKRFLK       (SEQIDNO:9)；BPI.65(red)    CIKISGKWKAQKRFLKC      (SEQIDNO:68)；BPI.65(ox.)                          (SEQIDNO:10).
因此，本发明包括的新化合物是分别基于BPI的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ区或与之相关，确定为第Ⅰ组、第Ⅱ组和第Ⅲ组的肽：第Ⅰ组ASQQGTAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKH         (SEQIDNO:1)；GTAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKHLGKGH        (SEQIDNO:2)；LQKELKRIKIPDYSDSFKIKHL                (SEQIDNO:3)；QQGTAALQKELKRIK                       (SEQIDNO:4)；GTAALQKELKRIKIP                       (SEQIDNO:5)；第Ⅱ组SSQISMVPNVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK   (SEQIDNO:6)；IKISGKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:7)；KWKAQKRFLK                             (SEQIDNO:8)；CIKISGKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:9)；CIKISGKWKAQKRFLKC                      (SEQIDNO:10)；NVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK            (SEQIDNO:11)；AKISGKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:16)；IAISGKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:17)；IKASGKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:18)；IKIAGKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:19)；IKISAKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:20)；IKISGAWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:21)；IKISGKAKAQKRFLK                        (SEQIDNO:22)；IKISGKWAAQKRFLK                        (SEQIDNO:23)；IKISGKWKAAKRFLK                        (SEQIDNO:24)；IKISGKWKAQARFLK                        (SEQIDNO:25)；IKISGKWKAQKAFLK                        (SEQIDNO:26)；IKISGKWKAQKRALK                        (SEQIDNO:27)；IKISGKWKAQKRFAK                        (SEQIDNO:28)；IKISGKWKAQKRFLA                        (SEQIDNO:29)；IKISGAWAAQKRFLK                        (SEQIDNO:30)；IKISGKWKAAARFLK                        (SEQIDNO:31)；IAISGKWKAQKRFLA                        (SEQIDNO:32)；IKISGKWKAKQRFLK                        (SEQIDNO:47)；IKISGKFKAQKRFLK                        (SEQIDNO:48)；IKISGKWDKAQKRFLK                      (SEQIDNO:49)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQKRFLK               (SEQIDNO:50)；KRFLKKWKAQKRFLK                        (SEQIDNO:51)；KWKAQKRFLKKWKAQKRFLK                   (SEQIDNO:54)；KRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK              (SEQIDNO:55)；KWKAAARFLKKWKAQKRFLK                   (SEQIDNO:57)；KWKAQKRFLKKWKAAARFLK                   (SEQIDNO:58)；KWKAAARFLKKWKAAARFLK                   (SEQIDNO:59)；KWKAAARFLKKWKAAARFLKKWKAAARFLK         (SEQIDNO:60)；IKISGKWKAQFRFLK                        (SEQIDNO:62)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQKRFLK               (SEQIDNO:63)；IKISGKWKAQKRAβ-(3-吡啶基)LK              (SEQIDNO:64)；QKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK             (SEQIDNO:65)；ADADIKISGKWKAQKRFLK                    (SEQIDNO:66)；IKISGKWKAQFDRFLK                      (SEQIDNO:71)；IKISGKWKAQWRFLK                        (SEQIDNO:72)；IKISGKWKAKKRFLK                                     (SEQIDNO:73)；IKISGKWKAQAβ-(1-萘基)RFLK                            (SEQIDNO:74)；IKISGKWKAFKRFLK                                     (SEQIDNO:75)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK                            (SEQIDNO:78)；IKISGKWKAFFRFLK                                     (SEQIDNO:82)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAFKRFLK                            (SEQIDNO:84)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAFFRFLK                            (SEQIDNO:85)；KWKAQWRFLKKWKAQWRFLKKWKAQWRFLK                      (SEQIDNO:93)CIKISGKWKAQKRPLC                                    (SEQIDNO:99)；IKKRAISFLGKKWQK                                     (SEQIDNO:100)；IKISGKWKAWKRFLK                                     (SEQIDNO:102)；IKISGKWKAWKRAβ-(1-萘基)LKK                           (SEQIDNO:104)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLK                   (SEQIDNO:111)；KWQLRSKGKIKIFKA                                     (SEQIDNO:113)；IKISGKAβ-(1-萘基 )KAAβ-(1-萘基)KRFLK                  (SEQIDNO:115)；IKISGKWKAQKRKLK                                     (SEQIDNO:116)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK                   (SEQIDNO:117)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK          (SEQIDNO:118)；IKISGKWKAQERFLK                                     (SEQIDNO:132)；IKISGKWKAQKRWLK                                     (SEQIDNO:137)；IKISGKWKAEKKDLK                                     (SEQIDNO:143)；KWAFAKKQKKRLKRQWLKKF                                (SEQIDNO:148)；KWKAQKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK                      (SEQIDNO:149)；KWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAQKRFLK              (SEQIDNO:150)；KWKAQKRFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK              (SEQIDNO:151)；KWKAQWRFLKKWKAQWRFLK                                (SEQIDNO:159)；KWKAAβ-(1-萘基)KRFLKKWKAAβ-(1-萘基)KRFLK              (SEQIDNO:160)；KAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK              (SEQIDNO:161)；KWKAQKRF                                            (SEQIDNO:163)；CKWKAQKRFLKMSC                                      (SEQIDNO:164)；CKWKAQKRFC                                          (SEQIDNO:165)；IKISGKWKAQKRAβ-(1-萘基)LK                            (SEQIDNO:166)；KWKAFFRFLKKWKAFFRFLK               (SEQIDNO:101)；IKISGKWKAAWRFLK                    (SEQIDNO:223)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)FRFLK           (SEQIDNO:224)；IKISGKWKAAFRFLK                    (SEQIDNO:225)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)ARFLK           (SEQIDNO:226)；第Ⅲ组：VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK       (SEQIDNO:12)；KSKVWLIQLFHKK                      (SEQIDNO:13)；SVHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK      (SEQIDNO:14)；KSKVGWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:15)；ASKVGWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:33)；KAKVGWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:34)；KSAVGWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:35)；KSKAGWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:36)；KSKVAWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:37)；KSKVGALIQLFHKK                     (SEQIDNO:38)；KSKVGWAIQLFHKK                     (SEQIDNO:39)；KSKVGWLAQLFHKK                     (SEQIDNO:40)；KSKVGWLIALFHKK                     (SEQIDNO:41)；KSKVGWLIQAFHKK                     (SEQIDNO:42)；KSKVGWLIQLAHKK                     (SEQIDNO:43)；KSKVGWLIQLFAKK                     (SEQIDNO:44)；KSKVGWLIQLFHAK                     (SEQIDNO:45)；KSKVGWLIQLFHKA                     (SEQIDNO:46)；KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIQLFHKK       (SEQIDNO:56)；GWLIQLFHKKIESALRNKMNS              (SEQIDNO:61)；VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIE             (SEQIDNO:67)；KSKVGWLIQLWHKK                     (SEQIDNO:76)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFHKK            (SEQIDNO:77)；KSKVLWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:79)；KSKVGWLILLFHKK                     (SEQIDNO:80)；KSKVGWLIQLFLKK                     (SEQIDNO:81)；KSKVGWLIFLFHKK                     (SEQIDNO:86)；KSKVGWLIKLFHKK                     (SEQIDNO:87)；KSKVGWLIQLFFKK                     (SEQIDNO:89)；KSKVFWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:90)；KSKVGWLIQLFHKF                     (SEQIDNO:91)；KSKVKWLIQLFHKK                     (SEQIDNO:92)；KSKVKWLIKLFHKK                           (SEQIDNO:94)；KSKVKWLIKLFFKFKSKVKWLIKLFFKF             (SEQIDNO:95)；KSKVGWLISLFHKK                           (SEQIDNO:103)；KSKVGWLITLFHKK                           (SEQIDNO:105)；KSKVGWLIQLFWKK                           (SEQIDNO:106)；KSKVGWLIQLFHKW                           (SEQIDNO:107)；KSKVGWLIQLAβ-(1-萘基)HKK                  (SEQIDNO:108)；KSKVGWLIQLFAβ-(1-萘基)KK                  (SEQIDNO:109)；KSKVGWLIQLFHKAβ-(1-萘基)                  (SEQIDNO:110)；KSKVGWLIQFFHKK                           (SEQIDNO:112)；KSKVKAβ-(1-萘基)LIQLFHKK                  (SEQIDNO:114)；KSKVGW(p-氨基)LIFLFHKK                    (SEQIDNO:119)；KSKVKWLIQLWHKK                           (SEQIDNO:120)；KSKVGWLIYLFHKK                           (SEQIDNO:121)；KSKVGWDLIQLFHKK                         (SEQIDNO:122)；KSKVGFLIQLFHKK                           (SEQIDNO:123)；KSKVGFDLIQLPHKK                         (SEQIDNO:124)；KSKVGAD-1-β-(1-萘基)LIQLFHKK               (SEQIDNO:125)；KSKVGA2-β-(1-萘基)LIQLFHKK                (SEQIDNO:126)；KSKVGAD-2-β-(1-萘基)LIQLFHKK               (SEQIDNO:127)；KSKVGA(吡啶基)LIQLFHKK                    (SEQIDNO:128)；KSKVGF(p-氨基)LIQLFHKK                    (SEQIDNO:129)；KSKVF(p-氨基)WLIQLFHKK                    (SEQIDNO:130)；KSKVGKLIQLPHKK                           (SEQIDNO:131)；CKSKVGWLIQLFHKKC                         (SEQIDNO:133)；KSKVKFLIQLFHKK                           (SEQIDNO:134)；KSKVGYLIQLFHKK                           (SEQIDNO:135)；KSKVGWLIQWFHKK                           (SEQIDNO:138)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FHKK                  (SEQIDNO:139)；KSKVGA(环己基)LIQLFHKK                    (SEQIDNO:140)；KSKVGWLIQLFAβ-(1-萘基)KAβ-(1-萘基)         (SEQIDNO:142)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFAβ-(1-萘基)KK         (SEQIDNO:144)；KSKVKALIQLFHKK                           (SEQIDNO:157)；KSKVGVLIQLFHKK                           (SEQIDNO:162)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFHKKAβ-(1-萘基)        (SEQIDNO:167)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQAβ-(1-萘基)FHKK         (SEQIDNO:168)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIF(p-氨基)LFHKK           (SEQIDNO:169)；KSKVF(p-氨基)Aβ-(1-萘基)LIQLFHKK           (SEQIDNO:170)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLWHKK                  (SEQIDNO:171)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FHKAβ-(1-萘基)              (SEQIDNO:172)；KSKVGWLIF(p-氨基)LFHKAβ-(1-萘基)                (SEQIDNO:173)；KSKVF(p-氨基)WKIQLFHKAβ-(1-萘基)                (SEQIDNO:174)；KSKVGWLIQLWHKAβ-(1-萘基)                       (SEQIDNO:175)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FAβ-(1-萘基)KK              (SEQIDNO:176)；KSKVGWLIF(P-氨基)LFAβ-(1-萘基)KK                (SEQIDNO:177)；KSKVF(p-氨基)WLIQLFAβ-(1-萘基)KK                (SEQIDNO:178)；KSKVGWLIQLWAβ-(1-萘基)KK                       (SEQIDNO:179)；KSKVGWLIF(P-氨基)Aβ-(1-萘基)FHKK                (SEQIDNO:180)；KSKVF(p-氨基)WLIQAβ-(1-萘基)FHKK                (SEQIDNO:181)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)WHKK                       (SEQIDNO:182)；KSKVF(p-氨基)WLIF(p-氨基)LFHKK                  (SEQIDNO:183)；KSKVGWLIF(p-氨基)LWHKK                         (SEQIDNO:184)；KSKVF(p-氨基)WLIQLWHKK                         (SEQIDNO:185)；KSKVGAD-β-(2-萘基)LILLFHKK                     (SEQIDNO:190)；KSKVGWLILLFHKKKVGWLILLFHKK                   (SEQIDNO:191)；KSKVGWLIFLFHKKSKVGWLIFLFHKK                  (SEQIDNO:192)；KSKVGWLILLSKVGWLIQLFHKK                      (SEQIDNO:193)；KSKVGWLIQLFHKKSKVGWLILLFHKK                  (SEQIDNO:194)；KSKVGWKIFLFHKKKWVGWLIQLQLFHKK                (SEQIDNO:195)；KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIFLFHKK                 (SEQIDNO:196)；KSKVGWLILLWHKK                               (SEQIDNO:198)；KSKVGAD-β-(2-萘基)LIQLWHKK                     (SEQIDNO:199)；KSKVGAD-β-(2-萘基)LILLWHKK                     (SEQIDNO:200)；KSKVGGLIQLFHKK                               (SEQIDNO:201)；KSKVGLLIQLFHKK                               (SEQIDNO:202)；KSKVGILIQLFHKK                               (SEQIDNO:203)；KSKVGADLIQLFHKK                             (SEQIDNO:204)；KSKVGVDLIQLFHKK                             (SEQIDNO:205)；KSKVGAβLIQLFHKK                            (SEQIDNO:206)；KSKVG(δ-氨基丁酸)LIQLFHKK                      (SEQIDNO:207)；KSKVG(γ-氨基丁酸)LIQLFHKK                      (SEQIDNO:208)；KSKVGA(δ-甲基)LIQLFHKK                        (SEQIDNO:209)；KSKVGG(叔丁基)LIQLFHKK                         (SEQIDNO:210)；KSKVGG(N-甲基)LIQLFHKK                         (SEQIDNO:211)；KSKVGV(N-甲基)LIQLFHKK                         (SEQIDNO:212)；KSKVGL(N-甲基)LIQLFHKK                         (SEQIDNO:213)；KSKVGWLINLFHKK                                (SEQIDNO:214)；KSKVGWLIELFHKK                                (SEQIDNO:215)；KSKVGWLIDLFHKK                           (SEQIDNO:216)；KSKVGWLIKLFHKK                           (SEQIDNO:217)；KSKVKVLIQLFHKK                           (SEQIDNO:218)；KSKVKWAIQLFHKK                           (SEQIDNO:219)；KSKVGVAIQLFHKK                           (SEQIDNO:220)；KSKVKVAIQLFHKK                           (SEQIDNO:221)；本发明包括确定为第Ⅳ组的具有来自不同区的部分的肽：第Ⅳ组：KWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK                 (SEQIDNO:52)；IKISGKWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK            (SEQIDNO:53)；KSKVGWLIQLFHKKKWKAQKRFLK                 (SEQIDNO:70)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIFLFHKK   (SEQIDNO:83)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIQLFHKK   (SEQIDNO:88)；KWKAQFRFLKKSKVGWLILLFHKK                 (SEQIDNO:96)；Aβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKF                (SEQIDNO:136)；KWKAAARFLKKSKVGWLIQLFHKK                 (SEQIDNO:141)；KWKVFKKIEKKSKVGWLIQLFHKK                 (SEQIDNO:147)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKSKVGWLIQLFHKK(SEQIDNO:154)；KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLKKSKVGWLIQLWHKK(SEQIDNO:155)；KWKAQWRFLKKSKVGWLIQLFHKK                 (SEQIDNO:158)；KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)FLKKSKVGWLILLFHKK(SEQIDNO:186)；KWKAQFRFLKKSKVGWLIQLWHKK                 (SEQIDNO:187)；KWKAQFRFLKKSKVGAD-β-(2-萘基)LIQLFHKK      (SEQIDNO:188)；KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)KRFLKKSKVGAD-β-(2-萘基)LIQLFHKK(SEQIDNO:189)；KWKAQFRFLKKSKVGWLIFLFHKK                 (SEQIDNO:197)；KAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLILLFHKK        (SEQIDNO:222)。
此处描述的BPI功能区肽作为对革兰氏阴性细菌的有效抗菌剂并中和革兰氏阴性细菌膜相关的LPS毒性作用是有用的。本发明的肽具有数量不同的其他BPI活性，包括不直接与革兰氏阴性细菌感染相关联的活性，如肝素结合和中和活性。本发明提供的肽还可具有与BPI已知生物学活性不同的活性。例如：令人惊奇地发现本发明肽的一些实施例中，其杀菌活性的生物学效应范围比BPI更宽，并表现出对革兰氏阳性菌以及革兰氏阴性菌的杀菌活性。本发明的一些实施例还出人意料地发现具有杀真菌活性。因此，本发明的优势在于提供的多肽具有BPI生物学功能区的氨基酸序列并有独特的抗微生物活性。本发明的肽具有BPI双重的抗菌和抗内毒素特征，包括那些具有增加的抗生谱的肽，它们代表了一类新的抗生素分子。
本发明的BPI功能区肽具有迄今在BPI蛋白质产物中发现的生物学治疗用途。例如，在申请日为1994年1月24日共同拥有，共同待批的美国专利申请08/188,221中论述了BPI蛋白产物在治疗人的革兰氏阴性细菌内毒素血症的应用。例如申请日为1993年3月12日的共同拥有，共同待批的美国专利申请08/031,145和申请日为1994年3月11日的PCT/US 94/02463论述了用于治疗分枝杆菌疾病的BPI蛋白制剂。申请日为1993年10月5日的共同拥有，共同待批的美国专利申请08/132,510论述了在治疗涉及网状内皮系统功能受抑制的状态中BPI蛋白质制剂的应用。例如申请日为1993年9月22日的共同拥有，共同待批的美国专利申请08/125,651论述了BPI蛋白质制剂和抗生素的协同组合体。例如申请日为1993年7月14日的共同拥有，共同待批的美国专利申请08/093,201和申请日为1994年7月14日的PCT/US 94/07834论述了用LBP蛋白质制剂加强BPI蛋白质制剂杀菌活性的方法。为举例证明本发明的BPI功能区肽的治疗用途，此处特别引用上述申请的公开内容以供参考。本发明的BPI功能区肽还具有在上述美国专利申请08/030,644,08/093,202,08/183,222和08/209,762专利申请及申请日为1994年3月11日的相应的PCT/US94/02465中所公开的治疗病理条件和疾病状态的治疗用途。
因此，本发明的BPI功能区肽在下列方法中是有用的：中和肝素的抗凝作用；抑制血管形成(尤其是与眼视网膜病相联系的血管形成)；抑制内皮细胞增生(尤其是与受精卵植入相联系的子宫内膜异位和增生)；抑制恶性肿瘤细胞增生(尤其是卡波济肉瘤增生)；治疗慢性炎症疾病状态(如关节炎，尤其是发作的类风湿性关节炎)；治疗革兰氏阴性细菌感染及其后遗症；治疗在血液循环中革兰氏阴性内毒素的有害影响(如增加细胞因子产生)；杀死革兰氏阴性细菌；治疗与网状内皮系统功能受抑制相联系的有害生理学影响(尤其涉及肝脏枯否氏细胞功能受抑制，如肝脏受到物理的，化学的和生物学损害而引起的病变)；与抗生素(如庆大霉素，多粘菌素B和cefamandole nafate)协同治疗革兰氏阴性细菌感染及其后遗症；与抗生素协同组合杀死革兰氏阴性细菌；与LBP蛋白质制剂联合治疗革兰氏阴性菌感染及其后遗症；与LBP蛋白质产物联合抗革兰氏阴性细菌；单独或与抗生素和/或铋联合治疗分枝杆菌感染(尤其是被结核杆菌，麻疯杆菌和M.avium的感染)；治疗血液循环中脂肪阿拉伯甘露聚糖的有害生理影响(如增加细胞因子产生)；净化含脂阿拉伯甘露聚糖的体液(如全血，血浆，血清和骨髓)；和治疗与弯曲菌属的细菌感染相联系的疾病状态(如胃炎和消化性的胃及十二指肠溃疡)。本发明还提供用于上述用途有效量的BPI功能区多肽的药物制剂，包括用作口服、肠胃外的、局部的和喷雾剂型的药剂，以及特殊的附加成份包括可做药用的稀释剂，佐剂和载体。
关于与LBP蛋白质产物联合的BPI功能区肽的应用、此处所用的“LBP蛋白质产物”包括天然的和重组的脂多糖结合蛋白质产物；天然的、合成的和重组的生物学活性多肽片段以及脂多糖结合蛋白质的衍生物；生物学活性多肽类似物，包括LBP或其生物学活性片段的杂交融合蛋白质。根据本发明的方法有用的LBP蛋白产物包括如在申请日为1993年6月17日共同拥有和共同待批的美国专利申请08/079,510，申请日均为1994年6月17日的美国专利申请08/261,660和相应的PCT/US 94/06931中所述命名为rLBP的，可在转化的真核宿主细胞中以重组基因表达生产的LBP全蛋白。在该申请中还描述了优选的缺乏CD14介导的炎症特性并保留通过CD14受体介导结合LPS活性能力之LBP蛋白质衍生物。根据本发明优先使用该LBP蛋白质产物，因为过多的CD14-介导的免疫刺激一般认为是无益的、在患感染的个体中尤其如此。
优选的LBP蛋白质衍生物被鉴定为分子量为大约25KD的氨基末端片段。最优选的LBP氨基末端片段鉴定为LBP氨基末端的前197个氨基酸的氨基酸序列，如SEQIDNOS:97和98所列出的，并命名为rLBP25，该产物在前面提到的共同拥有和共同待批的美国专利申请08/079,510,08/261,660和相应的PCT/US94/06931中已描述。
在保留结合LPS能力的前提下，期望LBP蛋白质衍生物尽可能小于25KD并包含明显少于全LBP分子氨基末端的前197个氨基酸适用于本发明。另外，在丢失CD14介导的免疫刺激活性之成份的前提下，预期LBP蛋白质衍生物大于全LBP分子前197氨基酸残基并包括rLBP前197个氨基酸羧基末端一侧的氨基酸(如SEQIDNOS:97和98所公开)同样证明对本发明的方法有用。还可预料到本领域的技术人员能对SEQIDNOD:97和98的氨基酸残基进行增加，删除和取代而不失去所需的该分子的生物学活性。更进一步可经删除，取代、增加或突变包括对编码LBP全蛋白的DNA序列的指定位点诱变的突变得到LBP蛋白产物，其中的蛋白质产物保留了LPS结合活性而缺乏CD14介导的免疫刺激活性。尤其期望有是可导致改进LBP对细菌和亲合性和/或增强体内稳定性的LBP杂交分子和二聚体形式。这些包括LBP/BPI杂交蛋白和LBP-Ig融合蛋白。这类杂交蛋白质还包括那些使用人γ-1或γ-3铰链区以允许二聚体形成的蛋白质。二聚体的其它形式期望具有增强的血清稳定性和结合亲合力，包括与缺失CH2区的Fc融合，或使用亮氨酸或螺旋结构的杂交分子。
本发明的BPI功能区多肽可以本领域已知的任何方法，包括以组产物的方法来生产和/或分离。1991年7月2日公开的共同拥有的美国专利5,028,530,1993年4月27日公开的共同拥有的美国专利5206154和申请日为1993年1月28日的共同拥有，共同待批的美国专利申请08/010,676(此处引用以上文件以供参考)均公开了包括抗微生物肽的多肽重组生产的新方法。在细菌中重组生产抗微生物多肽的其他程序已由Piers et al.1993,Gene134:7-13描述。申请日为1992年5月19日的共同拥有，共同待批的美国专利申请07/885,501及其部分延续的申请日为1993年5月19日的美国专利申请08/072,063和相应的PCT/US93/04752(此处引用它们以供参考)均公开了在培养基中纯化从基因转化的哺乳动物宿主细胞表达和分泌的重组BPI并且公开了大批量生产重组BPI的方法，以适于配制稳定的，纯化的药用制剂。
使用任一这类方法也可能有效地生产BPI功能区多肽。那些本领域的普通技术人员能分离或化学合成编码本发明各个肽的核酸。该核酸在用作重组表达载体的成份时是重要的成分。其中，该核酸可与转录和/或翻译调控元件进行连接，并且这类重组表达载体能在其转化的各种细胞培养中表达本发明多肽，包括原核细胞或更好地用真核细胞，或最好用哺乳动物细胞。
以本领域已知的任何化学合成技术，尤其是固相合成技术，例如，使用商用自动肽合成仪可能很有效地合成本发明的肽。该肽也可能以组合肽的形式提供，其中包含组合体的肽是以线型方式互相连接，并且其中的BPI序列在肽中存在重复，允许选择的构象存在“间隔区”氨基酸将重复区分开或不分开。本发明还提供支键组合体，其中的组合肽是在含有该肽的氨基酸的氨基酸侧链上进行具功能性的共价连接。
本发明的功能区肽能以含有BPI功能区肽和至少一种其它多肽中至少一部分的重组杂交融合蛋白质的形式提供。例如，在由Thofan等共同拥有，共同待批的美国专利申请07/885,911(申请日为1992年5月19日)及其部分延续的美国专利申请系列08/064,693(申请日为1993年5月19日)和相应的PCT/US93/04754中描述了这类蛋白质(此处全面引用以供参考)。
一般来说，那些本领域的技术人员将认识到此处所述的肽可用各种化学技术进行修饰以产生具有与未修饰的肽活性基本相同并理想地还具有其它有用特征的复合物。例如，肽的羧酸基团，不管是羧基末端还是侧链可以药用上可接受的阳离盐的形式提供，或酯化形成C1-C16脂，或转化成式NR1R2的酰胺，其中R1和R2是互不依赖的H或C1-C16烷基，或组合形成杂环，如5元或6元环。肽的氨基基团，不管是氨基末端还是侧链，可以是药用上可接受的加酸盐形式，例如HCl,HBr，乙酸，苯甲酸，甲苯磺酸，马来酸，酒石酸或其它有机酸盐，或可被修饰为C1-C16烷基或双烷基胺或进一步转化为酰胺。使用熟知技术可将肽侧链的羟基转变为C1-C16烷氧基或C1-C16酯。肽侧链的苯和酚环可被一个或多个卤素原子，如氟、氯、溴、碘、或被C1-C16烷基，C1-C16烷氧基、羧酸及其酯、或该羧酸的酰胺所取代。肽侧链的亚甲基可延伸成同源C2-C4亚烷基。疏基可用任一熟知的保护基团如乙酰胺基团来保护。本领域的技术人员也将认识到将环状结构导入本发明的肽中以选择和提供导致结合和/或稳定性增强的结构制约的构象之方法。例如、可羧基末端或氨基末端的半胱氨酸残基加入肽中，以便该肽氧化时含-二硫键，由此产生一环状的肽。其它肽的环化方法包括疏基酯和羧基和氨基末端的酰胺和酯。
