CN103260648A - 用于预防和治疗癌症的组合物和方法 - Google Patents

用于预防和治疗癌症的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103260648A
CN103260648A CN2011800543835A CN201180054383A CN103260648A CN 103260648 A CN103260648 A CN 103260648A CN 2011800543835 A CN2011800543835 A CN 2011800543835A CN 201180054383 A CN201180054383 A CN 201180054383A CN 103260648 A CN103260648 A CN 103260648A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nano
particle
cell
antigen
mhc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011800543835A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103260648B (zh
Inventor
佩蕾·圣玛丽亚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
UTI LP
Original Assignee
UTI LP
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by UTI LP filed Critical UTI LP
Publication of CN103260648A publication Critical patent/CN103260648A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103260648B publication Critical patent/CN103260648B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6923—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being an inorganic particle, e.g. ceramic particles, silica particles, ferrite or synsorb
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum

Abstract

常规的癌症免疫治疗的缺点是不能在体内以足以显著减小肿瘤大小或癌细胞数目的数目有效扩增特异性地靶向癌细胞的T细胞。为了克服该限制，本文提供了用呈递肿瘤特异性抗原的I类MHC分子和/或II类MHC分子和共刺激分子包被的纳米颗粒及其在扩增抗原特异性抗肿瘤发生T细胞到达现有免疫治疗技术所不能达到的水平中的用途。这些抗原特异性抗肿瘤发生T细胞包括在体内启动和维持针对转移性或非转移癌细胞、癌前细胞或赘生性细胞的显著免疫应答所必需的细胞毒性T细胞、效应T细胞、记忆T细胞和辅助T细胞。本发明描述了靶向癌细胞或癌前细胞(其为循环细胞，如在淋巴瘤中)、迁移性转移细胞和实体瘤的全身性方法。

