CN102933221A

CN102933221A - 使用胎盘干细胞治疗结节病

Info

Publication number: CN102933221A
Application number: CN2011800275668A
Authority: CN
Inventors: 詹姆士·爱丁格; 史蒂芬·菲施科夫; 亚历山大·弗兰茨基; 弗拉基米尔·扬科维奇; 毕涛·梁; 菲利普·马丁; 辛西娅·雷; 张小葵
Original assignee: Anthrogenesis Corp
Current assignee: Clarity Acquisition II LLC
Priority date: 2010-04-08
Filing date: 2011-04-06
Publication date: 2013-02-13
Also published as: CA2795401A1; WO2011127113A1; JP2013523823A; AU2011237743A1; IL222324A0; US20140219970A1; AR081450A1; EP2555783A1; KR20130092394A; TW201138792A; ZA201207534B; MX2012011543A; NZ602798A; US20110311491A1; AR116031A2; US8562973B2

Abstract

本发明提供的是使用胎盘细胞，例如本发明所述的胎盘干细胞和胎盘多能细胞(PDACs)，来治疗患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体的组合物和方法。本发明还提供的是包含所述细胞或其组合物的试剂盒。

Description

使用胎盘干细胞治疗结节病

1.发明领域

本文提供的是一种分离的胎盘细胞(例如胎盘干细胞)、所述胎盘干细胞的群体，及使用它们来治疗结节病或结节病相关疾病、障碍或病症例如系统性结节病、皮肤结节病、

氏综合征、神经结节病、肺结节病、心脏结节病、眼结节病或具有其它器官或组织受累(involvement)的结节病的方法。

2.发明背景

结节病(sarcoidosis)，也称为类肉瘤病(sarcoid disease)或Besnier-Boeck病，是一种多系统肉芽肿性炎症性疾病，可累及多个器官(例如肺、皮肤、心脏、眼、肝脏、神经系统、肾脏或骨骼肌系统)。结节病的病因仍不清楚，虽然人们一直认为它与遗传敏感个体在暴露于环境因素、职业因素或感染因素之后的免疫应答发生改变有关系。

类固醇疗法(例如皮质类固醇，例如泼尼松)一直是结节病的标准疗法。然而，皮质类固醇的使用有许多缺点。例如，某些患者对类固醇疗法不起反应。另外，皮质类固醇具有一些严重的副作用，并且它们的使用通常受到进行性或严重病症的限制。因此，存在着使用例如人胎盘干细胞来治疗结节病的新方法的需求。

3.发明概述

在一个方面，本文提供的是治疗、处理、缓解或预防结节病、或一种或多种结节病相关疾病、障碍和/或病症，例如与结节病相关的、导致结节病或由结节病引起的疾病、障碍和/或病症的方法。本文还提供的是用于治疗结节病、或由结节病引起的或与结节病有关的疾病、障碍或病症的试剂盒。

在一个实施方案中，本文提供的是一种治疗患有结节病、或结节病相关疾病、障碍或病症的个体的方法，该方法包括给予所述个体治疗有效量的组织培养塑料器具贴壁的胎盘细胞(tissue cultureplastic-adherent placental cells)，例如胎盘多能细胞或胎盘干细胞，在本文中也称为PDACs(胎盘衍生贴壁细胞(placenta derivedadherent cells)，例如在下文第4.2节中描述的胎盘衍生贴壁细胞)、或者PDACs(例如胎盘干细胞)条件化培养基，其用量和时间足以达到结节病或所述疾病、障碍或病症的一个或多个症状的可检测改善。

在另一个方面，本文提供的是胎盘细胞(例如胎盘干细胞)在制备用于治疗、处理、缓解或预防结节病或由结节病引起的或与结节病有关的疾病、障碍和/或病症的药物中的应用。

在另一个实施方案中，本文提供的是试剂盒，该试剂盒包含PDACs或其治疗用细胞组合物，可制成药学上可接受的形式，例如通过与药学上可接受的载体混合；和涂药器(applicator)，以及使用说明书。

在某些实施方案中，所述方法包括将胎盘细胞(例如胎盘干细胞)以足以可检测改善所述结节病或所述疾病或障碍的一个或多个症状的用量和时间给予所述个体，与所述胎盘干细胞给予之前的个体相比。