此处明确地声明，肽类似物和有机物类似物实施例也在本发明的范围之内，其中该肽类似物和有机物类似物的三维排列与本发明多肽骨架结构和氨基酸侧链成份相似，导致本发明肽的肽类似物和有机物类似物具有重要的生物学活性。它提示每种BPI的所述活性存在一种药效基团。芘效基团是一种预测的，为生物学活性所必需的三维结构的定义。用通用的计算机模拟软件(计算机辅助药物设计)可设计出适合每个药效基团的肽类似物和有机物的类似物。药效基团之间的特异性活性的重叠程度仍有待于鉴定。
BPI功能区多肽的给药可采用含有BPI功能区多肽和允许药用的稀释剂，佐剂，或载体制成药用组合物。BPI功能区肽组合物可与已知的抗生素、表面活性剂或其他化学治疗剂联合或单独给药。在申请日为1993年2月2日的共同拥有，共同待批的美国专利申请08/012,360及其部分延续的申请日为1994年2月2日的美国专利申请08/190,869和申请日为1994年2月2日的相应的PCT/US 94/01239中已描述了这种组合的实施例，此处引用其公开以供参考。
本领域的技术人员很容易根据与相应生物学活性相联系的通用参数，例如包括：病人的体重，细菌感染的程度和特征，内毒素休克的程度和特征，以及对象施用肝素的数量和施用肝素后的时间来鉴定用于杀菌活性的BPI功能区肽的有效剂量；对肝素抗凝活性的部分或全部中和，对LPS的部分或全部中和以及其他本发明所述的作用等。本领域的技术人员同样能使用本发明实施例的肽来确定本文所述和所期望的治疗用途。
本发明的实施例包含的药物可制备成口服剂，注射剂或其他肠胃外方法的药剂，并最好包括本领域的技术人员已知的常规允许药用的载体、佐剂和平衡离子。该药物的最佳形式为单位剂量的固态、半固态和液体剂型，如片剂、丸剂、粉末，液体溶液或悬液，以及可注射的和可吸收的溶液。预期的有效剂量范围为从约100kg/kg到约10mg/kg体重。
下面实施例是本发明具体实例及其各种用途的例证。实施例1描述了BPI蛋白质裂解片段的制备；实施例2描述了用实施例1的蛋白质裂解片段进行杀菌试验的结果；实施例3描述了用实施例1的蛋白质裂解片段进行肝素结合试验的结果；实施例4描述了使用鲎属阿米巴细胞溶胞产物试验实施例1的蛋白质裂解片段LPS结合活性的实验结果；实施例5描述了BPI 15-聚体肽的制备；实施例6描述了使用实施例5的15-聚体肽进行肝素结合试验的结果；实施例7描述了使用实施例5的15聚体肽进行鲎属阿米巴细胞溶胞产物试验的结果；实施例8描述了实施例5的15聚体肽杀菌试验的结果；实施例9描述了BPI各个功能区肽的制备；实施例10描述了使用实施例9的BPI各个功能区肽进行肝素结合试验的结果；实施例11描述了使用实施例9的BPI各个功能区肽进行肝素中和试验的结果；实施例12描述了使用实施例9的BPI各个功能区肽进行LPS中和活性的鲎属阿米巴细胞溶胞产物试验的结果；实施例13描述了实施例9的BPI各个功能区肽杀菌试验的结果；实施例14描述了BPI功能区肽组合体的制备；实施例15描述了实施例14的BPI功能区肽组合体的杀菌活性试验；实施例6描述了实施例14的BPI功能区肽组合体额外的杀菌活性试验；实施例17描述了使用实施例14的BPI功能区肽组合体进行体内和体外肝素中和试验的结果；实施例18描述了BPI取代的各种功能区肽的制备和杀菌活性，肝素结合活性和LPS中和活性试验的功能活性分析；实施例19总结了有代表性的BPI功能区肽对杀菌和肝素结合试验的结果；实施例20描述了在各种结合和中和试验中BPI功能区肽的分析；实施例21论述了肝素中和试验；实施例22描述了在胶原蛋白和细菌诱导的关节炎动物模型系统中用BPI功能区肽给药来例证对慢性炎症疾病状态的治疗；实施例23阐明了在小鼠恶性黑色素瘤转移模型系统中BPI功能区肽的血管抑制作用试验；实施例24论述了BPI功能区肽对内皮细胞增生的影响；实施例25描述了在动物模型系统中BPI功能区肽的分析；实施例26描述了在人体内试验本发明BPI功能区肽的抗内毒素效果的方案；实施例27描述了施用BPI功能区肽以测试其对抗生素耐药性菌株的抗微生物效果。
实施例Ⅰ
BPI蛋白水解片段的制备
对rBPI23进行化学裂解和酶促消化处理，以产生重组BPI蛋白质的各种不同大小的蛋白水解片段。
如用溴化氰(CNBr)或蛋白内切酶Asp-N进行蛋白水解之前还原并烷基化处理rBPI23。加入冷(4℃)丙酮(1∶1V/V)后经过液沉淀使蛋白质脱盐，并在离心(5000×9)10分钟后经沉淀回收沉淀的蛋白质。用冷丙酮将rBPI23蛋白质沉淀团块洗两次并在氮气流下干燥之。然后在8M尿素/0.1MTris-HCl(pH8.1)中重新配制rBPI23溶液使其终浓度为1mg蛋白质/ml，并加入3.4mM二硫苏糖醇(Calbiochem,San DIego,CA)于37℃处理90分钟以还原之。加入碘乙酰胺(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)至终浓度5.3mM并在暗处于室温下保温30分钟以完成烷基化。用丙酮沉淀、离心并按上述方法洗经过还原和烷基化的蛋白质，然后重新溶解沉淀饼以按下述方法进行CNBr或Asp-N消化。
为进行CNBr催化的蛋白质片段裂解，首先将蛋白质沉淀饼溶解在70％三氟乙酸(TFA)(Protein Sequencing Grade,SiglnaChemical Co.,St.Louis,MO)中至蛋白质浓度为5mg/ml。加入溶解可70％TFA中的溴化氰Baker Analyzed Reagent,VWR Sci-entific,San Francisco,CA)，达到CNBr至蛋白质2∶1(W/W)的最终比例。这一比例使CNBr相对于rBPI23蛋白质中蛋氨酸残基数目而言大约是75倍摩尔过量。用氮气清洗反应混合物并使反应在暗处于室温下进行24小时。加入9倍体积的蒸馏水终止反应，并冷冻(-70℃)并冻干之。
为进行蛋白内切酶消化，将经过还原和烷基化的rBPI23以0.5mg/ml的浓度溶解在8M尿素/0.1MTris-HCl(pH8.1)中。然后加入等体积的0.1MTris-HCl(pH8.1)以使5M尿素/0.1MTris-HCl(pH8.1)中含有浓度为2.5mg/ml的蛋白质。以1:1000(W/W，酶:底物)的比例加入得自Pseudomonas fragi的蛋白内切酶Asp-N(Boehringer-Mannhein,Indianapolis,IN)，并于37℃消化6小时。加入终浓度为0.1％的TFA终止反应，然后经反相HPLC分级分离样品。
在Zobax蛋白质加C3柱(4.6×250mm,300A孔经，MAC-MOD Analytical Inc,Chadsford,PA)上纯化CNBr和Asp-N片段混合物。在2小时洗脱期间内以1.0ml/分钟的流速在该柱上通过从5％乙腈(溶于0.1％TFA)至80％乙腈(溶于0.1％TFA)范围的洗脱梯度。使用Beckman System Gold HPLC(Beckman Sci-entfic Instruments,San Ramon,CA)于220mm处监测各洗脱部分。使柱加热分隔保持在35℃并手工收集各管，于-70℃下冷冻并在Speed Vac浓缩器中干燥。然后将各部分溶解在20mM乙酸钠(pH4.0)/0.5MNaCl的溶液中备用。
由Francis Bitsch博士和John Kim博士在1aboratory of DriCedric Shachleton,Children’s Hospital-Oakland Research Institute中，在VGBio-G质谱仪上进行电喷射离子化质谱分析(ESI-MS)。根据对数据的术学转化得到分子质量。
虽然rBPI23的DNA序列编码成熟蛋白质的氨基酸残基1-199，但根据ESI-MS测定结果，所产生的蛋白质的有意义部分是在Leu-193和Va-195处截短的。经分离羧基末端胰酶解肽、测定其序列并用ESI-MS法分析，证实这些羧基末端截短序列的存在。
在rBPI23蛋白质中的56、70、100、111、170和196位上共有6个蛋氨酸，并如所预期的经用溴化氰化学裂解后产生6个主要肽片段。CNBr裂解实验的结果总结于表1中。以反相(C3)HPLH法分离各片段(图1a)并经Edman降解确定它们的氨基末端序。用C3HPLC柱层析和进一步尝试的离子交换层析，均没有将两头最大的片段(C1和C5)分辨开，推测这可能是因为它们有相似的长度和某电点。经ES1-MS确定混合物内(C1和C5片段的特征。推测的C1质量为6269(表1)，考虑这是由于在CNBr裂解反应期间羧基末端蛋氨酸转化成高丝氨酸而丢失30a.m.u.o所观察到的6251.51±0.34的质量与高丝氨酸内酯中间体中丢失水分子(18a、m、u)相符-由于C1片段C末端氨基酸的疏水性，故其有利于高丝氨酸的生成。推测的C5)片段的质量为6487，且所观察到的质量为6385.84±0.39(表1)。对于C5片段，C末端氨基酸是亲水的，所以可能有利于高丝氨酸内酯中间体的水解。根据序列分析和质谱数据，C5成分代表C1/C5混合物中材料的大约10-25％。
用蛋白内切酶Asp-N进行蛋白水解裂解，以提供CNBrC1/C5混合物内所包含之区域的其他片段。rBPI23序列内分别在位置15、36、39、57、105和116上共有6个天冬氨酸残基。测定以C3HPLC分离之6个大Asp-N片段的序列并用ESI-MS测定质量(表1)。以1∶1000(W/W，酶∶底物)的比例进行短期间消化以排除可能的非特异性裂解，特别晨谷氨酸残基处的裂解。很明显，这一消化并没有全部完成，因为分离到了一个Asp残基(氨基酸15和35)未被裂解的片段(1-38)。Asp-N片段的质谱与预略的各别片段的质量相符。与CNBr裂解不同的是羧基末端片段很难分解，可从所有其他Asp-N片段中很好地分辨出从氨基酸116至羧基末端的Asp-N片段。
表ⅠrBPI23裂解片段分析的总结
CNBr裂解片段                             质量峰        序列         I.D.        测定的    推测的Ⅰ      101-110     C4(101-111)      N.D.     1169Ⅱ        5767      C2(57-70)        N.D.     1651Ⅲ       71-99      C3(71-100)       N.D.     3404Ⅳ      171-194     C6(171-196)      N.D.     2929Ⅴ   1-25,112-124    C1(1-56),       6251     6269C5(112-170)       6486     6487
 Asp-N蛋白水解的片段                      质量峰        序列          LD.         测定的   推测的A         1-14       A1(1-14)       1465.5     1464Ⅰ        39-56       A3(39-56)      2145.2     2145Ⅱ        15-38       A2(15-38)      2723.6     2724Ⅲ        57-76       A4(57-104)     5442.5     5442Ⅳ         1-38       A1A2(1-38)     4171.4     4172Ⅵ       116-134     A6a(116-193)    8800.3     8800Ⅶ       116-128     A6b(116-195)    8997.1     8996
实施例2
BPI蛋白水解片段的杀菌效果
在环状扩散试验中，使用粗糙型突变体E.coli J5细菌根据杀菌效果筛选按实施例1所述方法产生的BPI蛋白水解片段。具体地说，将过夜的E,coli J5培养物1∶50稀释到新鲜的胰酶水解大豆培养液中并于37℃保温3小时，以达到培养物的对数期生长。然后在Sorvall RT6000B离心机(Sorvall Instruments,Newton,CT)中以3,000rpm离心30分钟沉淀细菌。加入5ml量的10mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)并再次离心沉淀之。弃去上清并加入5mL新鲜缓冲液，重新悬浮细菌并经于590nm测定吸光率以确定其浓度(在此波长处1.00吸光率值相当于悬液中1.25×109CFU/ml细菌浓度)。在10ml融化的下层琼脂糖中(约在45℃)将细菌稀释成4×106CFU/ml，并反复倒转以在常规用于此目的的15ml聚丙烯试管中混合之。
然后将试管的全部内容物倒入水平正方形培养皿中并左右摇动使之分布均匀。琼脂糖在30秒钟内凝固并有大约1mm的均一厚度。然后用接在真空装置上的无菌的3mm打孔器在固化琼脂糖上打出一系列的孔。使用前用100％乙醇消毒打孔器并用干，以避免污染细胞培养物。
将5或10μl各BPI片段小心吸移到各小孔内。向分立的小孔内加入稀释缓冲液(pH8.3)作为阴性对照，并加入浓度为5μg/ml和1μg/ml的rBPI23作为阳性对照。将各平板于37℃下保湿3小时，然后向水平培养皿中加入10mL融化的覆盖层琼脂糖(于大约45℃)，使凝胶固化并于37℃保温过夜。第二天，看到在那些具有杀菌活性的孔中的对着菌苔的清晰带。为了提高该带的视觉可见度，在凝胶上倒入稀释的考马斯溶液(含有0.002％考马斯亮兰、27％甲醇、15％甲醛(37％储备液)和水)并着染24小时。用测微计检查细菌带。
当以高达25pmol/孔的量试验时，没有鉴定出经用CNBr或Asp-N消化所产生之rBPI23片段的杀菌活性。相反，使用低到0.75pmol/孔量的rBPI23则以该检测法测到了可测出的杀菌活性。另一方面，其量高达100pmol/孔的经还原并烷基化的rBPI23也没有表出现杀菌活性，不过烷基化的rBPI23则保留了相当于rBPI23的杀菌活性。
实施例3
BPI蛋白水解片段对肝素的结合
按照1993年7月15日提交的待批美国专利申请序号08/093,202(该文献列为本文参考文献)的实施例1中所述的方法，以肝素结合试验估计按上述实施例1制得的rBPI23和BPI蛋白水解片段。简单地说，将各片段加到其底部配有聚偏二氟乙烯膜(Immo-bilon-P,Millipore,Bedford,MA)之96孔微量滴定板的小孔中。在每个含饱和浓度3H-肝素(20μg/ml)中使用‘100pmol的各片段估测CNBr片段的肝素结合能力。阳性对照孔含有不同量的rBPI23。干燥小孔并用溶于磷酸盐缓冲盐水(pH7.4)中的0.1％牛血清白蛋白(BSA)封闭之。用封闭缓冲液制得3H-肝素(0.03-20μCi/ml，平均分子量15,000；DuPont-NEN,Wilm-ington,DE)的稀释液，并4℃下在含BPI小孔中保温1小时。吸出未结合的肝素并用封闭缓冲液将小孔洗3次，干燥后在液体闪烁计数器(1217型，LKB,Gaithersburg,MD)中作定量分析。虽然封闭缓冲液中的BSA显示了对结合肝素的低亲和力和低容量，但认为这在生理上是无关的并且按常规从试验化合物信号中扣除本底。鉴于用100倍过量的未标记肝素可完全抑制放射标记之肝素的结合，从而确定了片段-肝素结合的特异性(数据未示出)。
表Ⅱ中所示的结果(重复孔的平均值±两个值的差)表明，含有氨基酸71-100(C3)和1-56及112-170(C1,5)的CN-Br片段结合了相似量的肝素。CNBr片段171-196也比对照蛋白质奇异果甜蛋白(thaumatin，一种与rBPI23有相似分子量和电荷的蛋白质)结合了更多的肝素。
Asp-N片段还证明了rBPI23中的多个肝素结合区。如表Ⅱ中所示，57-104Asp-N片段结合了最高量的肝素，其次是1-38和116-193片段。
这些数据连同CNBr片段数据表明，rBPI23内至少有3个分离的肝素结合区域，同时如由化学或酶学方法产生的rBPI23的片段所证明的，最高肝素结合能力是在残基71-100范围内。
表ⅡrBPI23片段的肝素结合
片段消化产物       区域       结合的3H-肝素(cpm)C1,C5      1-56,112-170      82,918±4,462C2           57-70           6,262±182C3           71-100         81,655±3,163C4          101-111          4,686±4C6           171-196        26,204±844
Asp-N消化产物A1            1-38        17,002±479A2           15-38         3,042±162A3           39-56         8,664±128A4           57-104       33,159±1,095A6a          116-193       13,419±309
  rBPI23        1-193         51,222±1,808Thaumatin                       7,432±83洗涤缓冲液                      6,366±46
实施例4
BPI蛋白水解片段对LAL试验的影响
对按照实施例1所述方法产生的BPI蛋白水解片段进行鲎阿米巴状细胞溶胞产物(LAL)抑制试验，以确定这些片段的LPS结合性质。具体地说，在Eppendorf试管中将各片段与固定浓度的E.col:0113LPS(终浓度4ng/ml)混合并在不时振荡下37℃保温3小时。还试验还0.05μg/mlrBPI23的添加对照组。保温后，向各试管内加入360μlDulbecco氏磷酸盐缓冲盐水(D-PBS；GrandIsland Biological Co.(GIBco),Long Island,NY)，以使用于LAL试验的LPS浓度为200pg/ml。然后将各样品以每孔体积50μl转移到ImmulonII条(Dynatech Chantilly,VA)上。
以50μl/孔的体积加入鲎阿米巴状细胞溶胞产物(定量显色LAL试验盒，Whit aker Bioproducts,Inc.,Walkersville,MD)并将小孔室温保温25分钟。然后以每孔100μl的体积加入显色底物并充分混合之。室温保温20至30分钟后，经加入100μl的25％(V/V)乙酸终止反应。然后在多板读数器(Vmax型，MolecularDynamics,Menlo Park,CA)中测出在405nm处的光密度，并将以LPS的百分抑制率表示的经果示于图2中。在该图中，实心圈代表rBPI23；空心圈代表Asp-N片段A3；x代表Asp-N片段A2；实心正方形代表Asp-N片段A4；实心三角形代表Asp-N片段AlA2；空心正方形代表Asp-N片段A6a；小空心正三角形代表CNBr片段C3，且小实心正方形代表CNBr片段C1/C5。
含有氨基酸片段1-56和117-170的CNBr消化产物部分抑制LPS诱导的LAL反应，IC50值约为100nM。该IC50值大约比在同一试验中测得的完整rBPI23的IC50值(9nM)高10倍。发现其他CNBr消化产物片段是非抑制性的。
用从Asp-N消化产物产生的片段观察到稍微不同的结果，其中发现有3个片段在LAL试验中是抑制性的。相当于氨基酸116-193的片段表现出与完整rBPI23相似的LAL抑制活性，其浓度为15nM时即完全抑制LPS诱导的LAL反应。相当于氨基酸57-104和1-38的片段也抑制LAL反应，但所用量要高10倍。这些结果加上用CNBr消化产物测得的结果进一步支持根据前述实验结果得出的结论，即rBPI23分子的至少3个区域具有中和LBS对LAL反应的激活作用，并且最强有力的区域似乎存在于116-193氨基酸片段内。
使用ELISA检测法对实施例1中所述的rBPI23蛋白水解片段进行了免疫反应性研究。在此检测法中，使用能够阻断rBPI23杀菌和LAL抑制性质的兔多克隆抗rBPI23抗体，和两个不同的非阻断性小鼠抗rBPI23单克隆抗体探测rBPI23蛋白水解片段。发现多克隆抗体对116-193和57-104 Asp-N片段及1-56和112-170CNBr片段有免疫反应活性，而小鼠单克隆抗体则只与代表rBPI23之残基1-14的Asp-N片段反应。
实施例5
BPI之15残基肽的制备
为了进一步确定按实施例一4所述BPI片段检测法测得的生物学活性区域，制备由衍生于BPI的23KD氨基末端片段之氨基酸序列的15个氨基酸组成的15残基合成肽，并估测其肝素结合活性、在鲎阿米巴状细胞溶胞产物抑制(LAL)试验中表现的活性以及杀菌活性。具体地说，基于以前在待批美国专利申请系列号08/093,202(1993年7月15日提交)中所述的rBPI23的序列，以一式两份制备并合成各含15个氨基酸47个合成肽的系列，以使每个肽与该系列的相邻肽共享有11个氨基酸的交迭氨基酸序列。
同时利用Coselco Mimotopes Pty.Lid.许可的Cambridge Re-search Biochemicals Ltd.的固相技术，按照Maeji等人(1990,Immunol.Methods 134:23-33)和Gammon等人(1991,J.Exp.Med.173:609-617)的方法合成上述肽。简单地说，将rBPI23(1-199)的序列分成47个不同的15残基肽，该肽系列以每到第5个氨基酸即开始下一个肽的方式沿着rBPI23的线性序列前进。该肽合成技术允许在96孔板形式中分隔的小柱(Pins)上同时小规模合成多种肽。为此，利用了94个单个的小柱进行合成，而其余两个小柱(B,B)除去不加入活化的加入活化的FMOC-氨基酸处，和其余94个小柱同样步骤合成。最后利用含水碱性缓冲液(碳酸钠，pH8.3)从固相小柱支持物上裂解15残基肽。在这样的条件下多肽唯一与小柱的键合发生定量的二酮哌嗪环化，得到在各肽之羧基末端带有cyclo(lysy prolyl)基团的裂解肽。氨基末端未被乙酰化从而可使游离氨基基团对阴离子结合反应作出潜在贡献。每孔收集平均约15μg各15模肽。
实施例6
BPI的15残基肽对肝素的结合
按照实施例3中所述方法对实施例5中所述的BPI 15模肽进行肝素结合试验。
这些实验的结果示于图3中，并以结合的总cpm数减去只接受封闭缓冲液的对照孔结合的cpm数来表赤。这些结果表明在rBPI23序列中存在三组不同的代表分隔的肝素结合功能区的肝素结合肽。在BPI序列中，发现第一个区域从大约氨基酸21处延伸至大约氨基酸51-处；发现第二个区域从大约氨基酸65处延伸至大约氨基酸107处；并且发现第三个区域从大约氨基酸137处延伸到大约氨基酸171处。来自空白对照小柱的材料未显示有肝素结合作用。
实施例7
BPI的15残基肽对鲎阿米巴样细胞溶胞
产物(LAL)试验的影响
使用实施例4中所述的LAL试验来检测实施例5中所述15残基肽的LPS结合活性。
这些实验的结果示于图4中。图4中的数据表明，代表rBPI23蛋白质之三个不同区域的至少3个主要亚组的肽具有导致显著LAL抑制作用的LPS结合活性。发现第一个区域从大约氨基酸17延伸到大约氨基酸55；第二个区域从大约氨基酸73延伸到大约氨基酸99；且第三个区域从大约氨基酸137延伸到大约氨基酸163。另外，如图中所示的其他个别肽也表现有LAL抑制作用。相反，如用LAL检测法测知的，来自空白对照小柱的材料并没有表现任何LPS中和作有。
实施例8
BPI的15残基肽的杀菌效果
用实施例2中所述的环状扩散法试验实施例5中所述15残基肽的对E.coli之粗糙突变菌株(J5)的杀菌效果。来自空白小柱(B,B)的产物作为阴性对照。
图5中显示了试验的结果。发现具有杀菌活性的仅有的15残基肽是相当于BPI蛋白质之氨基酸85-99的肽。如图5所示，有不同量rBPI23的阳性对照孔也显示了杀菌活性，而缓冲液和空白小柱对照组则没有。
这些杀菌试验连同以上实施例中所述的肝素结合和LAL试验的结果表明，在BPI蛋白质中存在不同的功能性区域。
上述实施例1-8中所示的结果表明，rBPI23至少包含3个贡献于分子之总生物学活性的功能区域。第一个区域出现在大约氨基酸17和45间的序列中并可在残基38处经Asp-N裂解而被破坏。该区域在抑制LPS诱导的LAL活性上和肝素结合试验表现有中度活性。第二个功能区域出现在大约氨基酸65和99之间的区域中，并且其对LPS诱导的LAL活性的抑制作用可因在残基70处的CNBr裂解而减小。该区域还表现有最高的肝素结合能力并含有杀菌肽，即氨基酸85-99。位在大约氨基酸142和169间的第三个功能区域在抑制LPS诱导的LAL刺激试验中有活性，并且是这三个区域表现有最低肝素结合能力的区域。
实施例9
BPI个别功能区肽的制备
基于对实施例5至8中所述交迭肽系列所作试验的结果，使用Applied Biosystems,Inc.432型肽合成仪，按照Merrifield(1963,J.Am.Chem.Soc.85:2149)和Merrifield等人(1966,Anal.Chem.38:1905-1914)所述的固相肽合成方法从BPI蛋白质的各功能性限定的区段制备BPI功能区肽。制备具有下列表Ⅲ中所列出之BPI之氨基酸残基1-199部分的氨基酸序列的BPI功能区肽，并将它们分别定名为BPI.2至BPI.5和BPI.8。
表Ⅲ个别BPI功能区肽
 多肽号  区域 氨基酸区域 氨基酸残基 分子量(道尔顿)BPI.2    Ⅱ    85-99        15         1828.16BPI.3    Ⅱ    73-99        27         3072.77BPI.4    Ⅰ    25-46        22         2696.51BPI.5    Ⅲ   142-163       22         2621.52BPI.8    Ⅱ    90-99        10         1316.8
实施例10
NPI个别功能区肽的肝素结合活性
按照实施例3中所述方法检测BPI个别功能区域肽BPI.2、BPI.3和BPI.8，连同rBPI21△cys的肝素结合活性。图6中所示结果表明，BPI.3和rBPI21△cys具有中度肝素结合活性，BPI.2和BPI.8则有很小或没有肝素结合活性。
实施例11
BPI个别功能区肽的肝素中和活性
按照1993年7月15日提交的共同待批和转让的美国专利申请系列号08/093,202中实施例3的方法检测BPI功能区域肽BPI.2、BPI.3、BPI.4、BPI.5、BPI.6和BPI.8，连同作为阳性对照的rBPI23对由ATIII/肝素复合物引起的凝血酶失活作用的影响。具体地使用ChromostrateTM抗凝血酶检测试剂盒(OrganonTeknika Corp.,Durham,NC)检测血浆中预生成的ATIII/肝素复合物对纯化之凝血酶的抑制作用。
简单地说，在96孔微量滴定板中以每孔200μl的终体积一式三份进行检测。检测从1.0μg/ml到100μg/ml范围内不同浓度的BPI功能区肽，以确定在预生成的ATIII/肝素复合物存在下它们对凝血酶抑制作用的影响。加入检测组份的次序如下：1)以终体积50μl在PBS中稀释的rBPI23或BPI功能区域肽或作为对照蛋白质的thaumatin的系列稀释液，终浓度分别为100、50、25、10和1μg/孔；2)50μl在由制造商提供的缓冲液中1∶100稀释的血浆；3)50μl在由制造商提供的缓冲液制得的浓度为1nKat/ml的凝血酶；4)50μl在水中浓度为1μmol/ml的生色底物。使反应在37℃下进行10分钟，并经加入50μl0.1M柠檬酸终止反应。在实施例3中所述的微量板读数器上定量比色反应结果。
这些检测的结果示于图7a和7c中，其中分别以重量或摩尔浓度表示样品浓度。BPI功能区域肽BPI.3和BPI.5各自都表现有最显著的肝素中和效应。在这些试验中，对照蛋白质奇异果甜蛋白没有显示中和作用，并且在所有蛋白质浓度下都基本上等同于缓冲液对照组。
实施例12
用LAL检测法测得的BPI个别功能区肽
的LPS中和活性
按照本文实施例4的方法，以LAL试验估测BPI功能区肽NPI.2、BPI.3和BPI.8，以及作为阳性对照的rBPI23，确定这些肽的LPS结合和抑制特性。实验基本上按实施例3中所述方法进行并且结果显示于图8a和8b，其中样品浓度分别表示为重量或摩尔浓度。结果表明BPI.3具有中度LPS抑制活性，BPI.2和BPI.8则没有明显的LPS抑制活性。
实施例13
BPI个别功能区肽的杀菌活性试验
按照实施例2的方法，以环状扩散检测法检验BPI功能区域肽BPI.2、BPI.3和BPI.8，连同作为阳性对照的rBPI23对E.coli J5(粗糙型)和E.coli O111:B4(光滑型)细菌的杀菌作用。这些结果证明，BPI功能区肽BPI.2和BPI.3各自都表现有杀菌活性，而BPI.8则几乎没有杀菌活性。显示杀菌活性的各杀菌肽倾向于对粗糙型E.coli菌株比对光滑型更为有效。
在附加实验中，进行液体培养基抗菌试验以进一步确定某些BPI肽的杀菌活性。具体地说，从琼脂平板上的单个菌株中选择E.coli J5(粗糙型)或E.coli O111:B4(光滑型)细菌，将其接种5mlMueller Hinton液体培养基并在37℃下振荡保温过夜。将过夜培养物稀释(约1∶50)到5ml新鲜液体培养基中并在37℃下培养至对数生长期(约3小时)。以3000rpm(1500×9)离心5分钟以沉淀分离细菌。将细菌沉淀饼重新悬浮在5mlPBS中用Mueller Hinton培养基稀释至2×106细胞/ml(其中1OD570单位等于1.25×109CFU/ml)。将待试验的BPI功能区肽在液体培养基中稀释到200μg/ml并在96孔平板中作2倍系列稀释(100μl体积)。所有各项均在2倍终浓度并以每一浓度三份样品进行实验。以100μl/孔加入细菌并将平板放在振荡器上37℃保温20小时。然后在ELISA平板多头读数器上读590nm吸光率。在每个肽浓度的三个孔中选择一个进行菌落形成单位(CFU)测定。向270μlPBS中加入30μl等分样品并再次进行10倍系列稀释。然后将50μl等分析品接种在胰酶水解大豆琼脂上并保温过夜。计数菌落数并测定细菌终浓度。图9e(E.coli J5)和9f(E.coli O111:B4)中图示这些试验的结果。如这些图中所示，BPI功能区肽NPI.3具有明显的抗E.coli J5细菌的抗菌活性，并有较弱的抗E.coli O111:B4细菌的活性。
实施例14
BPI组合功能区肽的制备
使用实施例9中所述的固相化学合成法制制结合肽。这些肽的序列示于表Ⅳ中。将会注意到，定名为BPI.7、BPI.9和BPI.10的肽代表部分的BPI序列甚或某些BPI序列的多次重复。具体地说，NPI.7包含由单一线性肽链中重复两次的氨基酸残基90-99组成的20线基部分。BPI.10包含分别由单一线性肽链中氨基酸残基94-99、90-99、90-99和93-99、90-99、90-99组成的25残基(称为BPI.10.1；SEQIDNO:55)和26残基(定名为BPI10.2；SEQIDNO:65)的约50∶50混合物。BPI.9包含单一线性肽链中的氨基酸残基94-99然后是残基90-99。
将这些肽用于实施例10-13中所述的各个BPI活性检测法中。在实施例10中所述的并在图6中显示结果的肝素结合试验中，BPI.7具有极强的肝素结合能力。在实施例11中描述并在图7a和7b中显示结果的肝素中和试验中，BPI.7与rBPI23相比具有更明显的肝素中和效应。在实施例12中描述并在图9a-9d中所示的使用环状扩散平板的杀菌试验中，BPI功能区域肽BPI.7、BPI.9和BPI.10.1及BPI.10.2均表现有杀菌活性，同时还发现BPI.7、BPI.9和BPI.10.1及BPI.10.2在液体培养基检测法中也表现有抗粗糙型和平滑型E.coli变异菌株的显著杀菌活性。BPI.10肽显示有抗上述细菌菌株的最强杀菌活性。
用肽BPI.7和BPI.10测得的这些杀菌活性结果显示，BPI区域Ⅱ肽KWKAQKRFLK(即BPI.8,SEQIDN0:8)的线性二聚体(BPI.7)和线性多聚体(BPI.10.1和BPI.10.2)的混合物具有抗E.coli J5菌株的杀菌活性，但单体(BPI.8)基本上未显示杀菌活性。此外，二聚和多聚体肽具有包括氨基酸94-99、90-99的BPI.9的较高杀菌活性。基于这些结果，使用实施例9中所述的方法合成表Ⅳ中所示的其他肽。
表ⅣBPI组合功能区肽
 BPI肽    氨基酸区   氨基酸残基   分子量(道尔顿)BPI.7   90-99,90-99      20           2644.66BPI.8      90-99         10           1316.8BPI.9   94-99,90-99      16           2131.34BPI.10.1 94-99,90-99,     25           3319.1990-99BPI.10.2 93-99,90-99,     26           3447.3290-99BPI.13    148-161        14           1710.05BPI.29 148-161,148-161   28           3403.1BPI.30   90-99,148-161   24           3023.86BPI.63   85-99,148-161   29           3524.4
实施例15
组合功能区肽的杀细菌活性
将实施例14中所述的BPI组合功能区域肽用于基本上如上文实施例2和13中所述的环状扩散杀菌试验。这些结果示于图10a-10e。图10a中所示结果证明，包括区段Ⅱ肽(氨基酸90-99)之一个拷贝的BPI.8在1000μg/ml下没有抗E.coli J5细胞的可检测的杀菌活性。相反，包含区段Ⅲ单体(氨基酸148-161)之一个拷贝的BPI.13的BPI.13在浓度大于30μg/ml下显示有可检测的杀菌活性。包含区段Ⅱ单体BPI.13之两个拷贝的BPI.29具有更强的杀菌活性，而包含区段Ⅱ肽BPI.8和区段Ⅲ肽BPI.13之线性结合的BPI.30则显示接近BPI的最高抗J5细胞的杀菌活性。
图10b显示用包括BPI.8、BPI.7和BPI.10的区段Ⅱ肽所作实验的结果(还参见表Ⅳ)。虽然BPI.8在1000μg/ml浓度下没有显示抗E.coli J5细胞的杀菌活性，但组合肽BPI.7和BPI.10则显示有高水平的杀菌活性。
使用各种不同的其他细菌作为靶细胞进行附加实验，以检验这些BPI功能区肽的杀菌范围。图10c显示使用E.coli菌株07-K1所作环状扩散实验的结果。在这些实验中，rBPI23在100μg/ml浓度下没有显示杀菌活性，甚至在1000μg/ml的浓度下也只有低的杀菌活性。发现包括区段Ⅱ(DⅡ)单体的肽BPI.8和包括区段Ⅲ(DⅢ)单体的BPI.13同样只有低水平的杀菌活性，尽管发现BPI.13的活性水平高于rBPI23。令人惊奇的是，区段Ⅱ二聚体BPI.7和区段Ⅱ-区域Ⅲ(DⅡ-DⅢ)异二聚体BPI.30显示了高水水平的杀菌活性，并且区段Ⅲ二聚体BPI.29显示了中度杀菌活性。这些结果证明，本文鉴定的功能性BPI功能区的肽具有定量上不同于BPI分子本身之杀菌活性的杀菌活性。图10d和10e显示的结果进一步证明，本文所述的同二聚体或并二聚体具有定性和定量上抗敏感菌株的不同的杀菌活性谱。图10d显示使用肺炎杆菌(Klebsiella pneumroniae)细菌所作环状扩散试验的结果。DⅡ-DⅢ异二聚体BPI.30显示了最高水平的抗该细菌的杀菌活性，DⅢ同二聚体BPI.29显示了中度水平的活性，且DⅡ二聚体(BPI.7)和DⅢ单体(BPI.13)显示了低水平活性。在800μg/ml浓度下包括DⅡ单体的BPI.8没有显示杀菌活性，这与用E.coli菌株所作试验证明的该肽缺乏杀菌活性这一结果相等。
图10e显示使用革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌(Staphylo-coccus aurens)所作环状扩散实验中观察到的杀菌活性水平。DⅡ-DⅢ异二聚体BPI.30显示了抗该细菌的最高杀菌活性，DⅢ同二聚体BPI.29显示了中等水平的活性，且DⅡ二聚体(BPI.7)和DⅢ单体(BPI.13)显示了低水平活性。包括DⅡ单体的BPI.8在800μg/ml浓度下没有显示杀菌活性，这与用其他细菌观察到的该肽缺乏杀菌活性的结果一致。
上述结果显示，本文公开的同二聚体和异二聚体具有不同量的杀菌活性，这种不同体现在杀菌活性的大小和测得杀菌活性所必需的肽的最小有效浓度。这些结果还显示，这些肽在定量上，特别是在定性上具有与BPI本身不同的杀菌活性。
实施例16
BPI组合功能区肽的附加杀菌活性
从实施例15中公开的实验结果来看，区段Ⅱ-区段Ⅲ结合肽抗多种不同细菌和其他微生物的杀菌活性与BPI区段Ⅱ和区段Ⅲ肽各组分的杀菌活性差不多。将如上所述的下列BPI功能区肽用于环状扩散杀菌试验(实施例2)和基本上如实施例15中所述的液体培养基杀菌试验(实施例13)。这些结果示于图11a-11q中。这些附图显示了使用下列细菌菌株所作杀菌试验的结果：
革兰氏阳性细菌                  测定的BPI肽Pseudomonas aeruginosa         BPI.8,BPI.13,BPI.30E.coliO18:K1:H7                BPI.8,BPI.13,BPI.30Klebsiella pneunoniae          BPI.8,BPI.13,BPI.30E.coliO75                      BPI.8,BPI.13,BPI.30Serratia marcescens            BPI.8,BPI.13,BPI.30Proteus mirabilis              BPI.2,BPI.13,BPI.30Salmonella typhurium              BPI.23,BPI.30E.coliO86a:K61                    BPI.23,BPI.30E.coliO4:K12                         BPI.30
革兰氏阳性细菌
Streptococcus pneumonia        BPI.29,BPI.30.,BPI.48,BPI.55,BPI.13,
                           BPI.69
Bacillus megaterium            BPI.2,BPI.7,BPI.45,BPI.46,BPI.47,
                           BPI.48
Staphylococcus aureus          BPI.7,BPI.8,BPI.10,BPI.13,BPI.30
   真菌
  Candida albicans             BPI.30, PI.13,BPI.29,BPI.48,BPI.2
现将这些实验的结果总结如下。所试验的BPI肽均没有显示对抗粘质沙雷氏菌(S.marcescens)(图11f)或假单胞菌(P.mirabilis)(图11g)的任何杀菌活性。BPI.8在浓度高达约2000pmol时没有显示对抗所有被试微生物的杀菌活性。BPI.13和BPI.30显示有对抗绿脓假单胞菌(P.aeruginosa)(图11a)和E.coliO18:K1:H7)(图11b)、肺炎杆菌(图11c)和E.coliO75(图11d)的杀菌活性。另外，BPI.30在液体培养基试验中显示有对抗伤寒杆菌(S.typhurium)(图11b)和E.ColliO86a:K51(图11j)及E.ColliO4:K12(图11k)的杀菌活性。BPI.23在环状扩散试验中显示有对抗E.ColliO86a:K61(图11i)的杀菌活性。此外，BPI.30显示有对抗人血清中E.colliO86a:K61(图11e)的杀菌活性。
还试验了本发明提供的BPI肽对革兰氏阳性细菌的杀菌能力(见表ⅧA)。令人惊奇的是，在使用金黄色葡萄球菌(图11e)、肺炎杆菌(图11m)和巨大芽胞杆菌(B.megatherium)(图11n)所作的环状扩散试验中，所试验的每种BPI肽在浓度约为20至2000pmol范围内均显示了一定程度的杀菌活性。这些结果显然与抗生素庆大霉素和万古霉素的杀菌活性差不多(图11o)。此外，试验了肽对L型革兰氏阳性细菌如L型金黄色葡萄球菌ATCC19640的活性。BPI.13,BPI.10,BPI.48和BPI.120是对这些L型细菌有活性的代表性化合物。
特别令人惊奇的是，发现一种肽，即BPI.13在用白色念珠菌(Candida albicans)进行的液体培养基试验中表现有杀真菌活性(图11p和11g)。如这些附图中所示，BPI.13的活性可明显地区别于有更低活性水平的BPI.2、BPI.29、BPI.30和BPI.48。如表ⅧB所示，其它代表性化合物对白色念珠菌有活性。这些结果证明，本发明的BPI功能区肽具有性质上不同于以前报导的天然BPI之活性的抗微生物活性。
实施例17
BPI组合功能区肽的肝素中和活性
经检测BPI组合功以区肽可逆转肝素化全血和血浆中肝素对凝血时间的抑制效应，确定这些实施例14中制备的肽具有体外和体内肝素中和能力。