Description

用于预防和治疗癌症的组合物和方法
相关申请的交叉引用
根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2010年11月12日提交的美国临时申请序列号61/413,330的优先权，该申请通过引用整体并入本文。
技术领域
本发明涉及与免疫治疗和医药相关的组合物和方法。具体地，本发明涉及用于预防和治疗癌症的治疗方法。
背景技术
癌症免疫是癌症治疗领域中的一个新兴领域，其旨在利用机体的自身免疫防御来靶向和清除癌细胞。与具有位点特异性的传统疗法(如放射和手术)或者与伴随有害副作用和高毒性的化学治疗方法相比，采用机体自身免疫系统来攻击癌细胞的想法具有许多优点。
通过许多不同肿瘤特异性抗原的鉴定和表征，该领域取得了显著的进步。这些肿瘤特异性抗原对癌细胞本身具有特异性。如果可以启动靶向这些肿瘤特异性抗原的免疫应答，那么机体自身即可有效清除癌细胞。但是，在患者中诱导肿瘤特异性免疫的策略迄今尚未成功。研究表明，有多种因素造成现有癌症免疫治疗策略的失败。首先，这些策略未能充分地扩增循环细胞毒性T细胞淋巴细胞。其次，癌症患者通常是免疫抑制的，并且不能产生启动免疫应答所必需的共刺激分子。因此，癌症免疫治疗的主要目标是在体内产生大量可以有效地攻击癌细胞的高亲合力肿瘤特异性T细胞。
本发明采用用肿瘤特异性抗原/MHC复合物和共刺激分子包被的纳米颗粒。该独特的复合物可诱导循环CD8+T细胞以大于现有癌症免疫疗法的量扩增。
发明内容
常规癌症免疫疗法的缺点是不能以足以显著减小肿瘤大小的数目有效扩增特异性地靶向癌细胞的T细胞。考虑用呈递肿瘤特异性抗原的I类MHC分子和/或II类MHC分子和共刺激分子包被的纳米尺寸的颗粒能够活化引起抗原特异性抗肿瘤发生T细胞大量扩增的幼稚T细胞(
Figure BDA00003173643900021
T cell)，所述抗原特异性抗肿瘤发生T细胞能够在体内分化为启动和维持针对癌细胞、癌前细胞或赘生性细胞的显著免疫应答所必需的细胞毒性T细胞、效应T细胞、记忆T细胞和辅助T细胞。本发明描述了靶向癌细胞、癌前细胞或赘生性细胞(其为循环细胞，如在淋巴瘤中)、迁移性转移细胞和实体瘤的全身性方法。这与具有位点特异性的疗法(如放射、手术和活检)形成鲜明对比。
该技术的一些方面和一些实施方案包括用于预防或治疗肿瘤和癌症的新方法，包括以足以扩增抗肿瘤发生T细胞的量向对象施用有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物。传统来说，在以足以有效治疗具有癌细胞和/或肿瘤的患者的数目扩增T细胞方面，靶向肿瘤和癌症的免疫疗法尚未获得成功。本发明的一些方面涉及出乎意料地能够以在传统上用其他免疫疗法未达到的水平扩增抗肿瘤发生T细胞群体的新复合物。
本发明的某些实施方案涉及抑制肿瘤生长以及预防或治疗癌症的方法，包括以足以扩增抗肿瘤发生T细胞的量向对象施用有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物，其中所述方法还包括以足以活化和/或扩增预先存在的抗肿瘤发生记忆细胞的量施用抗原/MHC/纳米颗粒复合物。考虑向患者施用抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物将使幼稚T细胞分化为不同类型的抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体。由此，这些群体之一是抗原特异性抗肿瘤发生记忆T细胞。还考虑不含共刺激分子的抗原/MHC/纳米颗粒复合物的后续施用可以活化所述抗原特异性抗肿瘤发生记忆T细胞。
在又一方面中，本公开内容提供了通过施用有效量的有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物在有此需要的患者中活化抗原特异性抗肿瘤发生记忆细胞的方法。
在又一实施方案中，本发明包括用于诊断癌症的方法，包括评估治疗诱导的抗肿瘤发生CD8+或CD4+T细胞的扩增应答作为主动免疫的指示。
另一方面涉及用于在患者中抑制癌症转移的方法，所述方法包括以足以扩增抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体的量向对象施用有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物，其中所述扩增的群体足以治疗所述癌症，其中所述抗原是所述肿瘤特异性的，其中所述施用在所述患者中提供所述复合物的体循环。
本发明的另一些实施方案包括扩增抗原特异性抗肿瘤发生T细胞的方法，包括以足以激活抗原特异性抗肿瘤发生T细胞扩增的量向对象或在体外向细胞施用抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物。在一些方面中，T细胞是CD8+或CD4+T细胞或NKT细胞。在本发明的另一些方面中，T细胞是CD8+或CD4+记忆T细胞。在本发明的又一些方面中，T细胞是CD8+细胞毒性T细胞或CD4+辅助T细胞。
本发明的某些实施方案涉及在对象中选择性地扩增和/或产生抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体的方法，所述方法包括向所述对象施用抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，其中以足以扩增所述群体的量和频率施用所述复合物。因此，本发明可以在体内启动和维持减少或清除发生中的癌细胞和癌前细胞的免疫应答。由此，本发明可以扩增期望的T细胞，如识别肿瘤抗原的T细胞，从而预防、治疗和/或减轻与发生中的肿瘤相关的疾病。
本发明涉及以抗原特异性方式靶向机体中的细胞。肿瘤特异性抗原在本领域中是公知的，并且描述于许多参考文献中，例如，Dranoff，G.(“Targets of Protective Tumor Immunity.”(2009)Cancer Vaccines：Ann.N.Y. Acad.Sci.1174：74-80)，和美国专利7795224、7812116、7785801，其通过引用并入本文。该技术不限于某些抗原，用于鉴定肿瘤特异性抗原的技术在本领域中是公知的，并且之前已有描述，例如，Schlichtholz等.(“The immune response to p53in breast cancer patients is directed againstimmunodominant epitopes unrelated to the mutational hot spot.”CancerRes1992；52：6380-4)；De Plaen E等.(“Immunogenic(tum-)variants ofmouse tumor P815：cloning of the gene of tum-antigen P91A andidentification of the tum-mutation.”Proc Natl Acad Sci USA1988；85：2274-8)；和Sahin U.等.(“Human neoplasms elicit multiple specificimmune responses in the autologous host.”Proc Natl Acad Sci USA1995；92：11810-3)，其通过引用并入本文。因此，不受理论约束，该技术启动了针对任何特征为具有特异性抗原的机体中细胞的免疫应答。由此，本发明不限于特定抗原序列，而是可以针对对于机体中患病细胞而言独特的任何抗原序列。
本发明的一些实施方案涉及诊断、预防或治疗肿瘤发生的方法，包括以足以扩增抗原特异性抗肿瘤发生T细胞的量向对象施用抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物。一般地并且如本文所使用的，当在偶联到基质的MHC或MHC样分子的上下文中时，术语“抗原”包括但不限于肽、核酸、碳水化合物、脂类或者可以调节T细胞或T细胞群体活性的其它分子或化合物中的全部或一部分。在本发明的一些方面中，纳米颗粒是生物可吸收的，使得其防止纳米颗粒在体内长期积累而不会在其中产生任何伴随的毒性作用。
用于所公开方法的本发明一些实施方案包括颗粒，所述颗粒包括与抗原/MHC/共刺激分子复合物偶联的纳米颗粒。抗原/MHC/共刺激分子复合物可直接或通过接头偶联到所述纳米颗粒。纳米颗粒可包含多个层，其进而可包含多个组分(例如带有其它可以更易于偶联到抗原/MHC/共刺激分子复合物的分子(例如链霉亲和素或亲和素或其它已知用于将其部分附着在纳米颗粒上的分子)之涂层或壳的金属芯核)。在一些方面中，纳米颗粒包含一种或更多种选自以下的材料：例如，硒化镉、钛、二氧化钛、锡、氧化锡、硅、二氧化硅、铁、氧化铁III、银、镍、金、铜、铝、钢、钴铬合金、钛合金、透磷钙石、磷酸三钙、氧化铝、二氧化硅、氧化锆、钻石、聚苯乙烯、硅、橡胶、聚碳酸酯、聚氨酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚酯、聚醚和聚乙烯、磷酸三钙、铬、镓以及生物可相容、生物可吸收的聚合物如PGLA、PLLA、PGA、PDLLA、PCL、PDLGA、PLDLA、PLC(它们全部都可以商标AbsorvTM获自Zeus，3737IndustrialBlvd，Orangeburg，SC，29118USA)、hylaurinic acid、藻酸盐、聚羟基脂肪酸酯等。在另一些方面中，生物可相容生物可吸收的纳米颗粒包含一种或更多种金属或者磁性或超顺磁性纳米颗粒。生物可相容生物可吸收的纳米颗粒还可包含一种或更多种由以下形成的生物可降解的包衣：葡聚糖；聚(乙二醇)；聚(氧化乙烯)；甘露醇；PHB-PHV类的聚(羟基脂肪酸酯)；和其它经修饰的聚糖，如淀粉、纤维素和壳聚糖。
本发明的一些方面包括包含抗原性组合物的方法和组合物，所述抗原性组合物包含引起或诱导抗原性应答或免疫应答的多肽、肽、核酸、碳水化合物、脂类和其它分子(通常称为抗原)的一个或更多个区段、片段或表位。
在一些方面中，可以使用本领域技术人员已知的方法将抗原/MHC复合物和共刺激分子交联(缀合)到本文所述的纳米颗粒。这样的将纳米颗粒与抗原/MHC复合物和共刺激分子缀合的方法的一种非限制性实例包括：(a)使抗原/MHC复合物和共刺激分子与缀合剂反应，从而形成抗原/MHC/共刺激分子复合物，以及(b)使纳米颗粒与步骤(a)的复合物反应。将纳米颗粒与抗原/MHC复合物和共刺激分子缀合的此类方法的另一非限制性实例包括：(a)使抗原/MHC复合物和共刺激分子与缀合剂分开地反应，从而形成抗原/MHC复合物和共刺激分子复合物；以及(b)使纳米颗粒与步骤(a)的复合物反应，使得抗原/MHC复合物和共刺激分子分开地连接到纳米颗粒。在一个实施方案中，该方法包括在进行步骤(b)之前将步骤(a)的复合物浓缩。在另一个实施方案中，所述缀合剂包括异双功能交联剂。在又一个实施方案中，所述缀合剂包括DOTA-马来酰亚胺(4-马来酰亚胺基丁酰胺基苄基-DOTA)、SMPT(4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-联硫基吡啶)甲苯-)、磺基-LC-SMPT(磺基琥珀酰亚胺基-6-(α-甲基-α-(2-硫基吡啶)苯乙酰胺)己酸酯、Traut试剂(2-亚氨基硫烷盐酸盐)或其任意组合。对将复合物与微米颗粒或纳米颗粒缀合的讨论，请参见美国专利公开号20070059775；美国专利号4,671,958、4,659,839、4,414,148、4,699,784、4,680,338、4,569,789、4,589,071、7186814和5543391；欧洲专利申请号188,256，其公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，抗原/MHC/共刺激分子复合物是通过首先使共刺激分子与纳米颗粒交联来制备的。在这种情况下，本公开内容还提供了包含纳米颗粒和偶联到所述纳米颗粒的共刺激分子的中间体。
由本公开内容的方法和组合物治疗的癌症、前癌、肿瘤和/或赘生性病症不限于任何特定细胞或肿瘤类型或者特定癌症，而包括其中肿瘤特异性抗原存在于细胞(如，癌细胞)中的任意此类(如，癌症)。在一些方面中，抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的肽组分来自或者设计自表达于或者存在于肿瘤、癌细胞、癌前细胞或赘生性细胞中的抗原或抗原表位或者其模拟物。针对多种癌症鉴定了多种这样的蛋白质或表位。
在本发明的另一些方面中，抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的MHC组分是经典的或非经典的I类MHC或II类MHC多肽组分。所述I类MHC组分可包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G分子的全部或一部分，特别是HLA-A分子的全部或一部分，例如HLA-A＊0201I类MHC分子。非经典I类MHC组分可包括CD1样分子。II类MHC组分可包括HLA-DR、HLA-DQ或HLA-DP的全部或一部分。在一些方面中，抗原/MHC/共刺激分子复合物与基质共价或非共价偶联或连接(抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物)。
共刺激分子是在体内产生第二信号的分子，其用于将幼稚T细胞活化为能够对具有所述特异性抗原的细胞产生免疫应答的抗原特异性T细胞。在本领域中公知多种共刺激分子，并且本发明不限于一种特定共刺激分子。共刺激分子的一些实例是B7.1、4-IBBL、CD40、IL-15/IL-15Ra、CD28、CD80、CD86和ICOS。在一些实施方案中，只有一种特定共刺激分子与纳米颗粒偶联。在另一实施方案中，多种不同共刺激分子与同一纳米颗粒偶联。在一些实施方案中，共刺激分子是蛋白质，如能够激动(agonizing)T细胞上的共刺激受体的抗体。在这种情况下，抗体能够诱导活化幼稚T细胞所必须的共刺激信号以及以抗原特异性方式诱导免疫应答。
所述基质通常是纳米颗粒。本发明的一个重要方面是纳米尺寸的纳米颗粒。在一个实施方案中，所述纳米颗粒的直径为约1nm至约100nm。优选地，所述纳米颗粒的直径为约5nm至约15nm。在另一实施方案中，所述纳米颗粒的直径为约5nm至约25nm，或者约1nm至约50nm，或者约2nm至约25nm，或者约1nm至约10nm，或者约10nm至约20nm，或者约1nm至约30nm。在一个实施方案中，所述纳米颗粒包含金属，如铁或氧化铁。在另一实施方案中，所述纳米颗粒包含生物可相容生物可吸收的聚合物。在一些实施方案中，所述纳米颗粒在体内经历生物吸收，使得纳米颗粒的体内的积累受到限制。本发明的肽可以与基质化学偶联，特别是通过化学或肽接头偶联。CD1分子是非经典MHC分子的一个实例。非经典MHC分子的特征在于物种之间是非多态性的、保守的，并具有窄且深的疏水配体结合口袋。这些结合口袋能够将糖脂和磷脂呈递给自然杀伤T(NKT)细胞。NKT细胞代表了共表达NK细胞标志物和半恒定T细胞受体(TCR)的一个独特的淋巴细胞群体。它们参与与许多种疾病有关的免疫应答的调控。
在一些方面中，抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物无需与佐剂一起施用来诱导免疫应答，例如，抗体应答。在特定实施方案中，抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒组合物可以与诱导针对癌性细胞的抗体应答的其它治疗技术联合使用。
附图说明
下述附图构成本说明书的一部分，其用于进一步说明本发明的一些方面。可通过参考这些附图中的一幅或多幅结合本文所示的具体实施方案的详细描述而更好地理解本发明。
图1描绘了有代表性的TEM图。pMHC包被的GNP(金纳米颗粒)(14nm)以高密度(～5×1013/m1)浓缩，并且是单分散的。放大倍数：50,000×。
图2表示pMHC(GNP)剂量和pMHC价态对pMHC包被的GNP的激动特性的影响。该图将由同源8.3-CD8+T细胞应答于两种不同的pMHC-GNP样品(二者均由每ml约2×1013个直径为14nm的GNP组成)而分泌的IFNγ的量进行比较。Au-022410和Au-21910分别携带约250个和约120个pMHC/GNP。Au-011810-C携带约120个对照pMHC/GNP。
图3描绘了大小对激动活性的影响。Au-022410是用较低pMHC价态包被但以高密度制备的14nm GNP；Au-032310是用高pMHC价态包被但以低密度制备的40nm GNP。与Au-032310样品相比，Au-022410具有出色的激动活性。Au-032310-C是用TUM/Kd包被的NP(阴性对照pMHC)。
图4示出保护性PEG对pMHC-GNP的功能的影响。Au-021910由受2kD巯基-PEG保护并且用约120个pMHC/GNP包被的约2×1013个直径为14nm的GNP组成)。Au-011810GNP(同样是每ml约2×1013个14nmGNP)受5kD巯基-PEG保护，并且被约175个pMHC/GNP包被。样品Au-021910清楚地具有优越的激动活性。
图5描绘了由定向包被的IGRP206-214-Kd-GNP引起的同源自调节性CD8+T细胞的体内扩增。血液或淋巴器官(胰腺的或肠系膜的淋巴结，分别为PLN和MLN)中与IGRP206-214-Kd四聚体结合的CD8+T细胞的平均％(n＝3只小鼠)。对照pMHC-GNP是通过相同方法制备但用疾病-不相关pMHC复合物(TUM/Kd)包被的GNP。
图6描绘了用pMHC包被的NP处理的小鼠中同源CD8+T细胞的大量扩增。上图：4次给药之后处死的小鼠的特征谱。下图：10次注射之后，两只不同小鼠的特征谱(仅血液；在提交(submission)时是活的)。
图7示出30,000×和40,000×放大的PBS中缀合有pMHC的Fe3O4纳米颗粒(IGRP/抗-CD28-SFPE-080411)。铁纳米颗粒(SFPE-072611)的核心大小为9.4nm。如通过Dot ELISA测量的，pMHC浓度为380μg/mL。如通过Dot ELISA测量的，抗-CD28浓度为124μg/mL。Fe浓度为700ug/mL(3.5×1014 pMHC-FeNP/mL)。如通过Dot ELISA测量的，pMHC价态为13pMHC/NP。如通过Dot ELISA测量的，抗CD28价态为1.4IgG/NP。
图8示出30,000×和40,000×放大的PBS中缀合有pMHC的Fe3O4纳米颗粒(IGRP-SFPE-080411)。铁纳米颗粒(SFPE-072611)的核心大小为9.4nm。如通过Dot ELISA测量的，pMHC浓度为340μg/mL。Fe浓度为500μg/mL(2.5×1014 pMHC-FeNP/mL)。如通过Dot ELISA测量的，pMHC价态为16pMHC/NP。
图9A-C示出缀合有pMHC的SFPE纳米颗粒的琼脂糖凝胶和非变性凝胶分析。图9A和9B所示的是考马斯蓝染色之前(图9A)和考马斯蓝染色之后(图9B)的琼脂糖凝胶，泳道1至5中上样的是：4μg的pMHC(泳道1)；2μg的pMHC(泳道2)；10μl的SFPE-080311(泳道3)；20μl的pMHC/抗-CD28-SFPE-080411(泳道4)和20μl的pMHC-SFPE-080411(泳道5)。图9C描绘了用以下上样的非变性凝胶：4μg的pMHC(泳道1)；2μg的pMHC(泳道2)；4μg的抗-CD28(泳道3)；2μg的抗-CD28(泳道4)；18μl的pMHC-SFPE-080411(泳道5)；18μlpMHC/抗-CD28-SFPE-0080411(泳道6)和10μl的SFPE-080311(泳道7)。
图10A-B示出8.3细胞对缀合有pMHC的SFPE-NP的IFN-γ应答和增殖应答。图10A描绘了pMHC-SFPE-080411的IFN-γ应答(IFNg，左图)和增殖应答(CPM，右图)。图10B描绘了pMHC/抗-CD28-SFPE-080411的IFN-γ应答(IFNg，左图)和增殖应答(CPM，右图)。
图11A-B示出mB7.1-hFcAA构建体的蛋白质和DNA序列。以如下方式突出了融合蛋白中各组分的序列：HA前导蛋白序列在白框中；mB7.1蛋白序列带下划线；hFcAA片段蛋白质序列有灰色阴影；BirA生物素化蛋白质序列在有对角线的框中，以及CH2区内的突变的FcR结合位点(LL至AA)标记有星号(A＊A＊)。
图12示出在次优浓度的抗-CD3(0.5μg/mL)的存在下，CD4+T细胞对mB7.1-hFc融合蛋白的增殖应答。该图说明如所设计的mB7.1-hFc融合蛋白可以有效地向TCR激活的T细胞递送共刺激信号。
发明详述
应理解，本发明不限于所述的特定实施方案，当然，因此可以变化。还应理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且不旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求书限制。
必须注意，如在本文中和所附权利要求书中所使用的，除非上下文中清楚地另有指明，否则单数形式包括复数指称。因此，例如，提及“赋形剂”包括多种赋形剂。
I.定义
除非另有指明，否则本文所使用的全部技术术语和科学术语与本发明所属领域普通技术人员所通常理解的含义相同。如本文所使用的，下述术语具有下述含义：
如本文所使用的，术语“包含”或“包括”意在表示组合物和方法包括所列举的元素，但不排除其它元素。当用于限定组合物和方法时，“基本由...组成”应表示就出于所述目的的组合而言，排除其它任意必不可少的重要元素。因此，基本由本文所限定的元素组成的组合物不排除在本质上不影响所要求保护之发明的基本特征和新特征的其它材料或步骤。“由...组成”应表示排除比其它成分的微量元素和后续方法步骤更多。由这些过渡术语中的每一个所限定的实施方案均在本发明的范围内。
“生物可相容”意指递送系统的组分不会引起组织损伤或者人生物系统的损伤。为了赋予生物相容性，将优先使用在人中具有安全使用史或者具有GRAS(一般接受为安全)状态的聚合物和赋形剂。生物相容性意指用于组合物中的成分和赋形剂最终将被机体“生物吸收”或者清除而对机体没有副作用。就生物可相容并且被认为无毒的组合物而言，其必须不对细胞造成毒性作用。类似地，术语“生物可吸收”是指由在体内经过一段时间而经历生物吸收的材料(使得避免材料在患者中长期积累)制成的纳米颗粒。在一个优选实施方案中，生物可相容纳米颗粒经过小于2年、优选小于1年并且更优选小于6个月的时间被生物吸收。生物吸收的速度与颗粒大小、所使用的材料和本领域技术人员所熟知的其它因素相关。生物可吸收、生物可相容材料的混合物可用于形成本发明所使用的纳米颗粒。在一个实施方案中，可以将氧化铁(III)与生物可相容、生物可吸收聚合物组合物。例如，可以将氧化铁(III)与PGLA组合以形成纳米颗粒。
抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物是指表面(如纳米颗粒)上肽、碳水化合物、脂类或者其它抗原性区段、片段或者抗原性分子或蛋白质的表位的呈递。本文所使用的“抗原”是指可以在对象中诱导免疫应答或者抗原特异性抗肿瘤发生T细胞扩增的分子的全部、一部分、片段或区段。
本文所使用的术语“共刺激分子”是指可以产生活化幼稚T细胞的共刺激信号的分子。幼稚T细胞的完全活化需要至少两种信号。第一信号由与MHC复合物结合的抗原呈递细胞所显示的抗原提供。第二信号是共刺激信号。该信号是涉及T细胞上的共刺激受体的激动信号。T细胞共刺激是T细胞增殖、分化和存活的关键组成。本发明涵盖能够产生共刺激信号的分子。因此，本发明不限于特定的共刺激分子。在一些实例中，共刺激分子是能够激动T细胞上的共刺激受体的抗体。
当用在数字标识(例如，温度、时间、量和浓度，包括范围)之前时，术语“约”表示可以变化(+)或(-)10％、5％或1％的近似值。
“杀伤”意指通过凋亡或坏死使得细胞死亡。凋亡或坏死可通过任何细胞死亡途径介导。
“免疫细胞”包括例如成体脾细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和骨髓来源的细胞，例如哺乳动物的缺陷型抗原呈递细胞，所述细胞对该免疫细胞所来源的生物体具有活性。