在某些实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少(例如可检测地减少)所述个体中的所述一个或多个症状的数量或严重程度，或减少所述个体中的所述一个或多个症状的数量或严重程度的增加速率，例如，和/或结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的一个或多个症状的可检测改善。在多个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少(例如可检测地减少)所述个体的一种或多种肉芽肿的数量或严重程度，或减少所述个体的一种或多种肉芽肿的数量或严重程度的增加速率。在一个实施方案中，所述治疗有效量是导致所述结节病的至少一个症状有可检测改善的量。

在一个具体的实施方案中，所述结节病是系统性结节病，并且所述症状包括肉芽肿的形成、疲劳、体重减轻、发热、酸痛、疼痛、关节炎、干眼症、膝关节肿胀、视力模糊、呼吸短促、咳嗽或皮肤病损中的一种或多种。

在另一个具体的实施方案中，所述结节病是皮肤结节病，并且所述症状包括皮肤病损。在一个更具体的实施方案中，所述皮肤结节病包含环形结节病、红皮病型结节病、鱼鳞癣状结节病、色素沉着不足结节病、硬斑病状结节病、粘膜结节病、丘疹性结节病、瘢痕结节病、皮下结节病或溃疡性结节病中的一种或多种。在一个更具体的实施方案中，所述皮肤病损包含结节性红斑、钱币状湿疹、多形性红斑、皮肤钙质沉着症和瘙痒症、冻疮样狼疮、皮肤斑、斑丘疹、皮肤中更深部的结节性病损或旧疤痕的浸润中的一种或多种。

在另一个具体的实施方案中，所述结节病是

氏综合征，并且所述症状包括结节性红斑、双侧肺门淋巴结肿大、关节炎、关节疼痛或发热中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述结节病是神经结节病，并且所述症状包括神经系统中肉芽肿的形成、头痛、精神混乱、不适或面部麻痹中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述结节病是肺结节病，并且所述症状包括咳嗽、呼吸短促、胸痛、胸闷感、声音嘶哑、鼻塞和反复或持久的鼻窦炎中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述结节病是心脏结节病，并且所述症状包括胸痛、心悸、充血性心力衰竭、心包炎或乳头肌功能紊乱、呼吸短促、踝关节肿胀、不规则心跳或猝死中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述结节病是眼结节病，并且所述症状包括红眼或泪眼、肉芽肿性眼色素层炎、虹膜小结、视网膜脉络膜炎、结膜炎、泪腺受累或突眼中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述结节病是具有其它器官或组织受累的结节病，例如具有骨骼肌、肝脏、血液、精神科、肾脏、脾脏、鼻窦、口、胃或肠、内分泌系统、胸膜或生殖系统受累的结节病。在另一个具体的实施方案中，所述结节病是肺部组织或器官除外的一个或多个器官或组织的结节病。在一个更具体的实施方案中，所述结节病是肺除外的一个或多个器官或组织的结节病。

在某些实施方案中，该治疗方法包括将至少约1x10⁷、5x10⁷、1x10⁸、5x10⁸、1x10⁹、5x10⁹或1x10¹⁰个胎盘细胞给予所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞已在体外增殖不超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个群体倍增。在任何本文所述实施方案的另一个实施方案中，所述胎盘细胞在所述给予之前已经过冷藏保存和解冻。

在任何上述方法的某些实施方案中，所述胎盘细胞是附着在组织培养塑料器具上并且通过流式细胞术检测是CD34^-、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺。在一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞具有分化成骨生成细胞或软骨生成细胞的能力。在另一个实施方案中，所述胎盘细胞是附着在组织培养塑料器具上；通过流式细胞术检测是CD34^-、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺；并且具有分化成具有骨生成细胞或软骨生成细胞的一个或多个特征(例如骨细胞或软骨细胞的特征)的细胞的能力。在其它的实施方案中，所述胎盘细胞另外还具有分化成具有以下特征的细胞的能力：神经细胞或神经原性细胞的一个或多个特征，例如神经元的特征；神经胶质细胞的一个或多个特征，例如神经胶质或星形胶质细胞的特征；脂肪细胞的一个或多个特征，例如脂肪细胞的特征；胰腺细胞的一个或多个特征；和/或心脏细胞的一个或多个特征。

在另一个实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术和/或RT-PCR检测是CD34^–、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺，以及CD38^–、CD45^–、CD80^–、CD86^–、CD133^–、HLA-DR,DP,DQ^–、SSEA3^–、SSEA4^–、CD29⁺、CD44⁺、CD73⁺、CD90⁺、CD105⁺、HLA-A,B,C⁺、PDL1⁺、ABC-p⁺和/或OCT-4⁺中的一种或多种。在另一个实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD34^–、CD45^–、CD10⁺、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺。在另一个实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD34^–、CD45^–、CD10⁺、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺。在另一个实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD34^–、CD45^–、CD10⁺、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺，并且另外还是CD29⁺、CD38^–、CD44⁺、CD54⁺、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。在另一个实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD54⁺、CD73⁺、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺。