在体外，检测BPI组合功能区肽对肝素介导的活化部分凝血酶时间(APTT)延长的影响。APTT因外源性或内源性凝血酶形成的抑制剂，如治疗给药的肝素存在而被延长。因此，中和肝素之抗凝作用的制剂将会缩短试验测得的APTT。将加有柠檬酸盐的人血浆(200μl)与15μl稀释剂(0.15MNaCl,0.1MTris-HCl,pH7.4)或15μl还含有25μg/ml肝素(187单位/mg)的稀释剂于37℃共同保温1分钟。以15μl体积加入不同浓度(从0.0至56μg/ml)的rBPI23、rBPI21△cys或BPI组合肽BPI.29(DⅢ同二聚体)和BPI.30(异二聚体DⅡ+DⅢ)，然后立即加入100μl凝血酶试剂(批号845-4,Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)。使用BBL.Fibrometer(Becton Dickenson Microbiology Systems,Cock-eysville,MD)检测血凝时间(凝血酶时间)。结果示于图12a、12b和12e中。图12a显示经加入不同量rBPI23或rBPI21△cys至使肝素延长的APTT相对减少。这些结果证明，这些相关蛋白质都能抑制肝素介导的APTT延长。图12b显示BPI组合肝BPI.29和BPI.30也抑制肝素介导的APTT的延长。图12e说明在非对数范围上用BPI.30获得的结果。图12g显示BPI.29、BPI.30、和BPI.7在该试验中对肝素化全血的凝血时间有更大影响。BPI.3和rBPI23显示较小的影响，且BPI.14、BPI.2、BPI.4、BPI.5、BPI.7和rBPI25、rBPI及rBPI21Acys在该试验中均显示对肝素化全血的凝血时间有较小减少作用。
进一步检测了注射肝素大鼠的BPI组合肽对APTT的体内的影响，并与rBP123的体内效应相比较。APTT因外源或内源性凝血酶生成抑制剂如治疗给药的肝素的存在而被延长。中和肝素之抗凝剂效应的制剂减少该试验中测得的APTT。通过动物的尾静脉给予按NIH指南饲养的Sprague-Dawley大鼠静脉内推注100U/kg肝素，5分钟后给不同量的试验蛋白质或与rBPI23比较的对照蛋白质。给予试验或对照蛋白质后2分钟从腹动脉采血测定血样的APTT。同时测定未经处理的动物，以及只用BPI肽处理的动物的APTT。图12c显示rBPI23对肝素介导的部分组织促凝血酶原激酶时间延长的抑制作用的剂量依赖性，并且在给予5mg/kgrBPI23后使注射肝素的经用BPI处理的动物的APTT差不多与未经处理的对照组动物一样。图12d中显示的相似实验的结果表明，无关蛋白质奇异果甜蛋白对注射肝素动物的APTT时间没有影响。给予BPI.10肽使注射肝素动物的APTT基本上与只用BPI.10处理的对照组动物的APTT相同。使用BPI.30也得到相似的结果(图12f)。
这些结果显示，BPI功能区组合肽(如BPI.10和BPI.30)及rBPI23可有效地中和肝素对各种凝血蛋白酶的抑制作用。基于这些特征而没想将本发明的BPI组合功能区肽用于临床上中和肝素抗凝血剂作用，所用剂量一般在功能上相当于所推荐的硫酸鱼精蛋白的剂量，而预期没有鱼精蛋白的严重酶致低血压和类过敏反应样付作用。
实施例18
BPI取代变异体功能区肽的制备
和功能活性分析
以上用含功能区Ⅱ和Ⅲ的肽获得的结果，促使我们作进一步的研究以确定肽内功能上重要的氨基酸残基。因此，制备了一系列包含区段Ⅱ和Ⅲ之氨基酸序列，但其中有一个氨基酸被丙氨酸残基取代的肽。用于取代实验的区段肽的图解说明示于图13(区段Ⅱ:IKISGK WAQKRFLK,SEQIDNO:7)才和图14(区段Ⅲ:KSKVGWLIQLFHKK,SEQIDNO:13)中。然后试验这些肽系列的肝素结合亲和力(Kd)、肝素结合能力(Hep-CAP)、如使用鲎阿米巴细胞溶胞产物试验(LAL)测得的LPS中和作用，以及使用环状扩散试验(RAD)测定的对抗E.coli J5的杀菌活性，各试验均按上面实施例中所述的方法完成。
表Ⅴ(区段Ⅱ)和表Ⅵ(区段Ⅲ)所示的结果以在这些试验中测得的BPI功能区Ⅱ和区Ⅲ及其各丙氨酸取代的变异肽间的活性倍数差表示(其中未注明LAL试验中的相对差异)。
就区段Ⅱ肽来说，在环状扩散试验中大部分丙氨酸取代的肽都显示杀菌活性降低2至10倍。该总体特征的例外包括BPI.19(Gly89-Ala89)、BPI.22(Lys92→Ala92)、BPI.23(Gln94-Ala94)和BPI.24(Lys95→Ala95)。相对的，大部分丙氨酸取代的肽在LAL试验中没有显示差异；在该试验中BPI.17(Ile87→Ala87)和BPI.21(Trp91→Ala91)分别显示活性的中度和大的增加。对于BPI.21，这些结果与发现该肽杀菌活性降低10倍相符，表明氨基酸91(天然序列中的色氨酸残基)在赋予该肽以生物学活性上是特别重要的。
在几乎所有例子中，丙氨酸取代对肝素结合力的影响上下不超过未被取代肽的2倍左右。一个例外是BPI.21的肝素结合能力比未被取代肽低4倍。这一发现进一步支持关于这些肽的各种活性对Trp 91的取代特别敏感的早期实验结果。在有些例中，被取代的肽的肝素结合能力有所降低，但Kd值则稍有提高(BPI.18；Ser88→Ala88)或稍有降低(BPI.24)。还有的例子是尽管Kd值增加(BPI.20,Lys90→Ala90)或降低(BPI.19)，但结合能力未改变。有一例亲合力保持未受影响但结合能力几乎减小2倍(BPI.25；Arg96→Ala96)。
这些结果表明，在区段Ⅱ序列中至少存在1个关键的残基(Trp91)，并且区段Ⅱ肽的活性大部分只受到其他区段Ⅱ氨基酸残基之丙氨酸取代的最小影响。
就区段Ⅲ肽来说，大多数丙氨酸取代的肽在环状扩散试验中均显示有大约降低2至5倍的杀菌活性。这一总特征的例外包括BPI.35(Gly152→Ala152)、BPI.39(Gln156→Ala156)、BPI.42(His159→Ala159)和BPI.44(Lys161→Ala161)。在LAL试验中大部分丙氨酸取代的肽均显示没有差异；BPI.31(Lys145→Ala145)、BPI.32(Ser149→Ala149)、BPI.33(Lys150→Ala150)和BPI.34(Val151→Ala151)显示LPS结合活性中度增加，BPI.36(Trp153→Ala153)BPI.40(Leu157→Ala157)则在该试验中显示LPS结合活性的大幅度降低。就BPI.36和BPI.40来说，这些结果与已发现这些肽的杀菌活性的降低5倍相一致，表明天然序列中的疏水氨基酸Trp153和Leu157在赋予肽以生物学活性上是特别重要的。
丙氨酸取代对肝素结合能的影响倍数是相似的，即上下不超过未被取代肽的5倍左右。在几乎每个例子中，丙氨酸取代对肝素结合的Kd和肝素结合容易影响的类型是一致的并且有用同样的倍数，此不同于用区段Ⅱ丙氨酸取代肽所作试验的结果。在一个例子中(BPI.42；His159→Ala159)，虽然Kd稍有降低(1.2倍)，但肝素结合容易未受影响。仅有的一个例子是肝素结合和肝素容量稍有增加(BPI.35；Gly152→Ala152)；发现只增加10％。
同用区段Ⅱ丙氨酸取代肽所作实验的结果一样，这些结果表明在区段Ⅲ序列中至少存在一个关键性的残基(Trp153)，并且可能还至少有一个其他残基(Leu157)。结果还表明，与区段Ⅱ丙氨酸取代的肽不同，差不多一半的取代导致被试活性至少相差2倍。在6个例子中，被试的所有4种活性均增加，并在10个例子中杀菌活性、肝素结合的Kd值和结合容量降低。仅有的一个例子(BPI.35,Gly152→Aa152)中，发现在杀菌、肝素结合Kd和肝素容量试验中的活性稍有增加。
这些结果表明，对疏水氨基酸残基Trp91、Trp153和Leu157的丙氨酸取代使这些BPI功能区取代肽的活性有最大影响。从rBPI23的阴离子性质看，这一结果是未被预料到的。事实上，其中赖氨酸被丙氨酸或苯丙氨酸取代的区段Ⅱ内氨酸取代肽显示了活性的显著增加(如BPI.24,BPI.73)。
如表ⅥB所示，色氨酸(Trp153)的取代并未影响杀真菌活性，尽管它对于杀细菌活性似乎是决定性的。谷氨酰胺在杀真菌活性方面似乎起着关键性作用，如在径向扩散测试中当发生取代(BPI.39,Gln 156→Ala156)时其活性降低8倍以上所证实的。
表Ⅴ
    BPI区段Ⅱ丙氨酸取代的肽活性X’倍数改变RAD   LAL HEPKd HEPCAPBPI.2  IKISGKWKAQKRFLKBPI.15 A                   ↓2.2   =  ↓1.1  ↓1.4BPI.16  A                  ↓1.8   =  ↓1.5  ↓1.6BPI.17   A                 ↓4.5   ↓ ↓1.3  ↓1.8BPI.18    A                ↓1.6   =  ↑1.1  ↓1.3BPI.19     A               ↑1.4   =  ↓1.3   =1.0BPL20       A              ↓1.1   =  ↑1.4   =1.0BPI.21       A             ↓10.4 ↓↓↓1.5  ↓4.0BPI.22        A             =1.0   =  ↓1.1  ↓1.5BPI.23         A           ↑2.2   =  ↑2.0  ↑1.4BPI.24          A          ↑3.8   =  ↓2.1  ↑2.1BPI.25           A         ↓3.8   =   =1.0  ↓1.9BPI.26            A        ↓4.0   =  ↓1.5  ↓1.8BPI.27             A       ↓2.5   =  ↓1.7  ↓1.7BPI.28              A      ↓2.4   =  ↓ 1.3 ↓1.3
表ⅥABPI区段Ⅲ丙氨酸取代的肽
                                     活性倍数改变
                                     RAD   LAL   HEPKd   HEPCAPBPI.13    K S K V G W L I Q L F H K KBPI.31    A                             ↓2.3   ↓   ↓3.9   ↓1.8BPI.32     A                            ↓15    ↓   ↓2.9   ↓1.7BPI.33      A                           ↓14    ↓   ↓2.0   ↓1.6BPI.34       A                          ↓22    ↓   ↑1.9   ↓1.8BPI.35        A                         ↓1.5   =    ↑1.1   ↑1.1BPI.36         A                        ↓4.9  ↓↓  ↓2.6   ↓4.6BPI.37          A                       ↓3.8   =    ↓5.2   ↓2.7BPI.38           A                      ↓5.0   =    ↓1.7   ↓1.9BPI.39            A                     ↑1.1  ↓↓  ↓1.3   ↓1.1BPI.40             A                    ↑5.2   =    ↓1.8   ↓2.3BPI.41              A                   ↓1.3   =    ↓2.1   ↓3.1BPI.42               A                  ↑22    =    ↓1.2    =1.0BPI.43                A                 ↓1.3   =    ↓2.0   ↓1.3BPI.44                                  ↑1.2   =    ↓1.7   ↓1.1
表ⅥB
     BPI区段Ⅲ丙氨酸取代的肽(杀真菌活性X倍数改变RDA    MICBPI.13   KSKVGWLIQLFHKKBPI.31   A                ↓1.9    =BPI.32    A               ↓1.3  ↓2.0BPI.33     A              ↓2.7    =BPI.34      A             ↓1.4    =BPI.35       A            ↓2.0  ↓2.0BPI.36        A           ↑1.1    =BPI.37         A          ↓1.1    =BPI.38          A         ↓1.8    =BPI.39           A        ↓8.1    nBPI.40            A       ↓1.1   ↓2.0BPI.41             A      ↓3.3    nBPI.42              A     ↓.5     =BPI.43               A    ↓3.5    nBPI.44                A   ↓2.6    =n=未测试
实施例19
BPI功能区肽之生物学活性的总结
下列表Ⅶ中给出了各种肽的结构类别分配。
已检测了本发明的BPI功能区肽或其有代表性的亚组的下列生物学活性：对抗革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，以及对抗某些其他微生物的杀菌活性；LPS结合和中和活性；以及肝素结合和肝素中和活性。
分别按实施例8和6中所述方法检测BPI功能区肽对E.coliJ5细菌的杀菌活性和肝素结合活性。表ⅧA中总结了本发明的部分对革兰氏阴性细菌E.coli J5(粗糙型)和E.coliO113(光滑型)以及革兰氏阳性菌S.aureus的杀菌试验结果。杀菌活性以产生30mm2杀菌圈所需要的肽量(pmol/孔和μg/孔)来表示。表Ⅶ-BPI肽构建体1．直接来自BPI序列A．区段Ⅰ肽肽肽序列                  SEOIDNO：BPI. 1              QQGTAALQKELKRIK                4BPI.4           LQKELKRIKIPDYSDSFKIKHL             3BPI. 14     GTAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKHLGKGH         2BPI.54             GTAALQKELKRIKIP                 5B．区段Ⅱ肽BPI.2               IKISGKWKAQKRFLK                7BPI.3         NVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK         11BPI.8                 KWKAQKRFLK                   8BPI.167                 KWKAQKRF                  163C．区段Ⅲ肽BPI.5            VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIE            67BPI.11                KSKVWLIQLFHKK                13BPI.12        S VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK       14BPI.13                KSKVGWLIQLFHKK               15BPI.55            GWLIQLFHKKIESALRNKMNS            612．线性和支链重复序列A．区段Ⅱ肽BPI.7            KWKAQKRFLKKWKAQKRFLK             54BPI.9               KRFLKKWKAQKRFLK               51BPI.10.1/        KRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK         55BPI.151BPI.10.2/        QKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK        65BPI.152BPI.153         KWKAQKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK    149MAP.1          β-A -Nα,Nε[Nα, Nε(BPI.2)K]KB．区段Ⅲ肽BPI.29           KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIQLFHKK      56MAP.2           β-A-Nα, Nε[Nα,Nε(BPI.13)K]K表Ⅶ(续)C．区段间组合肽肽肽序列SEQIDNO:BPI.30          KWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK           52BPI.63        IKISGKWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK        53BPI.74          KS KVGWLIQLFHKKKWKAQKRFLK          70BPI.149         KWKVFKKIEKKSKVGWLIQLFHKK          1473．单氨基酸取代A．区段Ⅱ肽BPI.15              AKISGKWKAQKRFLK                16BPI.16              IAISGKWKAQKRFLK                17BPI.17              IKASGKWKAQKRFLK                18BPI.18              IKIAGKWKAQKRFLK                19BPI.19              IKISAKWKAQKRFLK                20BPI.20              IKISGAWKAQKRFLK                21BPI.21              IKISGKAKAQKRFLK                22BPI.22              IKISGKWAAQKRFLK                23BPI.23              IKISGKWKAAKRFLK                24BPI.24              IKISGKWKAQARFLK                25BPI.25              IKISGKWKAQKAFLK                26BPI.26              IKISGKWKAQKRALK                27BPI.27              IKISGKWKAQKRFAK                28BPI.28              IKISGKWKAQKRFLA                29BPI.61              IKISGKFKAQKRFLK                48BPI.73              IKISGKWKAQFRFLK                62BPI.77              IKISGKWKAQWRFLK                72BPI.79              IKISGKWKAKKRFLK                73BPI.81              IKISGKWKAFKRFLK                75BPI.103             IKISGKWKAWKRFLKK              102BPI.120             IKISGKWKAQKRKLK               116BPI.136             IKISGKWKAQERFLK               132BPI.141             IKISGKWKAQKRWLK               137BPI.147             IKISGKWKAEKKFLK               143表Ⅶ(续)B．区段Ⅲ肽肽肽序列SEQIDNO:BPI.31                ASKVGWLIQLFHKK                 33BPI.32                KAKVGWLIQLFHKK                 34BPI.33                KSAVGWLIQLFHKK                 35BPI.34                KSKAGWLIQLFHKK                 36BPI.35                KSKVAWLIQLFHKK                 37BPI.36                KSKVGALIQLFHKK                 38BPI.37                KSKVGWAIQLFHKK                 39BPI.38                KSKVGWLAQLFHKK                 40BPI.39                KSKVGWLIALFHKK                 41BPI.40                KSKVGWLIQAFHKK                 42BPI.41                KSKVGWLIQLAHKK                 43BPI.42                KSKVGWLIQLFAKK                 44BPI.43                KSKVGWLIQLFHAK                 45BPI.44                KSKVGWLIQLFHKA                 46BPI.82                KSKVGWLIQLWHKK                 76BPI.83             KSKVGAβ(1-萘基)LIQLFHKK            77BPI.85                KSKVLWLIQLFHKK                 79BPI.86                KSKVGWLILLFHKK                 80BPI.87                KSKVGWLIQLFLKK                 81BPI.91                KSKVGWLIFLFHKK                 86BPI.92                KSKVGWLIKLFHKK                 87BPI.94                KSKVGWLIQLFFKK                 89BPI.95                KSKVFWLIQLFHKK                 90BPI.96                KSKVGWLIQLFHKF                 91BPI.97                KSKVKWLIQLFHKK                 92BPI.104               KSKVGWLISLFHKK                103BPI.106               KSKVGWLITLFHKK                105BPI.107               KSKVGWLIQLFWKK                106BPI.108               KSKVGWLIQLFHKW                107BPI.113               KSKVGWLIQFFHKK                112BPI.125               KSKVGWLIYLFHKK                121BPI.127               KSKVGFLIQLFHKK                123BPI.135               KSKVGKLIQLPHKK                131BPI.139               KSKVGYLIQLFHKK                135BPI.142               KSKVGWLIQWFHKK                138BPI.166               KSKVGVLIQLFHKK                162
             表Ⅶ(续)4．多氨基酸取代A．区段Ⅱ肽肽肽序列SEQIDNO:BPI.45               IKISGKWKAAARFLK                             31BPI.56               IKISGKWKAKQRFLK                             47BPI.59               IKISGAWAAQKRFLK                             30BPI.60               IAISGKWKAQKRFLA                             32BPI.75               IKKRAISFLGKKWQK                            100BPI.84            IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK                       78BPI.88               IKISGKWKAFFRFLK                             82BPI.114              KWQLRSKGKIKIFKA                            113B．区段Ⅲ肽BPI.100              KSKVKWLIKLFHKK                             94BPI.124              KSKVKWLIQLWHKK                             120BPI.138              KSKVKFLIQLFHKK                             134BPI.161              KSKVKALIQLFHKK                             1575．非典型氨基酸取代A．区段Ⅱ肽BPI.66               IKISGKWDKAQKRFLK                           49BPI.67          IKISGKAβ-(1-萘基)KAQKRFLK                         50BPI.70          IKISGKAβ-(1-萘基)KAQKRFLK                         63BPI.71          IKISGKWKAQKRAβ-(1-萘基)LK                         64BPI.72             ADADIKISGKWKAQKRFLK                         66BPI.76               IKISGKWKAQFDRFLK                           71BPI.80          IKISGKWKAQAβ-(1-萘基)RFLK                         74BPI.89          IKISGKAβ-(1-萘基)KAFKRFLK                         84BPI.90          IKISGKAβ-(1-萘基)KAFFRFLK                         85BPI.105         IKISGKWKAWKRAβ-(1-萘基)LKK                       104BPI.112     IKISGKAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLK                   111BPI.119     IKISGKAβ-(1-萘基)KAAβ-(1-萘基)KRFLK                   115BPI.121     IKISGKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK                   117BPI.122     IKISGKAβ-(1-萘基)KAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK          118
                  表Ⅶ(续)B．区段Ⅲ肽肽肽序列SEQIDNO:BPI.109             KSKVGWLIQLAβ-(1-萘基)HKK                               108BPI.110             KSKVGWLIQLFAβ-(1-萘基)KK                               109BPI.111             KSKVGWLIQLFHKA β-(1-萘基)                              110BPI.116             KSKVKAβ-(1-萘基)LIQLFHKK                               114BPI.123              KSKVGW(p- 氨基)LIFLFHKK                               119BPI.126                  KSKVGWDLIQLFHKK                                 122BPI.128                  KSKVGFDLIQLPHKK                                 124BPI.129            KSKVGAD-1-β-(1-萘基)LIQLFHKK                             125BPI.130            KSKVGA 2-β-(1-萘基)LIQLFHKK                             126BPI.131            KSKVGA D-2-β-(1-萘基)LIQLFHKK                            127BPI.132               KSKVGA(吡啶基)LIQLFHKK                               128BPI.133               KSKVGF(p-氨基)LIQLFHKK                               129BPI.134               KSKVF(p-氨基)WLIQLFHKK                               130BPI.143             KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FHKK                               139BPI.144               KSKVGA(环己基)LIQLFHKK                               140BPI.146         KSKVGWLIQLFAβ-(1-萘基)KAβ-(1-萘基)                          142BPI.148         KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFAβ-(1-萘基)KK                          1446．氨基酸/非典型氨基酸取代重复序列A．区段Ⅱ肽BPI.46                KWKAAARFLKKWKAQKRFLK                                 57BPI.47                KWKAQKRFLKKWKAAARFLK                                 58BPI.48                KWKAAARFLKKWKAAARFLK                                 59BPI.69                KWKAAARFLKKWKAARFLKKWKAAARFLK                        60BPI.99                KWKAQWRFLKKWKAQWRFLKKWKAQWRFLK                       93BPI.150               KWAFAKKQKKRLKRQWLKKF                                148BPI.154         KWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAQKRFLK                    150BPI.155         KWKAQKRFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK                    151BPI.156         KWKAAβ-(1-萘基)Aβ(1-萘基)RFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-                    萘基)PFLK152BPI.157         KWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAβ-(1-萘基)Aβ-(1-          153
                 萘基)RFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKBPI.160         KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLKKAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-         156
                              萘基)LKBPI.163                      KWKAQWRFLKKWAQWRFLK                          159BPL164          KWKAAβ-(1-萘基)KRFLKKWKAAβ-(1-萘基)KRFLK                    160BPI.165         KAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK                    161
                  表Ⅶ(续)B．区段Ⅲ肽肽肽序列SEQIDNO:BPI.101              KSKVKWLIKLFFKFKSKVKWLIKLFFKF                            95C．区段间组合肽BPI.93          IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIQLFHKK                       88BPI.98         IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK KSKVGWLIFLFHKK                       83BPI.102                 KWKAQFRFLKKSKVGWLILLFHKK                             96BPI.140              Aβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKF                              136BPI.145                 KWKAAARFLKKSKVGWLIQLFHKK                            141BPI.158    IKISGKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKSKVGWLIQLFHKK                  154BP1.159      KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLKKSKVGWLIQLWHKK                     155BPI.162                KWKAQWRFLKKSKVGWLIQLFHKK                             1587．环化肽A．区段Ⅰ肽BPI.57                      CIKISGKWKAQKRPLC                                 99BPI.58                      CIKISGKWKAQKRFLK                                  9BPI.65                      CIKISGKWKAQKRFLKC                                10BPI.168                      CKWKAQKRFLKMSC                                 164BPI.169                         CKWKAQKRFC                                  165B．区段Ⅲ肽BPI.137                    CKSKVGWLIQLFHKKC                                 133