“模拟物”是给定配体或肽的类似物，其中所述类似物与所述配体基本类似。“基本类似”意为所述类似物具有类似于所述配体的结合谱，只是该模拟物具有一个或多个官能团或修饰，总计占所述配体分子量的少于约50％、少于约40％、少于约30％或者少于约20％、少于约10％或者少于约5％。
“有效量”是足以实现预期目的(例如对T细胞活性或T细胞群体的调节)的量。如在本文中详述的，有效量或剂量及施用频率取决于目的和所述抗原，并且其可根据本公开内容来确定。
“抗原特异性抗肿瘤发生T细胞”或“抗肿瘤发生T细胞”是包括于针对由癌细胞、癌前细胞、赘生性细胞或发育中的肿瘤引起的疾病之治疗的免疫应答中的T细胞。考虑向经受发生中的肿瘤或者有经受发生中的肿瘤之风险的患者施用与MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物共价结合的肿瘤特异性抗原将使幼稚T细胞分化为能够经历靶向具有所述肿瘤特异性抗原之癌细胞的免疫应答的T细胞。这样的癌细胞无需是实体瘤的形式，但也可以在血液中循环(如癌淋巴细胞)，或者通过机体迁移，如转移性细胞的情况。通过该方法扩增的特异性抗肿瘤发生T细胞包括但不限于抗肿瘤发生记忆CD4+和CD8+T细胞、抗肿瘤发生细胞毒性CD8+T细胞和抗肿瘤发生CD4+T辅助细胞。
当在权利要求书和/或说明书中使用时，术语“抑制”、“减少”或“预防”或者这些术语的任何变体包括任何可测量的降低或完全抑制，以达到预期结果。当术语预防涉及癌症时意为预防从癌前状态进展为癌状态。
术语“癌细胞”是指显示出一个或更多个癌症特征或标志的细胞。这样的癌症标志包括生长信号自给自足、对生长抑制(抗生长)信号不敏感、回避细胞程序性死亡(凋亡)、潜力无限的复制能力、持续的血管生成和组织浸润和转移。这些生理变化中的每一个-在肿瘤发育过程中获得的新能力-均代表抗癌防御机制进入(hardwire into)细胞和组织的成功突破口(breaching)。
术语赘生物是指由瘤形成引起的异常组织块。瘤形成是细胞的异常增殖。赘生性细胞的生长超过并与其周围的正常组织的生长不一致。该生长以相同的过度方式持续，即使刺激停止之后也是如此。赘生物可以是良性的、癌前的或癌的。在一个实施方案中，本文所述的组合物和方法涉及癌前细胞或癌细胞。本文所使用的“癌前”是癌症的早期形式，其由不存在肿瘤细胞浸润进入环境组织所限定。癌前还指发育异常(dysplasia)，其为病理学者在活检中可识别的癌前病变的最早形式。
在权利要求书和/或说明书中，当与术语“包括/包含”一起使用时，没有数词修饰的名词的使用可表示“一个”，也可以与“一个或多个”、“至少一个”以及“一个或多于一个”的意思相同。
术语“抗肿瘤发生”是指具有对抗肿瘤发生、细胞赘生物及癌症的保护作用的细胞。例如，“抗肿瘤发生CD8+T细胞”或“抗肿瘤发生CD4+T细胞”是指具有对抗肿瘤发育、赘生物和癌症的保护作用的细胞。“抗肿瘤发生CD8+T细胞”还指具有对抗其它疾病(例如在下文中的第V部分题为治疗靶标中所列举的那些)之保护作用的细胞。
本文中的“纳米颗粒”意为可施用给对象的小的离散颗粒。在一些实施方案中，所述纳米颗粒基本为球形。本文所使用的术语“基本为球形”意为颗粒外形与球形的偏差不超过约10％。可以将多种本发明的已知抗原或肽复合物施加给所述颗粒。纳米尺寸的纳米颗粒对于本发明而言是关键的，本发明颗粒的大小范围是直径为约1nm至约100nm，优选地，直径为约5nm至约15nm。在本发明的一些实施方案中，纳米颗粒的直径为约1nm至约25nm、直径为约1nm至约50nm或者直径为约5nm至约10nm。可以例如通过分级分离来获得较小的纳米尺寸颗粒，通过分级分离使得较大颗粒被置于水溶液中。然后回收溶液的上面部分。该上面部分富含较小尺寸的颗粒。可以重复该方法直至产生期望的平均大小。
术语“转移性细胞”是指已获得从原来的或初始的肿瘤病变部位迁移到周围组织的能力和/或已获得穿透淋巴细胞或血管壁并且通过血流循环的能力的细胞。本文所使用的术语“转移”是指癌细胞从机体中的一个部位迁移或扩散到周围组织、淋巴系统或血管。当肿瘤细胞转移时，将新肿瘤称为转移性肿瘤。
权利要求书中术语“或”的使用用于表示“和/或”，除非明确说明表示仅仅择一选择或者所述择一选择彼此互斥，尽管本公开内容支持表示仅仅择一选择以及“和/或”的定义。
本文所使用的术语“免疫原性剂”或“免疫原”或“抗原”可互换使用，以描述能够在单独或者与佐剂联合或者呈递在展示载体上施用给受体后诱导针对其自身的免疫应答的分子。
本文所使用的“氨基分子”是指本领域中已知的任何氨基酸、氨基酸衍生物或氨基酸模拟物。在一些实施方案中，蛋白性分子的残基是连贯的，没有任何非氨基分子插入在氨基分子残基的序列中。在另一些实施方案中，所述序列可包括一个或多个非氨基分子部分。在一些特定实施方案中，所述蛋白性分子的残基序列中可插入一个或更多个非氨基分子部分。
本文所使用的短语“免疫应答”或其等同形式“免疫学应答”是指发生针对肿瘤特异性抗原或肿瘤特异性抗原相关表位的细胞介导的免疫应答(由抗原特异性T细胞或其分泌物介导)。细胞免疫应答由与I类或II类MHC分子相关的多肽表位呈递引发，以活化抗原特异性CD4+T辅助细胞和/或CD8+细胞毒性T细胞。所述应答还可涉及其它组分的活化。
对于本说明书及所附权利要求而言，术语“表位”和“抗原决定簇”可互换使用，表示抗原上被B细胞和/或T细胞应答或识别的位点。B细胞表位可由连续氨基酸或者由于蛋白质三级折叠而靠近的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂后仍保持存在，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理后丧失。表位通常包括至少3个(更常见至少5个或8至10个)呈独特空间构象的氨基酸。确定表位空间构象的方法包括如X射线晶体学和二维核磁共振。参见，例如Epitope Mapping Protocols(1996)。CD8T细胞识别约9个氨基酸的连续表位，而CD4T细胞识别约13至15个氨基酸。可通过如下方法鉴定识别所述表位的T细胞：通过测量抗原依赖性增殖(如通过应答于表位而引发的已接触抗原(primed)T细胞的3H-胸苷掺入所确定的(Burke等，1994))的体外测定，通过抗原依赖性杀伤(细胞毒性T淋巴细胞测定，Tigges等，1996)或者通过细胞因子分泌。可通过增殖测定(CD4+T细胞)或CTL(细胞毒性T淋巴细胞)测定来确定细胞介导的免疫应答的存在情况。
任选地，抗原(或优选为抗原的表位)可以与其它蛋白质(例如MHC和MHC相关蛋白)化学缀合或表达成为融合蛋白。
如本文和权利要求中所使用的，术语“抗体”或“免疫球蛋白”可互换使用，来表示数类结构上相关蛋白中的任意种类，其充当动物或受体的免疫应答的一部分，所述蛋白质包括IgG、IgD、IgE、IgA、IgM和相关蛋白质。
因此，术语“蛋白性组分”涵盖了包含天然合成蛋白质中20种常见氨基酸中至少之一或者包含至少一个经修饰或非常见氨基酸的氨基分子序列。
如本文所使用的，术语“患者”和“对象”同义地使用，表示哺乳动物。在一些实施方案中，患者是人。在另一些实施方案中，患者是通常用于实验室中的哺乳动物，如小鼠、大鼠、猿、犬、猫、牛、马或绵羊。
如本文所使用的，术语“治疗”意指患者中的疾病或病症或者相关症状的任何治疗，包括：
●抑制疾病或病症，即，阻滞或抑制临床症状(如癌症中的恶病质)的恶化；和或
●缓解疾病或病症，即，使临床症状衰退，例如，提高总体生存(overallsurvival)或降低肿瘤负荷。
在一些方面中，术语治疗是指临床结局的改善。术语“临床结局”是指任何与患者对治疗的反应相关的临床观察或测量结果。临床结局的非限制性实例包括肿瘤应答(tumor response，TR)、总体生存期(overallsurvival，OS)、无进展生存期(progression free survival，PFS)、无疾病生存期、肿瘤复发时间(time to tumor recurrence，TTR)、肿瘤进展时间(time to tumor progression，TTP)、相对风险(relative risk，RR)、细胞毒性或副作用。“总体生存期”(OS)是指与初始的或未经处理的个体或患者相比平均寿命的延长部分。“无进展生存期”(PFS)或“肿瘤进展时间”(TTP)表示治疗过程中及治疗后肿瘤不生长的时间长度。无进展生存期包括患者经历完全应答或部分应答的时间量，以及患者经历稳定疾病的时间量。本文所使用的并且由国家癌症研究院(National CancerInstitute)所限定的“肿瘤复发”是复发(返回)的癌症，通常在癌症无法被检测出的一段时间后。所述癌症可以返回到与初始(原来的)肿瘤相同的位置或者返回到机体中的另一位置。其也称为复发癌症。“肿瘤复发时间”(TTR)定义为从诊断出癌症的日期到第一次复发、死亡或者直至最后接触(如果在最后接触时患者没有任何肿瘤复发的话)的日期的时间。如果患者未复发，那么在死亡时或者在最后跟踪时检查TTR。在统计学和数学流行病学中，“相对风险”(RR)是指事件(或者产生疾病)相对于暴露的风险。相对风险是在暴露组相比于未暴露组中事件发生的可能性之比。
本发明的其它目的、特征和优点将从以下详述而变得明显。但是，应理解，所述详述和具体实施例尽管示出了本发明的一些具体实施方案，但是仅以举例形式给出，这是因为通过此详述本发明的精神和范围之内的多种变化和修饰对于本领域技术人员而言将变得明显。
考虑用抗原/MHC/共刺激分子复合物(抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物)包被的纳米颗粒将扩增靶向癌细胞的抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体。还认为一种这样的群体为抗原特异性抗肿瘤发生记忆T细胞。还考虑不含共刺激分子的抗原/MHC/纳米颗粒复合物的后续施用将扩增和/或活化所述抗原特异性抗肿瘤发生记忆T细胞的预先存在的合并物。考虑该技术将在体内扩增抗肿瘤发生T细胞。在一些实施方案中，全部循环CD8+T细胞的约17％至约47％是由包被有抗原-MHC复合物的纳米颗粒的施用而产生的抗原特异性T细胞。考虑向患者施用包被有肿瘤特异性抗原/MHC/共刺激分子复合物的纳米颗粒将导致循环抗原特异性CD8+T细胞扩增总循环T细胞的约5％至约90％或约10％至约80％、或约10％至约50％、或约50％至约90％、或约20％至约50％、或约30％至约60％、或约35％至约65％、或约40％至约70％、或约45％至约75％、或约50％至约80％、或约25％至约55％。
II.药物组合物和施用
本发明包括用于预防、减轻或治疗患有癌细胞、赘生性细胞、转移性细胞或发生中肿瘤相关疾病的患者的方法。由此，本发明考虑在多个实施方案中使用“疫苗”或免疫系统调节剂。提出适于用作疫苗的组合物可以由肿瘤特异性抗原性分子制备。本发明包括用于诱导或调节针对肿瘤特异性抗原(例如多肽、肽、碳水化合物、脂类或其它分子或分子片段)的免疫应答的组合物和方法。
本发明的一个方面是用于在易于发生所述癌细胞生长的患者中防止癌细胞生长的方法。对于某些类型的癌症而言，肿瘤特异性抗原是良好表征的。在这些实例中，有产生所述癌症之风险的患者可以用对所述癌症具有抗原特异性的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物来免疫。
本发明组合物的施用通常通过任何常用途径来实现。其包括但不限于肠胃外、正位、皮内、皮下、肌内、腹膜内、鼻内或者静脉内注射。在一些实施方案中，疫苗组合物可以被吸入(例如美国专利号6,651,655，其特别通过引用整体并入本文)。适用于其它施用模式的其它制剂包括口服制剂。口服制剂包含通常所用的赋形剂，例如药用级甘露糖、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物采用溶液剂、混悬剂、片剂、丸剂、胶囊剂、持续释放制剂或粉剂的形式，并含有约10％至约95％的活性成分，优选约25％至约70％。
通常，本发明的组合物以治疗有效性和免疫调节性的量，以相容于给药制剂和频率的形式施用。待施用的量取决于待治疗对象。需要施用的活性成分的精确量取决于执业医师的判断。但是，合适的剂量范围是从每次施用10纳克至数百纳克级别或者微克级别的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物。合适的初次施用和加强方案也是多样的，但是通常为初次施用，然后是后续施用。
应用的方式可以多种多样。任何施用疫苗的常规方法都可以应用。认为这些包括在固体生理可接受基质上或者在生理可接受分散体系中经口施用，通过注射胃肠外施用，等等。抗原/MHC/共刺激纳米颗粒复合物的剂量取决于施用途径、施用频率，并且可以根据对象的体型大小和健康状况而改变。
在许多例子里，会期望多次施用肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，约、至多约或者至少约3、4、5、6、7、8、9、10或更多次。所述施用通常间隔2天至12周，更通常间隔1周至2周。间隔0.5至5年(通常2年)定期加强对于维持免疫系统的状况来说是理想的。施用过程之后可以针对监测疗法和治疗对免疫应答和T细胞活性进行测定。由此，本方法可以与用于监测免疫疗法的已知方法组合以向患者提供治疗过程直至达到期望的临床终点。
A.组合疗法
本发明的组合物和相关方法(特别是抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的施用)还可联合传统疗法的施用一起应用。
在一个方面中，考虑抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物与细胞因子治疗联合使用。或者，抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物施用可以在其它治疗之前或之后进行，其间间隔数分钟到数周。在一些实施方案中，其它药剂和/或抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物分开施用，一般可以确保每次递送之间不会超过一定的间隔，使得所述药剂和抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物仍能够发挥对所述对象的有利联合作用。在这些实例中，考虑可以将两种形式彼此在约12至24小时之内施用，更优选地，彼此在约6至12小时之内施用。在一些情况下，可能期望将施用时间段显著延长，但是各次施用之间间隔数天(2、3、4、5、6或7)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8)。
可以利用多种组合，例如抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物施用是“A”，另一药剂是“B”：
A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B
B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A/B/B/A/A
B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A
本发明的肽-MHC-共刺激复合物组合物将按照此类化合物的一般施用方案施用给患者/对象，并考虑其毒性(如果有的话)。预计按照需要来重复治疗周期。还考虑可以将多种标准疗法例如水化疗法(hydration)与所述疗法联合应用。
B.药物组合物
在一些实施方案中，将药物组合物施用给对象。本发明的不同方面包括将有效量的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物组合物施用给对象。另外，这些组合物可以与免疫系统调节剂联合施用。这些组合物一般溶解或分散在可药用载体或水性介质中。
短语“可药用”或者“药理学上可接受”是指在施用给动物或人时不产生有害的、变应性的或其它不良的反应的分子实体和组合物。如本文所用的，“可药用载体”包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等等。用于药物活性物质的这些介质和试剂的使用在本领域中是公知的。除了与所述活性成分不相容的常规介质或试剂之外，均考虑将其用于免疫原性和治疗组合物。
本发明的活性化合物可配制成用于肠胃外施用，例如配制成用于通过静脉内、肌内、皮下或者甚至腹膜内途径注射。在本发明公开内容的教导下，含有调节对象免疫应答的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的含水组合物的制备是本领域技术人员已知的。通常，这些组合物可被制备成注射剂：液体溶液或悬液；也可以制备成适用于注射之前通过加入液体而制备溶液或混悬液的固体形式；所述制剂还可以是乳化剂。
适用于注射应用的药物形式包括：无菌水溶液或分散系；包括芝麻油、花生油或丙二醇水溶液的制剂；以及用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉剂。在所有情况下，所述形式必须是无菌的，并且必须是易于注射程度的流体。其还应该是在制备和储存条件下稳定的，并且必须被保护以抵抗微生物例如细菌和真菌的污染作用。
所述组合物可被配制成中性或盐形式。可药用盐包括酸加成盐(与所述蛋白质的游离氨基形成)，它是与无机酸形成的，例如盐酸或磷酸，或者有机酸，例如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等等。与游离羧基形成的盐可以来自于无机碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，以及有机碱，例如异丙基胺、三甲基胺、组氨酸、普鲁卡因等等。
载体还可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适混合物，以及植物油。可例如通过使用包衣(例如卵磷脂)、通过维持所需粒径(对于分散体系的情况)，以及通过使用表面活性剂，来保持合适的流动性。可以通过多种抗菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等等)来预防微生物的作用。在许多情况下，优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。可通过使用吸收吸附剂的组合物例如单硬脂酸铝和明胶来得到注射用组合物的延长吸收。
可如下制备无菌注射液：将所需量的活性化合物掺入按照需要具有多种其它上文所列成分的合适溶剂，然后灭菌。溶液的灭菌将以这样的方式来完成：不降低肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒的抗病原性特性。一般来说，通过将多种无菌活性成分加入到含有基础分散介质和来自上文所列的所需其它成分的无菌载体来制备分散体系。在用于制备无菌注射用溶液的无菌粉剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生所述活性成分的粉末，加上来自其之前无菌溶液的任何其它所需成分。这样的一种溶液灭菌方法是无菌过滤，但是，本发明意在包括任何不显著降低肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的抗病原性特性的灭菌方法。涉及剧烈的热和压力的灭菌方法(如高压灭菌)可破坏复合物的三级结构，因而显著降低肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的抗病原性特性。
根据预定目的确定治疗或预防组合物的有效量。术语“单位剂量”或“剂量”是指适用于对象的物理上分散的单位，每个单位含有预定量的组合物，其经计算产生上文在论及施用时(即合适的途径和方案)所述的所需应答。由治疗次数和单位剂量决定的待施用量取决于期望的结果和/或保护。组合物的精确量还取决于执业医师的判断，对于每个个体来说都是特有的。影响剂量的因素包括对象的身体和临床状态、施用途径、预定治疗目标(减轻症状还是治愈)，以及特定组合物的效力、稳定性和毒性。在制备后，溶液以与给药制剂相容的形式以治疗或预防有效量施用。所述制剂以多种给药形式容易地施用，例如上文所述的注射用溶液类型。
C.体外或离体施用
如本文所使用的，术语“体外施用”是指对从对象中取出的细胞或者位于对象之外的细胞进行操作，包括但不限于培养细胞。术语“离体施用”是指已在体外进行过操作的细胞接着被施用给对象。术语“体内施用”包括在对象体内进行的所有操作，包括施用。
在本发明的一些方面中，所述组合物可以体外、离体或体内施用。在某些体外实施方案中，自体T细胞与本发明组合物一起孵育。然后所述细胞可用于体外分析，或者用于离体施用。
III.抗原/MHC复合物和共刺激分子
抗原，包括来源于抗原性物质(包括但不限于肽、碳水化合物、脂类或本发明的经典和非经典MHC分子所呈递的其它分子)的区段、片段或其它分子，通常与MHC分子或其衍生物复合或有效偶联。T淋巴细胞对抗原的识别是主要组织相容性复合物(MHC)限制性的。给定T淋巴细胞仅识别与特定MHC分子结合的抗原。一般来说，T淋巴细胞仅在自身MHC分子存在时被激活，抗原作为与自身MHC分子相结合的抗原片段被识别。MHC限制性在所识别抗原方面以及与其抗原性片段结合的MHC分子方面限定了T淋巴细胞的特异性。在一些具体方面，某些抗原会与特定MHC分子或来源于其的多肽配对。
本文所用的术语“有效连接”或“包被”是指在与靶位点(例如免疫细胞)结合之前，各个多肽组分(例如MHC)和抗原性组分(例如肽)组分相结合形成活性复合物。这包括以下情况：在施用给对象之前，在体外合成或重组表达各个多肽复合物组分，然后分离并结合以形成复合物；嵌合或融合多肽(即所述复合物每个独立的蛋白质组分包含在单个多肽链中)合成或重组表达成完整复合物。通常，将多肽复合物添加到纳米颗粒，以形成吸附有或偶联有多肽复合物的纳米颗粒，其分子数∶纳米颗粒数比为约、至少约或至多约0.1、0.5、1、10、100、500、1000或更多比1，更常见0.1∶1至50∶1。可以使用标准技术确定所述纳米颗粒的多肽含量。
A.共刺激分子组分
共刺激分子是在体内产生第二信号的分子，其用于将幼稚T细胞活化为能够对具有所述特异性抗原的细胞产生免疫应答的抗原特异性T细胞。本发明不限于任何特定共刺激分子。在本领域中公知多种共刺激分子。共刺激分子的一些非限制性实例是B7.1、4-IBBL、CD40、IL-15/IL-15Ra、CD28、CD80、CD86和ICOS。可以只有一种特定共刺激分子与一种纳米颗粒偶联，或者可以多种共刺激分子与同一纳米颗粒偶联。在一些实施方案中，共刺激分子是蛋白质，如能够激动T细胞上的共刺激受体的抗体。在这种情况下，抗体能够诱导活化幼稚T细胞所必须的共刺激信号以及以抗原特异性方式诱导免疫应答。
共刺激分子可以以与抗原/MHC复合物相同的方式与纳米颗粒偶联。在本发明的一个实施方案中，共刺激分子和抗原/MHC复合物分开地连接到纳米颗粒。在本发明的另一实施方案中，共刺激分子和抗原/MHC复合物首先复合到一起，然后接着与纳米颗粒复合。通常而言，将多肽复合物添加到纳米颗粒，以产生吸附有或偶联有多肽复合物的纳米颗粒，其分子数∶颗粒数比为约、至少约或至多约0.1、0.5、1、10、100、500、1000或更多比1，更常见0.1∶1至50∶1。可以使用标准技术确定所述纳米颗粒的多肽含量。共刺激分子与抗原/MHC复合物之比可以为约0.1、0.5、1、2、5、10、50或更多比1，优选地获得共刺激分子∶抗原/MHC复合物的比为1∶1。
B.MHC分子
细胞内和细胞外抗原在识别和合适应答方面都给免疫系统带来完全不同的挑战。抗原呈递到T细胞是由两类不同的分子介导的：I类MHC(MHC-I)和II类MHC(MHC-II)，它们利用不同的抗原加工途径。来自胞内抗原的肽被在几乎所有细胞上表达的I类MHC分子呈递给CD8+T细胞，而来自胞外抗原的肽被II类MHC分子呈递给CD4+T细胞。但是，此二分法有一些例外情况。一些研究显示，从被胞吞的颗粒或可溶蛋白产生的肽在巨噬细胞和树突细胞中的MHC-I分子上呈递。在本发明的一些实施方案中，鉴定了来源于肿瘤特异性抗原的特定肽，其在合适的I类或II类MHC多肽背景下在肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物中呈递。在一些方面中，可评估对象的遗传组成，以确定将哪种MHC多肽用于特定患者和特定的肽集合。