在另一个实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺胎盘细胞另外还是CD117^–、CD133^–、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD54⁺、CD73⁺、CD80^-、CD86^-、CD90⁺、CD105⁺、CD117^-、CD133^-、CD200⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺。

在另一个实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是ABC-p⁺(通过流式细胞术检测)或OCT-4⁺(POU5F1⁺)(例如通过RT-PCR测定)，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白(也称为乳癌抗性蛋白(BCRP)及称为米托蒽醌抗性蛋白(MXR))。在另一个实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是SSEA3^-或SSEA4^-，例如通过流式细胞术测定，其中SSEA3是阶段特异性胚胎抗原3(Stage Specific Embryonic Antigen 3)，而SSEA4是阶段特异性胚胎抗原4。在另一个实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是SSEA3^–和SSEA4^–。

在本文所述方法的另一个实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是MHC-I⁺(例如HLA-A,B,C⁺)、MHC-II^–(例如HLA-DP,DQ,DR^-)或HLA-G^–中的一种或多种。在另一个实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种通过流式细胞术检测另外还是MHC-I⁺(例如HLA-A,B,C⁺)、MHC-II^–(例如HLA-DP,DQ,DR^-)和HLA-G^–中的每一种。

在另一个实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺细胞另外还是CD29⁺、CD38^–、CD44⁺、CD54⁺、CD80^–、CD86^–、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。在另一个实施方案中，所述细胞另外还是CD44⁺。在另一个实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD62E^–、CD62L^–、CD62P^–、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^–、CD144/VE-钙粘着蛋白^低、CD184/CXCR4^–、CD133^–、OCT-4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^–或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。在另一个实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54/ICAM⁺、CD62E^–、CD62L^–、CD62P^–、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^–、CD144/VE-钙粘着蛋白^dim、CD184/CXCR4^–、CD133^–、OCT-4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^–)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^-和程序性死亡-1配体(PDL1)⁺。

在本文所公开的方法的其它实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD200⁺和HLA-G^-；CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺；CD200⁺和OCT-4⁺；CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^-；CD73⁺和CD105⁺；或OCT-4⁺；或其任何组合。

在本文所公开的方法的某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^-、CD38^-、CD44⁺、CD45^-、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^-、SSEA4^-、OCT-4⁺、MHC-I⁺或ABC-p⁺中的一种或多种，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白(也称为乳癌抗性蛋白(BCRP)及称为米托蒽醌抗性蛋白(MXR))。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–和OCT-4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD54⁺、SH2⁺、SH3⁺和SH4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD54⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺和OCT-4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、MHC-1⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和ABC-p⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺和OCT-4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^–、SSEA3^–和SSEA4^–。在一个具体的实施方案中，所述OCT-4⁺、CD34^–、SSEA3^–和SSEA4^–细胞另外还是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺和SH4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和CD34^–，且或是SH3⁺或SH4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD34^–且或是CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD54⁺、CD90⁺或OCT-4⁺。在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD34^–、CD105⁺和CD200⁺。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法中的分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29^–、CD44⁺、CD45^–、CD54/ICAM^–、CD62-E^–、CD62-L^–、CD62-P^–、CD80^–、CD86^–、CD103^–、CD104^–、CD105⁺、CD106/VCAM⁺、CD144/VE-钙粘着蛋白^dim、CD184/CXCR4^–、β2-微球蛋白^dim、MHC-I^dim、MHC-II^-、HLA-G^dim和/或PDL1^dim中的一种或多种。在某些实施方案中，这样的胎盘细胞至少是CD29^-和CD54^-。在另一个实施方案中，这样的分离的胎盘细胞至少是CD44⁺和CD106⁺。在另一个实施方案中，这样的分离的胎盘细胞至少是CD29⁺。

在任何上述特征的某些实施方案中，细胞标记(例如分化簇或免疫原性标记)的表达是通过流式细胞术测定的。在某些其它的实施方案中，细胞标记的表达是通过RT-PCR测定的。