                表ⅧABPI肽杀微生物活性肽         E.coli J5a      E.coliO111:B4a    S.aureusaBPI.1              b               b                bBPI.2           3.001.50           b                bBPI.3           695.78             b                nBPI.4              b               b                bBPI.5           398.10          7.343.30            nBPI.7           175.40          2.072.10         3.769.60BPI.8          25.695.10           b                nBPI.9           476.60          5.337.50            nBPI.10.1(a)       102.30           697.10             nBPI.10.1(b)       102.30           697.10             nBPI.11          638.30             b                nBPI.12          524.80             b                nBPI.13          440.80          5.857.40         5341.27EPI.13P            n               n                nBPI.14             b               b                bBPI.15         9.705.10            b                nBPI.16         7550.90             b                nBPI.17         15.836.70           b                nBPI.18          7.128.50           b                nBPI.19          2.187.80           b                nBPI.20           3.451.40          b                nBPI.21           27.647.60         b                nBPI.22           2.546.80          b                nBPI.23         1.330.40            14.445.00        nBPI.24          654.60             27330.00         nBPI.25           8.203.50          b                nBPI.26           8.709.60          b                nBPI.27          5.754.40           b                nBPI.28          6.194.40           b                nBPI.29           441.60            1.163.775.30     15.508.98.a如用RPOBIT分析法(实施例19)测得的加到孔中达到30mm2固着量的pmolb=在5μg/孔之前无可检测的活性；n=未测
                表ⅧA(续)肽          E.coli.15a              E.coli O111:B4a         S.aureusaBPI.30            76.38                    608.20                1.216.37BPI.30P             n                         n                      nBPI.31           937.60                       b                      nBPI.32           613.80                       b                      nBPI.33           575.40                       b                      nBPI.34           916.20                       b                      nBPI.35           263.00                       b                      nBPI.36          1.652.00                      b                      nBPI.37          1.284.00                      b                      nBPI.38          1.698.20                      b                      nBPI.39            316.20                      b                      nBPI.40           1760.10                      b                      nBPI.41           2.465.40                     b                      nBPI.42            264.80                   3.731.70                  nBPI.43            729.40                   4.872.30                  nBPI.44            480.80                   2.982.90                  nBPI.45           1.301.80                  4.849.00              18.725.00BPI.46            186.69                   2.970.26             3.810.752.30BPI.47             97.73                    576.74                41.213.59BPI.48             42.40                    253.54                4.089.14BPI.54               b                         b                      nBPI.55            299.36                    3.702.60              28.204.45BPI.56           1.387.00                      b                      bBPI.57            514.03                       b                      bBPI.58           1.050.11                      b                      bBPI.59           3.718.00                      b                      bBPI.60           3.782.80                      b                      bBPI.61           86.541.00                     b                      bBPI.63             86.94                     511.61                2.101.84BPI.65(Re)        1.362.23                      b                      bBPI.65(Ox)          849.79                      b                  11.960.00a如用RPOBIT分析法(实施例19)测得的加到孔中达到30mm2固着量的pmolb=在5μg/孔之前无可检测的活性；n=未测
             表VⅧA(续)肽                      E.coli J5a          E.coli O111:B4a            S.aureusaBPI.66                    5.846.50                   b                       bBPI.67                    2.424.30                   b                       bBPI.69                      56.68                 244.07                 1.057.56BPI.70                        b                      b                       bBPI.71                    2.296.94                   b                       bBPI.72                    2.925.67                   b                       bBPI.73                     57.28                  3.290.60              2.313.133.50BPI.74                     731.94                 30.610.36               4.290.18BPI.75                    2.708.40                   b                    9.508.60BPI.76                    10.519.55                  b                       bBPI.77                      455.08                   b                    1.684.35BPI.79                     5.827.30                  b                       bBPI.80                      655.37                   b                     2.537.82BPI.81                      283.84                3.018.90                 9.477.20BPI.82                      171.32                3.681.30                11.027.00BPI.83                      164.84                51.147.55              116.500.54BPI.84                       11.63                46.130.96                9.677.46BPI.85                      227.35               295.208.43               14.677.13BPI.86                     1.519.64                   b                  459.138.55BPI.87                      188.72                23.949.00              868.991.70BPI.88                       70.32                 540.15                 9.051.O4BPI.89                      229.09                 4.210.70               7.357.20BPI.90                       83.11                 1.765.50              39.585.98BPI.91                     21.014.73                   b                     bBPI.92                       331.80                    b                     bBPI.93                       212.87                10.118.98                 bBPI.94                       922.54                 3.658.80              9.446.60BPI.95                       330.88                 2.809.70                 bBPI.96                       378.33                 8.691.85              91.585.37BPI.97                       295.58                    b                     bBPI.98                      4384.14                63.709.98                 ba如用RPOBIT分析法(实施例19)测得的加到孔中达到30mm2固着量的pmolb=在5μg/孔之前无可检测的活性；n=未测
              表VⅧA(续)肽                      E.coli J5a            E.coli O111:B4a                        S.aureusaBP1.99                      722.90                60.037.52                           37.942.676.00BPI.100                     407.74                 7.342.90                                 bBPI.101                    1.329.30                3.631.70                             4.388.20BPI.102                   13.814.12              697.655.78                                 bBPI.103                     165.18                 415.19                               4.705.95BPI.104                     385.85                 1.376.42                            27.933.64BPI.105                      65.35                 206.98                               6.260.97BPI.106                     427.12                3.413.80                                  bBPI.107                     384.67                4.665.64                                  bBPI.108                     661.05               306.965.11                          1.413.131.872.57BPI.109                     308.60                44.875.41                                 bBPI.110                     812.33                 7.952.04                                 bBPI.111                     969.00                  7232.08                             12.467.42BPI.112                    1.485.92                    b                                    bBPI.113                     270.66                  8.671.73                                bBPI.114                    1.696.20                    b                                    bBPI.116                      73.82                  37.539.59                               bBPI.119                     106.70                    536.44                            166.163.83BPI.120                         b                      b                                    bBPI.121                     154.35                  1.856.40                            941.388.07BPI.122                     179.89                  2.123.57                           2.631.667.24BPI.123                     247.20                  6.651.23                                bBPI.124                      91.23                  3.916.32                                bBPI.125                     428.85                 11.306.79                                bBPI.126                    1.979.97                    b                                    bBPI.127                      406.01                    b                                    bBPI.128                    2.271.14                    b                                    bBPI.129                    1.685.10                    b                                    bBPI.130                     325.75                 4.377.92                                 bBPI.131                    1.438.21                    b                                    bBPI.132                    4.505.79                    b                                    ba如用RPOBIT分析法(实施例19)测得的加到孔中达到30mm2固着量b=在5μg/孔之前无可检测的活性；n=未测
                   表VⅧA(续)肽                      E.coli15a            E.coli O111:B4a             S.aureusaBPI.133                   2.316.59                    b                        bBPI.134                    162.50                  580.11                      bBPI.135                   1.052.02                3.321.69                     bBPI.136                  18.846.44                    b                        bBPI.137                   1.390.00                87.980.00                    bBPI.138                     64.57                   995.40                     bBFI.139                   1.261.37                 3.793.91                    bBPI.140                     84.76                   605.34                  9.977.71BPI.141                   2.809.51                    b                        bBPI.142                    922.21                     b                        bBPI.143                  12.388.45                    b                        bBPI.144                    510.02                     b                        bBPI.145                    250.00                  9.561.00                    bBPI.146                       b                       b                        bBPI.147                    8.385.00                   b                        bBPI.148                   4.206.57                    b                        bBPI.149                     44.00                   391.00                     bBPI.150                    220.00                  3.610.00                    bBPI.151                       n                       n                        nBPI.152                       n                       n                        nBPI.153                       n                       n                        nBPI.154                    197.00                  2.977.76               30.052.224.71BPI.155                    5.912.26             53.027.986.44           5.530.185.440.73BPI.156                       n                       n                        nBPI.157                       n                       n                        nBPI.158                       n                       n                        nBPI.159                    765.43                152.678.66                14.387.00BPI.160                    288.78                  2.967.57               352.608.37BPI.161                   1.201.79                    b                   100.476.32BPI.162                       n                       n                        nBPI.163                       n                       n                        na如用RPOBIT分析法(实施例19)测得的加到孔中达到30mm2固着量的pmolb=在5μg/孔之前无可检测的活性；n=未测
                  表ⅧA(续)肽                      E.coli J5a         E.coli 0111:B4a          S.aureusaBPI.164                      n                       n                    nBPI.165                      n                       n                    nBPI.166                   514.00                  9.586.00                bBPI.167                  25.489.99                   b                    bBPI.168                   1.460.98                5.158.82                bBPI.169                   4.893.83                36.025.95           17.281.61MAP.1                      105.71                  552.79              1.382.60MAP.2                     1.608.40                 2.511.50            6.353.40a如用RPOBIT分析法(实施例19)测得的加到孔中达到30mm2固着量的pmolb=在5μg/孔之前无可检测的活性；n=未测
            表：ⅧB
            BPI肽杀真菌活性肽                  MICC.alb        C.albicansa(μg/mL)BPI.13                6.25            221.63BPI.29                              ＞1469.25BPI.30                              ＞1653.50BPI.31                6.25            426.21BPI.32                3.13            293.62BPI.33                6.25            603.44BPI.34                6.25            319.13BPI.35                3.13            441.79BPI.36                6.25            196.96BPI.37                6.25            252.71BPI.38                6.25            390.65BPI.39               12.50           1791.81BPI.40                3.13            253.17BPI.41                3.13            733.70BPI.42                6.25            548.49BPI.43               12.50            784.78BPI.44                6.25            577.65
               表ⅧB(续)肽                MICC.alb            C.albicansa(μg/mL)BPI.63                                ＞1006.34BPI.74                                ＞2148.21BPI.82              3.13                518.43BPI.83                                 1804.26BPI.85                                ＞1881.18BPI.86                                ＞2048.45BPI.87                                ＞1535.78BPI.91                                ＞3843.54BPI.92              3.13                298.72BPI.93                                ＞980.27BPI.94                                ＞922.54BPI.95                                ＞ 1397.64BPI.96                                  1856.08BPI.97              3.13                 213.22BPI.133            12.50                 284.39BPI.134            12.50                1254.98BPI.135             6.25                 427.81BPI.137                                ＞2285.73BPI.138             3.13                 256.82BPI.139             625                  322.96BPI.142            12.50                1243.79BPI.143            25.00               ＞2838.99BPI.144            12.50                 695.19BPI.145                                ＞1886.58BPI.146                                 ＞50.00BPI.147           100.00               ＞2558.17BPI.148            50.00BPI.149            12.50               ＞1397.76BPI.150                                ＞2380.67BPI.154                                ＞100.00BPI.155                                ＞100.00BPI.156                                ＞100.00
               表ⅧB(续)肽                       MCC.alb          C.albicansa(μg/mL)BPI.157                ＞100.00BPI.158                ＞100.00BPI.159                   50.00BPI.160                ＞100.00BPI.161                    3.13BPI.166                    3.13             170.65BPI.167                ＞50.00BPI.168                ＞100.00BPI.169                ＞100.00a  30mm2区所需的pmol
                表Ⅸ肽          肝素亲和力(nM)      肝素容量(ng)BPI.1          未结合              未结合BPI.2          346.5               203.6BPI.3          780.8               264.5BPI.4          335.6                80.8BPI.5          193.4               177.6BPI.7          908.0               405.6BPI.8          573.8                92.2BPI.9         1141.4               212.5BPI.10         915.7               548.9BPI.11         743.9               290.5BPI.12         284.6               231.5BPI.13         984.5               369.1BPI.14         396.4               119.3BPI.15         315.0               145.4BPI.16         231.0               127.25BPI.17         266.5               113.1BPI.18         381.2               156.6BPI.19         266.5               203.6BPI.20         485.1               203.6BPI.21         231.0                50.9
                 表Ⅸ(续)肽                     肝素亲和力(nM)      肝素容量(ng)BPI.22                     315.0              135.7BPI.23                     693.0              285.0BPI.24                     165.0              427.6BPI.25                     346.5              107.2BPI.26                     231.0              113.1BPI.27                     203.8              119.8BPI.28                     266.5              156.6BPI.29                     427.4              463.7BPI.30                     592.2              499.4BPI.31                     252.4              205.1BPI.32                     339.5              217.1BPI.33                     492.2              230.7BPI.34                     518.2              205.1BPI.35                    1083.0              406.0BPI.36                     378.7              80.2BPI.37                     189.3              136.7BPI.38                     579.1              194.3BPI.39                     757.3              335.6BPI.40                     546.9              160.5BPI.41                     468.8              119.1BPI.42                     820.4              369.1BPI.43                     492.3              283.9BPI.44                     579.1              335.6BPI.45                     152.6              160.7BPI.46                    1067.0              321.1BPI.47                    1911.0              576.4BPI.48                    1415.0              442.3BPI.54                     237.4               64.3BPI.55                     367.6              166.1BPI.56                     114.6              135.5BPI.58                     194.0              231.2BPI.59                     174.9              106.7BPI.60                      64.8              120.3BPI.61                      58.3               85.2BPI.63                     599.8              305.1BPI.65(ox.)                159.5              190.6BPI.65(red.)               216.0              279.6