还考虑将非经典MHC分子用于本发明的MHC复合物。非经典MHC分子是在物种之间非多态性的、保守的，并且具有窄且深的疏水配体结合口袋。这些结合口袋能够将糖脂和磷脂呈递给自然杀伤T(NKT)细胞。NKT细胞代表一类独特的淋巴细胞群体，其共表达NK细胞标志物和半恒定T细胞受体(TCR)。它们参与与许多种疾病相关的免疫应答的调控。
C.抗原性组分
本发明的一些方面包括涉及抗原性组合物的方法和组合物，所述抗原性组合物包括多肽、肽、核酸、碳水化合物、脂类和其它引起或诱导抗原性应答之分子的区段、片段或表位，一般称其为抗原。特别地，可鉴定通过免疫应答导致细胞破坏的抗原或这些抗原的抗原性区段或片段，并将其用于产生本文所述的MHC/纳米颗粒复合物。这些抗原可呈递到肿瘤细胞上并且对肿瘤细胞具有特异性。本发明的一些实施方案包括用于调节针对发挥特定生理功能之特定细胞或细胞群体的免疫应答的组合物和方法。肿瘤抗原的实例包括在下表中公开的抗原：
Figure BDA00003173643900221
Figure BDA00003173643900231
Figure BDA00003173643900241
Figure BDA00003173643900251
1.肽组分和蛋白性组分
可以通过多种氨基酸缺失、插入和/或替换来修饰本发明的多肽和肽。在一些特定实施方案中，经修饰的多肽和/或肽能够调节对象中的免疫应答。如本文所使用的，“蛋白质”或“多肽”或“肽”是指包含至少5个氨基酸残基的分子。在一些实施方案中，利用野生型形式的蛋白质或肽，但是，在本发明的许多实施方案中，利用经修饰的蛋白质或多肽来产生肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物。可使用肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物来产生免疫应答和/或修饰免疫系统的T细胞群体(即重新诱导(re-educate)免疫系统)。上文所述术语在本文中可互换使用。“经修饰蛋白质”或“经修饰多肽”或“经修饰肽”是指化学结构特别是氨基酸序列相对于野生型蛋白质或多肽发生变化的蛋白质或多肽。在一些实施方案中，经修饰蛋白质或多肽或肽至少具有一种经修饰的活性或功能(在认可蛋白质或多肽或肽可具有多种活性或功能的情况下)。特别地，考虑在MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物的背景下，经修饰的蛋白质或多肽或肽可以在一种活性或功能方面发生变化，但是保留其它方面的野生型活性或功能，例如免疫原性或与免疫系统的其它细胞相互作用的能力。
本发明的肽包括发现在机体中对癌细胞或癌前细胞具有特异性的肽。这些肽可以与特定的纳米颗粒/MHC/共刺激分子相结合，或者多个肽可以与共同的纳米颗粒和一个或多个MHC分子相结合。这些肽组合的施用包括施用一组附着有多种肽的纳米颗粒和/或施用各自附着有一种特定肽的多个纳米颗粒的组，或者这些纳米颗粒的组合，其包括这样的纳米颗粒，其中1、2、3、4、5、6或更多种纳米颗粒附着有1、2、3、4、5、6或更多种肽。
在一些实施方案中，蛋白质或多肽(野生型或经修饰的)(包括目的蛋白质或肽的任何复合物，特别是MHC/肽融合物)的大小可包含但不限于5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1750、2000、2250、2500个氨基分子或更多(包括其中可推导出的任何范围或值)，或其衍生物。在一些方面中，可使用抗原的5、6、7、8、9、10或更多个连续氨基酸(包括其衍生物)和片段(例如本文公开和参考的那些氨基酸序列)作为抗原。考虑可以通过截短对多肽进行突变，使得其比相应野生型更短，但是也可以通过融合或缀合具有特定功能(例如作为蛋白复合物呈递，以增强的免疫原性，等等)的异源蛋白质序列而使其改变。
可通过本领域技术人员已知的任何技术来制备蛋白性组分，所述技术包括：(i)通过标准分子生物学技术表达蛋白质、多肽或肽，(ii)从天然来源分离蛋白性化合物，或(iii)化学合成蛋白性材料。多个基因的核苷酸以及蛋白质、多肽和肽序列之前已经公开，并且可以在公认的计算机化数据库中找到。一个这样的数据库是National Center forBiotechnology Information的GenBank和GenPept数据库(互联网地址是ncbi.nlm.nih.gov/)。可以使用本文公开的技术或本领域普通技术人员已知的技术扩增和/或表达这些基因的编码区的全部或一部分。
这些组合物的抗原性表位和其它多肽的氨基酸序列变体可以是替换、插入或缺失变体。相比于野生型，本发明多肽中的修饰可以影响肽或多肽的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、235、236、237、238、239、240、241、242、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500个或更多个非连续或连续氨基酸。考虑将导致免疫应答的肽或多肽用于本发明方法中。
缺失变体通常缺少天然或野生型氨基酸序列中的一个或多个残基。可以缺失单个残基或者缺失数个连续氨基酸。可以将终止密码子(通过替换或插入)引入编码核酸序列中，以产生截短蛋白质。插入突变体通常包括在多肽的非终止位点加入材料。这可以包括插入一个或多个残基。还可以产生被称为融合蛋白的末端添加。
替换变体通常包含在所述蛋白质中的一个或多个位点用一个氨基酸替换另一个，并可设计成调节所述多肽的一个或多个特性，而同时丧失或不丧失其它功能或特性。替换可以是保守的，也就是说，一个氨基酸被形状和电荷相似的另一个氨基酸所替换。保守替换在本领域中是公知的，包括例如以下替换：丙氨酸替换成丝氨酸；精氨酸替换成赖氨酸；天冬酰胺替换成谷氨酰胺或组氨酸；天冬氨酸替换成谷氨酸；半胱氨酸替换成丝氨酸；谷氨酰胺替换成天冬酰胺；谷氨酸替换成天冬氨酸；甘氨酸替换成脯氨酸；组氨酸替换成天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸替换成亮氨酸或缬氨酸；亮氨酸替换成缬氨酸或异亮氨酸；赖氨酸替换成精氨酸；甲硫氨酸替换成亮氨酸或异亮氨酸；苯丙氨酸替换成酪氨酸；亮氨酸或甲硫氨酸；丝氨酸替换成苏氨酸；苏氨酸替换成丝氨酸；色氨酸替换成酪氨酸；酪氨酸替换成色氨酸或苯丙氨酸；以及缬氨酸替换成异亮氨酸或亮氨酸。或者，替换可以是非保守的，使得多肽或肽的功能或活性(例如对细胞受体的亲合力或亲和性)受到影响。非保守改变通常包括将残基替换为化学上不相似的残基，例如用极性或带电氨基酸替换非极性或不带电氨基酸，反之亦然。
本发明的蛋白质可以是重组的，或者体外合成的。或者，重组蛋白可以分离自细菌或其它宿主细胞。
本文使用的术语“功能等价密码子”是指编码相同氨基酸的密码子，例如精氨酸或丝氨酸的6个密码子，也是指编码生物学等价氨基酸的密码子(参见表2，下文)。
表2密码子表
Figure BDA00003173643900291
还应理解，氨基酸和核酸序列可包含额外残基，例如分别包含额外的N端或C端氨基酸，或者5’或3’核酸序列，但仍然基本如本文所公开的序列之一所给出的，只要所述序列满足上文给出的标准(包括保持蛋白质生物活性(例如免疫原性))即可。末端序列的添加特别适用于例如可包含位于编码序列5’或3’部分任一侧翼的多种非编码序列的核酸序列。
考虑在本发明组合物中，每毫升中有约0.001mg至约10mg总蛋白。因此，组合物中蛋白质浓度可以为约、至少约为或至多约为0.001、0.010、0.050、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、50、100μg/ml或mg/ml或更多(或其中可推导出的任何范围)。其中约、至少约或至多约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100％可以是肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物。
本发明考虑施用肽/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，以实现对癌症、赘生性细胞或肿瘤发育相关疾病或病症的治疗或预防疗法。
另外，美国专利号4,554,101(Hopp)教导了以亲水性为基础从一级氨基酸序列中鉴定和制备表位，其通过引用并入本文。通过Hopp中所公开的方法，本领域技术人员能够从氨基酸序列中鉴定可能的表位，并确定它们的免疫原性。许多科学出版物也致力于从氨基酸序列分析中预测二级结构和鉴定表位(Chou&Fasman，1974a，b；1978a，b；1979)。如果需要，可以使用这些技术中的任意技术来补充Hopp在美国专利号4,554,101中的教导。
2.其它抗原性组分
可以使用除肽以外的分子作为与MHC分子复合的抗原或抗原性片段，此类分子包括但不限于碳水化合物、脂类、小分子等。碳水化合物是多种细胞外表面的主要组分。某些碳水化合物是不同分化阶段的特征，并且这些碳水化合物经常被特异性抗体所识别。不同碳水化合物的表达可局限于特定的细胞类型中。针对子宫内膜和血清抗原的自身抗体应答已示出是子宫内膜易位的常见特征。已描述了子宫内膜易位中针对数种之前所鉴定抗原(包括2-HS糖蛋白(2-HeremansSchmidt glycoprotein)和碳酸酐酶)的血清自身抗体应答，它们对碳水化合物表位具有特异性(Yeaman等，2002)。
D.基质/纳米颗粒
在一些方面中，抗原/MHC复合物与基质有效偶联。基质可以是包含生物可相容、生物可吸收材料的纳米颗粒形式。基质还可以是纳米颗粒(如之前在美国公开号2009/0155292(其通过引用整体并入本文)中所述的那些)的形式。纳米颗粒可具有多种尺寸的结构，不同地称为纳米球、纳米颗粒或生物可相容生物可降解的纳米球或生物可相容生物可降解的纳米颗粒。这些含有抗原/MHC复合物的颗粒化制剂可以通过所述复合物与所述纳米颗粒的共价或非共价偶联而形成。
所述纳米颗粒通常由基本为球形的芯核和任选的一个或多个层组成。所述芯核可为多种尺寸和组成。除了芯核之外，所述纳米颗粒可以具有一个或多个层，以提供适于目的应用的功能。层(如果存在)的厚度可以根据特定应用的需要有所不同。例如，层可以赋予有用的光学特性。
层还可以赋予化学或生物学功能，本文称为化学活性或生物学活性层，就这些功能而言，所述层的厚度范围通常可以为约0.001微米(1纳米)至约10微米或更大(取决于所需纳米颗粒直径)，这些层通常施加在所述纳米颗粒的外表面上。
所述芯核和层的组成可以有所不同。用于颗粒或芯核的合适材料包括但不限于聚合物、陶瓷、玻璃、矿物等。实例包括但不限于：标准玻璃和特种玻璃、二氧化硅、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、丙烯酸聚合物、聚丙烯酰胺、聚丙烯腈、聚酰胺、含氟聚合物、硅酮、纤维素、硅、金属(如铁、金、银)、矿物(如红宝石)、纳米颗粒(如金纳米颗粒、胶体颗粒、金属氧化物、金属硫化物、金属硒化物和磁性材料，例如铁氧化物)，及其复合材料。所述芯核可以为均质组成，或者根据所需特性为两种或更多种材料的复合材料。在一些方面中，将使用金属纳米颗粒。这些金属颗粒或纳米颗粒可以由Au、Pt、Pd、Cu、Ag、Co、Fe、Ni、Mn、Sm、Nd、Pr、Gd、Ti、Zr、Si、和In、前体、其二元合金、其三元合金及其金属间化合物形成。参见美国专利6,712,997，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，所述芯核和层的组成可不同，前提是纳米颗粒是生物可相容和生物可吸收的。芯核可以为均质组成，或者根据所需特性为两种或更多种材料的复合材料。在一些实施方案中，将使用金属纳米球。这些金属纳米颗粒可由Fe、Ca、Ga等形成。
如之前所述，纳米颗粒中除了芯核之外还可包括一个或更多个层。所述纳米颗粒可包含由生物可降解的糖或其他聚合物组成的层。生物可降解的层的实例包括但不限于葡聚糖；聚(乙二醇)；聚(环氧乙烷)；甘露醇；基于聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚己酸内酯(PCL)；PHB-PHV类的聚(羟基烷酸酯)；及其他经修饰的聚糖如淀粉、纤维素和壳聚糖。此外，所述纳米颗粒可包括具有用于附着化学官能部分用作化学结合或偶联位点的合适表面的层。
层可以在纳米颗粒上以本领域技术人员已知的多种方式产生。实例包括溶液-凝胶化学技术，例如Iler(1979)；Brinker和Scherer(1990)中所描述的。其它在纳米颗粒上产生层的方法包括表面化学和包封技术，例如Partch和Brown(1998)；Pekarek等(1994)；Hanprasopwattana(1996)；Davies(1998)及其中的参考文献所描述的。还可以使用气相沉积技术，参见例如Golman和Shinohara(2000)；和美国专利号6,387,498。其它一些方法包括层-层自组装技术，例如Sukhorukov等(1998)；Caruso等(1998)；Caruso等(1999)；美国专利号6,103,379及其中所引用的参考文献所描述的。
可通过下述步骤形成纳米颗粒：将含有抗原/MHC/共刺激分子复合物及聚合物的水相与非水相相接触，然后蒸发非水相，以使水相中的颗粒发生聚并，如美国专利号4,589,330或4,818,542中所教导的。用于此制备方法的优选聚合物是选自以下的天然或合成的共聚物或聚合物：明胶琼脂、淀粉、阿拉伯半乳聚糖、白蛋白、胶原、聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)-丙交酯聚(ε-己内酯、聚(ε-己内酯-CO-乳酸)共聚物、聚(ε-己内酯-CO-乙醇酸)共聚物、聚(β-羟基丁酸)、聚(环氧乙烷)、聚乙烯、聚(烷基-2-氰基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、聚酰胺、聚氨基酸、聚(2-羟乙基DL-天冬酰胺)、聚酯脲、聚(L-苯丙氨酸/乙二醇/1，6-己二异氰酸酯)和聚(甲基丙烯酸甲酯)。特别优选的聚合物是聚酯，例如聚乙醇酸、聚乳酸、乙交酯-L(-)-丙交酯聚(ε-己内酯、聚(ε-己内酯-CO-乳酸)共聚物和聚(ε-己内酯-CO-乙醇酸)共聚物。可用于溶解所述聚合物的溶剂包括：水、六氟异丙醇、亚甲基氯、四氢呋喃、己烷、苯或者六氟丙酮倍半水合物。
E.将抗原-MHC和共刺激分子复合物与纳米颗粒偶联
为了将所述基质或纳米颗粒与抗原-MHC和共刺激分子复合物偶联，可以采用下述技术。
可通过对基质或纳米颗粒进行化学修饰来产生结合，通常包括在表面上产生“官能团”，所述官能团能够与抗原-MHC复合物、共刺激分子结合，和/或将所述基质或纳米颗粒的经任选化学修饰的表面与共价或非共价结合的所谓“连接分子”相连，然后使所述抗原-MHC复合物和共刺激分子与所获得的纳米颗粒反应。
术语“连接分子”意为能够与所述基质或纳米颗粒连接并且还能够与抗原-MHC-共刺激分子复合物相连的物质。
本文所使用的术语“官能团”不仅限于形成共价键的反应性化学基团，还包括导致与所述抗原-MHC-共刺激分子复合物形成离子相互作用或氢键的化学基团。另外，应注意，严格区分在表面上产生的“官能团”与带有“官能团”的连接分子是不可能的，因为对表面的修饰有时需要较小的连接分子(例如乙二醇)与所述纳米颗粒表面的反应。
官能团或带有它们的连接分子可选自：氨基、羧酸基、巯基、硫醚、二硫化物、胍基、羟基、胺基、邻二醇、醛、α-卤代乙酰基、汞有机物、酯基、酰卤、硫酯、酸酐、异氰酸酯、异硫代氰酸酯、磺酰卤、亚胺酯、重氮乙酸酯、重氮盐、1，2-二酮、磷酸、磷酸酯、磺酸、氮杂内酯(azolide)、咪唑、吲哚、N-马来酰亚胺、α-β-不饱和羰基化合物、芳基卤化物或其衍生物。
其它更高分子量的连接分子的非限制性实例有核酸分子、聚合物、共聚物、可聚合偶联剂、二氧化硅、蛋白质，以及表面具有与所述基质或纳米颗粒相反极性的链状分子。核酸可提供与自身含有核酸分子的亲和分子的连接，通过所述连接分子的互补序列来实现。
可举出的可聚合偶联剂的实例有：联乙炔、苯乙烯丁二烯、乙酸乙烯酯、丙烯酸酯、丙烯酰胺、乙烯基化合物、苯乙烯、硅氧化物、硼氧化物、磷氧化物、硼酸酯、吡咯、聚吡咯和磷酸酯。
所述基质或纳米颗粒的表面可进行化学修饰，例如通过结合带有功能性反应基团的磷酸衍生物来修饰。这些磷酸或磷酸酯衍生物的一个实例是亚氨基-双(甲叉磷酸基)碳酸，其可以通过“Mannich-Moedritzer”反应合成。这一结合反应可以用从制备过程直接获得的或者预处理(例如用三甲基硅烷基溴化物)之后的基质或纳米颗粒来进行。在第一种情况下，磷酸(酯)衍生物例如可以替换反应介质中仍与所述表面结合的组分。在较高温度下可增强该替换。另一方面，认为三甲硅烷基溴化物使得含有烷基的基于磷酸的络合剂脱烷基化，由此产生新的磷酸(酯)衍生物的结合位点。所述磷酸(酯)衍生物或者与其结合的连接分子可以显示与如上所述相同的官能团。对基质或纳米颗粒进行表面处理的另一个实例包括在二醇(例如乙二醇)中加热。应注意，如果已在二醇中进行合成，那么这一处理可能是多余的。在这些情况下，直接获得的合成产物很可能显示必要的官能团。但是，此处理适用于在含N或P的络合剂中产生的基质或纳米颗粒。如果对这些基质或颗粒用乙二醇进行后续处理，那么反应介质中仍与所述表面相结合的成分(例如络合剂)可以被二醇所替换和/或被脱烷基化。
还可以用带有第二官能团的伯胺衍生物替换仍与所述颗粒表面连结合的含N络合剂。所述基质或纳米颗粒的表面还可由二氧化硅包被。二氧化硅允许进行相对简单的有机分子化学缀合，因为二氧化硅易于与有机接头(例如三乙氧基硅烷或氯硅烷)发生反应。所述纳米颗粒表面还可以由同聚物或共聚物包被。可聚合偶联剂的实例为：N-(3-氨基丙基)-3-巯基苯甲酰胺、3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基酰肼和3-三甲氧基甲硅烷基)丙基马来酰亚胺。另一些可聚合偶联剂的非限制实例在本文中给出。这些偶联剂可根据待生成作为包衣的共聚物的类型单独或组合使用。
可用于含有过渡金属氧化物的基质或纳米颗粒的另一种表面修饰技术是通过氯气或有机氯化剂将过渡金属氧化物转变成相应的氯氧化物。这些氯氧化物能够与生物分子中常见的亲核试剂(例如羟基或氨基)反应。这一技术允许产生与蛋白质(例如通过赖氨酸侧链的氨基)的直接缀合。在用氯氧化物进行表面修饰后，与该蛋白质的缀合还可以通过使用双功能接头(例如马来酰亚胺丙酸酰肼)来实现。
对于非共价连接技术，具有与所述基质或纳米颗粒表面相反之极性或电荷的链状分子是特别合适的。可以非共价连接到芯核/壳纳米颗粒的连接分子的实例包括阴离子、阳离子或两性离子型表面活性剂；酸性或碱性蛋白质；聚胺、聚酰胺、聚砜或者聚羧酸。基质或纳米颗粒与带有功能性反应基团的两亲性试剂之间的疏水相互作用可产生所需连接。具体地，可以使用可彼此交联的有两亲特性的链状分子(例如磷脂或衍生多糖)。可通过共孵育来实现将这些分子吸附在所述表面上。亲和分子与基质或纳米颗粒之间的结合还可基于非共价自组织键。其中一个实例包括带有生物素作为连接分子的简单检测探针，以及亲和素或链霉亲和素偶联分子。
用于官能团与生物分子的偶联反应的方案可以在文献中找到，例如在″Bioconjugate Techniques″(GregT.Hermanson，Academic Press1996)中。所述生物分子(例如MHC分子或其衍生物)可以按照有机化学的标准步骤(例如氧化、卤化、烷基化、酰基化、加成、取代或酰胺化)与所述连接分子共价或非共价偶联。可以在将连接分子与基质或纳米颗粒偶联之前或之后应用这些用于偶联共价或非共价结合的连接分子的方法。另外，可以通过孵育的方式将分子与相应预处理(例如通过三甲硅烷基溴化物)的基质或纳米颗粒直接结合，其由于此预处理而显示出经修饰的表面(例如具有更高电荷或极性的表面)。
E.蛋白质产生
本发明描述了用于本发明多个实施方案的多肽、肽和蛋白质。例如，测定了特定肽及其复合物引发或调节免疫应答的能力。在一些具体实施方案中，还可以根据常规技术在溶液中或固相支持物上合成本发明肽或蛋白质的全部或一部分。有多种市售自动化合成仪，其可以根据已知方案使用。参见，例如Stewart和Young(1984)；Tam等(1983)；Merrifield(1986)；以及Barany和Merrifield(1979)，其均通过应用并入本文。或者，可使用重组DNA技术，其中将编码本发明肽的核苷酸序列插入到表达载体中，转化或转染进合适的宿主细胞，并且在适于表达的条件下培养。
本发明的一个实施方案包括将基因转移入细胞(包括微生物)用于生产蛋白质。可以将目的蛋白质的基因转移进合适的宿主细胞，然后在合适条件下培养所述细胞。可以使用编码几乎任何多肽的核酸。重组表达载体的产生及其中所包含的元件是本领域技术人员已知的，并且在本文中有简要的讨论。哺乳动物宿主细胞系的实例包括但不限于Vero和HeLa细胞，其它B细胞和T细胞系，例如CEM、721.221、H9，Jurkat、Raii以及中国仓鼠卵巢细胞系、W138，BHK，COS-7，293，HepG2，3T3，RIN和MDCK细胞。另外，可选择这样的宿主细胞株，其调节插入序列的表达，或者以所需的方式修饰和加工基因产物。蛋白质产物的这些修饰(例如糖基化)和加工(例如切割)对于所述蛋白质的功能来说可能是重要的。不同的宿主细胞具有特征性且特定的蛋白质翻译后加工和修饰机制。可以选择合适的细胞系或宿主系统，以确保所表达外源蛋白质的正确修饰和加工。在一些实例中，本发明的蛋白质可以由果蝇(Drosophila)细胞表达和纯化。
可以使用许多选择系统，包括但不限于分别用于tk、hgprt或aprt细胞中的HSV胸苷激酶、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶以及腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因。另外，可以使用抗代谢物抗性作为选择基础：dhfr，其赋予对甲氧苄啶和甲氨蝶呤的抗性；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性；neo，其赋予对氨基糖苷G418的抗性；以及hygro，其赋予对潮霉素的抗性。
G.核酸
本发明可包括编码本发明蛋白质、多肽、肽的重组多核苷酸。本申请中所使用的术语“多核苷酸”是指重组的或者分离的不含全部基因组核酸的核酸分子。术语“多核苷酸”中包括寡核苷酸(100个残基或更短的核酸)、重组载体，其包括例如质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。在一些方面中，多核苷酸包括与其天然发生基因或蛋白质编码序列基本分离的调节序列。多核苷酸可以是RNA、DNA、其类似物或其组合。
在该方面中，使用术语“基因”、“多核苷酸”或“核酸”来表示编码蛋白质、多肽或肽的核酸(包括正确转录、翻译后修饰或定位所需的任何序列)。本领域技术人员会理解，该术语涵盖了基因组序列、表达盒、cDNA序列以及较小的经改造核酸片段，其表达或者可适于表达蛋白质、多肽、结构域、肽、融合蛋白和突变体。编码多肽全部或一部分的核酸可含有长度为10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、441、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000、1010、1020、1030、1040、1050、1060、1070、1080、1090、1095、1100、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、9000、10000或更多个核苷酸、核苷或碱基对的编码这些多肽之全部或一部分的连续核酸序列。还考虑来自给定物种的特定多肽可由含有天然变异的核酸编码，其具有略微不同的核酸序列，但是仍编码相同或基本相似的蛋白质、多肽或肽。
在一些特定实施方案中，本发明涉及含有编码肿瘤特异性抗原和/或MHC分子的核酸序列的分离的核酸片段和重组载体。术语“重组”可以与多肽或特定多肽的名称一起使用，这一般指由已进行过体外操作的核酸分子或这些分子的复制产物所产生的多肽。
本发明所使用的核酸片段，不论其自身编码序列的长度如何，都可与其它核酸序列(例如启动子、多腺苷酸化信号、额外的限制性酶位点、多克隆位点、其它编码片段等)相连，使得它们的总长可以有显著的不同。因此，考虑可以使用几乎任何长度的核酸片段，其总长优选受到制备便利性和在预定重组核酸方案中用途的限制。在一些情况下，核酸序列可编码具有额外异源编码序列的多肽序列，例如用于多肽的纯化、转运、分泌、翻译后修饰，或者用于治疗益处，例如靶向或效力。可以将标签或其它异源多肽添加到经修饰的多肽编码序列上，其中“异源”是指与所述经修饰多肽不同的多肽。
IV.治疗靶标
本发明的方法包括由机体细胞的赘生物引起的疾病或病症的治疗。本发明的免疫原性多肽可用于在有、怀疑有或者有产生癌症、细胞赘生物或肿瘤之风险的人中诱导或调节免疫应答。可以对针对抗原免疫反应测试呈阳性的个体或者认为有产生这样的病症或相关病症的风险的个体实施所述方法。
本发明所涵盖的癌症和/或赘生性病症不限于任何特定细胞类型或特定癌症，而包括其中肿瘤特异性抗原存在于所述癌细胞中的任何癌症。另外，必须对癌细胞或癌前细胞进行定位，使得其可接受由本发明的组合物和方法诱导的免疫应答。这样的癌症的一些实例包括但不限于肾上腺皮质癌；膀胱癌；乳癌；导管性乳癌；浸润性导管内乳癌；乳房癌；伯基特氏淋巴瘤；宫颈癌；结直肠腺瘤；结直肠癌；1型遗传性非息肉病性结直肠癌；2型遗传性非息肉病性结直肠癌；3型遗传性非息肉病性结直肠癌；6型遗传性非息肉病性结直肠癌；7型遗传性非息肉病性结直肠癌；隆突性皮肤纤维肉瘤；子宫内膜癌；食道癌；胃癌；纤维肉瘤；多形性胶质母细胞瘤；多发性血管球瘤；肝母细胞瘤；肝细胞癌症；肝细胞癌；急性淋巴细胞性白血病；急性骨髓性白血病；急性骨髓性伴嗜酸粒细胞增多性白血病；急性非淋巴细胞性白血病；慢性骨髓性白血病；Li-Fraumeni综合征；肺癌性脂肪肉瘤；小细胞性肺癌；非霍奇金淋巴瘤；lynch癌家族综合征II；雄性生殖细胞肿瘤；肥大细胞白血病；甲状腺髓样癌；成神经管细胞瘤；黑素瘤，脑膜瘤；多发性内分泌肿瘤；易感性髓系恶性肿瘤；成神经细胞瘤性黏液肉瘤；骨肉瘤；卵巢癌；浆液性卵巢癌；卵巢癌；卵巢性索肿瘤；胰腺癌；胰腺内分泌肿瘤；家族性非嗜铬神经节瘤；毛母质瘤；浸润性垂体肿瘤；前列腺癌；前列腺癌症；家族性与散发性乳突性肾细胞癌；眼癌；家族性杆状易感综合征；杆状肿瘤；横纹肌肉瘤；肺的小细胞癌；头和颈鳞状细胞癌性软组织肉瘤；T细胞急性成淋巴细胞性白血病；伴有成胶质细胞瘤的Turcot综合征；伴有食道癌的胼胝症；子宫颈癌；结直肠癌；肺癌；前列腺癌；皮肤癌；骨癌；实体瘤/恶性肿瘤；黏液样圆细胞癌；局部晚期肿瘤(locally advanced tumors)；人软组织癌；癌症转移；鳞状细胞癌；食道鳞状细胞癌；口癌；皮肤T细胞淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；肾上腺皮质癌症；ACTH产生肿瘤；非小细胞癌；胃肠癌；泌尿系统癌；雌性生殖道的恶性肿瘤；雄性生殖道的恶性肿瘤；肾癌；脑癌；骨癌；皮肤癌；甲状腺癌；眼癌；腹膜积液；恶性胸膜积液；间皮瘤；Wilms肿瘤；胆囊癌；滋养细胞肿瘤；血管外皮细胞；Kaposi肉瘤和肝癌。
VI.实施例
为了说明本发明的多种实施方案，给出了下述实施例，其不意为以任何方式限制本发明。本领域技术人员容易理解，本发明非常适于实现本文所述目的，获得所述结果和优点及其固有的目的、结果和优点。本实施例与其中所述的方法代表目前优选的实施方案，其为示例性的，不旨在对本发明范围的限制。如权利要求书范围限定的本发明精神所涵盖的其改变和其它用途对于本领域技术人员而言是很明显的。
实施例1
基于金的pMHC-NP的合成和表征。可以根据Levy，R.等.(“Rationaland combinatorial design of peptide capping ligands for goldnanoparticles.”J Am Chem Soc126，10076-84(2004))来合成特定大小的金纳米颗粒(GNP)。使用分光光度计、透射电子显微镜(TEM)和动态光散射来测量GNP制备物的大小、密度、电荷和单分散性。然后，浓缩GNP样品，并采用不同方法缀合pHMC(抗原-MHC复合物)。开发了用于对pMHC价态/GNP进行定量以及用于以高浓度(～1014/ml)浓缩抗原＝MHC-GNP而不破坏单分散性的方法(图1)。
实施例2
GNP的pMHC结合能力。采用两种方法将pMHC包被到不同大小的GNP上：(i)通过静电相互作用使pMHC与GNP随机结合；和(ii)通过巯基-PEG-NH2接头定向结合。在这种情况下，使用附加的巯基-PEG作为GNP稳定剂来防止聚集。考虑第一种方法将使得产生非常高的配体密度，而破坏pMHC结合的定向性(即，只有一部分pMHC可以被同源T细胞识别)。第二种方法的目的是产生携带较少pMHC但通过其C末端定向结合的pMHC-GNP。针对14nm GNP和40nm GNP对两种方法进行了测试。证实对于两种方法，GNP的pHMC结合能力是表面积的函数。因此，当纳米颗粒尺寸较大时，会结合更多的pMHC。出乎意料地，发现PEG介导的结合不仅确保结合的定向性还提高单个GNP的结合能力(与我们开始时所预计的相反)。表1总结了这些结果。
表I.GNP的pMHC-结合能力
Figure BDA00003173643900401
实施例3
激动活性vs pMHC含量。在体外测试了pMHC价态、GNP大小、GNP密度和包被策略对pMHC-GNP的激动活性的影响。将多种IGRP206-214-Kd-GNP制备物活化来源于8.3-T细胞受体(TCR)转基因NOD小鼠的同源(IGRP206-214特异性)幼稚CD8+T细胞(在本文中称为“8.3-CD8+T细胞”)的能力进行了比较。第一组实验将IGRP206-214-Kd(pMHC)价态对一系列GNP密度的影响进行了比较。使用包被有对照(非同源)pMHC(Tum-Kd)的GNP作为阴性对照。如所预期的，IGRP206-214-Kd-(而非TUM-Kd)GNP以pMHC剂量依赖的方式活化这些T细胞(如通过IFNγ产生测量的)。图2示出通过接头方法以包被有不同数目的pMHC的14nm GNP进行的实验。此外，用高出约2倍数目的pHMC包被的GNP具有优越的激动活性。因此，pMHC-GNP的激动活性是总pMHC含量的函数。
实施例4
激动活性vs GNP大小和密度。进一步分析表明，总pMHC含量不是影响pMHC-GNP的激动活性的唯一因素，GNP大小也是重要的。通过比较两个大小不同(14nm和40nm)且pMHC价态不同的pMHC样品的活性来进行测试。在图3所述的实验中，使用携带约200pMHC/GNP的14nm GNP和携带约5000pMHC/GNP的40nm GNP。分别将两个样品的GNP密度调整为3×1013和1012GNP/mL，以将总pMHC含量调整为约450μg/ml。特别地，在一系列总pMHC含量范围内，与40mmpMHC/GNP化合物相比，8.3-CD8+对14nm pMHC/GNP化合物的应答显著更佳，尽管前者携带更多的pMHC/GNP。这表明，关键的是GNP密度(更大的GNP/同源T细胞)。例如，与携带100pMHC/GNP的40×10nm NP(4000pMHC)相比，携带1000pMHC/GNP的4×40nm NP(4000pMHC)不太理想。
总之，这些数据表明最佳的pMHC-GNP制备物是包含以高密度使用的小GNP的那些。将pMHC价态升高至高于某一水平(即25pMHC/GNP)的优点不那么重要。
实施例5
激动活性vs pMHC暴露。如上所指出的，通过用3.4kD巯基-PEG-NH2接头(作为pMHC C末端(carboxitermini)的受体)和作为GNP稳定剂的巯基-PEG接头共包被GNP来形成pMHC-GNP样品。为了确定稳定用巯基-PEG的长度是否影响其GNP抗聚集特性、巯基-PEG-NH2与pMHC结合的能力和/或pMHC-GNP的激动特性，将使用不同大小(2kD和5kD，分别比pMHC-受体更短和更长)的稳定用接头制备的pMHC-GNP进行比较。两种接头具有类似的抗聚集特性，5kD接头不抑制pMHC与较短的3.4kD巯基-PEG-NH2的结合。但是，特别地，与用较长(5kD)巯基-PEG共包被的那些相比，由较短(2kD)巯基-PEG保护的pMHC-GNP具有优越的激动活性(图4)。这表明，长的保护性巯基-PEG接头保护与受体接头结合的pMHC分子免于T细胞暴露。
实施例6
由pMHC-GNP引起的自调节CD8+细胞的体内扩增：包被策略的一个关键作用。测试了若干不同IGRP206-214-Kd-GNP样品在体内扩增同源性自调节CD8+细胞的能力。将pMHC-GNP通过i.v.注射到10周龄NOD小鼠中。每只小鼠每周接受两次注射，共5周。通过用荧光标记的pMHC四聚体对细胞悬液进行染色来评估血液和淋巴器官中同源性T细胞群体的大小变化。首先测试通过直接吸附(300-600pMHCs/GNP)(每次注射10μl的GNP)以高pMHC价态包被的两个30mm pMHC/GNP样品(约1.8至2.2×1013GNP/ml)。两个样品均示出体外激动活性(未示出)。但是，二者均未能诱导血液或淋巴器官中的同源性自调节CD8+细胞的扩增(未示出)，可能是因为pMHC在体内迅速地与GNP支架分离。
测试了NP密度类似但通过PEG接头以较低价态(40至100pMHC/GNP)包被的两个14nm pMHC-GNP样品。与通过吸附方法所产生的pMHC-GNP的情况不同，这些pMHC-GNP的注射(10μl/剂)诱导血液和淋巴器官二者中的同源T细胞显著扩增(图5)。这些扩增是抗原特异性的，因为缀合有对照pMHC的GNP不诱导扩增，即使在较高剂量下也是如此(100μ/剂)。因此，用pMHC通过合适的PEG接头共价包被并以充分地高数目使用的小直径(14nm)pMHC-GNP能够在体内扩增同源性自调节CD8+细胞。
实施例7
由以较高pMHC价态包被的pMHC-GNP引起的同源CD8+T细胞的大量扩增。接下来确定pMHC-NP是否具有在体内诱导同源T细胞大量扩增的潜能。其通过以下来完成：用3×1012个携带25μg总pMHC的10至14nm NP(每NP约150个IGRP206-214/Kd分子)进行若干次注射来处理小鼠。如图6所示，与其未经处理的相应小鼠相比，用10剂(每周两次，共10周)处理的小鼠在外周血中示出同源IGRP206-214(NRP-V7)反应性CD8+T细胞的大量扩增(<0.4至>17，47％CD8+T细胞)(下图)。这样的扩增已见于在4剂pMHC-NP后处死的小鼠中(上图)。pMHC-NP扩增的细胞特异性地结合同源pMHC四聚体而不结合非同源pMHC四聚体(分别为NRP-V7/Kd相比于TUM/Kd)。
实施例8
选出(co-opt)最佳pMHC-GNP设计以开发具有共刺激特性的“多元化”NP。共刺激分子的一个实例是IL-15/IL-15Ra。例如，需要IL-15来维持记忆CD8+T细胞应答(例如，参见Kennedy，M.K等.“Reversibledefects in natural killer and memory CD8T cell lineages in interleukin15-deficient mice.”J Exp Med191，771-80(2000)和Becker，T.等，“Interleukin15is required for proliferative renewal of virus-specificmemory CD8T cells.”J.Exp.Med.195，1541-1548(2002)，其通过引用并入本文)。APC上膜IL-15Ra对IL-15的反式呈递维持记忆CD8+T细胞的存活，并增强其在抗原性回忆应答过程中的增殖(参见例如Sato，N.等，“The IL-15/IL-15Ralpha on cell surfaces enables sustained IL-15activityand contributes to the long survival of CD8memory T cells.”Proc NatlAcad Sci U S A104，588-93(2007)和Mortier，等.“Macrophage-anddendritic-cell-derived interleukin-15receptor alpha supports homeostasis0f distinct CD8+T cell subsets.”Immunity31，811-22(2009)，其通过引用并入本文)。因此，考虑与单独用pMHC包被的NP相比，展示IL-15/IL-15Ra复合物的pMHC-NP将具有优越的记忆T细胞扩增特性。因此，可以以显著较低量的总pMHC和NP获得类似或更好的效果。在多元化pMHC-NP平台的一个实施方案中，NP将携带化学计量不同(范围：1∶25至25∶1)的pMHC和重组IL-15/IL-15Ra-hFc融合物二者。
在一个实施例中，通过柔性GS接头将编码残基N49-S162的mIL-15cDNA片段与编码残基G33-A132的mIL-15Ra cDNA融合。然后将该IL-15/IL-15Ra cDNA与编码人IgG的Fc部分(hFc)的cDNA融合。我们将该构建体亚克隆到了蝇细胞表达载体中，该表达载体与嘌呤霉素抗性基因一起被转染到黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)SC2细胞中，以产生稳定细胞系。通过蛋白质A亲和色谱从上清液纯化重组蛋白。类似的设计可适用于其它共刺激分子(即，产生与IgG的Fc部分融合的二聚体或三聚体的二聚体)。
实施例9
缀合有pMHC的金纳米颗粒的制备
缀合有pMHC的金纳米颗粒制备物(pMHC-GNP，12nm和30nm)。GNP的制备。通过以下来制备GNP：在硅油浴中加热球瓶中的双蒸水(200mL)直至沸腾。然后向沸水中加入1％HAuCL4(4mL)的溶液。在添加1％柠檬酸钠溶液之前将该溶液搅拌10分钟。对于12nm GNP而言，添加12mL柠檬酸钠溶液。对于30nm GNP而言，添加12mL柠檬酸钠溶液。在添加柠檬酸钠溶液之后立即出现葡萄酒色。为了完成反应，再将GNP溶液搅拌30分钟。这是Levy，R.等(“Rational and combinatorialdesign of peptide capping ligands for gold nanoparticles.”J Am Chem Soc126，10076-84(2004)，其通过引用并入本文)所述的方法的改良。
GNP的表面修饰。通过向GNP溶液中添加25mM巯基-PEG-NH2(M.W.3,400)和50mM巯基-PEG(M.W.2,000，PEG/GNP比为10,000∶1)来使GNP聚乙二醇化。将该溶液在室温下搅拌5小时。然后，用3×30mL无菌双蒸水洗涤聚乙二醇化的GNP以除去过量PEG，并在40mL的100mM MES(C6H13NO4S.xH2O)缓冲液(pH5.5)中重悬。
pMHC缀合。将pMHC(IGRP206-214/Kd，4mg)逐滴添加到聚乙二醇化的GNP溶液中，同时在室温下轻轻搅拌。在添加20mg的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDC)之前将混合物搅拌1小时。再将该混合物搅拌4小时。然后用40mL磷酸盐缓冲的盐水(PBS，PH7.2至7.4)将pMHC-GNP缀合物洗涤3次，并在8mL PBS中重悬。
实施例10
缀合有pMHC的金纳米颗粒的制备
缀合有pMHC的GNP(pMHC-GNPs，2至10nm)的制备。制备GNP(2至5nm)。通过以下来制备2至5nm的GNP：将250mg(对于2nm GNP而言)或50mg(对于4nm GNP而言)十二烷胺溶解于10mL的DDAB溶液(甲苯中100mM双十二烷基溴化铵(DDAB))中。其次，将100mg四丁基硼氢化铵(TBAB)溶解于4mL的DDAB溶液中。然后，在50mL三颈烧瓶中将十二烷胺和TBAB的溶液混合，在氮气下搅拌。将34mg AuCl3溶解于4.5mL DDAB溶液中，并迅速注射到TBAB与十二烷胺溶液的混合物中。溶液立即变为深红色，表示GNP的形成。将该混合物连续搅拌30分钟，向混合物中加入15mL乙醇。然后将混合物以4,100×g旋转12分钟，以沉淀GNP。
制备GNP(6至10nm)。为了制备6至10nm的GNP，首先将癸酸(172mg)溶解于10mL甲苯中，然后在50mL三颈烧瓶中与多种量的TBAB溶液(对于6nm和10nm GNP分别为4mL和1mL)混合，同时在氮气下搅拌。然后将AuCl3(34mg溶解于4.5mL DDAB储液中)快速注射到TBAB和癸酸溶液的混合物中。溶液立即变为深红色。将该混合物连续搅拌30分钟，向混合物中加入15mL乙醇。然后将混合物以4,100×g旋转12分钟，以沉淀GNP。
GNP的表面修饰。将GNP重悬于20mL的甲醇中0.1M巯基丙酸(MPA)(pH10)，在室温下搅拌1小时。然后加入10mL乙酸乙酯。将混合物以4,100×g旋转15分钟。然后用30mL的无菌双蒸水将所沉淀的GNP洗涤3次，重悬于20mL100mM MES(C6H13NO4S.xH2O)缓冲液(pH5.5)中。向该混合物中加入0.5M聚氧乙烯双(胺)(PEG/GNP比为10,000∶1)和0.1M1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(终EDC浓度2mM)的溶液。然后将该混合物搅拌4小时。用3×30mL无菌双蒸水洗涤聚乙二醇化的GNP，以除去过量的PEG和EDC。
pMHC缀合。将聚乙二醇化的GNP重悬于20mL100mM MES(C6H13NO4S.xH2O)缓冲液(pH5.5)中。然后将pMHC(5mg/mL，总计10至30mg)逐滴加入重悬的GNP(pMHC/GNP比为500∶1)中，在添加0.1M的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)(EDC终浓度为2mM)之前将混合物在室温下搅拌1小时。再将该混合物搅拌4小时。然后用40mL磷酸盐缓冲的盐水(PBS，PH7.2至7.4)将pMHC-GNP缀合物洗涤3次，然后在10至20mL PBS中重悬。
实施例11
用以加强幼稚的同源CD8+T细胞的活化的缀合有IGRP206-214/Kd和激动性抗-CD28抗体的氧化铁纳米颗粒的制备、表征和功能测定
采用热沉积方法来合成氧化铁纳米颗粒(Fe3O4NP)，采用透射电子显微镜(TEM)(9.4nm)来测量NP的大小。
然后使所合成的颗粒与3.4KD的功能化多巴胺-PEG接头缀合，所述接头设计为稳定纳米颗粒和充当淋巴细胞刺激配体的受体二者。然后将这些聚乙二醇化的纳米颗粒与激动性抗-CD28单克隆抗体(克隆37.51mAb；针对共刺激分子B7.1的淋巴细胞活化受体)和/或肥胖糖尿病(NOD)小鼠(IGRP206-214/Kd)中的大量CD8+T细胞群体所靶向的多拷贝肽-主要组织相容性复合物(pHMC)缀合。通过测量样品中的铁含量来测量纳米颗粒密度。通过dot-ELISA法，分别采用MHC和IgG特异性抗体作为pMHC和抗-CD28mAb的检测剂来确定缀合有pMHC/抗-CD28单克隆抗体的纳米颗粒制备物中pMHC和抗体的价态。图7和8示出有代表性的TEM图像，所述TEM图像示出缀合有pMHC/抗-CD28mAb(图7)和缀合有pMHC(图8)的纳米颗粒制备物二者都是单分散的，并且具有类似的铁(纳米颗粒)含量和pMHC价态。
如所预期的，琼脂糖凝胶电泳分析的结果表明，对照未缀合的纳米颗粒不包含蛋白质分子(参见图9B泳道3的缺少考马斯蓝染色)。相反，缀合有蛋白质的纳米颗粒制备物染有考马斯蓝(图9B的泳道4和5)，并且该染色与铁信号共同迁移(图9A的泳道4和5)。这些制备物在5％聚丙烯酰胺凝胶上的电泳还表明，事实上，两种制备物中的全部蛋白质成分都在纳米颗粒上，在溶液中未缀合蛋白质水平不可检出(图9C)。如所预期的，不同于溶液中的对照未缀合pMHC单体，纳米颗粒因其大小而未迁移到凝胶中。
接下来，我们将缀合有pMHC和缀合有pMHC/抗-CD28mAb的纳米颗粒激活和活化来源于表达IGRP206-214/Kd反应性TCR转基因的转基因NOD小鼠的同源幼稚CD8+T细胞的能力进行了比较。其通过测量应答于连续稀释的纳米颗粒制备物，这些小鼠的幼稚CD8+T细胞的增殖和干扰素-γ分泌活性(分别为图10的左图和右图)(2.5×105个细胞/mL)来完成的。如图10所示，与单独用pMHC包被的纳米颗粒(图10A)相比，缀合有pMHC/抗-CD28mAb的纳米颗粒(图10B)具有显著更高的激动活性。低纳米颗粒密度的缀合有pMHC/抗-CD28mAb的纳米颗粒诱导最大增殖(图10B，右图)和干扰素-γ分泌(图10B，左图)，这些值显著高于针对所测试的最大密度的缀合有pMHC的纳米颗粒(图10A)所获得的最大值。
实施例12
重组小鼠B7.1-hFc融合蛋白的表达、纯化和功能表征
理想地，可以用全部范围的能够在T细胞表面上接受(engaging)同源信号转导受体的共刺激分子(即，CD28对于B7.1，如在抗-CD28mAb的情况下)来包被目的在于活化幼稚T细胞的包被有pMHC的纳米颗粒。这对于其激动性mAb不可得的受体而言特别有用。为了测试该方法的可行性，我们产生了编码小鼠B7.1(mB7.1)-hFc融合蛋白(采用柔性GS连接的间隔B7.1和hFc部分)的DNA构建体，该构建体用于在果蝇S2细胞(采用pMT/V5载体)或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(采用pcDNA3.3载体)中表达。融合蛋白包括mB7.1片段(209a.a.，D37-K245)，接着是人IgG1(hIgG1)CH2区(227个氨基酸)。通过蛋白A-琼脂糖亲和色谱来从培养上清液纯化融合蛋白。融合蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列示于图11A至B中。
为了测试mB7.1-hFc融合蛋白的共刺激活性，我们从野生型NOD小鼠纯化了幼稚CD4+T细胞，并将它们在系列稀释的mB7.1-hFc的存在下培养，在次优浓度的激动性抗-CD3mAb的存在下固定到板上。只在单独的固定化抗-CD3mAb或抗-CD28mAb(阴性对照)的存在下孵育的培养物不增殖(提供背景水平的H3胸腺嘧啶掺入，数据未示出)。向包被有抗-CD3mAb的板上的培养物中添加抗-CD28mAb大大地提高了H3胸腺嘧啶掺入的水平(阳性对照)。向在次优浓度的抗-CD3mAb的存在下布板的培养物中添加mB7.1-hFc诱导幼稚CD4+T细胞的增殖活性浓度依赖地升高，无论在S2或CHO细胞中是否产生了融合蛋白(图12)。这表明，所设计的融合蛋白可以有效地向TCR激活的T细胞递送共刺激信号。因此，这样的设计将充当用于改造编码其它共刺激分子的融合蛋白的模板，所述其它共刺激分子待缀合到用于体内抗原特异性T细胞之活化和扩增的包被有pMHC的纳米颗粒。
因此，应理解，虽然通过优选实施方案具体地公开了本发明，但是本领域技术人员可以采用本文所公开的内容所体现的本发明的任选特征、修改、改进和变化，认为这些修改、改进和变化在本发明的范围内。本文所提供的作为示例性优选实例方案的材料、方法和实施例是示例性的，并且不旨在限制本发明的范围。
在本文中广泛地和一般地描述了本发明。落在一般公开内容范围内的每个较窄的种类和亚组也构成本发明的一部分。其包括本发明的一般描述：前提是或者否定限制从类别中去除任何主题，无论所剔除的材料是否是本文所特别引用的均如此。
此外，在以马库什组的方式描述的本发明的特征或方面中，本领域技术人员将理解本发明因此也以马库什组的任意个体成员或成员的亚组的方式来描述。
在本公开内容中，多个公开、专利和公开的专利说明书通过鉴定引用而参考。在本文中提到的全部公开、专利申请、专利和其它参考文献明示地通过引用整体并入本文，与其各自单独地通过引用并入本文的程度相同。在矛盾的情况下，以本说明，包括定义，为准。