           表Ⅸ(续)肽       肝素亲和力(nM)    肝素容量(ng)BPI.66      295.7             111.6BPI.67      107.8             250.4BPI.69      967.1             450.8BPI.70      145.2              59.2BPI.71       75.6             158.9BPI.72      145.2             102.8BPI.73      227.2             413.4BPI.74      218.1             207.3BPI.75       96.0             119.8BPI.76      127.9             144.4BPI.77      301.9             581.7BPI.79      199.4             110.2BPI.80      135.6             210.3BPI.81      334.7             318.4BPI.82      427.2             163.1BPI.83      409.9             253.3BPI.84     1003.2             329.2BPI.85      682.4             233.1BPI.86      383.1             208.4BPI.87      575.0             280.0BPI.88     1629.0             352.8BPI.89     1199.4             252.8BPI.90     1231.7             274.8BPI.91      288.1             181.2BPI.92      667.1             227.3BPI.93      386.7             291.5BPI.94      406.9             216.1BPI.95      551.2             224.5BPI.96      468.8             203.8BPI.97      765.4             252.2BPI.98      683.3            1678.4BPI.99     9097.7             971.4BPI.100    2928.9             314.0BPI.101    1905.0             210.9BPI.102    4607.8             535.2
             表Ⅸ(续)肽         肝素亲和力(nM)       肝素容量(ng)MAP.1          936.8              459.1MAP.2          785.5              391.2Cecropin.      395.3              242.0Magainin      3174.6              453.7PMB 肽         309.42              58.01LALF          1294.1              195.3
当使用杀菌活性作为预测的变量并以肝素结合容量和亲和力(Kd)作为预测变量进行多项回归分析时，观察有代表性的BPI功能区肽间的引人感兴趣的关系。该分析表明只有肝素结合容量与杀菌活性具有有意义的关联(肝素容量，p=0.0001和肝素亲和力，p=0.6007)。换句话说，给定的肽能够以饱和量结合的肝素量(即容量)与杀菌活性有重要关系，而与肝素沉淀中某种肽多久达到50％饱和(即亲和力)无关。从LPS结合竞争和中和数据也可以看出，容量是最能预测杀菌活性的。例如，结果证明BPI.7、BPI.29、BPI.30、BPI.46、BPI.47、BPI.48、BPI.63、BPI.65(还原的)、BPI.69、BPI.73、BPI.58、MPI.1和MPI.2具有极高的肝素容量并且也有高的杀菌活性。多抗原肽(MAP肽)是在如Posnet和Tam(1989,Methods in Enzymoloqy178:738-746)所述的分支赖氨酸核心上的多聚肽。相反，BPI.2、BPI.4、BPI.8、BPI.14、BPI.53、BPI.54则有低的肝素结合容量并因而只有很小或没有杀菌活性。
比较BPI区段内组合肽BPI.30(包括区段Ⅱ-区段Ⅲ肽)和BPI.74(包括区段Ⅲ-区段Ⅱ肽)的抗革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌杀菌活性，及肝素结合和容量。这些结果令人惊奇地表明，颠倒肽在组合中次序即可改变所观察到的相对活性水平。例如，发现与BPI.30相比，BPI.74大大降低了杀菌活性。具体地说，BPI.74抗E.coli J5细菌的杀菌活性低10倍，抗E.cOli O111:B4细菌的杀菌活性低50倍，并且抗S.aureus的杀菌活性低3.5倍。还观察到其肝素结合容量降低2倍，并且肝素亲和力降低2倍。
检验了其他杀菌和内毒素结合蛋白质的肝素结合活性。以实施例3中所述的直接肝素结合法检测Cecropin A.maRaininⅡ酰胺、多粒菌素B(Polymyxxxin B)(PMB)肽和鲎抗LPS因子(LALF)。爪蟾抗菌肽Ⅱ酰胺(Sigma,St:Louis,MO)表现有与杀菌肽A(Sigma,242ng/2μg肽，Kd=395nM)、LALF(As-soc.of Cape Cod,Woods Hole,MA,195.3ng/2μg肽，Kd=1.29μM)和多粒菌素B肽(Bachem Biosciences,philadelphia,PA,58.0ng/2μg肽，Kd=309mM)相对的最高肝素结合容量(437.7ng肝素/2μg肽，Kd=3.17μM)。爪蟾抗菌肽Ⅱ酰胺是天然爪蟾抗菌肽序列的取代变异体，其中8,13和15位上已有3个丙氨酸取代。据报导爪蟾抗菌肽Ⅱ酰胺比天然爪蟾抗菌肽序列有较小的溶血活性。
上述结果支持由BPI肽试验数据证明的肝素结合LPS结合和杀菌活性间的关系，并提示其它LPS结合蛋白质也可与肝素结合。相应地，更具活性的杀菌蛋白质，包括杀菌肽A和爪蟾抗菌肽Ⅱ酰胺表现出在该系统其他LPS结合蛋白质中的最高肝素结合容量。
一种类型的BPI功能区肽加成变异体在BPI功能区肽的氨基式羧基末端加入D-丙氨酸-D-丙氨酸。这一研究的理由是经加入D-丙氨酸而赋予更大的革兰氏阳性菌杀菌活性。革兰氏阳性细菌的细胞壁生物合成包括转肽酶反应，其中特异性地结合并利用D-丙氨酸-D-丙氨酸。β-内酰胺抗生素如青霉素可有效地抑制这一反应。在活性杀菌肽上掺入D-丙氨酸-D-丙氨酸将使该肽靶向革兰氏阳性细菌的活跃合成的细胞壁。
在BPI功能性区肽的区段Ⅱ取代系列中，当Lys95被丙氨酸取代时(BPI.24)观察到出乎预料的活性增加。与丙氨酸取代肽相比，继后的95位上的苯丙氨酸取代(BPI.73)导致了活性的进一步改善。令人惊奇的是，95位上的氨基酸被D-Phe取代则导致活性的显著降低，以致达到低于原始肽(BPI.2)的水平。这一异构体效应证明，此种肽的相互作用是立体特异性的，并暗示BPI.73与BPI.76相比能够折叠成更具活性的构象。特别是在研究了其他残基上的现象后，这种立体特异性为药效基团开发提供了重要的决定因素。
已经利用由本文限定的BPI的功能区衍生肽来确定了疏水氨基酸(特别是色氨酸)对于最佳活性是最关键的。这一发现的出乎意料之处是由于BPI的阳离子性质。事实上，对于区段Ⅱ来说，当用丙氨酸或苯丙氨酸取代赖氨酸时，活性即显著增加(BPI.24，BPI.73)。功能区域肽的组合，包括来自3个区段的最具活性的取代肽的组合，也可提高个别肽构建体的效力。
使用VVDACC-18柱(25mm×4.6mm,5μm粒度，3nm孔径；Separation Group,Hesperia,CA)，以分析性反相HPLC法测定各个新的合成肽的纯度。使用在水溶液的5％乙腈/0.1％三氟乙酸(TFA)作为流动相A，并使用80％乙腈/0.065％TFA作为流动相B进行HPLC。在220nm处进行分光光度分析以监测洗脱物。流速为1.0ml/分钟。选择使各种肽都能得以最佳分辨的梯度洗脱条件。用分布于总峰面积的主峰区域的百分比表示纯度(参见表X)。还使用VG Biotech Bio-Q质谱仪以电子射流离子化质谱法检测新合成的肽的纯度和性质。表Ⅹ总结了用质谱和HPLC法对本发明的举例的肽所作纯度分析的结果。
使用半制备反相VYDACC-18柱(25cm×10mm,10μm颗粒大小，30mm孔隙大小)纯化BPI.13及其他选择的肽。使用下列梯度纯化BPI.13:26.7％B至33％B/30分钟，流速2.0ml/分钟。将BPI.13以8.8mg/ml的浓度溶解在流动相A中，并以0.5ml体积注射。进行三次分别注射并收集得自每次注射的主峰。合并收集的材料并使用Speed Vac蒸发至干。
用分析性反相系统和上述梯度洗脱条件测定所回收之材料(该纯化的材料被称为BPI.13P)的纯度。基于该分析，发现BPI.13P纯度为98％。还使用VG Biot ch Bio-Q质谱仪，以电子射流离子化质谱化测定BPI.13P的纯度和性质。测得分子质量为1711.0(预测的质量是1711.1)。用质谱法没有测出杂质。BPI.13P的回收率为55％，估计所需的肽占起始材料的69％。
如按上述方法进一步纯化本发明的肽，发现当化学纯度增加时，所试验的肽，例如BPI.13P和BPI.30P的生物活性随之增加。这表明所观察到的生物学活性是由于肽本身所产生的。特别是，当肽制剂的纯度增加到98％时，纯度约为69％的BPI.13的抗白色念珠菌(Caridia albicans)的完全新的和不可预见的抗真菌活性(见实施例16)也进一步增加。
                表Ⅹ肽                蛋白质氨基酸片段            MS％      HPLC
                                         纯度      ％纯度BPI.1                  19-33                   -         2pBPI.2                  85-99                  57        37.2BPI.3                  73-99                   -         17BPI.4                  25-46                   -         npBPI.5                  42-163                  -         18BPI.6                 112-127                  -         68BPI.7               (90-99)×2                69        40.9BPI.8                  90-99                  79         rnBPI.9               95-99,90-99                -         29BPI.10.1/       94-99,90-99,90-99and           -         rmBPI.10.2         93-99,90-99,90-99BPI.11            148-151,153-161              -         76BPI.12                141-169                  -         26BPI.13                148-161                 78         69BPI.13P               148-161                100         98BPI.14                 21-50                   -         13.3BPI.15             85-99,A@85(I)              66         57.6BPI.16             85-99,A@85(K)               -         84.1BPI.17             85-99,A@87(I)              86         73BPI.18             85-99,A@88(S)              66         70BPI.19             85-99,A@88(G)               -         69BPI.20             85-99,A@90(K)               -         66BPI.21             85-99,A@91(W)              68         65.8BPI.22             85-99,A@92(K)               -         66BPI.23             85-99,A@94(Q)               -         69BPI.24             85-99,A@95(K)               -         67BPI.25             85-99,A@96(R)               -         73BPI.26             85-99,A@97(F)               -         73BPI.27             85-99,A@98(L)               -         65BPI.28             85-99,A@99(K)               -         80BPI.29             (148-161)×2                -         26BPI.30             99-99,148-161               -         21BPI.30P            90-99.148-161              95         98BPI.31           148-161.A@148(K)              -         68BPI.32           148-161,A@ 49(S)              -         70BPI.33           148-161,A@150(K)              -         58
                      表Ⅹ(续)肽               蛋白质氨基酸片段             MS％     HPLC％
                                          纯度      纯度BPI.34           148-161,A@151(V)               -        51BPI.35           148-161,A@152(G)               -        72BPI.36           148-161,A@153(W)               -        64BPI.37           148-161,A@154(L)               -        51BPI.38           148-161.A@155(I)               -        70BPI.39           148-161,A@156(Q)               -        53BPI.40           148-161,A@157(L)               -        53BPI.41           148-161,A@158(F)               -        63BPI.42           148-161,A@159(H)               -        59BPI.43           148-161,A@160(K)               -        53BPI.44           148-161,A@161(K)               -        70BPI.45         85-99,A@94(Q)&95(K)             71        46BPI.46      (99-90)×2,A@1st94(Q)&95(K)        67        47BPI.47       (90-99)×2,A@2d94(Q)&95(K)        57        34BPI.48        [90-99,A@94(Q)&95(K)]×2         68        33BPI.54                21-35                     -         -BPI.55               152-172                    -        28BPI.56         85-99,K@94(Q)&Q@95(K)            -        55BPI.58               Cys-85-99                 49       25.7BPI.59         85-99,A@90(K)&92(K)             56       30.3BPI.60         85-99,A@86(K)&99(K)             57       78.3BPI.61            85-99,F@91(W)                60       59.8BPI.63            85-99,148-161                38       31.3BPI.65Rd          Cys-85-99-Cys                41       22,34BPI.65Ox          Cys-85-99-Cys                 -         npBPI.66            85-99,WD@91(W)                -        70BPI.67       85-99,β-(1-萘基 )-A@91           65        52BPI.69       [90-99,A@94(Q)&95(K)]×3          44       54,40BPI.70       85-99,β-(3-吡啶基)-A@91          66        54BPI.71              AD-AD-85-99                 -        60BPI.72      85-99,β-(3-吡啶基)-A@97(F)         -        52BPI.73           85-99,F@95(K)                  -       44,39BPI.74          148-161,90-99                   -        29BPI.75          KKRAISFLGKKWQK                  -        32
                    表Ⅹ(续)肽                    蛋白质氨基酸片段          MS％    HPLC％
                                            纯度     纯度BPI.76                 85-99,FD@95(K)             -       39BPI.77                 85-99,W@95(K)              -       38BPI.79                 85-99,K@94(Q)              -       48BPI.80           85-99,β-(1-萘基基)-A@95(K)      -       44BPI.81                 85-99,F@94(Q)              -      33,35BPI.82               148-161,W@158(F)             -       58BPI.83         148-161,β-(1-萘基)-A@153(W)       -       63BPI.84             85-99,β-(1-萘基)A@            -       50
                   91(W)&F@95(K)BPI.85               148-161,L@152(G)             -       74BPI.86               148-161,L@156(Q)             -       51BPI.87               148-161,L@159(H)             -       63BPI.88              85-99,F@94(Q)&95(K)           -       50BPI.89        85-99,β-(1-萘基)A@91(W)&F@94(Q)    -       50BPI.90           85-99,β-(1-萘基)A@91(W),        -       63F@94(Q)&95(K)BPI.91               148-161,F@156(Q)             -       31BPI.92               148-161,K@156(Q)             -       50BPI.93         85-99148-161β-(1-萘基)A@91(W),    -       38
                     F@95(K)BPI.94               148-161,F@159(H)             -       59BPI.95               148-161,F@152(G)             -       57BPI.96               148-161,F@161(K)             -       60BPI.97               148-161,K@161(G)             -       67BPI.98        90-99,β-(1-萘基)A@91(W),F@95(K)+   -       31
                 148-161,F@156(Q)BPI.99              [90-99,W@95(K)]×3            -        -BPI.100           148-161,K@152(G)&156(Q)         -       61BPI.101      [148-161,K@152(G)&156(Q),F@159&161]  -       16
                       ×2BPI.102         90-99,F@95(K)+148-161,L@156(Q)    -       16BPI.103                85-99,W@94(Q)              -       28BPI.104               148-161,S@156(Q)            -       34BPI.105          85-99,β-(1-萘基)A@94(Q)        58       43
                        表Ⅹ(续)肽                     蛋白质氨基酸片段             MS％   HPLC％
                                                纯度    纯度BPI.106                148-161,T@156(Q)               -      26BPI.107                148-161,W@159(H)               -      55BPI.108                148-161,S@161(K)               -      50BPI.109           148-161,β-(1-萘基)A@158(F)         -      41BPI.110           148-161,β-(1-萘基)A@159(H)         -      56BPI.111           148-161,β-(1-萘基)A@161(K)         -      73BPI.112          85-99,β-(1-萘基)A@91(W)&95(K)       -      56BPI.113               148-161,F@157(L)                -      46BPI.114                KWQLRSKGKIKFKA                 -      17BPI.116       148-161,K@152(G),β-(1-萘基)A@153(W)    -      72BPI.119        85-99,β-(1-萘基)A@91(w)&94(K)         -      77BPI.120                  85-99,K@97(F)                -      52BPI.121        85-99,β-(1-萘基)A@94(Q)&95(K)        65      35BPI.122     85-99,β-(1-萘基)A@91(W),94(Q)&95(K)      -      46BPI.123           148-161,p-氨基-F@156(Q)             -      64BPI.124         148-161,K@152(G)&W@158(F)             -      67BPI.125              148-161,Y@156(Q)                 -      54BPI.126             148-161,WD@153(W)                66      54BPI.127              148-161,F@153(W)                65      63BPI.128             148-161,FD@153(W)                63      51BPI.129      148-161,1-β-(1-萘基)AD@153(W)          24      28BPI.130       148-161,2-β-(1-萘基)A@ 53(W)          55      80BPI.131      148-161,2-β-(1-萘基)AD@153(W)          75      60BPI.132          148-161,pyr-A@53(W)                 49      50BPI,133          148-161,p-氨基F@153(W)              63      47BPI.134          148-161,p-氨基F@152(G)               -      68BPI.135            148-161,K@153(W)                   -      70BPI.136             85-99,E@95(K)                     -      50BPI.137           Cys-148-161-Cys                     -      28BPI.138        148-161,K@152(G)&F@153(W)              -      61BPI.139            148-161,Y@153(W)                   -      60BPI.140       94-99,β-(1-萘基)A@94(G)&95(K)+         -      26
                 148-161,S@156(Q)BPI.141               85-99,W@97(F)                   -      50
                   表Ⅹ(续)肽                蛋白质氨基酸片段                 MS％   HPLC％
                                               纯度    纯度BPI.142              148-161,W@157(L)                -      57BPI.143         148-161,β-(1-萘基)A@157(L)          -      65BPI.144           148-161,环己基1A@153(W)            -      60BPI.145       94-99,β-(1-萘基)A@94(G)&95(K)+        -      20
                      148-161BPI.146      148-161,β-(1-萘基)A@159(H)&161(K)      -      53BPI.147                 85-99K@96(R)                 -      55BPI.148      148-161,β-(1-萘基)A@153(W)&159(H)      -      62BPI.149             KWKVFKKIEK+148-161               -      27BPI.150            KWAFAKKQKKRLKRQWLKKF              -       mBPI.151/10.1         94-99,90-99,90-99               -      14BPI.52/10.2          95-99,90-99,90-99               -      21BPI.153                  (90-99)×3                  -      17BPI.154       (90-99)×2,β-1-(萘基)A@1st95(G)&95(K) -      31BPI.155     (90-99)×2,β-(1-萘基)A@2d95(G)&95(K)    -      23BPI.156      [90-99,β-(1-萘基)A@95(G)&95(K)]×2     -      38BPI.157      [90-99,β-(1-萘基)A@59(G)&95(K)]×3     -      38BPI.158       85-99,148-161,β-(1-萘基)A@95(G)       -      16
                    &95(K)BPI.159      90-99,β-(1-萘基)A@91(W)&95(K)+         -      23
                 148-161,W@518(F)BPI.160     [90-99,β-(1-萘基)A@91(W)&95(K)]×2      -      32BPI.161         148-161,K@152(G),A@153(W)            -      75BPI.162           90-99,148-161.W@95(K)              -      21BPI.163            [90-99,W@95(K)]×2                -       mBPI.164       [90-99,β-(1-萘基)A@94(Q)]×2          -      46BPI.165    [90-99,β-(1-萘基)A@91(W),F@95(K)]×2     -      72BPI.166             148-161.V@153(W)                 -      68BPI.167                  90-97                       -      56BPI.168              Cys-90-101-Cys                  -      13BPI.169              Cys-90-97-Cys                   -      20MAP.1       βAla-Nα.Nε-[Nα.Nε(BPI.2)1-Lys]LyS   54     mpMAP.2      βAla-Nα,Nε-[Nα,Nε(BPI.13)1-Lys]Lys   49     mp-=未做；m=混合的2p=两个峰；mp=多个峰；np=无峰
实施例20
使用结合和中和检测法分析BPI功能区肽
A.LPS结合试验
对BPI功能区肽进行LPS结合试验。
按照Gazzano-Santoro等人(文献出处同上)所述方法进行这些试验中的第一个试验。简单地说，超声波处理E.coli菌株J5脂质A的悬液并在甲醇中稀释成0.2μg/ml浓度，然后将50μl等分样品吸附到小孔内(Immulon 2 Removawell Strips,Dynatech)。37℃过夜保温后，用215μlD-PBS/0.1％BSA的溶液37℃封闭小孔3小时。然后，弃去封闭缓冲液，用加在D-PBS中的0.05％吐温-20(D-PBS/T)溶液洗小孔，在7℃下与50μl加在D-PBS/T中的[125I]-rBPI23的溶液(比活性9.9μci/μg，总放射活性234，000rpm)和逐渐增加浓度的BPI功能区肽保温过夜。保温后，用D-PBS/T将小孔洗三次并使用V计数器计数结合的放射活性。对经D-PBS/BSA处理的小孔的结合被看作非特异性本底结合并从各小孔内结合的总放射活性中减去。
这些实施的结果示于图17a(其中各种肽的浓度以nm为单位给出)和17b(其中同一结果以μg/ml为肽的浓度单位给出)中。用未标记的rBPI23作为对照进行竞争实验。这些结果证明所有被试验的肽均具有不同程度的与rBPI23竞争LPS结合的能力。
在加或不加全血的条件下，使用双倍量的[125I]-rBPI23(总放射活性计数为454,000cpm，比活性10μci/μg)重复该实验，比较BPI.10和rBPI23的LPS结合亲和力。这些实验结果示于图18中，并证明(基于摩尔量)在与放射标记的rBPI23竞争的实验中，BPI.10的结合能力在rBPI23的2倍以内。按照上述第一个实验的方法，使用肽BPI.7BPI.29和BPI.30重复实验，不同的是使用总计数225,000cpm的[125I]-rBPI23，并以浓度为0.5mg/ml的脂质A铺板。该实验的结果示于图19中，并显示(基于摩尔量)这些肽结合脂质A的能力比未标记的rBPI23小6至10倍。
建立第二种结合检测法，其中使用放射标记的重组LPS结合蛋白质([125I]-rLBP)在与BPI功能肽BPI.2、BPI.3、BPI.4、BPI.5、BPI.7、BPI.13、BPI.14、BPI.29、BPI.30和BPI.48的竞争实验中代替放射标记的rBPI23。这些试验中使用rBPI、rBPI21△cys和rLBP25作为对照。实验中，脂质A以0.7μg/ml(在甲醇中)的浓度吸附到小孔上。在一系列渐增浓度的BPI肽存在下于37℃将放射标记的rLBP(总计数650,000cpm，比活性3.45μCi/μg)保温2.5小时。这些结果示于图20a和20b中。IC50值(即脂质A对放射标记的rLBP25的结合被抑制到没有肽时所达到的值的一半所需的浓度)示于附表Ⅺ中。
表Ⅺ
                      IC50:肽                      nM   μg/mLrBPI                    13    0.65rBPI21△cys            30    0.69BPI.7                  100    0.26BPI.29                 130    0.44BPI.48                 200    0.48BPI.30                 250    0.75BPI.3                  250    0.75rLBP25                600     15BPI.13                1000    1.7BPI.2                 1300    2.36BPI.5                 1700    4.42
在第三个结合试验中。试验多种BPI功能肽在与人内皮细胞(HUVEC)保温后与放射标记的LPS结合的能力。该试验法检测一旦BPI肽结合到HUVEC细胞上后再结合LPS的能力。在500μlD-PBS/BSA溶液中，在浓度为1μg/ml或3μg/ml的各种BPI肽存在下，将HUVEC细胞4℃保温3小时。保温后用冰冷的D-PBS/BSA将细胞洗两次，然后在500μl溶于D-PBS/BSA中的[125I]-RaLPS溶液(总放射活性计数340,000cpm，比活性4.6×106cpm/μg)中4℃下继续保温2.5小时。用D-PBS/BSA将小孔洗三次，溶解于500μl1M NaOh中并使用γ计数器计数溶胞产物的放射活性。图21中所示的这些结果表明，BPI.29和BPI.30在结合到HUVEC细胞上之后仍保留有结合LPS的能力。
B．利用TNF细胞毒性对BPI功能区肽进行LPS中和筛选试验
使用肿瘤坏死因子(TNF)细胞毒性检测法建立LPS中和的筛选试验。在以剂量依赖方式用LPS刺激后，使人单核细胞系(THP-1；登记号TIB202，美国典型培养物保藏中心(ATCC)，Rockville,MD)生长于添加维生素D的培养基中以产生TNF。小鼠成纤维细胞(L929细胞；ATCCCCL1)对TNF介导的细胞杀伤是敏感的，并且该细胞杀伤也是剂量依赖性的。因此，L929细胞的细胞杀伤程度为检测THP-1细胞中TNF诱导程度提供了一种敏感检测法，而其本身又是与THP-1细胞接触的游离LPS量的敏感指示剂。BPI功能区肽或rBPI23的LPS结合和中和作用减少了与THP-1细胞接触的游离LPS的量，从而减少了所产生的THF的量，后者本身又在标准化检测法中测得的L929细胞杀伤的量。因此，下述试验为估计本发明BPI功能区肽的LPS结合和中和能力提供了一种敏感方法。
在添加10％FCS和维生素D的RPMI培养基(GIBCO,LongIsland,NY)中将THR1细胞旋转培养3天，使细胞密度达到150,000个细胞/ml。然后将细胞以100,000个细胞/孔的密度铺敷在圆底96孔培养板中，并在没有维生素D或FCS的培养基中，在5ng/m1 E.coli O1113LPS存在下37℃保温6小时。实验对照孔还含有不同量的rBPI23或BPI功能区肽，浓度范围大约从0.1μg/ml到100μg/ml。保温后以大约600×g离心平板以沉淀细胞。并将各50μl上清液加到平行制备的每孔含50,000个L929细胞(在50μlRPMI/10％FCS中)的96孔平底培养皿中。
在RPMI/10％FCS培养基中单层培养L929细胞达到每平皿约106个细胞，在实验前一天按1∶2分开关培养过夜以使细胞在实验当天达到约70％贴壁生长。在向入96孔平板内前20分钟向70％贴壁生长的培养物中加入放射菌素D至终浓度为1μg/ml。在维持细胞生长的标准条件下，在加有THP-1上清液的L929细胞平板37℃保温16小时(过夜)。然后向各小孔中加入20ml经在2mlCellTitre96TM水溶液(Promega,Madison,WI)中稀释100μl甲磺酸吩嗪酯(phenazine methylsulfonate)制备的，含有3-[(4,5-二甲基)-硫代-2-基]-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺酰)-2H-四唑(内盐)的溶液。将培养物于37℃保温2-4小时并进行分光光度分析以确定490nm(A490)吸光率。相对照已知量TNF(从大约10mg/ml至大约10mg/ml)制作的半对数标准曲线估计实验结果。