Claims (34)

1.在对象中治疗肿瘤或癌症的方法，其包括以足以扩增对所述肿瘤或癌症具有特异性的抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体的量向所述对象施用有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物，从而治疗所述肿瘤或癌症。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述扩增的抗肿瘤发生T细胞群体是抗原特异性抗肿瘤发生记忆T细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其还包括施用不含共刺激分子的抗原/MHC/纳米颗粒复合物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒的直径为约1nm至约100nm。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述纳米颗粒的直径为约5nm至约15nm。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述抗原特异性抗肿瘤发生T细胞是CD8+T细胞。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是癌性肿瘤。
8.用于在对象中扩增和/或产生抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体的方法，所述方法包括以足以扩增和/或产生所述群体的量和频率向所述对象施用抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述被扩增的抗原特异性抗肿瘤发生T细胞是记忆T细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其还包括施用有效量的不含共刺激分子的抗原/MHC/纳米颗粒复合物。
11.根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒的直径为约1nm至约100nm。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述纳米颗粒的直径为约5nm至约15nm。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗原特异性抗肿瘤发生T细胞是CD8+T细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其中多个相同的和不相同的抗原表位包含于所述抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物中。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述多个抗原表位来自单个抗原。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述多个抗原表位来自多个抗原。
17.抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，其包含抗原/MHC/共刺激分子、生物可相容的芯核和所述芯核的外表面上的生物可降解的包衣。
18.根据权利要求17所述的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，其中所述生物可相容的芯核包含氧化铁(III)。
19.根据权利要求17所述的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，其中所述生物可降解的包衣是葡聚糖、甘露醇和聚(乙二醇)中的一种或更多种。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，其中所述纳米颗粒共价地结合至所述抗原/MHC复合物的所述MHC基团，此外其中所述结合任选地通过接头实现。
21.根据权利要求20所述的抗原/MHC/共刺激分子/纳米颗粒复合物，其中所述纳米颗粒共价地结合至所述共刺激基团，此外其中所述结合任选地通过接头实现。
22.通过以足以扩增抗原特异性抗肿瘤发生T细胞的量向患者施用有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物在所述患者中抑制肿瘤生长或者治疗癌症的方法，其中所述复合物的所述MHC分子包含I类MHC分子和II类MHC分子二者。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗原特异性抗肿瘤发生T细胞是记忆T细胞。
24.根据权利要求23所述的方法，其还包括以足以扩增和/或活化所述抗原特异性记忆T细胞的量施用不含共刺激分子的抗原/MHC/纳米颗粒复合物。
25.根据权利要求22至24所述的方法，其中所述纳米颗粒的直径为约1nm至约100nm。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述纳米颗粒的直径为约5nm至约15nm。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述抗原特异性抗肿瘤发生T细胞是CD8+。
28.复合物，其包含：
(a)纳米颗粒
(b)偶联到所述纳米颗粒的抗原-MHC复合物
(c)偶联到所述纳米颗粒的共刺激分子。
29.根据权利要求28所述的颗粒，其中所述纳米颗粒的直径为约1nm至约100nm。
30.根据权利要求29所述的颗粒，其中所述纳米颗粒的直径为约5nm至约15nm。
31.复合物，其包含：
(a)纳米颗粒
(b)偶联到所述纳米颗粒的共刺激分子。
32.根据权利要求31所述的颗粒，其中所述纳米颗粒的直径为约1nm至约100nm。
33.根据权利要求32所述的颗粒，其中所述纳米颗粒的直径为约5nm至约15nm。
34.在患者中抑制癌症转移的方法，所述方法包括：以足以扩增抗原特异性抗肿瘤发生T细胞群体的量向对象施用有效偶联到纳米颗粒的抗原/MHC/共刺激分子复合物，其中所述扩增的群体足以治疗所述癌症，其中所述抗原对所述肿瘤是特异性的，其中所述施用在所述患者中提供所述复合物的全身性循环。
CN201180054383.5A 2010-11-12 2011-11-11 用于预防和治疗癌症的组合物和方法 Expired - Fee Related CN103260648B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41333010P 2010-11-12 2010-11-12
US61/413,330 2010-11-12
PCT/EP2011/069931 WO2012062904A2 (en) 2010-11-12 2011-11-11 Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610192518.9A Division CN105770906A (zh) 2010-11-12 2011-11-11 用于预防和治疗癌症的组合物和方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103260648A true CN103260648A (zh) 2013-08-21
CN103260648B CN103260648B (zh) 2016-04-13

Family

ID=44983530

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610192518.9A Pending CN105770906A (zh) 2010-11-12 2011-11-11 用于预防和治疗癌症的组合物和方法
CN201180054383.5A Expired - Fee Related CN103260648B (zh) 2010-11-12 2011-11-11 用于预防和治疗癌症的组合物和方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610192518.9A Pending CN105770906A (zh) 2010-11-12 2011-11-11 用于预防和治疗癌症的组合物和方法

Country Status (14)

Country Link
US (3) US9511151B2 (zh)
EP (1) EP2637700A2 (zh)
JP (2) JP5991979B2 (zh)
KR (1) KR20140037789A (zh)
CN (2) CN105770906A (zh)
AU (2) AU2011328077A1 (zh)
BR (1) BR112013007064A2 (zh)
CA (1) CA2817710C (zh)
IL (1) IL225471B (zh)
MX (1) MX350203B (zh)
NZ (1) NZ608695A (zh)
RU (2) RU2017119820A (zh)
SG (2) SG189909A1 (zh)
WO (1) WO2012062904A2 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104327158A (zh) * 2014-09-05 2015-02-04 马恒标 大蒜中提取得到的抗肿瘤活性的多肽
CN107921277A (zh) * 2015-05-14 2018-04-17 伊利诺伊大学理事会 使用循环肿瘤细胞作为生物标志物来监测癌症疗法的功效的方法
WO2018094570A1 (zh) * 2016-11-22 2018-05-31 深圳华大基因研究院 多肽及其应用
CN113403276A (zh) * 2021-06-23 2021-09-17 河北大学 抗体功能化的外泌体制剂及其制备方法和应用

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140105980A1 (en) * 2012-10-11 2014-04-17 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders
NZ579653A (en) * 2007-03-07 2012-07-27 Uti Limited Partnership Compositions and methods for the prevention and treatment of autoimmune conditions
RU2635537C2 (ru) * 2010-09-29 2017-11-13 Ютиай Лимитед Партнершип Способ лечения аутоиммунного заболевания с использованием биосовместимых биоабсорбируемых наносфер
US9511151B2 (en) 2010-11-12 2016-12-06 Uti Limited Partnership Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer
US10988516B2 (en) 2012-03-26 2021-04-27 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating inflammation
SI2859015T1 (sl) * 2012-06-08 2018-12-31 Alkermes Pharma Ireland Limited Ligandi, modificirani s cirkularno permutacijo, kot agonisti in antagonisti
EP2711418B1 (en) * 2012-09-25 2017-08-23 Miltenyi Biotec GmbH Method for polyclonal stimulation of T cells by flexible nanomatrices
US10548957B2 (en) * 2012-09-28 2020-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Targeted expansion of Qa-1-peptide-specific regulatory CD8 T cells to ameliorate arthritis
US9603948B2 (en) 2012-10-11 2017-03-28 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders
CA2916465C (en) 2013-06-24 2023-05-23 Neximmune Humanized anti-cd28 antibodies and artificial antigen presenting cells
EP2824112B1 (en) 2013-07-10 2016-12-21 Miltenyi Biotec GmbH Method for inducing proliferation of Natural Killer cells by mobile nanomatrices
SG11201603487YA (en) 2013-11-04 2016-05-30 Uti Limited Partnership Methods and compositions for sustained immunotherapy
TWI689310B (zh) 2014-07-11 2020-04-01 巨生生醫股份有限公司 治療鐵缺乏症之方法
SG11201703203RA (en) 2014-10-20 2017-05-30 Juno Therapeutics Inc Methods and compositions for dosing in adoptive cell therapy
US10632193B2 (en) 2014-12-24 2020-04-28 Neximmune, Inc. Nanoparticle compositions and methods for immunotherapy
CN107847582A (zh) 2015-05-06 2018-03-27 优迪有限合伙公司 用于持续疗法的纳米颗粒组合物
CN107636162B (zh) 2015-06-01 2021-12-10 加利福尼亚技术学院 用针对特定群体的抗原筛选t细胞的组合物和方法
AU2018283319B2 (en) * 2017-06-16 2023-11-09 Mayo Foundation For Medical Education And Research Materials and methods for increasing immune responses
CN111107871A (zh) * 2017-07-21 2020-05-05 伯克利之光生命科技公司 抗原呈递合成表面、共价官能化表面、活化t细胞及其用途
CN108359013A (zh) * 2018-02-07 2018-08-03 上海交通大学 一种人工抗原递呈纳米制剂及其用于体内外扩增特异性t细胞的应用
EP3853352A4 (en) * 2018-09-21 2022-08-10 Berkeley Lights, Inc. FUNCTIONALIZED TRUCK PLATE, PROCESS FOR ITS MANUFACTURE AND ITS USE
US20220249389A1 (en) 2019-07-12 2022-08-11 Oregon Health & Science University Immunotherapeutic constructs and methods of their use
MX2019015508A (es) 2019-12-18 2021-06-21 Univ Guadalajara Nanopartículas para el tratamiento del cáncer.

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101678090A (zh) * 2007-03-07 2010-03-24 乌第有限合伙公司 用于预防和治疗自身免疫病的组合物和方法
WO2010037397A1 (en) * 2008-10-01 2010-04-08 Dako Denmark A/S Mhc multimers in cmv immune monitoring