这些实验的结果示于图22a-22h。图22a显示在有或没有5ng/ml LPS时，A490与L929细胞培养物中TNF浓度间的关系。这些结果显示无论检测培养基中是否存在LPS,A490和TNF浓度间呈现同样的线性关系。图22b图解显示在加有渐增量的肝素条件下，将TNF-与L929细胞一起保温的实验结果。这些结果显示了浓度为1ng/ml和0.1ng/ml的TNF的恒定和特征性A490吸收值，表明肝素没有影响TNF引起的L929细胞杀伤。图22c图解说明对照实验，结果显示当于5ng/ml LPS存在下以所指出的浓度在THP-1培养物中保温时，rBPI21△cys降低了TNF介导的L929细胞杀伤的量。图22d显示通过L929杀伤试验测定，发现肝素能通过抑制BPI介导的对LPS刺激的THP-1细胞的TNF产生的抑制作用，而与LPS竞争对rBPI21△cys的结合。
图22e显示的是A490对TNF的标准曲线(作为TNF介导的L929细胞杀伤的度量曲线)；图22g显示在约1000倍TNF浓度范围内的半对数作图中标准曲线的线性关系。图22f显示试验中THF-1细胞的依赖因素，其中使用约100,000个THP-1细胞和浓度至少为5ng/ml的LPS很容易产生可检测量的TNF。最后，图22h显示，该试验依赖于THP-1细胞才能受LPS刺激产生TNF；当在试验中用人组织细胞的淋巴瘤细胞(U937；ATCCCRL1593)代替THP-1细胞时，没有产生可检测量的TNF。
用这试验法分析本发明的多种BPI功能区肽的LPS结合和中和能力。这些结果示于表Ⅻ中，并且如通过TNF介导L929细胞杀伤所检测到的，表明各被试肽均具有抑制THP-1细胞受LPS刺激产生TNF的能力。表Ⅻ肽                      IC50(μg/mL)rBPI21△cys               0.2BPI.7                       30BPI.13                      20BPI.29                      2-3BPI.30                      6-7BPI.48                       1
C．使用细胞一氧化氮(NO)产生试验建立对BPI功能区肽的LPS中和筛选法
使用对LPS处理的小鼠细胞中NO产生的检测法(参见Lors-bach et al.,1993,J.Biol.Chem.268:1908-1913)发展另一种筛选BPI功能区肽的LPS中法试验法。在该方法中，用细菌LPS处理小鼠RAW 264.7细胞(ATCC TIB71)。将细胞加在96孔平板中保温，并在有或没有γ干扰素、γLBP、胎牛血清(FBS)或正常人血清(NHS)，或BPI21△cys存在下，用E.coli O113LPS或酵母多糖(zymosan)刺激2小时。保温后，用新鲜培养基洗细胞并在含有10％FCS的培养基中保温过夜。从积聚在培养基中的细胞内释放NO并自发转变为亚硝酸盐。通过如下所述的Griess反应原位检测该亚硝酸盐。亚硝酸盐与所加入之磺胺的伯胺反应并形成重氮盐。然后使该盐与所加入的萘基乙二胺反应生成红色偶氮染料。Griess反应在室温下进行约10分钟。根据在550nm波长处以分光光度法测吸光率得到的Gress反应产物的标准曲线估计所产生的NO的量。
该试验的结果示于图23a至23c。图23a显示NO产生对γ干扰素存在的依赖性。发现这种干扰素效应在浓度为1000/ml时达到饱和。图23b显示LPS刺激的NO产生对LBP(作为纯化重组蛋白质加入的，或作为细胞保温培养基的FBS或NHS添加物的成分加入的)存在的依赖性。图23c显示rBPI23介导的对LPS刺激的NO产生的抑制作用，其IC50为30-100ng/ml。这些结果证明，该检测方法是一种用于BPI和本文所述的BPI功能区肽之LPS中和活性的简单、经济和生理上相关的检测试验系统。
用BPI功能区肽完成的这些试验的结果示于图24a-24g中，其中将由未受刺激的细胞产生的本底NO被指定为“NO LPS”。图24a和24b分别显示rBPI、rBPI2△cys和rBPI25对酵母多糖和LPS刺激的NO产生的抑制作用。从中看出任何浓度的BPI蛋白质对酵母多糖刺激的NO产生均没有抑制作用(图24a)。相反，经与这些rBPI相关蛋白质一起保温则以浓度依赖方式抑制LPS刺激的NO产生(图24b)。图24c(酵母多糖)和图24d(LPS)显示RAW 264.7细胞与BPI.2、BPI.3、BPI.4、BPI.7和BPI.14一起保温对NO产生的影响；其中使用rBPI21△cys作为对照。如使用天然BPI所显示的，经与任何浓度的BPI功能区肽一起保温均未能抑制酵母多糖刺激的NO产生(但可能除外高浓度BPI.7引起的小量抑制作用；图24c)。另一方面，rBPI21△cys可有效地抑制LPS刺激的NO产生，并达到比BPI.3和BPI.7产生的抑制作用较低的程度(图24d)。
使用BPI.5、BPI.13、BPI.29和BPI.30，并以rBPI21△cys作为用于平行比较的对照重复该实验。发现酵母多糖刺激的RAW264.7细胞NO产生受到高浓度(～100μg/ml)BPI.30的抑制，而任何其他的BPI功能区肽和rBPI21△cys对酵母多糖刺激的NO产生均没显示任何刺激作用(图24e)。LPS刺激的NO产生受到rBPI△cys的有效抑制，并且受到本实验中试验的所有BPI功能区域肽的不同的和较低程度的抑制(图24f)。
根据这些实验结果计算BPI蛋白质和肽的IC50值(即酵母多糖或LPS刺激的RAW264.7细胞的NO产生减少到没有抑制剂时的一半所需的待测BNPI的浓度)并示于图24g中。发现除了BPI.30外，各种BPI功能区肽或rBPI21△cys、rBPI或rLBP在这些实验中对酵母多糖介导的NO产生均没有明显的抑制作用；证明BPI.30抑制由酵母多糖刺激的NO产生的IC50值在10至100μg/ml之间。发现BPI.3、BPI.5、BPI.13、BPI.29和BPI.30在该试验中具有可测水平的LPS中和作用，这些肽的相对IC50值示于图24g中。
D．利用细胞增殖试验建立对BPI功能区肽的LPS中和筛选方法
建立另一种估测BPI功能区肽的LPS中和筛选法。还可利用这种抑制LPS处理的小鼠细胞中细胞增殖的敏感检测法，在制备标准曲线后定量分析人血浆中的LPS水平。
在该检测法中，于检测前首先在50U/ml重组小鼠γ干扰素(Genzyme,Cambridge,MA)存在下，将维持在添加了10mMHEPES缓冲液(pH7.4),2mML-谷氨酰胺、青霉素(100U/ml)、链霉素(100μg/ml)、0.075％碳酸氢钠0.15M2-硫基乙醇和10％胎牛血清(Myelone,Inc.,Logan,UT)之RPMI1640培养基(GIBCO)中的小鼠RAW264.7细胞(ATCC TIB71)保温24小时。然后收集被诱导的细胞并在4℃下以500×g离心，重新悬浮于500mlRPMI1640培养基(没有添加物)后再次离心，并再次重新悬浮在RPMI1640培养基(没有添加物)中。计数细胞并将其浓度调到2×105细胞/ml，然后向96孔微量滴定板的各小孔中加入100μl等分样品。然后将细胞与E.coli 0113 LPS(Con-trol Standerd,Assoc.of Cape Cod,Woods Hole,MA)一起保温15小时，以在无血清RPMI1640培养基中1ng/ml的浓度(这一浓度是根据在50pg/ml至100ng/ml的不同浓度LPS进行存在下进行滴定实验的结果而确定的)加入等分样品(100μl/孔)。在加有或没有浓度为25ng/ml至50μg/ml的BPI功能区肽情况下进行保温。实验开始后5小时加入1μCi/孔[3H]-胸苷以定量检测细胞增殖情况。保温15小时后，用细胞收获器(Inotch Biosystems,INB-384,Sample Processing and Filter Counting System,Lansing,MI)将标记的细胞收集到玻璃纤维滤膜上。
该实验的结果示于图26a-26c中。图26a显示LPS介导的对RAW 264.7细胞增殖的抑制作用对加到反应混合物中之LBP的依赖性这种LBP可以是作为血清成分或重组LBP(浓度为1μg/ml)。图26b和26c图解显示见于上述实验中的BPI功能区肽作用的特征性曲线。BPI.5表现有5.3±0.6μg/ml的EC50值(即LPS的生长抑制效应消减50％时的肽浓度)。BPI.81不能逆转LPS对RAW264.7细胞的生长抑制效应，但显示IC50(即将RAW细胞生长从不加肽时抑制50％所需的肽浓度)为14±0.2μg/ml的额外生长抑制作用。BPI.98显示有0.16±0.08μg/ml的EC50值和16.5±1.9μg/ml的IC50值。最后，BPI.86显示有0.13±0.04μg/ml的EC50和37.5±12.5μg/ml的IC50值。表ⅩⅢ中显示了本实验中所有被试验的代表性肽的实验结果。附加的代表性肽，例如，BPI.99至BPI.169在本实验中显示出活性。其中一种肽BPI.157显示出与BPI.29相似的EC50，但IC50较低。
                   表ⅩⅢBPI                                 序列                EC50        IC50肽BPI.2                       IKISGKWKAQKRFLK              -           -BPI.5                    HVHISKSKVGWLIQLFHKKIE          5.3±0.6     -BPI.7                     KWKAQKRFLKKWKAQKRFLK         ＞50      37.5±12.5BPI.10                QKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK       ＞50         17.25BPI.13                       KSKVGWLIQLFHKK          1.9±0.4    37.5±12.5BPI.13p                      KSKVGWLIQLFHKK          2.0±0.3       ＞50BPI.29               KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIQLFHKK    0.1±0.02    13.6±0.4BPI.30                 KWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK      1.2±1.1     10.5±1.2BPI.46                   KWKAAAKRFLKKWKAQKRFLK       1.9±1.9     18.8±0.8BPI.47                   KWKAQKRFLKKWKAAAKRFLK       0.9±0.3      9.8±0.1BPI.48                   KWKAAAKRFLKKWKAAAKRFL       1.3±0.9      5.0±0.1BPI.63              IKISGKWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK   0.08±0.02     7.1±0.02BPI.69              KWKAAARFLKKWKAAARFLKKWKAAARFLK  0.11±0.07     2.4±0.3BPI.73                       IKISGKWKAQFRFLK          22±10           -BPI.76                 KSKVGWLIQLFHKKKWKAQKRFLK      2.7±0.3     18.8±0.8BPI.76                       IKISGKWKAQFDRFLK          ＞50            -BPI.77                       IKISGKWKAQWRFLK          10±32         ＞50BPI.80                 IKISGKWKAQAβ-(1-萘基)RFLK       35±36         ＞50BPI.81                       IKISGKWKAFKRFLK             -        14.0±0.2
                表ⅩⅢ(续)BPI                            序列                                      EC50            IC50肽BPI.82                 KSKVGWLIQLWHKK                                  0.8±0.1       18.8±0.8BPI.83            KSKVGLIQLAβ-(1-萘基)HKK                               1.2±0.1       37.5±12.5BPI.84            IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK                              57±28             -BPI.85                 KSKVLWLIQLFHKK                                 1.3±0.1         17±15BPI.86                 KSKVGWLILLFHKK                                 0.13±0.04      37.5±12.5BPI.87                 KSKVGWLIQLFLKK                                  1.3±0.4       11.4±1.3BPI.88                 IKISGKWKAFFRFLK                                    ＞50         6.2±7.5BPI.89            IKISGKAβ-(1-萘基)KAFKRFLK                                ＞50          11±0.3BPI.90            IKISGKAβ-(1-萘基)KAFFRFLK                                ＞50         6.3±0.7BPI.91                 KSKVGWLIFLFHKK                                  0.7±0.1            -BPI.92                 KSKVGWLIKLFHKK                                  1.9±0.1       37.5± 12.5BPI.93      IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIQLFHKK                     0.9±0.25       9.7±0.1BPI.94                 KSKVGWLIQLFFKK                                  1.3±0.02        23±2BPI.95                 KSKVFWLIQLFHKK                                  1.0±0.01      37.5±12.5BPI.96                 KSKVGWLIQLFHKF                                  1.6±0.2       18.8±0.8BPI.97                 KSKVKWLIQLFHKK                                  2.8±0.3       37.5±12.5BPI.98      IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIFLFHKK                     0.16±0.08      16.5±1.9MAP.1       (β-丙氨酰-Nα,Nε-取代的-[Nα,Nε(BPI.2)赖氨酰基]赖氨酸)      0.45±0.1       37.5±12.5rBPI21△cys                                                           0.08±0.05           ---增殖碱性达到50μg/ml
E．LPS中和试验：基于对全血中LPS诱导之TNF产生的抑制作用
按上述步骤检测全血中本发明BPI功能区肽的LPS中和作用。首先将从健康人体抽取的血液收集到无菌试管(ACD,Ruther-ford,N.J.)中。将等分的血液样品(170μl)与10μl含2.5ng/mlE.coli O113LPS，并加有浓度范围为0.5—50μg/ml的不同浓度之本发明BPI肽的无Ca++、Mg++PBS混合。然后将这些混合物于37℃保温4小时，保温后经加入55μl冰冷的无Ca++、Mg++PBS终止反应，然后以500×g离心7分钟。然后使用商品ELISA试剂盒(BiokineTM ELISA Test,T-cell Sciences,Cambrige,MA)检测上清液中的TNF水平。
图27和表ⅩⅣ中显示了使用得自两不同供血者的全血，经加入有代表性的肽所作实验的结果。图27显示对BPI功能区肽BPI.7、BPI.13和BPI.29的TNF产生抑制作用的比较实验结果，其中还给出使用rBPI21△cys所得到的结果以便比较。表ⅩⅣ中以IC50值定量给出这些结果，并与上文C部分中所述的使用RAW264.7细胞的NO产生检测的LPS中和作用相比较。表ⅩⅣ
                      IC50(μg/ml)BPI肽                TMF试验        NO试验rBPI21△cys           0.65          0.4BPI.29                 5.0           2.4BPI.13                 42             16BPI.7              无抑制作用     无抑制作用
F．使用色氨酸荧光猝灭进行LPS和肝素结合试验
在用波长约在280nm和290nm之间，最好是285nm波长激发后，天然氨基酸色氨酸可发射波长在300和300nm之间的可见光(即荧光)。已知由这些荧光产生的发射光的量受到局部环境，包括pH和缓冲液条件，以及蛋白质和其他分子间相互结合作用的影响。衍生物区段Ⅱ和Ⅲ的某些BPI功能区肽含有色氨酸残基，可利用色氨酸荧光检测本发明BPI功能区肽和LPS或肝素间的结合相互作用。
在有或没有LPS或肝素条件下，使用SPEX Fluorolog荧光计检测本发明BPI功能区肽的色氨酸荧光。使用0.25nm狭缝宽度检测300-400nm间的发射波长。数据是作为在大约5分钟时间内三次检测的平均值累积的。在实验过程中利用循环水溶使样品保持在25℃或37℃。使用一种因与LPS结合而影响色氨酸残基之内在固有荧光的蛋白质，即蟹内毒素结合蛋白质(CEBP)作为阳性对照(参见Wainwright et al.,1990,Cellular and Molecular Aspects ofEndotoxin Reactions,Nowotny et al.,des.,Elsevier Science Pub-lishing B.V.,The Netherlands,PP.315-325)。
这些实验的结果示于表ⅩⅤ中。对作为线图之斜率负倒数的猝灭数据进行Scatchard型Stern-Volmer作图，以确定Kd值。对BPI.10、BPI.46和BPI.47的数据进行比较，可以看出当Kd值增加时(表示LPS的活性增加)，百分荧光猝灭随之增加。这些肽之间的差异包括当与BPI.10比较时可见BPI.48中的碱性和极性氨基酸残基被非极性氨基酸残基取代。相反，当肝素结合的Kd值增加时，未检测到荧光猝灭的百分比增加。这一结果表明肝素结合与LPS结合的位点或性质之间的基本差异。
                  表ⅩⅤ
                        猝灭     Kd    猝灭BPI       #of     K4LPS    LPS     肝素    肝素肽        Trp     (nM)       ％    (μM)    (％)BPI.10     2      124        26     1.2      67BPI.47     2     115         41     2.2      47BPI.48     2      83         62     0.8      41BPI.69     3      58         72     0.4      42BPI.73     1      66         47     0.7      19CEBP*     5      19         56     0.8      54
*于25℃下完成CEBP(LALF)实验
G，肝素介导的凝血酶时间延长的中和试验
检测BPI功能区域肽对肝素介导的凝血酶时间(即凝血酶和血浆混合物产生凝血所需要的时间延长的影响。凝血酶时间可因内源或外源性凝血酶生成抑制剂，如治疗给药的肝素的存在而延长。中和肝素的抗凝血剂作用的制剂将降低试验测得的凝血酶时间。
在这些实验中，使用MLA Electra800凝血定时器检测凝血酶凝血时间。在反应瓶中将重新配制的血浆(200μl,Sigma ChemicalCo.,855-10)于37℃保温2分钟。保温后向反应瓶中加入凝血酶的凝血时间试剂(100μl,Baxter Diaghostics Inc.,B4233-50),然后测定凝血时间。向反应瓶中加入肝素钠(15μl，在PBS中40μg/ml,Sigma Chemical Co.,H3393)和典型的BPI功能区肽(10μl不同浓度(约0.05μg/ml至10μg/ml的稀释液)，然后加入血浆以试验这些肽对凝血酶凝血时间的影响。使用BPI肽测定TCT凝血时间(凝血酶时间)，结果示于图28和表ⅩⅥ中。图28和下列表ⅩⅥ中所示的这些结果证明，如通过抑制肝素介导的凝血酶时间延长所显示的，被试验的BPI功能区肽可中和肝素。定量该抑制作用的IC50值并示于表ⅩⅥ中。
               表ⅩⅥBPI肽              IC50μg/ml)±SEBPI.10           0.115±0.014BPI.47           0.347±0.041BPI.63           0.362±0.034BPI.69           0.200±0.025BPI.73           0.910±0.821BPI.82           0.200±0.073BPI.84           0.225±0.029BPI.87           0.262±0.009BPI.88           0.691±0.180BPI.90           0.753±0.210BPI.98           0.242±0.038BPI.99           0.273±0.011BPI.100          0.353±0.050BPI.101          0.285±0.088BPI.102          0.135±0.024
实施例21
肝素中和试验：基于对进入体内Matrigel R基底膜基质中的
肝素/FGF诱导的血管生成的抑制作用
检测本发明的BPI功能区肽在小鼠体内抑制肝素诱导的血管生成的能力。将液体Matriger R(Collaborative Biomedical Prod-ucts,Inc.,Bedford,MA)保存在4℃下并按Massaniti等人(1992,Lab.Invest.67:519-528)所述方法向液态凝胶中加入血管生成因子。以1.250-10.000U/ml的不同浓度将肝素(Sigma,St.Louis,MO)溶解于无菌PBS中。用无菌PBS将重组成纤维细胞生长因子(bhFGF；BACHEM Bioscience Inc.,Philadelphia,PA)稀释到200ng/ml。在给每只小鼠注射的0.5mlMatriger R中加2.5ml溶解的肝素溶液和2.5μl重组rhFGF。向此MatrigelR混合物中加入在每只实验动物10μl/0.5ml MatrigelR等分样品中的浓度范围为0.5至50μg/ml(终浓度)的BPI功能区肽。用10μl无菌PBS取代BPI功能区肽，加入MatrigelR等分样品中用于注射对照组动物。
在6-8周令雄性C57BL/6J小鼠(Jackson Laboratory,BarHarbor,ME)背部中线皮下注射按上述方法制备的0.5mlMatrigelR的等分样品。注射后七天，切掉MatrigelR凝胶并放500μlDrabkin氏试剂(Sigma)中。用机械方法匀浆化处理凝胶后，测定保存于Drabkin氏试剂中之凝胶的总蛋白质和血红蛋白含量。使用包括于商品试剂盒(DC Protein Assay,Bio-Rad,Richmond,CA)检测试剂以微量平板检测法测定总蛋白质水平。使用将与本方法一起使用的Sigma(St.Louis,MO)提供的Sigma检测程序#525和试剂检测血红蛋白浓度。用与总蛋白质浓度的对比量表示血红蛋白水平。
在从动物身上切下将用于组织学染色的凝胶，不放在Drabkin氏试验中而直接用福尔马林固定。将福尔马林固定的凝胶包埋在Tissue-TekO.C.T.化合物(Miles,Inc.,Elkhart,IN)中进行冷冻切片。用苏木精和曙红着染冷冻于切的载玻片(参见Mu-mason,1979,Animal Tissue Techniques,4th Ed.,W.H.fee-man&Co.,San Fransisco,CA,Ch.9,PP.111-131)。
用显微镜检查冷冻染色的切片，对比未加BPI肽条件下制备的Matrigel R凝胶，检测本发明的BPI功能区肽抑制血管形成的效果。经校准见于含BPI肽切片中的血红蛋白量，定量分析BPI肽抑制血管形成的程度。
实施例22
分析慢性炎症性疾病：胶原诱导
的或反应性关节炎模型中的BPI功能区肽
给胶原诱导的关节炎动物模型施用BPI功能区域肽以检测它们的效应。具体地说，按照Stuart等人(1982,J.Clin.Invest.69:673-683)的方法在小鼠尾的基部用牛Ⅱ型胶原皮内免疫动物，以诱发关节炎。一般说来，在用胶原免疫后21天小鼠开始发展关节炎症状。每隔21-25天通过尾静脉注射BPI功能区肽，对照rBPI23或BPI，或缓冲液，在120天期间里以双盲方式估计被处理小鼠的关节炎发病数。
具体地说，在0天给每只体重约20-50g的各组雄性小鼠(Mouse/DBA/1J)于尾的根部，通过皮内注射(0.1mg/小鼠)给予牛Ⅱ型胶原(Southern Biotechnology Assocites,Inc.,Birming-ham,AL)。将BPI功能区肽、和rBPI23及rBPI溶解在由0.5MNaCl、20mM乙酸钠组成的缓冲液(pH6.0)中并用PBS稀释后以不同浓度给药。单独给予PBS缓冲液作为对照。
还使用胶原诱发的关节炎动物模型，以硫酸鱼精蛋白作为对照估测BPI功能区肽的效能。具体地说，将BPI肽溶解在上述PBS中并以不同浓度给药。以下述剂量给予其他试验材料：硫酸鱼精蛋白(Sigma Chemical Co.,St.Couis,MO)(0.13mg/小鼠)、奇异果甜蛋白(thaurnatin)(0.12mg/小鼠)，和PBS缓冲液(0.1ml)。各组动物均于注射胶原后每28至32天给尾静脉注射接受试验材料或对照材料。
还按照Yong等人(1988,Microbiol Pathogenesis4:305-310)的方法，使用BPI功能区肽治疗小肠结肠类耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)反应性关节炎模型的反应性关节炎。具体地说，给以前已经静脉内注射过足以诱发小鼠非败血性关节炎之剂量(4×108个细胞)的小肠结肠炎耶尔森氏菌cWA0:8T2(按Yong等人所述的缺少毒力质粒的菌株)的DBA/2J小鼠注射BPI肽。各组小鼠均通过尾静脉注射接受试验或对照材料。
Berrelia burgdorferi是Lyme病反应性病和其相关关节炎的病原体，并且在它的细胞壁上具有LPS样复合物，其不同于大肠杆菌细胞壁上的相应复合物，但结构与之相关。以鲎阿米巴样细胞溶胞产物(LAL)抑制试验检测给予BPI功能区肽后对B.burgdorferiLPS之抑制作用的影响。具体地说，进行实施例4中所述的LAL试验，以检测BPI肽对以2.5μg/ml的浓度给药的B.aurgdorferiLPS和以2ng/ml的浓度给药的E.coli0113LPS的影响。实施例23在小鼠恶性黑素瘤细胞转移模型中
分析BPI功能区域肽
注射BPI功能区域肽，鱼精蛋白或缓冲液对照材料，以试验它们在小鼠恶性黑素瘤转移模型中的效力。具体地说，在第0天通过尾静脉注射给各组C57BL/6J小鼠接种105个B16.F10恶性黑素瘤细胞。在实验的第1、3、6、8、10、13、15、17和19天通过试验小鼠的尾静脉注射各种不同浓度的BPI功能区肽。同时给另外几组对照小鼠注射作为阳性对照的硫酸鱼精蛋白(0.13mg/小鼠)，或作为阴性对照的PBS缓冲液(0.1ml/小鼠)。在第20天通过断颈杀死动物，并检查其肺组织。灌注各肺叶并通过气管向肺内注射3ml水使肺膨胀。然后借助解剖显微锐计数表浅的肿瘤块并分析见于各组之肿瘤数目的统计学类异显著性。
实施例24
以小鼠脑毛细血管内皮细胞增殖试验
分析BPI功能区肽以所有内皮细胞增殖试验法试验BPI功能区域肽的效力。对进行这些实验，Bauer所述的(1989,Microvascula Research37:148-161)使小鼠脑毛细血管内皮细胞(EC)，在含有Earle氏盐、L-谷氨酰胺和2.2g/L碳酸氢钠(GIBCO,Grand ISland,NY)，加10％热灭活胎牛血清(FCS；Ivine Scientific,Irvine,CA)和1％青霉素/链霉素(GIBCO)的199培养基中传代。经用胰蛋白酶-EDTA(GIBCO)胰酶解3分钟，收获贴壁细胞。向培养瓶中加入10ml传代培养基终止胰酶消化。在标准平底96孔微量滴定板中对新收获的EC进行增殖试验。每个试验孔终体积为200μl。向各孔中加入总共4×104个EC细胞和不同浓度的BPI肽，或缓冲液(对照)。在5％CO2恒温箱中培养48小时后，向各孔内加入1μCi[3H]胸苷(在10μl199培养基中)。24小时掺入后，经胰酶消化将EC细胞收获到玻璃微纤维滤膜上，并用气体正比固相β计数器定量掺入的[3H]胸苷。从贴壁细胞培养瓶中收获10次传代的细胞并将胰酶消化的细胞重新悬浮在12.5ml培养基中，以对EC细胞进行BPI肽的直接结合研究。然后在标准24孔组织培养板的各孔中加入0.5ml细胞悬浮液，并保温过夜。用加在含钙和镁的磷酸盐缓冲盐水中的10％牛血清白蛋白(GIBCO)洗平板。根据[3H]-胸苷摄入量检测对EC细胞增殖的浓度依赖性抑制作用。
实施例25
在动物模型中分析BPI功能区肽
A．在小鼠内毒素血症模型中的分析
在小鼠内毒素血症模型中试验BPI功能区肽的效力。以LD90剂量(例如40mg/kg)给每组至少15只小鼠静脉内注射内毒素(如E.coli0111:B4,Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)。然后第二次静脉注射浓度约为0.1mg/kg到100mg/kg，推荐剂量约1至50mg/kg的试验肽。阴性对照小鼠注射未加肽的缓冲液。观察动物7天并记录死亡率。将注射肽的小鼠与对照组小鼠相比较，根据内毒素血症相关死亡率的降低检测本发明肽的效力。
B．在小鼠腹膜炎模型中的分析
在小鼠急性腹膜炎模型中试验BPI功能区肽的效力。用107个E．coli07:K1菌株的细菌(0.5mL)攻击各组至少15只小鼠，然后用10mL浓度范围约为0.1mg/kg至100mg/kg的BPI功能区肽的溶液治疗小鼠。阴性对照小鼠注射未加肽的缓冲液。观察动物7天并记录死亡率。与对照组相比，注射有效BPI功能区肽的试验组小鼠显示死亡率降低。
C．在小鼠白色念珠菌模型中的分析
全身性念珠菌病的小鼠模型已被用于测试治疗白色念珠菌感染的各种治疗剂的体内有效性。TNF-α在此小鼠模型中具有保护作用(Louie,A.,et al.,1994,Infection and Immunity,62(7):2761-2772)，在此之前，重组可溶性IL-4受体可治愈这种感染(Puccetti,P.et al.,1993,J.Infec.Diseases,169:1325-1331)。已确定某些小鼠对白色念珠菌和所引起的念珠菌病具有遗传易感性，因此适用作测试对抗这种感染的治疗有效性的模型系统(Romani,L.,et al.,1993,J.Immunol.150:925-931)。
基本上按照如Louie et al.,supra；Puccetti et al.,supra所述的方法在这种小鼠模型中测试本发明的肽对全身性白色念珠菌感染的药效。可基本上如Hector et al(1982,Infection and Immunity,38(3):1020-1028)所述建立并确定适宜的小鼠。
用大约103～108，优选106～108活白色念珠菌(菌株CA-6,B311,88-689-6，用于实施例18中的念珠菌菌株，或其它适宜的离体菌株)的不同剂量，以0.5ml攻击至少15只小鼠的组，然后用大约0.1-1.0mlBPI功能区肽溶液以大约0.1mg/kg至大约100mg/kg的不同浓度进行处理。在阴性对照小鼠中用不加肽的缓冲液进行注射。通过定量培养小鼠的器官(Louie et al.,supra),或通过确定存活时间可进行测定。本发明的有效肽在改善对白色念珠菌所引起的疾病的效果方面是有活性的。
实施例26
BPI功能区肽在人体内的内毒素
中和模型中的治疗应用
按照1994年1月24日提交的共同所有、例如共同待批的美国专利申请序号08/188,221中所述方法设计和进行受控制的双盲交叉研究，以研究BPI功能区肽对静脉内输注细菌内毒素而患内毒素血症的人体内的效力。
实施例27
BPI肽对抗生素耐药菌的杀菌活性
这些研究是基本上按照用于实施例2的方法进行的。
A．鼠伤寒沙门氏菌的多粘菌素B耐药性菌株
为了研究多粘菌素B耐药性机理与对本发明的肽杀菌活性的抗性之间的相互作用，通过将108野生型鼠伤寒沙门氏菌(SL3770,Genetic Stock Center,Galgary,Canada)铺覆到多粘菌素梯度平板上分离出鼠伤寒沙门氏菌的多粘菌素B耐药性菌株(例如见Roland et al.,1993,J.Bacteriology,175:4154-4164)。将所分离的多粘菌素B耐药性鼠伤寒沙门氏菌(命名为LR-1)和野生型菌株的过夜培养物以1∶50稀释到新鲜的胰蛋白酶大豆肉汤中并于37℃温育3小时以达到对数期。向鼠伤寒沙门氏菌LR-1培养物中补加2.5μg/ml硫酸多粘菌素B。将细菌重新悬浮于新鲜缓冲液中并由570nm处的吸光度确定浓度。将细菌加到熔化的琼脂糖中使终浓度达1×106/ml。将rBIP21从2mg/ml开始在D-PBS中系列稀释两倍。将多粘菌素B从20mg/ml开始以同样方式进行稀释。将试验肽从大约1mg/ml开始在D-PBS中进行2倍系列稀释。如实施例2所述，每孔加大约5μl。
图29a和图29b显示了rBPI21(实心圆)；多粘菌素B(空心圆)；BPI.30(实心三角形)；BPI.48(空心三角形)；BPI.69(实心正方形)；BPI.105(空心正方形)分别对鼠伤寒沙门氏菌；和对命名为LR-1的鼠伤寒沙门氏菌的多粘菌素B耐药性菌株的杀菌活性。
B．大肠杆菌的抗生素耐药性菌株
为了测试BPI肽对多重抗生素耐药性大肠杆菌的杀菌活性，试验了多重耐药性菌株大肠杆菌19536(amp R 16μg/ml；头孢他啶R＞16μg/ml；头孢曲松R＞16μg/ml)。该菌株是得自BaxterMicroscanR库(Sacramento,CA)的临床分离菌。如实施例2和以上A部分中所述试验了大肠杆菌19536的过夜培养物。试验BPI肽从大约1mg/ml开始在D-PBS中进行2倍系列稀释。BPI.48,BPI.63,BPI.69和BPI.88是具有抗多重抗生素耐药性大肠杆菌活性的代表性化合物。
图29c和29d显示了rBPI21(实心正方形)，头孢曲松(空心正方形)，BPI.48(实心圆)，BPI.63(空心圆)，BPI.69(实心三角形)和BPI.88(空心三角形)分别对大肠杆菌(19536)的抗生素耐药性菌株和对大肠杆菌O111:B4的抗菌活性。
C．BPI肽对肺炎菌：肺炎克雷伯氏菌抗生素耐药性菌株的杀菌活性
为了测试BPI肽对肝炎克雷伯氏菌抗生素耐药性菌株的杀菌活性，如实施例2和以上所述试验了多重耐药性临床分离菌株19645(肺炎克雷伯氏菌19645的MIC(μg/ml):am＞16；ti＞16；azt＞16；pi＞64；ak＞16；crm＞16；caz＞16；cax＞16；cft＞32；a/s＞16:grn＞6；to＞6；cfz＞16)。该菌株得自Baxter MicroscanR库(Sacramento,CA)。将肺炎克雷伯氏菌19645和非耐药性菌株(ATCC 29011)的过夜培养物以1∶50稀释到新鲜胰蛋白酶大豆肉汤中并于37℃温育3小时以达到对数期。如实施例2和以上A部分中所述试验了过夜培养物。BPI.7,BPI.48,BPI.63,BPI.69,BPI.103,BPI.105和BPI.119是对抗生素耐药性克雷伯氏菌有效的代表性化合物。
图29e和29f显示了代表性肽对肺炎克雷伯氏菌抗生素耐药性菌株(19645)的杀菌活性。在图29e中，显示了BPI.7(空心圆)，BPI.48(实心圆)，BPI.63(空心三角形)，BPI.69(实心三角形)，rBPI21(空心正方形)，头孢他啶(实心正方形)和头孢曲松(小三角形)的结果。在图29f中，显示了BPI.88(空心圆)，BPI.103(实心圆)，BPI.105(空心三角形)，BPI.119(实心三角形)，rBPI21(空心正方形)，头孢他啶(实心正方形)和头孢曲松(小圆圈)的结果。
图29g和29h显示了代表性肽对肺炎克雷伯氏菌(ATCC29011)的杀菌活性，在图29g中，显示了BPI.7(空心圆)，BPI.48(实心圆)，BPI.63(空心正方形)，BPI.69(实心正方形)，rBPI21(空心三角形)，头孢他啶(实心三角形)和头孢曲松(小圆圈)的结果。在图29h中，显示了BPI.88(空心圆)，BPI.103(实心圆)，BPI.105(空心正方形)，BPI.119(实心正方形)，rBPI 21(空心三角形)，头孢他啶(实心三角形)和头孢曲松(小圆圈)的结果。
应了解的是，前述的公开内容强调本发明的某些特定实施方案，并且对上述内容所有改动和等同替代均在待批权利要求所列出的本发明的精神和范围之内。
                  序列表(1)一般信息
(ⅰ)申请人：
  (A)名称：XOMA公司
  (B)街道：2910 Seventh Street
  (C)城市：Berkley
  (D)州：CA
  (E)国家：USA
  (F)邮编：(ZIP):94710
  (G)电话：510-644-1170
  (H)电传：510-649-7571
  (A)名称：Roger G.Little
  (B)街道：620 Rose Drive
  (C)城市：Benicia
  (D)州：CA
  (E)国家：USA
  (F)邮编：(ZIP):94510
(ⅱ)发明题目：来自杀菌性通透性增强蛋白质功能区的
生物活性肽及其应用
(ⅲ)序列数：226
(ⅳ)计算机可读形式：
  (A)媒体类型：FLOPPY盘
  (B)计算机：兼容制IBM PC
  (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
  (D)软件：PatentIn Release#1.0,Version#1.25
(ⅴ)目前申请资料
申请号：PCT/US94/10427
(ⅵ)在先申请资料：
  (A)申请号：08/209,762
  (B)申请日：1994年3月11日
(ⅵ)在先申请资料：
  (A)申请号：08/183,222
  (B)申请日：1994年1月14日
(ⅷ)律师/代理人资料
  (A)姓名：McDonnell,John J.