Family Cites Families (145)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1000470A (en) 1908-02-11 1911-08-15 Frank C Widmann Ring-mold.
US1017295A (en) 1910-08-20 1912-02-13 Adolph F Hensler Journal-box.
US1048588A (en) 1911-05-05 1912-12-31 Adams & Westlake Co Pole-changer.
US1008080A (en) 1911-07-15 1911-11-07 Jacub Schwartzman Bed-spring.
US1012404A (en) 1911-07-29 1911-12-19 Frederick L S Means Protective caster.
US1044155A (en) 1912-04-11 1912-11-12 Diamond Match Co Splint-drying means for match-machines.
US4367110A (en) 1979-07-02 1983-01-04 Toppan Printing Co. Decorative laminate and a manufacturing method therefor
US4452901A (en) 1980-03-20 1984-06-05 Ciba-Geigy Corporation Electrophoretically transferring electropherograms to nitrocellulose sheets for immuno-assays
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
FR2504010B1 (fr) 1981-04-15 1985-10-25 Sanofi Sa Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation
GB2097032B (en) 1981-04-22 1984-09-19 Teron International Urban Dev A combined ceiling air and services distribution system mechanical chasse and structural roof member
US4478946A (en) 1981-07-02 1984-10-23 South African Inventions Development Corporation Carrier bound immunosorbent
US4671958A (en) 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
DE3377484D1 (en) 1982-04-19 1988-09-01 Nissan Motor Method for controlling reduction ratio of continuously variable transmission with acceleration compensation
US4818542A (en) 1983-11-14 1989-04-04 The University Of Kentucky Research Foundation Porous microspheres for drug delivery and methods for making same
US4542225A (en) 1984-08-29 1985-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
US4659839A (en) 1984-10-10 1987-04-21 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for radiolabeled antibody fragments
CA1336076C (en) 1985-01-14 1995-06-27 Alan R. Fritzberg Metal radionuclide labeled proteins for diagnosis and therapy
US5171582A (en) 1985-07-31 1992-12-15 Ghent William R Treatment of iodine deficiency diseases
US4680338A (en) 1985-10-17 1987-07-14 Immunomedics, Inc. Bifunctional linker
US4699784A (en) 1986-02-25 1987-10-13 Center For Molecular Medicine & Immunology Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate
US5258499A (en) 1988-05-16 1993-11-02 Vestar, Inc. Liposome targeting using receptor specific ligands
US6106840A (en) 1988-06-23 2000-08-22 Anergen, Inc. MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity
US5260422A (en) 1988-06-23 1993-11-09 Anergen, Inc. MHC conjugates useful in ameliorating autoimmunity
US4859839A (en) 1988-07-08 1989-08-22 Counter Computer Corporation Point-of-sale terminal for laundry or dry cleaning establishments
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
DE69232875T2 (de) 1991-04-23 2003-08-21 Anergen Inc MHC-Konjugate zur Verbesserung der Autoimmunität.
US5200189A (en) 1991-07-23 1993-04-06 Ecolab Inc. Peroxyacid antimicrobial composition
CA2130997A1 (en) 1992-02-27 1993-09-02 C. Garrison Fathman Early antigen for autoimmune diabetes
JP2631436B2 (ja) 1992-07-24 1997-07-16 徳厚 小島 排水立て管継手
US5972336A (en) 1992-11-03 1999-10-26 Oravax Merieux Co. Urease-based vaccine against helicobacter infection
CA2185810A1 (en) 1994-03-28 1995-10-05 Jo Klaveness Liposomes
US6103379A (en) 1994-10-06 2000-08-15 Bar-Ilan University Process for the preparation of microspheres and microspheres made thereby
WO1996018105A1 (en) 1994-12-06 1996-06-13 The President And Fellows Of Harvard College Single chain t-cell receptor
DE19508058A1 (de) 1995-02-21 1996-08-22 Schering Ag Verfahren zur Herstellung von DTPA-Tetraestern der terminalen Carbonsäuren und deren Verwendung zur Herstellung pharmazeutischer Mittel
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840839A (en) 1996-02-09 1998-11-24 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Alternative open reading frame DNA of a normal gene and a novel human cancer antigen encoded therein
US6033864A (en) 1996-04-12 2000-03-07 The Regents Of The University Of California Diagnosis, prevention and treatment of ulcerative colitis, and clinical subtypes thereof, using microbial UC pANCA antigens
US20050003431A1 (en) 1996-08-16 2005-01-06 Wucherpfennig Kai W. Monovalent, multivalent, and multimeric MHC binding domain fusion proteins and conjugates, and uses therefor
DK0935607T3 (da) 1996-08-16 2004-12-06 Harvard College Oplöselige monovalente og multivalente MHC klasse II-fusionsproteiner samt anvendelser deraf
CA2302779C (en) 1997-09-16 2010-02-02 Oregon Health Sciences University Recombinant mhc molecules useful for manipulation of antigen-specific t-cells
IL137706A0 (en) 1998-02-19 2001-10-31 Harvard College Mhc fusion proteins and conjugates
JP2002513765A (ja) 1998-05-07 2002-05-14 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 免疫応答の調節における無視された標的組織抗原の使用
DE19825371A1 (de) 1998-06-06 1999-12-09 Bayer Ag Elektrochrome Anzeigevorrichtung mit isolierten Zuleitungen
IL125608A0 (en) 1998-07-30 1999-03-12 Yeda Res & Dev Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines
US7807377B2 (en) * 1998-10-20 2010-10-05 Salvatore Albani Method of isolating antigen-specific T cells employing artificial antigen presenting cells
US6150022A (en) 1998-12-07 2000-11-21 Flex Products, Inc. Bright metal flake based pigments
JP2000213425A (ja) 1999-01-20 2000-08-02 Hino Motors Ltd Ｅｇｒク―ラ
US7090973B1 (en) 1999-04-09 2006-08-15 Oscient Pharmaceuticals Corporation Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics
WO2000067788A2 (en) 1999-05-06 2000-11-16 Genetics Institute, Inc. Use of soluble costimulatory molecules to enhance immune responses
WO2001024764A2 (en) 1999-10-06 2001-04-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cell targeting compositions and methods of using the same
US6585947B1 (en) 1999-10-22 2003-07-01 The Board Of Trustess Of The University Of Illinois Method for producing silicon nanoparticles
US6651655B1 (en) 2000-01-18 2003-11-25 Quadrant Technologies Limited Inhaled vaccines
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
KR100379250B1 (ko) 2000-12-04 2003-04-08 한국과학기술연구원 나노 단위 크기의 금속 입자가 함유된 고분자 복합 소재및 그 제조 방법
US7094555B2 (en) 2001-04-05 2006-08-22 Benaroya Research Institute At Virginia Mason Methods of MHC class II epitope mapping, detection of autoimmune T cells and antigens, and autoimmune treatment
DE10117858A1 (de) 2001-04-10 2002-10-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt MHC-Tetramere
WO2003001204A2 (en) 2001-06-22 2003-01-03 The University Of British Columbia Type 1 diabetes diagnostics and therapeutics
US20070129307A1 (en) 2001-06-22 2007-06-07 The University Of British Columbia Insulin epitopes for the treatment of type 1 diabetes
US20030124149A1 (en) 2001-07-06 2003-07-03 Shalaby Shalaby W. Bioactive absorbable microparticles as therapeutic vaccines
ES2304467T3 (es) 2001-07-10 2008-10-16 North Carolina State University Vehiculo de liberacion de nanoparticulas.
DE10144252A1 (de) 2001-08-31 2003-03-27 Fraunhofer Ges Forschung Nanopartikel mit daran immobilisiertem biologisch aktivem TNF
US7186814B2 (en) 2001-11-09 2007-03-06 Nanosphere, Inc. Bioconjugate-nanoparticle probes
ES2405405T3 (es) 2001-12-17 2013-05-31 Corixa Corporation Composiciones y procedimientos para la terapia y el diagnóstico de enfermedad inflamatoria del intestino
US6688494B2 (en) 2001-12-20 2004-02-10 Cima Nanotech, Inc. Process for the manufacture of metal nanoparticle
US7285289B2 (en) 2002-04-12 2007-10-23 Nagy Jon O Nanoparticle vaccines
DE60334474D1 (de) 2002-07-12 2010-11-18 Univ Johns Hopkins Reagenzien und verfahren zum eingriff in einzigartige klonotype lymphozyten-rezeptoren
DE10310261A1 (de) 2003-03-05 2004-09-23 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Identifizierung von Antigen-Epitopen
US20040197304A1 (en) 2003-04-01 2004-10-07 The Procter & Gamble Company And Alimentary Health, Ltd. Methods of determining efficacy of treatments of inflammatory diseases of the bowel
US6929675B1 (en) 2003-04-24 2005-08-16 Sandia Corporation Synthesis metal nanoparticle
US20050118102A1 (en) 2003-04-28 2005-06-02 Intematix Corporation Spin resonance heating and/or imaging in medical applications
JP2006524991A (ja) 2003-05-08 2006-11-09 エクサイト セラピーズ インコーポレーティッド 抗原特異的ｔ細胞の作製および単離の方法
EP1628675A4 (en) 2003-05-20 2008-05-07 Univ Virginia ANTIGENS TARGETED BY PATHOGENIC T LYMPHOCYTES PREDOMINANT IN DIABETES TYPE 1 AND USES THEREOF
US7060121B2 (en) 2003-06-25 2006-06-13 Hsing Kuang Lin Method of producing gold nanoparticle
US7812116B2 (en) 2003-07-03 2010-10-12 Rush University Medical Center Immunogenic peptides
WO2005020933A2 (en) 2003-09-02 2005-03-10 University Of South Florida Nanoparticles for drug-delivery
GB0321937D0 (en) 2003-09-19 2003-10-22 Univ Liverpool Nanoparticle conjugates and method of production thereof
EP1671055B1 (en) 2003-10-09 2013-03-20 Brooks Instrument LLC Valve assembly
DE102004023187A1 (de) 2004-05-11 2005-12-01 Ganymed Pharmaceuticals Ag Identifizierung von Oberflächen-assoziierten Antigenen für die Tumordiagnose und -therapie
US7534449B2 (en) 2004-07-01 2009-05-19 Yale University Targeted and high density drug loaded polymeric materials
US9079765B2 (en) 2004-10-01 2015-07-14 Midatech Ltd. Nanoparticles comprising antigens and adjuvants, and immunogenic structures
WO2006054806A1 (ja) 2004-11-22 2006-05-26 Locomogene, Inc. クローン病関連自己抗原
US7462446B2 (en) 2005-03-18 2008-12-09 University Of Washington Magnetic nanoparticle compositions and methods
US20070059775A1 (en) 2005-03-29 2007-03-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Synthesis and conjugation of iron oxide nanoparticles to antibodies for targeting specific cells using fluorescence and MR imaging techniques
US7562421B2 (en) 2005-04-03 2009-07-21 Magen Eco Energy A.C.S. Ltd. Connecting clasp
US7326399B2 (en) 2005-04-15 2008-02-05 Headwaters Technology Innovation, Llc Titanium dioxide nanoparticles and nanoparticle suspensions and methods of making the same
JPWO2007024026A1 (ja) 2005-08-25 2009-03-05 明石　満 Ｔ細胞認識エピトープペプチドを固定化又は内包化した生分解性ナノ粒子
WO2008051245A2 (en) 2005-12-02 2008-05-02 Novartis Ag Nanoparticles for use in immunogenic compositions
WO2007084775A2 (en) 2006-01-20 2007-07-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for modulation of suppressor t cell activation
EP2476435B1 (en) 2006-08-11 2017-12-20 Life Sciences Research Partners VZW Immunogenic peptides and their use in immune disorders
US7816814B1 (en) 2006-08-18 2010-10-19 Hennessy Michael J Bi-directional power converters
MX2009007101A (es) 2006-12-29 2009-12-01 Univ Washington Superficies y materiales antibioincrustación bifuncionales.
WO2008115641A2 (en) 2007-02-15 2008-09-25 Yale University Modular nanoparticles for adaptable vaccines
US20150250871A1 (en) 2007-03-07 2015-09-10 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders
US20140105980A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders
US20100151031A1 (en) 2007-03-23 2010-06-17 Desimone Joseph M Discrete size and shape specific organic nanoparticles designed to elicit an immune response
WO2009003493A2 (en) * 2007-07-03 2009-01-08 Dako Denmark A/S Mhc multimers, methods for their generation, labeling and use
TWI407853B (zh) 2007-07-22 2013-09-01 Camtek Ltd 用於控制製造程序的方法及系統
JP5085240B2 (ja) 2007-09-03 2012-11-28 日本電波工業株式会社 水晶デバイス及び水晶デバイスの製造方法
EP2399610A3 (en) 2007-09-24 2012-09-05 Bar-Ilan University Polymer nanoparticles coated by magnetic metal oxide and uses thereof
WO2009064273A1 (en) 2007-11-16 2009-05-22 Paul Appelbaum Apparatus and method for packaging articles in clear plastic packages
US8779088B2 (en) 2007-12-17 2014-07-15 Marfl Ab Vaccine for the treatment of Mycobacterium related disorders
US8629098B2 (en) 2008-01-15 2014-01-14 Yale University Compositions and methods for adoptive and active immunotherapy
AU2009211224A1 (en) 2008-02-04 2009-08-13 Ulive Enterprises Ltd Nanoparticle conjugates
CN102014874A (zh) 2008-03-04 2011-04-13 流体科技公司 免疫调节剂颗粒和治疗方法
WO2009126835A2 (en) 2008-04-09 2009-10-15 University Of Washington Techtransfer Invention Licensing Magnetic nanoparticle and method for imaging t cells
US20090258355A1 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Brookhaven Science Associates, Llc Nanoscale Clusters and Methods of Making Same
US20110159023A1 (en) 2008-08-25 2011-06-30 Solomon Langermann Pd-1 antagonists and methods for treating infectious disease
US8323696B2 (en) 2008-08-29 2012-12-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
EP2337795A2 (en) 2008-10-01 2011-06-29 Dako Denmark A/S Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
CA2642141A1 (en) 2008-10-20 2010-04-20 Innovative Microelectronics Inc. Flange alignment pin
CA2743590A1 (en) 2008-11-12 2010-05-20 Yeda Research And Development Co. Ltd. Diagnosis of multiple sclerosis
WO2010080032A2 (en) 2009-01-09 2010-07-15 Stichting Het Nederlands Kanker Instituut Bead-assisted viral transduction
MX2011007559A (es) 2009-01-20 2011-12-06 Myelin Repair Foundation Inc Composiciones y metodos para induccion de tolerancia antigeno-especifica.
US8383085B2 (en) 2009-05-29 2013-02-26 University Of Manitoba Methods of making iron-containing nanoparticles
CA2777053A1 (en) 2009-10-06 2011-04-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Human single-chain t cell receptors
GB0922066D0 (en) 2009-12-17 2010-02-03 Univ Belfast Modulator
GB201003088D0 (en) 2010-02-24 2010-04-14 Univ Exeter Method for the preparation of a novel nanoparticle conjugate
EP4324526A2 (en) 2010-07-26 2024-02-21 Qu Biologics Inc. Immunogenic anti-inflammatory compositions
WO2012025936A2 (en) 2010-08-25 2012-03-01 Ramamohan Rao Davuluri Improved process for the preparation of rufinamide
WO2012031258A1 (en) 2010-09-03 2012-03-08 Oregon Health & Science University Recombinant t-cell receptor ligands with covalently bound peptides
RU2635537C2 (ru) 2010-09-29 2017-11-13 Ютиай Лимитед Партнершип Способ лечения аутоиммунного заболевания с использованием биосовместимых биоабсорбируемых наносфер
US9511151B2 (en) * 2010-11-12 2016-12-06 Uti Limited Partnership Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer
JP6077544B2 (ja) 2011-09-07 2017-02-08 ミダテック リミテッド ナノ粒子−ペプチド組成物
EP2758780A4 (en) 2011-09-22 2015-09-16 Marv Entpr Llc METHOD OF TREATING MULTIPLE SCLEROSIS
EP2591801A1 (en) 2011-11-14 2013-05-15 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Nanoparticle compositions for generation of regulatory T cells and treatment of autoimmune diseases and other chronic inflammatory conditions
US20130128138A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Shenzhen China Star Optoelectronics Technolog Co., LTD. Flat Panel Display Device, Stereoscopic Display Device, Plasma Display Device
CN104136603A (zh) 2011-12-09 2014-11-05 约翰霍普金斯大学 具有限定和动态形状的人工抗原递呈细胞
US10988516B2 (en) 2012-03-26 2021-04-27 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating inflammation
US20150150996A1 (en) 2012-06-06 2015-06-04 Northwestern University Compositions and methods for antigen-specific tolerance
US9603948B2 (en) 2012-10-11 2017-03-28 Uti Limited Partnership Methods and compositions for treating multiple sclerosis and related disorders
WO2014096015A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Disulfide-linked multivalent mhc class i comprising multi-function proteins
US9335768B2 (en) 2013-09-12 2016-05-10 Lam Research Corporation Cluster mass flow devices and multi-line mass flow devices incorporating the same
SG11201603487YA (en) 2013-11-04 2016-05-30 Uti Limited Partnership Methods and compositions for sustained immunotherapy
US20150374815A1 (en) 2014-06-25 2015-12-31 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
DK3233903T3 (da) 2014-12-19 2021-02-22 Eth Zuerich Kimære antigenreceptorer og anvendelsesfremgangsmåder
EP3067366A1 (en) 2015-03-13 2016-09-14 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin Combined T cell receptor gene therapy of cancer against MHC I and MHC II-restricted epitopes of the tumor antigen NY-ESO-1
KR20180020125A (ko) 2015-03-27 2018-02-27 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 변형된 t 세포 및 이의 제조 및 사용 방법
CN107847582A (zh) 2015-05-06 2018-03-27 优迪有限合伙公司 用于持续疗法的纳米颗粒组合物
MA44907A (fr) 2015-09-11 2018-07-18 Agenus Inc Cellules hôtes génétiquement modifiées et leurs procédés d'utilisation
MX2019005497A (es) 2016-11-09 2019-11-18 Uti Lp Moleculas de pmhc de clase ii recombinantes.
MX2019012058A (es) 2017-04-07 2019-11-11 Uti Lp Ensayo para medir la potencia de las interaccioned del receptor-ligando en nanomedicinas.
WO2019106435A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Uti Limited Partnership Methods of treating autoimmune disease

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101678090A (zh) * 2007-03-07 2010-03-24 乌第有限合伙公司 用于预防和治疗自身免疫病的组合物和方法
WO2010037397A1 (en) * 2008-10-01 2010-04-08 Dako Denmark A/S Mhc multimers in cmv immune monitoring

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104327158A (zh) * 2014-09-05 2015-02-04 马恒标 大蒜中提取得到的抗肿瘤活性的多肽
CN104327158B (zh) * 2014-09-05 2017-02-01 山东省肿瘤防治研究院 大蒜中提取得到的抗肿瘤活性的多肽
CN107921277A (zh) * 2015-05-14 2018-04-17 伊利诺伊大学理事会 使用循环肿瘤细胞作为生物标志物来监测癌症疗法的功效的方法
WO2018094570A1 (zh) * 2016-11-22 2018-05-31 深圳华大基因研究院 多肽及其应用
CN110191893A (zh) * 2016-11-22 2019-08-30 深圳华大生命科学研究院 多肽及其应用
US11390647B2 (en) 2016-11-22 2022-07-19 Bgi Shenzhen Polypeptide and use thereof
CN110191893B (zh) * 2016-11-22 2023-03-21 武汉华大吉诺因生物科技有限公司 多肽及其应用
CN113403276A (zh) * 2021-06-23 2021-09-17 河北大学 抗体功能化的外泌体制剂及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
MX2013004581A (es) 2013-10-01
CN105770906A (zh) 2016-07-20
WO2012062904A2 (en) 2012-05-18
IL225471B (en) 2018-04-30
IL225471A0 (en) 2013-06-27
US20170274096A1 (en) 2017-09-28
NZ608695A (en) 2014-12-24
US10172955B2 (en) 2019-01-08
JP5991979B2 (ja) 2016-09-14
RU2623038C2 (ru) 2017-06-21
US20120121649A1 (en) 2012-05-17
JP2017014255A (ja) 2017-01-19
SG189909A1 (en) 2013-06-28
US20190076545A1 (en) 2019-03-14
AU2016201498B2 (en) 2018-01-25
US9511151B2 (en) 2016-12-06
RU2013121571A (ru) 2014-11-20
SG10201509279QA (en) 2015-12-30
JP2013543855A (ja) 2013-12-09
CN103260648B (zh) 2016-04-13
MX350203B (es) 2017-08-30
EP2637700A2 (en) 2013-09-18
AU2016201498A1 (en) 2016-03-24
CA2817710A1 (en) 2012-05-18
CA2817710C (en) 2020-11-10
KR20140037789A (ko) 2014-03-27
AU2011328077A1 (en) 2013-04-11
BR112013007064A2 (pt) 2016-09-13
US11000596B2 (en) 2021-05-11
WO2012062904A3 (en) 2012-08-30
RU2017119820A (ru) 2018-11-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103260648B (zh) 用于预防和治疗癌症的组合物和方法
CN104884465B (zh) 用于治疗多发性硬化及相关病症的方法和组合物
CN102099014B (zh) 二氧化硅纳米颗粒及其用于制备疫苗的用途
JP6570082B2 (ja) 炎症を治療するための方法および組成物
AU2020384926A1 (en) Antigenic peptides for prevention and treatment of B-cell malignancy
CN113557035A (zh) 自组装肽纳米颗粒和其用途
S Neto et al. Target Delivery from Modified Polymers to Cancer Treatment
WO2016081783A1 (en) Novel nanoparticle-based vaccine targeting cancer/testis antigens (cta) and its use in solid and hematological malignancies
BR112020018196A2 (pt) Métodos e composições para tratar câncer com peptídeos de afinidade com ecm ligados a citocinas
Ghafelehbashi et al. Recent progress in cancer immunotherapy: Application of nano-therapeutic systems
Dhara et al. Improved targeting of therapeutics by nanocarrier-based delivery in cancer immunotherapy and their future perspectives
Sowmya et al. Preclinical and Commercial Trials of Cancer Diagnosis via Nano‐Imaging and Nanovaccinology
Traini Nanoparticle-filled micelles as versatile delivery vehicles for TLR4 mediated immunotherapy
Ta Nanobiotechnology Applied for Biomedicine: Lecture Note: Spring 2017
JP2008174490A (ja) 抗原性ペプチドを主成分とする薬剤
BR112014023859B1 (pt) Nanopartícula, uso da mesma, e composição

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160413

Termination date: 20201111