  (B)登记号：26,949
  (C)参考/审查号：93,1133
(ⅸ)电讯资料
  (A)电话：312-715-1000
  (B)电传：312-715-1234(2)SEQ ID NO:1资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：29氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“I区”
(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:1：Ala ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile1               5                   10                  15Lys Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His
        20                  25(2)SEQ ID NO:2资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：30氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.14”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:2Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Lau Lys Arg Ile Lys Ile Pro Asp1               5                   10                  15Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly His
        20                  25                  30(2)SEQ ID NO:3资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：22氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.4”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:3Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro Aap Tyr Ser Asp Ser1               5                   10                  15Phe Lys Ile Lys His Leu
        20(2)SEQ ID NO:4资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.1”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:4Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:5资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.54”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:5Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:6资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：35氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“区段Ⅱ”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:6Ser Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile1               5                   10                  15Ser Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg
        20                  25                  30Phe Leu Lys
    35(2)SEQ ID NO:7资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.2”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:7Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:8资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：10氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.8”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:8Us Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Lau Lys1              5                   10(2)SEQ ID NO:9资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：16氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.58”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:9Cys Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu1               5                   10                  15Lys,(2)SEQ ID NO:10.资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：17氨基酸
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(ⅸ)特征
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  (D)其它特征：“BPI.65氧化型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:10Cys Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu1               5                   10                  15Lys Gys(2)SEQ ID NO:11资料
(ⅰ)序列描述
  (A)长度：27氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.3”(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:11Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser1               5                   10                  15Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys
        20                  25(2)SEQ ID NO:12资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：28氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“区段Ⅲ”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:12Val His Val His Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu1               5                   10                  15Phe His Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys
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(ⅰ)序列特征
  (A)长度：13氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.11”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:13Lys Ser Lys Val Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:14资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：29氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.12”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:14Ser Val His Val His Ile Ser Iys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln1               5                   10                  15Leu Phe His Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys
        20                 25(2)SEQ ID NO:15资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：14氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.13”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:15Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:16资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
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(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
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(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
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(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
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(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
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(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.18”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:19Ile Lys Ile Ala Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:20资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.19”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:20Ile Lys Ile Ser Ala Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:21资料
(ⅰ)序列描述
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.20”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:21Ile Lys Ile Ser Gly Ala Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:22资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.21”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:22Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:23资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.22”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:23Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Ala Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:24资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.23”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:24Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:25资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅹⅰ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.24”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:25Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:26资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅹⅰ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.25”(ⅸ)序列描述：SEQ ID NO:26Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Ala Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:27资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅹⅰ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.26”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:27Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Ala Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:28资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅹⅰ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.27”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:28Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Ala Lys1               5                    10                 15(2)SEQ ID NO:29资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅹⅰ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.28”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:29Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Ala1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:30资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅹⅰ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.59”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:30Ile Lys Ile Ser Gly Ala Trp Ala AlA Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:31资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.45”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:31Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:32资料
(ⅰ)序列特征
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其它资料：“BPI.60”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:32Ile Ala Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Ala1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:33资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.31”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:33Ala Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1                5                  10(2)SEQ ID NO:34资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (B)其他资料：“BPI.32”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:34Lys Ala Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:35资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.33”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:35Lys Ser Ala Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:36资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.34”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:36Lys Ser Lys Ala Gly Trp Lau Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:37资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.35”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:37Lys Ser Lys Val Ala Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:38资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.36”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:38Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:39资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.37”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:39Lys Ser Lys Val Gly TrP Als Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:40资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.38”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:40Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ala Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:41资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.39”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:41Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Ala Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:42资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.40”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:42Lys Ser Lys Va1 Gly Trp Leu Ils Gln Ala Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:43资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.41”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:43Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Ala His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:44资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.42”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:44Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe Ala Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:45资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.43”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:45Iys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Ala Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:46资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.44”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:46Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:47资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.56”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:47ILe Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Lys Gln Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:48资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.61”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:48Ile Lys Ile Ser Gly Lys Phe Lys Ala Gln LyS Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:49资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.66”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰的位点
  (B)位置：5..7
  (D)其他资料：/标记-D-Trp/
注-“第7位氨基酸是D-色氨酸”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:49Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:50资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.67”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰的位点
  (B)位置：6..8
  (D)其他资料：/标记-取代
  的Ala/注-“第7位丙氨酸
  是β-萘基取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:50Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:51资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.9”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:51Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:52资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：24氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.30”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:52Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly Trp1               5                   10                  15Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
         20(2)SEQ ID NO:53资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：29氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.63”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:53Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys1               5                   10                  15Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
        20                  25(2)SEQ ID NO:54资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.7”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:54Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Lys1               5                   10                  15Arg Phe Leu Lys
        20(2)SEQ ID NO:55资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：25氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.10.1”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:55Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys1               5                   10                  15Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys
        20                  25(2)SEQ ID NO:56资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：28氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.29”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:56Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Lys Ser1               5                   10                  15Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
        20                  25(2)SEQ ID NO:57资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.46”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:57Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Lys1               5                   10                  15Arg Phe Leu Lys
        20(2)SEQ ID NO:58资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.47”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:58Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala Ala1               5                   10                  15Arg Phe Leu Lys
        20(2)SEQ ID NO:59资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.48”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:59Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala Ala1               5                   10                  15Arg Phe Leu Lys
        20(2)SEQ ID NO:60资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：30氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.69”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:60Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala Ala1               5                   10                  15Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys
        20                  25                  30(2)SEQ ID NO:61资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：21氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.55”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:61Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg1               5                   10                  15Asn Lys Met Asn Ser
        20(2)SEQ ID NO:62资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.73”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:62Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Phe Arg Phs Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID N0:63资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.70”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：8..10
  (D)其他资料：/标记-取代
  的Ala/注-“第7位的丙氨酸
  是β-3-吡啶-取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:63Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:64资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.71”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：15..15
  (D)其他资料：/标记-取代
  的Ala/注-“13位的丙氨酸
  是β-3-吡啶-取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:66Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Ala Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:65资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：26氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.10.2”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:65Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys
        20                  25(2)SEQ ID NO:66资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：17氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.72”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：1..3
  (D)其他资料：/标记-D-丙氨酸
  注-“位点1和位点2的
  丙氨酸残基是D-丙氨酸”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:64Ala Ala Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu1               5                   10                  15Lys(2)SEQ ID NO:67资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：22氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.5”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:67Val His Val His Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu1               5                   10                  15Phe His Lys Lys Ile Glu
        20(2)SEQ ID NO:68资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：17氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.65还原型”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：二硫键
  (B)位置：1..17(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:68Cys Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15Cys(2)SEQ ID NO:69资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：487氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“rBPI”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:69Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val-31 -30                 -25                 -20Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile Gly Thr Ale Val Thr Ala Ala Val-15                 -10                  -5                   1Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala
          5                  10                  15Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys
     20                  25                  30Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly
 35                  40                  45His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser50                   55                  60                  65Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser
             70                  75                   80Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe
         85                  90                  95Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp Lau Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile
   100                  105                 110Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser Asn Pro Thr Ser Gly Lys pro Thr
115                 120                 125Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser His Ile Asn Ser Val His Val His130                 135                 140                 145Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Lau Phe His Lys Lys
           150                  l55                 160Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys
        165                 170                 175Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu
    180                 185                 190Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu
195                 200                 205Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys210                 215                 220                 225Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His His Asn Pro Pro Pro Pye Ala Pro
            230                 235                 240Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala His Asp Arg Met Vel Tyr Leu Gly
       245                 250                  255Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr Ala Gly Lau Val Tyr Gln Glu Ala
    260                 265                 270Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser
275                280                  285Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val290                 295                 300                 305Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser
            310                 315                 320Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro
        325                 330                 335Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala
    340                 345                 350Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser
355                 360                 365Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu370                 375                 380                 385Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu
            390                 395                 400Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val
        405                 410                 415Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val
    420                 425                 430Gln Leu Tyr Asn Val Val Lau Gln Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe
435                 440                 445Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys450                455(2)SEQ ID NO:70资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：24氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.74”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:70Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Lys1               5                   10                  15Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys
            20(2)SEQ ID NO:71资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.76”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：10..12
  (D)其他资料：/标记-D-Phe/
  注-“11位的氨基酸是
  D-苯丙氨酸”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:71Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:72资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.77”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:72Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Trp Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:73资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.79”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:73Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Lys Lys Arg Phe Leu Lys1               5                       10              15(2)SEQ ID NO:74资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.80”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰-位点
  (B)位置：10..12
  (D)其他资料：/标记-取
  代型-Ala/注-“11位
  丙氨酸是β-1-苯基-
  取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:74Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:75资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.81”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:75Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Phe Lys Arg Phe Leu Lys1                5                  10                  15(2)SEQ ID NO:76资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.82”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:76Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:77资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.83”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位点：10..12
  (D)其他资料：/标记-取代的Ala/
  注-“6位丙氨酸是β-1-萘
  基取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:77Lys Ser Lys Val Gly Ala Lys Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:78资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.84”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：6..8
  (D)其他资料：/标记-取代型-
  Ala/注-“7位丙氨酸是
  β-1-萘基-取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:78Ile Lys Ile Ser Gly LysAlA Lys Ala Gln PheArg Phe Leu Lys1               5                  10                 15(2)SEQ ID NO:79资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.85”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:79Lys Ser Lys Val Leu Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:80资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.86”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:80Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:81资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.87”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:81Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe Leu Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:82资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.88”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:82Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Phe Phe Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:83资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：29氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.98”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：6..8
  (D)其他资料：/标记-取代
  型-Ala/注-“7位
  丙氨酸是β-1-萘基取
  代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:83Ile Lys Ile Ser Gly Als Ala Als Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:84资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.89”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：6..8
  (D)其他资料：/标记-取代
  型-Ala/注-“7位丙氨酸
  是β-1-萘基-取代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:84Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Phe Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:85资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.90”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：6..8
  (D)其他资料：/标记-取代
  型-Ala/注-“7位
  丙氨酸是β-1-萘基取
  代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:85Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Phe Phe Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:86资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.91”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:86Lys Ser Lys Val Gly Trp Lau Ile Phe Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:87资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.92”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:87Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Lys Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:88资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：29氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.93”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰位点
  (B)位置：6..8
  (D)其他资料：/标记-取代
  型-Ala/注-“7位丙
  氨酸是β-1-萘基-取
  代型”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:88Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:89资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.94”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:89Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gin Leu Phe Phe Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:90资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.95”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:90Lys Ser Lys Val Phe Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:91资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.96”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:91Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Phe1               5                   10(2)SEQ ID NO:92资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.97”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:92Lys Ser Lys Val Lys Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:93资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：30氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.99”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:93Lys Trp Lys Ala Gln Trp Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln1               5                   10                  15Trp Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Trp Arg Phe Leu Lys
            20                  25                  30(2)SEQ ID NO:94资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.100”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:94Lys Ser Lys Val Lys Trp Leu Ile Lys Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:95资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：28氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.101”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:95Lys Ser Lys Val Lys Trp Leu Ile Lys Leu Phe Phe Lys Phe Lys Ser1               5                   10                  15Lys Val Lys Trp Leu Ile Lys Leu Phe Phe Lys Phe
        20                  25(2)SEQ ID NO:96资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：24氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“BPI.102”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:96Lys Trp Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly Trp1               5                   10                  15Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys
        20(2)SEQ ID NO:97资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：1443碱基对
  (B)类型：核酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：DNA
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：CDS
  (B)位置：1..1443
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：m ot肽
  (B)位置：76-1443
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“rLBP”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:97ATG GGG GCC TTG GCC AGA GCC CTG CCG TCC ATA CTG CTG GCA TTG CTG       48Mat Gly Ala Leu Ala Arg Ala Leu Pro Ser Ile Leu Leu Ala Leu Leu-25                 -20                 -15                 -10CTT ACG TCC ACC CCA GAG GCT CTG GGT GCC AAC CCC GGC TTG GTC GCC       96Leu Thr Ser Thr Pro Glu Ala Lau Gly Ala Asn Pro Gly Leu Val Ala
             -5                   1               5AGG ATC ACC GAC AAC GGA CTG CAG TAT GCG GCC CAG GAG GGG CTA TTG       144Arg Ile Thr Asp Lys Gly Leu Gln Tyr Ala Ala Gln Glu Gly Leu Leu
     10                  15                  20GCT CTG CAG ACT GAG CTG CTC AGG ATC ACG CTG CCT GAC TTC ACC GGG       192Ala Leu Gln Ser Glu Leu Leu Arg Ile Thr Leu Pro Asp Phe Thr Gly
 25                  30                  35GAC TTG AGG ATC CCC CAC GTC GGC CGT GGG CGC TAT GAG TTC CAC AGC       240Asp Leu Arg Ile Pro His Val Gly Arg Gly Arg Tyr Glu Phe His Ser40                  45                  50                  55CTG AAC ATC CAC AGC TGT GAG CTG CTT CAC TCT GGG CTG AGG CT GTC        288Leu Asn Ile His Ser Cys Glu Leu Leu His Ser Ala Leu Arg Pro Val
             60                  65                  70CCT GGC CAG GGC CTG AGT CTC AGC ATC TCC GAC TCC TCC ATC CGG GTC       336Pro Gly Gln Gly Leu Ser Leu Ser Ile Ser Asp Ser Ser Ile Arg Val
         75                  80                  85CAG GGC AGG TGG AAG GTG CGC AAG TCA TTC TTC AAA CTA CAG GGC TCC        384Gln Gly Arg Trp Lys Val Arg Lys Ser Phe Phe Lys Leu Gln Gly Ser
     90                  95                 100TTT GAT GTC AGT GTC AAG GGC ATC AGC ATT TCG GTC AAC CTC CTG TTG        432Phe Asp Val Ser Val Lys Gly Ile Ser Ile Ser Val Asn Leu Leu Leu105                  110                 115GGC AGC GAG TCC TCC GGG AGG CCC ACA GTT ACT GCC TCC AGC TGC AGC        480Gly Ser Glu Ser Ser Gly Arg Pro Thr Val Thr Ala Ser Ser Cys Ser120                 125                 130                 135AGT GAC ATC GCT GAC GTG GAG GTG GAC ATG TCG GGA GAC TTG GGG TGG        528Ser Asp Ile Ala Asp Val Glu Val Asp Met Ser Gly Asp Leu Gly Trp
            140                 145                 150CTG TTG AAC CTC TTC CAC AAC CAG ATT GAG TCC AAG TTC CAG AAA GTA        576Leu Leu Asn Leu Phe His Asn Gln Ile Glu Ser Lys Phe Gln Lys Val
        155                 160                 165CTG GAG AGC AGG ATT TGC GAA ATG ATC CAG AAA TCG GTG TCC TCC GAT        624Leu Glu Ser Arg Ile Cys Glu Met Ile Gln Lys Ser Val Ser Ser Asp
    170                 175                 180CTA CAG CCT TAT CTC CAA ACT CTG CAA GTT ACA ACA GAG ATT GAC AGT        672Leu Gln Pro Tyr Leu Gln Thr Leu Pro Val Thr Thr Glu Ile Asp Ser
185                 190                 195TTC GCC GAC ATT GAT TAT AGC TTA GTG GAA GCC CCT CGG GCA ACA GCC        720Phe Ala Asp Ile Asp Tyr Ser Leu Val Glu Ala Pro Arg Ala Thr Ala200                 205                 210                 215CAG ATG CTG GAG GTG ATG TTT AAG GGT GAA ATC TTT CAT CGT AAC CAC        768Gln Met Leu Glu Val Met Phe Lys Gly Glu Ile Phe His Arg Asn His
            220                 225                 230CGT TCT CCA GTT ACC CTC CTT GCT GCA GTC ATG AGC CTT CCT GAG GAA        816Arg Set Pro Val Thr Leu Leu Ala Ala Val Met Ser Leu Pro Glu Glu
        235                 240                 245CAC AAC AAA ATG GTC TAC TTT GCC ATG TCG GAT TAT GTC TTC AAC ACG        864Mis Asn Lys Met Val Tyr Phe Ala Ile Ser Asp Tyr Val Phe Asn Thr
    250                 255                 260GCC AGC CTG GTT TAT CAT GAG GAA GGA TAT CTG AAC TTC TCC ATC ACA        912Ala Ser Leu Val Tyr His Glu Glu Gly Tyr Leu Asn Phe Ser Ile Thr
265                 270                 275GAT GAG ATG ATA CCG CCT GAC ZCT AAT ATC CGA CTG ACC ACC AAG TCC        960Asp Glu Met Ile Pro Pro Asp Ser Asn Ile Arg Thr Thr Thr Lys Ser280                 285                 290                 295TTC CGA CCC TCC GTC CCA CGG TTA GCC AGG CTC TAC CCC AAC ATG AAC       1008Phe Arg Pro Phe Val Pro Arg Leu Ala Arg Leu Tyr Pro Asn Met Asn
            300                 305                 310CTG GAA CTC CAG GGA TCA GTG CCC TCT GCT CCG CTC CTG AAC TTC AGC       1056Leu Glu Leu Gln Gly Ser Val Pro Ser Ala Pro Leu Leu Asn Phe Ser
        315                 320                 325CCT GGG AAT CTG TCT GTG GAC CCC TAT ATG GAG ATA GAT GCC TTT GTG       1104Pro Gly Asn Leu Ser Val Asp Pro Tyr Met Glu Ile Asp Ala Phe Val
    330                 335                 340CTC CTG CCC AGC TCC AGC AAG GAG CCT GTC TTC CGG CTC AGT GTG GCC       1152Leu Leu Pro Ser Ser Ser Lys Glu Pro Val Phe Arg Leu Ser Val Ala
345                 350                 355ACT AAT GTG TCC GCC ACC TTG ACC TTC AAT ACC AGC AAG ATCACT GGG        1200Thr Asn Val Ser Ala Thr Leu Thr Phe Asn Thr Ser Lys Ile Thr Gly360                 365                 370                 375TTC CTG AAG CCA GGA AAG AAA GTG GAA CTG AAA GAA TCC AAA GTT           1248Phe Leu Lys Pro Gly Lys Val Lys Val Glu Leu Lys Glu Ser Lys Val
            380                 385                 390GGA CTA TTC AAT GCA GAG CTG TTG GAA GCG CTC CTC AAC TAT TAC ATC       1296Gly Leu Phe Asn Ala Glu Leu Leu Glu Ala Leu Leu Asn Tyr Tyr Ile
        395                 400                 405CTT AAC ACC TTC TAC CCC AAG TTC AAT GAT AAG TTG GCC GAA GGC TTC       1344Leu Asn Thr Phe Tyr Pro Lys Phe Asn Asp Lys Leu Ala Glu Gly Phe
    410                 415                 420CCC CTT CCT CTG CTG AAG CGT GTT CAG CTC TAC GAC CTT GGG CTG CAG       1392Pro Leu Pro Leu Leu Lys Arg Val Gln Leu Tyr Asp Leu Gly Leu Gln
425                 430                 435ATC CAT AAG GAC TTC CTG TTC TTG GCT GCC AAT GTC CAA TAC ATG AGA       1440Ile His Lys Asp Phe Leu Phe Leu Gly Ala Asn Val Gln Tyr Met Arg(22)SEQ ID NO:98资料
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：481氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线型
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：混合特征
  (D)其他资料：“rLBP”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:98Met Gly Ala Leu Ala Arg Ala Leu Pro Ser Ile Leu Leu Ala Leu Leu-25             -20                     -15                 -10Leu Thr Ser Thr Pro Glu Ala Leu Gly Ala Asn Pro Gly Leu Val Ala
             -5                   1               5Arg Ile Thr Asp Lys Gly Leu Gln Tyr Ala Ala Gln Glu Gly Leu Leu
     10                  15                  20Ala Leu Gln Ser Glu Leu Leu Arg Ile Thr Leu Pro Asp Phe Thr Gly
 25                  30                  35Asp Leu Arg Ile Pro His Val Gly Arg Gly Arg Tyr Glu Phe His Ser40                  45                  50                        55Leu Asn Ile His Ser Cys Glu Leu Leu His Ser Ala Leu Arg Pro Val
             60                  65                  70Pro Gly Gln Gly Leu Ser Leu Ser Ile Ser Asp Ser Ser Ile Arg Val
         75                  80                   85Gln Gly Arg Trp Lys Val Arg Lys Ser Phe Phe Lys Leu Gln Gly Ser
    90                   95                 100Phe Asp Val Ser Val Lys Gly Ile Ser Ile Ser Val Asn Leu Leu Leu105                  110                 115Gly Ser Glu Ser Ser Gly Arg Pro Thr Val Thr Ala Ser Ser Cys Ser120                 125                 130                 135Ser Asp Ile Ala Asp Val Glu Val Asp Met Ser Gly Asp Leu Gly Trp
            140                 145                 150Leu Leu Asn Leu Phe His Asn Gln Ile Glu Ser Lys Phe Gln Lys Val
        155                 160                 165Leu Glu Ser Arg Ile Cys Glu Met Ile Gln Lys Ser Val Ser Ser Asp
    170                 175                 180Leu Gln Pro Tyr Leu Gln Thr Leu Pro Val Thr Thr Glu Ile Asp Ser
185                 190                 195Phe Ala Asp Ile Asp Tyr Ser Leu Val Glu Ala Pro Arg Ala Thr Ala200                 205                 210                 215Gln Met Leu Glu Val Met Phe Lys Gly Glu Ile Phe His Arg Asn His
            220                 225                 230Arg Ser Pro Val Thr Leu Leu Ala Ala Val Met Ser Leu Pro Glu Glu
        235                 240                 245His Asn Lys Met Val Tyr Phe Ala Ile Ser Asp Tyr Val Phe Asn Thr
    250                 255                 260Ala Ser Leu Val Tyr His Glu Glu Gly Tyr Leu Asn Phe Ser Ile Thr
265                 270                 275Asp Glu Met Ile Pro Pro Asp Ser Asn Ile Arg Leu Thr Thr Lys Ser280                 285                 290                 295Phe Arg Pro Phe Val Pro Arg Leu Ala Arg Leu Tyr Pro Asn Met Asn
            300                 305                 310Leu Glu Leu Gln Gly Ser Val Pro Ser Ala Pro Leu Leu Asr Phe Ser
        315                     320             325Pro Gly Asn Leu Ser Val Asp Pro Tyr Met Glu Ile Asp Ala Phe Val
    330                 335                 340Leu Leu Pro Ser Ser Ser Lys Glu Pro Val Phe Arg Leu Ser Val Ala
345                 350               355Thr Asn Val Ser Ala Thr Leu Thr Phe Asn Thr Ser Lys Ile Thr Gly360                 365                 370                 375Phe Leu Lys Pro Gly Lys Val Lys Val Glu Leu Lys Glu Ser Lys Val
            380                 385                 390Gly Leu Phe Asn Ala Glu Leu Leu Glu Ala Leu Leu Asn Tyr Tyr Ile
        395                 400                 405Leu Asn Thr Phe Tyr Pro Lys Phe Asn Asp Lys Leu Ala Glu Gly Phe
    410                 415                 420Pro Leu Pro Leu Leu Lys Arg Val Gln Leu Tyr Asp Leu Gly Leu Gln425                  430                 435Ile His Lys Asp Phe Leu Phe Leu Gly Ala Asn Val Gln Tyr Met Arg440                 445                 450                 455Val(2)SEQ ID NO:99资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：16氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.57”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:99Cys Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Pro Leu1               5                   10                  15Cys(2)SEQ ID NO:100资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.75”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:100lle Lys Lys Arg Ala Ile Ser Phe Leu Gly Lys Lys Trp Gln Lys1              5                   10                   15(2)SEQ ID NO:101资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.282”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:l0lLys Trp Lys Ala Phe Phe Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Phe1                   5               10                  15Phe Arg Phe Leu Lys
            20(2)SEQ ID NO:102资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：16氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.103”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:102Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Trp Lys Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15Lys(2)SEQ ID NO:103资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.104”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:103Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Ser Leu Phe His Lys Lys1                5                  10(2)SEQ ID NO:104资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：16氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.105”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：13
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
           注=“1 3位上的丙氨酸是β-1-萘基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:104Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Trp Lys Arg Ala Leu Lys1               5                   10                  15Lys(2)SEQ ID NO:105资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.106”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:105Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Thr Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:106资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.107”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:106Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Ieu Phe Trp Lys Lys1              5                   10(2)SEQ ID NO:107资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.108”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:107Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Trp1               5                   10(2)SEQ ID NO:108资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.109”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：11
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“11位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:108Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Ala Mis Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:109资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.110”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:109Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe Ala Lys Lys1                5                  10(2)SEQ ID NO:110资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.111”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：14
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“14位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:110Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:111资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.112”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：7
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“ 7位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：
  (B)：位置：11
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“11位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:111lle Lys lle Ser Gly Lys Ala Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys1              5                    10                      15(2)SEQ ID NO:112资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.113”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:112Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Phe Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:113资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.114”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:113Lys Trp Gln Leu Arg Ser Lys Gly Lys Ile Lys Ile Phe Lys Ala1               5                   10                        15(2)SEQ ID NO:114资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.116”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:114Lys Ser Lys Val Lys Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1                 5                  10(2)SEQ ID NO:115资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.119”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：7
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“7位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:115Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Ala Lys Arg Phe Leu Lys1               5               10                      15(2)SEQ ID NO:116资料：
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  (A)：长度：15氨基酸
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  (D)：拓扑：线型
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  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.120”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:116Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Lys Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:117资料：
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  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
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  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.121”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：11
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“11位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:117Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys1                5                  10                  15(2)SEQ ID NO:118资料：
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  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.122”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：7
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“7位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：11
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“11位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:118Ile Lys Ile Ser Gly Lys Ala Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:119资料：
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  (D)：其他信息：“BPI.123”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：9
  (D)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“9位上的苯基丙氨酸是对氨
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:119Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe Mis Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:120资料：
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  (A)：长度：14氨基酸
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  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.124”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:120Lys Ser Lys Val Lys Trp Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:121资料：
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  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.125”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:121Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Tyr Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:122资料：
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.126”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=D-Trp
                 注=“6位上的氨基酸是D-色氨酸。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:122Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:123资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.127”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:123Lys Ser Lys Val Gly Phe Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:124资料：
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  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.128”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=D-Phe
                 注=“6位上的氨基酸是D-苯基丙氨
                 酸。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:124Lys Ser Lys Val Gly Phe Leu Ile Gln Leu Pro His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:125资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.129
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是D-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:125Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:126资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.130”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是2-β-1
                 -萘基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:126Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:127资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.131”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6-
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是D-2-β-Ala
                 萘基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:127Lys Ser LysVal Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1              5                   10(2)SEQ ID NO:128资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.132”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是吡啶基取代
                 的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:128Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:129资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.133”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“6位上的苯丙氨酸是
                 对氨基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:129Lys Ser Lys Val Gly Phe Leu Ile Gln leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2) SEQ ID NO:130资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.134”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (D)：其他信息：标记=取代的phe
                 注=“ 5位上的苯丙氨酸是对氨
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:130Lys Ser Lys Val Phe Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:131资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.135”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:131Lys Ser Lys Val Gly Lys Leu Ile Gln Leu Pro His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:132资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.136”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:132Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Glu Arg Phe Leu Lys1                5                   11                  15(2)SEQ ID NO:133资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：16氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.137”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:133Cys Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1                5                   10                  15Cys(2)SEQ ID NO:134资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.138”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:134
Lys Ser Lys Val Lys Phe Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
1               5                    10(2)SEQ ID NO:135资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.139”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:135Lys Ser Lys Val Gly Tyr Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:136资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：7氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.140”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：1
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“1位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“2位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:136Ala Ala Arg Phe Leu Lys Phe1               5(2)SEQ ID NO:137资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.141”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:137Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Trp Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:138资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.142”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:138Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Trp Phe His Lys Lys1              5                   10(2)SEQ ID NO:139资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.143”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“ 10位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:139Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Ala Phe His Lys Lys1               5                   10
(2)SEQ ID NO:140资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.144”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是环己基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:140Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1                5                  10(2)SEQ ID NO:141资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.145”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:141Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1                5                  10                  15                  20(2)SEQ ID NO:142资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.146”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：14
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“14位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:142Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe Ala Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:143资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.147”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:143Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Glu Lys Lys Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:144资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.148”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                注=“12位上的丙氨酸是β-1-萘
                基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:144Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe Ala Lys Lys1                5                  10(2)SEQ ID NO:145资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：1813碱基对
  (B)：类型：核酸
  (C)：链型：单链
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：cDNA
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/链：CDS
  (B)：位置：31..1491
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：mat-肽
  (D)：其他信息：124..1491
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“rBPI”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:145CAGGCCTTGA GGTTTTGGCA GCTCTGGAGG ATG AGA GAG AAC ATG GCC AGG GGC    54
                             Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly
                             -31 -30                 -25CCT TGC AAC GCG CCG AGA TGG GTG TCC CTG ATG GTG CTC GTC GCC ATA    102Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile
        -20                 -15                 -10GGC ACC GCC GTG ACA GCG GCC GTC AAC CCT GGC GTC GTG GTC AGG ATC   150Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val Asn Pro gly Val Val Val Arg Ile
    -5                    1              5TCC CAG AAG GGC CTG GAC TAC GCC AGC CAG CAG GGG ACG GCC GCT CTG   198Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu10                   15                  20                  25CAG AAG GAG CTG AAG AGG ATC AAG ATT CCT GAC TAC TCA GAC AGC TTT   246Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe
             30                  35                  40AAG ATC AAG CAT CTT GGG AAG GGG CAT TAT AGC TTC TAC AGC ATG GAC   294Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp
         45                  50                  55ATC CGT GAA TTC CAG CTT CCC AGT TCC CAG ATA AGC ATG GTG CCC AAT   342Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn
     60                  55                  70GTG GGC CTT AAG TTC TCC ATC AGC AAC GCC AAT ATC AAG ATC AGC GGG    390Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly
 75                  80                  85AAA TGG AAG GCA CAA AAG AGA TTC TTA AAA ATG AGC GGC AAT TTT GAC    438Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp90                   95                 100                 105CTG AGC ATA GAA GGC ATG TCC ATT TCG GCT GAT CTG AAG CTG GGC AGT    486Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser
            110                 115                 120AAC CCC ACG TCA GGC AAG CCC ACC ATC ACC TGC TCC AGC TGC AGC AGC    534Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser
        125                 130                 135CAC ATC AAC AGT GTC CAC GTG CAC ATC TCA AAG AGC AAA GTC GGG TGG    582His Ile Asn Ser Val His Val His Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp
    140                 145                 150CTG ATC CAA CTC TTC CAC AAA AAA ATT GAG TCT GCG CTT CGA AAC AAG    630Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys
155                 160                 165ATG AAC AGC CAG GTC TGC GAG AAA GTG ACC AAT TCT GTA TCC TCC AAG    678Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys170                 175                 180                 185CTG CAA CCT TAT TTC CAG ACT CTG CCA GTA ATG ACC AAA ATA GAT TCT    726Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser
           190                 195                 200GTG GCT GGA ATC AAC TAT GGT CTG GTG GCA CCT CCA GCA ACC ACG GCT    774Val Ala Gly Ile Asr Tyr Gly Leu Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala
        205                 210                 215GAG ACC CTG GAT GTA CAG ATG AAG GGG GAG TTT TAC AGT GAG AAC CAC    822Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asr His
    220                 225                 230CAC AAT CCA CCT CCC TTT GCT CCA CCA GTG ATG GAG TTT CCC GCT GCC    870His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala
235                 240                 245CAT GAC CGC ATG GTA TAC CTG GGC CTC TCA GAC TAC TTC TTC AAC ACA    919His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly Leu Ser Asp Tyr phe Phe Asn Thr250                 255                 260                 265GCC GGG CTT GTA TAC CAA GAG GCT GGG TGC TTG AAG ATG ACC CTT AGA    966Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg270                                 275                 280GAT GAC ATG ATT CCA AAG GAG TCC AAA TTT CGA CTG ACA ACC AAG TTC    1014Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe
        285                 290                 295TTT GGA ACC TTC CTA CCT GAG GTG GCC AAG AAG TTT CCC AAC ATG AAG    1062Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys
    300                 305                 310ATA CAG ATC CAT GTC TCA GCC TCC ACC CCG CCA CAC CTG TCT GTG CAG    1110Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln
315                 320                 325CCC ACC GGC CTT ACC TTC TAC CCT GCC GTG GAT GTC CAG GCC TTT GCC    1158Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala330                 335                 340                 345GTC CTC CCC AAC TCC TCC CTG GCT TCC CTC TTC CTG ATT GGC ATG CAC    1206Val Leu Pro Asr Ser Ser Leu Ala Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His
            350                 355                 360ACA ACT GGT TCC ATG GAG GTC AGC GCC GAG TCC AAC AGG CTT GTT GGA    1254Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly
        365                 370                 375GAG CTC AAG CTG GAT AGG CTG CTC CTG GAA CTG AAG CAC TCA AAT ATT    1302Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile
    380             385                     390GGC CCC TTC CCG GTT GAA TTG CTG CAG GAT ATC ATG AAC TAC ATT GTA    1350Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val
395                 400                 405CCC ATT CTT GTG CTG CCC AGG GTT AAC GAG AAA CTA CAG AAA GGC TTC    1398Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe410                 415                 420                 425CCT CTC CCG ACG CCG GCC AGA GTC CAG CTC TAC AAC GTA GTG CTT CAG    1446Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln
            430                 435                 440CCT CAC CAG AAC TTC CTG CTG TTC GGT GCA GAC GTT GTC TAT AAA        1491Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys
        445                 450                 455TGAAGGCACC AGGGGTGCCG GGGGCTGTCA GCCGCACCTG TTCCTGATGG GCTGTGGGGC    1551ACCGGCTGCC TTTCCCCAGG GAATCCTCTC CAGATCTTAA CCAAGAGCCC CTTGCAAACT    1611TCTTCGACTC AGATTCAGAA ATGATCTAAA CACGAGGAAA CATTATTCAT TGGAAAAGTG    1671CATGGTGTGT ATTTTAGGGA TTATGAGCTT CTTTCAAGGG CTAAGGCTGC AGAGATATTT    1731CCTCCAGGAA TCGTGTTTCA ATTGTAACCA AGAAATTTCC ATTTGTGCTT CATGAAAAAA    1791AACTTCTGGT TTTTTTCATG TG(2)SEQ ID NO:146资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：487氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:146Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val-31 -30                 -25                 -20Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val-15                 -10                 -5                    1Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala5                               10                  15Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys20                           25                  30Ile pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly
 35                  40                  45His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser50                  55                  60                  65Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser
             70                  75                  80Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe
         85                  90                  95Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile
    100                 105                 110Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr
115                 120                 125Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser His Ile Asn Ser Val His Val His130                 135                 140                 145Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
            150                 155                 160Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys
        165                 170                 175Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu
    180                 185                 190Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu
195                 200                 205Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys210                 215                 220                 225Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro
            230                 235                 240Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly
        245                 250                 255Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala
    260                 265                 270Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser
275                 280                 285Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val290                 295                 300                 305Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser
            310                 315                 320Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro
        325                 330                 335Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala
    340         345                         350Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser
355                 360                 365Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu370                 375                 380             385Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu
            390                 395                 400Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val
        405                 410                 415Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val
    420                 425                 430Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe
435                 440                 445Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys450                 455(2)SEQ ID NO:147资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.149”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:147Lys Trp Lys Val Phe Lys Lys Ile Glu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
            20(2)SEQ ID NO:148资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.150”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:148Lys Trp Ala Phe Ala Lys Lys Gln Lys Lys Arg Leu Lys Arg Gln1               5                   10                  15Trp Leu Lys Lys Phe
            20(2)SEQ ID NO:149资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：30氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.153”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:149Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln1                5                  10                  15Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys20                                  25                  30(2)SEQ ID NO:150资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.154”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“5位是β-1-萘基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:150Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Gln1               5                   10                  15Lys Arg Phe Leu Lys
            20(2)SEQ ID NO:151资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.155”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：15
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“15位是β-l-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：16
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“16位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:151Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala1               5                   10                  15Ala Arg Phe Leu Lys
            20(2)SEQ ID NO:152资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.156”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“5位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：15
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“15位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：16
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“16位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:152Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala1                5                  10                  15Ala Arg Phe Leu Lys
            20(2)SEQ ID NO:153资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：30氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.157”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
             注=“ 5位是β-1-萘
             基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
             注=“6位是β-1-萘
             基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：15
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
             注=“15位是β-1-萘
             基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：16
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“16位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：25
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“ 25位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：26
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“26位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:153Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala1                   5               10                  15Ala Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys
            20              25                      30(2)SEQ ID NO:154资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：29氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.158”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：11
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“11位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:154Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys1               5               10                      15Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:155资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.159”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“2位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:155Lys Ala Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Trp Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys
            20(2)SEQ ID NO:156资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.160”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“2位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：16
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“16位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:156Lys Ala Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys Lys Ala Lys Ala Gln1               5                   10                  15Ala Arg Phe Leu Lys
            20(2)SEQ ID NO:157资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.161”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:157Lys Ser Lys Val Lys Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:158资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.162”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:158Lys Trp Lys Ala Gln Trp Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly Trp leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1              5                   10                  15                  20(2)SEQ ID NO:159资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：20氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“5位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：15
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“15位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:160Lys Trp Lys Ala Ala Lys Arg Phe Leu Lys Lys Trp Lys Ala Ala Lys Arg Phe Leu Lys1                5                  10                  15                  20(2)SEQ ID NO:161资料：
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  (A)：长度：20氨基酸
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“2位是β-l-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:161Lys Ala Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys Lys Ala Lys Ala Gln1               5                   10                  15Phe Arg Phe Leu Lys
             20(2)SEQ ID NO:162资料：
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  (A)：名称/键：混合特征
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：13
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“13位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:166Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Ala Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:167资料：
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  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.222”
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  (A)：名称/键：修饰的位点
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  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：14
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“14位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:167Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:168资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.223”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:168Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Ala Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:169资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.224”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
             注=“6位是β-1-萘基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：9
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             注=“9位是对氨基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:169Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:170资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.225”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“5位是对氨基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:170Lys Ser Lys Val Phe Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1                5                  10(2)SEQ ID NO:171资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
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  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:171Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys1              5                   10(2)SEQ ID NO:172资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
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  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
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                注=“10位是β-1-萘
                基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：14
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                 注=“14位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:172Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Ala Phe His Lys Ala1                                   10(2)SEQ ID NO:173资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
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  (B)：位置：9
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                 注=“9位是对氨基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
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                 注=“14位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:173Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:174资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.229”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“5位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：14
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“14位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:174Lys Ser Lys Val Ala Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:175资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
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(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：14
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“14位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:175Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Ala1               5                   10(2)SEQ ID NO:176资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.231”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:176Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Ala Phe A1a Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:177资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.232”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：9
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“9位是对氨
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:177Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe Ala Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:178资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.233”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“5位是对氨
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：12
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“12位是β-1-萘
                 基取代的。”(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:178Lys Ser Lys Val Phe Trp Leu Ile Gln Leu Phe Ala Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:179资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.234”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
             注=“2位是β-1-萘基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:179Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Trp Ala Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:180资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.235”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：9
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“9位是对氨
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
 (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:180Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Ala Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:181资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.236”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“5位是对氨基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:181Lys Ser Lys Val Phe Trp Leu Ile Gln Ala Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:182资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.237”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:182Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Ala Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:183资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.238”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“5位是对位氨基取代的。”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：修饰的位点
  (B)位置：9
  (C)其他信息：标记=取代的Phe
               注=“9位是对氨基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:183Lys Ser Lys Val Phe Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:184资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.239”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：9
  (C)其他信息：标记=取代的Phe
               注=“9位是对氨基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:184Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:185资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.240”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：5
  (C)：其他信息：标记=取代的Phe
                 注=“5位是对氨
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:185Lys Ser Lys Val Phe Trp Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:186资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.247”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“ 2位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:186Lys Ala Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys
             20(2)SEQ ID NO:187资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.245”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:187Lys Trp Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Trp Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys
            20(2)SEQ ID NO:188资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.246”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：16
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                注=“16位是D-β-2-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:188Lys Trp Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10              15Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys20(2)SEQ ID NO:189资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.248”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“2位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：16
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“16位是D-β-2-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:189Lys Ala Lys Ala Gln Ala Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
            20(2)SEQ ID NO:190资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.242”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是D-β-2-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:190Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:191资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：28氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.272”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:191Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys Lys1               5               10                      15Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:192资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：28氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.275”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:192Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys Lys Sr Lys Val1                5                   14                  15Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys
20                  25(2)SEQ ID NO:193资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：28氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.270”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:193Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys Lys1               5               10                      15Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:194资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：28氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.271”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:194Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Lys1               5                   10                  15Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:195资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：28氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.273”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:195Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys Lys Ser Lys1               5                   10               15Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
     20                  25(2)SEQ ID NO:196资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：28氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.274”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:196Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Lys1               5                   10                  15Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys
            20                  25(2)SEQ ID NO:197资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.276”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:197Lys Trp Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Trp Leu Ile Phe Leu Phe His Lys Lys
            20(2)SEQ ID NO:198资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.241”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:198Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Leu Leu Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:199资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.243”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是D-β-2-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:199Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Trp His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:200资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.244”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (C)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“6位是D-β-2-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:200Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Leu Leu Trp His Lys Lys
1                5              10(2)SEQ ID NO:201资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.249”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:201Lys Ser Lys Val Gly Gly Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:202资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.250”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:202Lys Ser Lys Val Gly Leu Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:203资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.251”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:203Lys Ser Lys Val Gly Ile Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:204资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.252”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=D-Ala
                 注=“6位上的氨基酸是D-丙氨酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:204Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:205资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.253”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=D-Val
                 注=“6位上的氨基酸是D-缬氨酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:205Lys Ser Lys Val Gly Val Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:206资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
  (D)：其他信息：标记=δ-aba
                 注=“6位上的氨基酸是δ-氨基丁
                 酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:207Lys Ser Lys Val G1y Xaa Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:208资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.256”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=gaba
                 注=“6位上的氨基酸是γ-氨基丁酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:208Lys Ser Lys Val Gly Xaa Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10
  (D)：其他信息：标记=δ-aba
                 注=“6位上的氨基酸是δ-氨基丁
                 酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:207Lys Ser Lys Val Gly Xxx Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:208资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.256”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=gaba
                 注=“6位上的氨基酸是γ-氨基丁酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:208Lys Ser Lys Val Gly Xxx Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:209资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.257”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=d一甲基-A
                 注=“6位上的氨基酸是δ-甲基丙氨
                 酸。
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:209Lys Ser Lys Val Gly Ala Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:210资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.258”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=叔丁基-G
                 注=“6位上的氨基酸是叔丁基甘氨酸”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:210Lys Ser Lys Val Gly Gly Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:211资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.259”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=N-甲基-G
                 注=“6位上的氨基酸是N-甲基-甘氨
                 酸”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:211Lys Ser Lys Val GIy Gly Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys
1               5                   10(2)SEQ ID NO:212资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.260”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=N-甲基-V
                 注=“6位上的氨基酸是N-甲基-缬氨
                 酸”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:212Lys Ser Lys Val Gly Val Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:213资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.261”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：
  (B)：位置：6
  (D)：其他信息：标记=N-甲基-L
                 注=“6位上的氨基酸是N-甲基-亮氨酸。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:213Lys Ser Lys Val Gly Leu Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:214资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.262”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:214Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Asn Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:215资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.263”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:215Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Glu Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:216资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.264”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:216Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Asp Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:217资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.265”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:217Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Lys Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:218资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.266”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:218Lys Ser Lys Val Lys Val Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:219资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
 (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.267”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:219Lys Ser Lys Val Lys Trp Ala Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:220资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.268”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:220Lys Ser Lys Val Gly Val Ala Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:221资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：14氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.269”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:221Lys Ser Lys Val Lys Val Ala Ile Gln Leu Phe His Lys Lys1               5                   10(2)SEQ ID NO:222资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：24氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.277”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：2
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“2位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:222Lys Ala Lys Ala Gln Phe Arg Phe Leu Lys Lys Ser Lys Val Gly1               5                   10                  15Trp Leu Ile Leu Leu Phe His Lys Lys
            20(2)SEQ ID NO:223资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.278”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:223Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Trp Arg Phe Leu Lys1               5               10                      15(2)SEQ ID NO:224资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.279”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:224Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Phe Arg Phe Leu Lys1                5                   10                  15(2)SEQ ID NO:225资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.280”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:225Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Phe Arg Phe Leu Lys1               5                   10                  15(2)SEQ ID NO:226资料：
(ⅰ)：序列特征：
  (A)：长度：15氨基酸
  (B)：类型：氨基酸
  (D)：拓扑：线型
(ⅱ)：分子类型：肽
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：混合特征
  (D)：其他信息：“BPI.281”
(ⅸ)：特征：
  (A)：名称/键：修饰的位点
  (B)：位置：10
  (D)：其他信息：标记=取代的Ala
                 注=“10位上的丙氨酸是β-1-萘
                 基取代的。”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO:226Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Ala Ala Arg Phe Leu Lys1               5               10                      15

Claims (5)

1．一种化合物，该化合物至少具有一种BPI生物活性，并选自下列一组肽：ASQQGTAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKH         (SEQIDNO:1)；GTAALQKELKRIKIPDYSDSFKIKHLGKGH        (SEQIDNO:2)；LQKELKRIKIPDYSDSFKIKHL                (SEQIDNO:3)；QQGTAALQKELKRIK                       (SEQIDNO:4)；或GTAALQKELKRIKIP                       (SEQIDNO:5)。
2．一种化合物，该化合物至少具有一种BPI生物活性，并选自下列一组肽：SSQISMVPNVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK   (SEQIDNO:6)；IKISGKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:7)；KWKAQKRFLK                            (SEQIDNO:8)；CIKISGKWKAQKRFLK                      (SEQIDNO:9)；CIKISGKWKAQKRFLKC                     (SEQIDNO:10)；NVGLKFSISNANIKISGKWKAQKRFLK           (SEQIDNO:11)；AKISGKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:16)；IAISGKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:17)；IKASGKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:18)；IKIAGKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:19)；IKISAKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:20)；IKISGAWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:21)；IKISGKAKAQKRFLK                       (SEQIDNO:22)；IKISGKWAAQKRFLK                       (SEQIDNO:23)；IKISGKWKAAKRFLK                       (SEQIDNO:24)；IKISGKWKAQARFLK                       (SEQIDNO:25)；IKISGKWKAQKAFLK                       (SEQIDNO:26)；IKISGKWKAQKRALK                       (SEQIDNO:27)；IKISGKWKAQKRFAK                       (SEQIDNO:28)；IKISGKWKAQKRFLA                       (SEQIDNO:29)；IKISGAWAAQKRFLK                       (SEQIDNO:30)；IKISGKWKAAARFLK                       (SEQIDNO:31)；IAISGKWKAQKRFLA                       (SEQIDNO:32)；IKISGKWKAKQRFLK                       (SEQIDNO:47)；IKISGKFKAQKRFLK                                 (SEQIDNO:48)；IKISGKWDKAQKRFLK                               (SEQIDNO:49)；IKISGKAβ(1-萘基)KAQKRFLK                          (SEQIDNO:50)；KRFLKKWKAQKRFLK                                 (SEQIDNO:51)；KWKAQKRFLKKWKAQKRFLK                            (SEQIDNO:54)；KRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK                       (SEQIDNO:55)；KWKAAARFLKKWKAQKRFLK                            (SEQIDNO:57)；KWKAQKRFLKKWKAAARFLK                            (SEQIDNO:58)；KWKAAARFLKKWKAAARFLK                            (SEQIDNO:59)；KWKAAARFLKKWKAAARFLKKWKAAARFLK                  (SEQIDNO:60)；IKISGKWKAQFRFLK                                 (SEQIDNO:62)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQKRFLK                         (SEQIDNO:63)；IKISGKWKAQKRAβ-(3-吡啶基)LK                        (SEQIDNO:64)；QKRFLKKWKAQKRFLKKWKAQKRFLK                      (SEQIDNO:65)；ADADIKISGKWKAQKRFLK                           (SEQIDNO:66)；IKISGKWKAQFDRFLK                               (SEQIDNO:71)；IKISGKWKAQWRFLK                                 (SEQIDNO:72)；IKISGKWKAKKRFLK                                 (SEQIDNO:73)；IKISGKWKAQAβ-(1-萘基)RFLK                         (SEQIDNO:74)；IKISGKWKAFKRFLK                                 (SEQIDNO:75)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK                         (SEQIDNO:78)；IKISGKWKAFFRFLK                                 (SEQIDNO:82)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAFKRFLK                         (SEQIDNO:84)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAFFRFLK                         (SEQIDNO:85)；KWKAQWRFLKKWKAQWRFLKKWKAQWRFLK                  (SEQIDNO:93)；CIKISGKWKAQKRPLC                                (SEQIDNO:99)；IKKRAISFLGKKWQK                                 (SEQIDNO:100)；IKISGKWKAWKRFLKK                                (SEQIDNO:102)；IKISGKWKAWKRAβ-(1-萘基)LKK                        (SEQIDNO:104)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLK                 (SEQIDNO:111)；KWQLRSKGKIKIFKA                                 (SEQIDNO:113)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAAβ-(1-萘基)KRFLK                 (SEQIDNO:115)；IKISGKWKAQKRKLK                                 (SEQIDNO:116)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK               (SEQIDNO:117)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK(SEQIDNO:118)；IKISGKWKAQERFLK                                 (SEQIDNO:132)；IKISGKWKAQKRWLK                                 (SEQIDNO:137)；IKISGKWKAEKKFLK                                               (SEQIDNO:143)；KWAFAKKQKKRLKRQWLKKF                                          (SEQIDNO:148)；KWKAQKRFLKKWKAQKAFLKKWKAQKRFLK                                (SEQIDNO:149)；KWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAQKRFLK(SEQIDNO:150)；KWKAQKRFLKKWKAAβ(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK(SEQIDNO:151)；KWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK(SEQIDNO:152)；KWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLK(SEQIDNO:153)；KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLKKAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLK(SEQIDNO:156)；KWKAQWRFLKKWKAQWRFL                                           (SEQIDNO:159)；KWKAAβ-(1-萘基)KRFLKKWKAAβ-(1-萘基)KRFLK(SEQIDNO:160)；KAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKAβ-(1-萘基)KAQFRFLK(SEQIDNO:161)；KWKAQKRF                                                      (SEQIDNO:163)；CKWKAQKRFLKMSC                                                (SEQIDNO:164)；CKWKAQKRFC                                                    (SEQIDNO:165)；IKISGKWKAQKRAβ-(1-萘基)LK                                       (SEQIDNO:166)；KWKAFFRFLKKWKAFFRFLK                                          (SEQIDNO:101)；IKISGKWKAAWRFLK                                               (SEQIDNO:223)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)FRFLK                                       (SEQIDNO:224)；IKISGKWKAAFRFLK                                               (SEQIDNO:225)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)ARFLK                                       (SEQIDNO:226)。
3．一种化合物，该化合物至少具有一种BPI生物活性，并选自下列一组肽：VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK          (SEQIDNO:12)；KSKVWLIQLFHKK                         (SEQIDNO:13)；SVHVHISKSKVGWLIQLFHKKIESALRNK         (SEQIDNO:14)；KS KVGWLIQLFHKK                       (SEQIDNO:15)；ASKVGWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:33)；KAKVGWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:34)；KSAVGWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:35)；KSKAGWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:36)；KSKVAWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:37)；KSKVGALIQLFHKK                        (SEQIDNO:38)；KSKVGWAIQLFHKK                        (SEQIDNO:39)；KSKVGWLAQLFHKK                        (SEQIDNO:40)；KSKVGWLIALFHKK                        (SEQIDNO:41)；KSKVGWLIQAFHKK                        (SEQIDNO:42)；KSKVGWLIQLAHKK                        (SEQIDNO:43)；KSKVGWLIQLFAKK                        (SEQIDNO:44)；KSKVGWLIQLFHAK                        (SEQIDNO:45)；KSKVGWLIQLFHKA                        (SEQIDNO:46)；KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIQLFHKK          (SEQIDNO:56)；GWLIQLFHKKIESALKNKMNS                 (SEQIDNO:61)；VHVHISKSKVGWLIQLFHKKIE                (SEQIDNO:67)；KSKVGWLIQLWHKK                        (SEQIDNO:76)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFHKK                (SEQIDNO:77)；KSKVLWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:79)；KSKVGWLILLFHKK                        (SEQIDNO:80)；KSKVGWLIQLFLKK                        (SEQIDNO:81)；KSKVGWLIFLFHKK                        (SEQIDNO:86)；KSKVGWLIKLFHKK                        (SEQIDNO:87)；KSKVGWLIQLFFKK                        (SEQIDNO:89)；KSKVFWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:90)；KSKVGWLIQLFHKF                        (SEQIDNO:91)；KSKVKWLIQLFHKK                        (SEQIDNO:92)；KSKVKWLIKLFHKK                        (SEQIDNO:94)；KSKVKWLIKLFFKFKSKVKWLIKLFFKF          (SEQIDNO:95)；KSKVGWLISLFHKK                        (SEQIDNO:103)；KSKVGWLITLFHKK                        (SEQIDNO:105)；KSKVGWLIQLFWKK                        (SEQIDNO:106)；KSKVGWLIQLFHKW                              (SEQIDNO:107)；KSKVGWLIQLAβ-(1-萘基)HKK                      (SEQIDNO:108)；KSKVGWLIQLFABFAβ-(1-萘基)KK                   (SEQIDNO:109)；KSKVGWLIQLFHKAβ-(1-萘基)                      (SEQIDNO:110)；KSKVGWLIQFFHKK                              (SEQIDNO:112)；KSKVKAβ-(1-萘基)LIQLFHKK                      (SEQIDNO:114)；KSKVGW(p-氨基)LIFLFHKK                        (SEQIDNO:119)；KSKVKWLIQLWHKK                              (SEQIDNO:120)；KSKVGWLIYLFHKK                              (SEQIDNO:121)；KSKVGWDLIQLFHKK                            (SEQIDNO:122)；KSKVGFLIQLFHKK                              (SEQIDNO:123)；KSKVGFDLIQLPHKK                            (SEQIDNO:124)；KSKVGAD-1-β-(1-萘基)LIQLFHKK                    (SEQIDNO:125)；KSKVGA2-β-(1-萘基)LIQLFHKK                     (SEQIDNO:126)；KSKVGAD-2-β-(1-萘基)LIQLFHKK                    (SEQIDNO:127)；KSKVGA(吡啶基)LIQLFHKK                        (SEQIDNO:128)；KSKVGF(p-氨基)LIQLFHKK                        (SEQIDNO:129)；KSKVF(p-氨基)WLIQLFHKK                        (SEQIDNO:130)；KSKVGKLIQLPHKK                              (SEQIDNO:131)；CKSKVGWLIQLFHKKC                            (SEQIDNO:133)；KSKVKFLIQLFHKK                              (SEQIDNO:134)；KSKVGYLIQLFHKK                              (SEQIDNO:135)；KSKVGWLIQWFHKK                              (SEQIDNO:138)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FHKK                      (SEQIDNO:139)；KSKVGA(环己基)LIQLFHKK                        (SEQIDNO:140)；KSKVGWLIQLFAβ-(1-萘基)KAβ-(1-萘基)              (SEQIDNO:142)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFAβ-(1-萘基)KK              (SEQIDNO:144)；KSKVKALIQLFHKK                              (SEQIDNO:157)；KSKVGVLIQLFHKK                              (SEQIDNO:162)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLFHKK                      (SEQIDNO:167)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQAβ-(1-萘基)FHKK              (SEQIDNO:168)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIF(p-氨基)LFHKK                (SEQIDNO:169)；KSKVF(p-氨基)Aβ-(1-萘基)LIQLFHKK                (SEQIDNO:170)；KSKVGAβ-(1-萘基)LIQLWHKK                      (SEQIDNO:171)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FHKAβ-(1-萘基)              (SEQIDNO:172)；KSKVGWLIAβ-(1-萘基)LFHKAβ-(1-萘基)              (SEQIDNO:173)；KSKVAβ-(1-萘基)WLIQLFHKAβ-(1-萘基)              (SEQIDNO:174)；KSKVGWLIQLWHKAβ-(1-萘基)                      (SEQIDNO:175)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)FAβ-(1-萘基)KK                 (SEQIDNO:176)；KSKVGWLIF(p-氨基)LFAβ-(1-萘基)KK                   (SEQIDNO:177)；KSKVF(p-氨基)WLIQLFAβ-(1-萘基)KK                   (SEQIDNO:178)；KSKVGWLIQLWAβ-(1-萘基)KK                         (SEQIDNO:179)；KSKVGWLIFL(p-氨基)Aβ-(1-萘基)HKK                   (SEQIDNO:180)；KSKVF(p-氨基)WLIQAβ-(1-萘基)FHKK                   (SEQIDNO:181)；KSKVGWLIQAβ-(1-萘基)WHKK                         (SEQIDNO:182)；KSKVF(p-氨基)WLIF(p-氨基)LFHKK                     (SEQIDNO:183)；KSKVGWLIF(p-氨基)LWHKK                           (SEQIDNO:184)；KSKVF(p-氨基)WLIQLWHKK                           (SEQIDNO:185)；KSKVGAD-β-(2-萘基)LILLFHKK                        (SEQIDNO:190)；KSKVGWLILLFHKKKSKVGWLILLFHKK                   (SEQIDNO:191)；KSKVGWLIFLFHKKKSKVGWLIFLFHKK                   (SEQIDNO:192)；KSKVGWLILLFHKKKSKVGWLIQLFHKK                   (SEQIDNO:193)；KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLILLFHKK                   (SEQIDNO:194)；KSKVGWLIFLFHKKKSKVGWLIQLFHKK                   (SEQIDNO:195)；KSKVGWLIQLFHKKKSKVGWLIFLFHKK                   (SEQIDNO:196)；KSKVGWLILLWHKK                                 (SEQIDNO:198)；KSKVGAD-β-(2-萘基)LIQLWHKK                        (SEQIDNO:199)；KSKVGAD-β-(2-萘基)LILLWHKK                        (SEQIDNO:200)；KSKVGGLIQLFHKK                                 (SEQIDNO:201)；KSKVGLLIQLFHKK                                 (SEQIDNO:202)；KSKVGWLIQLFHKK                                 (SEQIDNO:203)；KSKVGADLIQLFHKK                               (SEQIDNO:204)；KSKVGVDLIQLFHKK                               (SEQIDNO:205)；KSKVGABLIQLFHKK                               (SEQIDNO:206)；KSKVG(δ-氨基丁酸)LIQLFHKK                         (SEQIDNO:207)；KSKVG(γ-氨基丁酸)LIQLFHKK                         (SEQIDNO:208)；KSKVGA(δ-甲基)LIQLFHKK                           (SEQIDNO:209)；KSKVGG(叔丁基)LIQLFHKK                           (SEQIDNO:210)；KSKVGG(N-甲基)LIQLFHKK                           (SEQIDNO:211)；KSKVGV(N-甲基)LIQLFHKK                           (SEQIDNO:212)；KSKVGL(N-甲基)LIQLFHKK                           (SEQIDNO:213)；KSKVGWLINLFHKK                                 (SEQIDNO:214)；KSKVGWLIELFHKK                                 (SEQIDNO:215)；KSKVGWLIDLFHKK                                 (SEQIDNO:216)；KSKVGWLIKLFHKK                                 (SEQIDNO:217)；KSKVKVLIQLFHKK                                 (SEQIDNO:218)；KSKVKWAIQLFHKK                        (SEQIDNO:219)；KSKVGVAIQLFHKK                        (SEQIDNO:220)；KSKVKVAIQLFHKK                        (SEQIDNO:221)。
4．一种化合物，该化合物至少具有一种BPI生物活性，并选自下列一组肽：KWKAQKRFLKKSKVGWLIQLFHKK                                   (SEQIDNO:52)；IKISGKWKAQKRFLK KSKVGWLIQLFHKK                             (SEQIDNO:53)；KSKVGWLIQLFHKKKWKAQKRFLK                                   (SEQIDNO:70)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIFLFHKK                      (SEQIDNO:83)；IKISGKAβ-(1-萘基)KAQFRFLKKSKVGWLIQLFHKK                      (SEQIDNO:88)；KWKAQFRFLKKSKVGWLILLFHKK                                   (SEQIDNO:96)；Aβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKF                                    (SEQIDNO:136)；KWKAAARFLKKSKVGWLIQLFHKK                                   (SEQIDNO:141)；KWKVFKKIEKKSKVGWLIQLFHKK                                   (SEQIDNO:147)；IKISGKWKAAβ-(1-萘基)Aβ-(1-萘基)RFLKKSKVGWLIQLFHKK(SEQIDNO:154)；KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLKKSKVGKWKAFKRFLK(SEQIDNO:155)；KWKAQWRFLKKSKVGWLIQLFHKK                                   (SEQIDNO:158)；KAβ-(1-萘基)KAQAβ-(1-萘基)RFLKKSKVGWLILLFHKK(SEQIDNO:186)；KWKAQFRFLKKSKVGWLIQLWHKK                                   (SEQIDNO:187)；KWKAQFRFLKKSKVGAD-β-(2-萘基)LIQLFHKK                        (SEQIDNO:188)；KAβ-(1-萘基)KAAβ-(1-萘基)KRFLKKSKVGAD-β-(2-萘基)LIQLFHKK(SEQIDNO:189)；KWKAQFRFLKKSKVGWLIFLFHKK                                   (SEQIDNO:197)；KAβ-(1-萘基)AQFRFLKKSKVGWLILLFHKK                           (SEQIDNO:222)。
5．含有权利要求1-4中任一项的化合物的药物组合物。
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