在另一个实施方案中，可用于本文所公开方法中的所述胎盘细胞，例如，所述CD10⁺、CD34^-、CD105⁺、CD200⁺细胞，以比同等数量骨髓衍生间充质干细胞高的可检测水平表达一个或多个基因，其中所述的一个或多个基因是ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A中的一种或多种，并且其中所述的骨髓衍生间充质干细胞在培养物中经历了同所述分离的胎盘细胞已经历的传代数相等的传代数。在某些实施方案中，所述一个或多个基因的所述表达是例如通过RT-PCR或微阵列分析测定的，例如使用U133-A微阵列(Affymetrix)。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞当培养例如从约3到约35个群体倍增不等时，在包含以下成分的培养基中表达所述一个或多个基因：60%DMEM-LG(例如来自Gibco)和40%MCDB-201(例如来自Sigma)；2%胎牛血清(例如来自HycloneLabs.)；1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)；1x亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10^-9M地塞米松(例如来自Sigma)；10^-4M抗坏血酸2-磷酸酯(例如来自Sigma)；10ng/mL表皮生长因子(例如来自R&DSystems)；和10ng/mL血小板衍生生长因子(PDGF-BB)(例如来自R&D Systems)。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞当培养从约3到约35个群体倍增时，在包含以下成分的培养基中表达所述一个或多个基因：60%DMEM-LG(例如来自Gibco)和40%MCDB-201(例如来自Sigma)；2%胎牛血清(例如来自Hyclone Labs.)；1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)；1x亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10^-9M地塞米松(例如来自Sigma)；10^-4M抗坏血酸2-磷酸酯(Sigma)；10ng/mL表皮生长因子(例如来自R&D Systems)；和10ng/mL血小板衍生生长因子(PDGF-BB)(例如来自R&D Systems)。

在有些实施方案中，所述胎盘细胞表达CD200但不表达HLA-G，或表达CD73、CD105和CD200，或表达CD200和OCT-4，或表达CD73和CD105但不表达HLA-G，或表达CD73和CD105并且当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体(embryoid-likebody)形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体，或表达OCT-4并且当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体。

在某些实施方案中，所述胎盘细胞以比同等数量骨髓衍生间充质干细胞(BM-MSCs)高的可检测水平表达CD200和ARTS1(1型肿瘤坏死因子的氨肽酶调节物)；ARTS-1和LRAP(白细胞衍生精氨酸氨肽酶)；IL6(白介素-6)和TGFB2(转化生长因子,β2)；IL6和KRT18(角蛋白18)；IER3(立即早期应答3)、MEST(中胚层特异性转录物同系物)和TGFB2；CD200和IER3；CD200和IL6；CD200和KRT18；CD200和LRAP；CD200和MEST；CD200和NFE2L3(核因子(类红细胞衍生2)样3)；或CD200和TGFB2，其中所述骨髓衍生间充质干细胞在培养物中经历了同所述分离的胎盘细胞已经历的传代数相等的传代数。在其它的实施方案中，所述胎盘细胞以比同等数量骨髓衍生间充质干细胞BM-MSCs高的可检测水平表达ARTS-1、CD200、IL6和LRAP；ARTS-1、IL6、TGFB2、IER3、KRT18和MEST；CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3，和TGFB2；ARTS-1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3和TGFB2；或IER3、MEST和TGFB2，其中所述骨髓衍生间充质干细胞在培养物中经历了同所述分离的胎盘细胞已经历的传代数相等的传代数。

在各种不同的实施方案中，可用于本文所公开方法中的所述分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，都包含在细胞群体里面，其中所述群体中细胞的至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%是所述分离的胎盘细胞。在某些其它的实施方案中，所述细胞群体中的胎盘细胞基本上不含具有母体基因型的细胞；例如，在所述群体中的胎盘细胞的至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有胎儿基因型，即是来源于胎儿的。在某些其它的实施方案中，包含所述胎盘细胞的细胞群体基本上不含具有母体基因型的细胞；例如，在所述群体中的细胞的至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有胎儿基因型，即是来源于胎儿的。在某些其它的实施方案中，包含所述胎盘细胞的细胞群体包含具有母体基因型的细胞；例如，在所述群体中的细胞的至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有母体基因型，即是母体来源的。

在本文所述胎盘细胞(例如PDACs)的任何实施方案的一个实施方案中，当包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时，例如在增殖条件下培养时，所述胎盘细胞促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体。

在本文所公开的任何胎盘细胞的某些实施方案中，所述细胞是人的。

在某些实施方案中，任何胎盘细胞，例如本文所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞，对接受者来说都是自体的。在某些其它的实施方案中，任何胎盘细胞，例如本文所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞，对接受者来说都是异源的。

在某些实施方案中，所述胎盘细胞在所述给予之前是冷藏保存的。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是从胎盘细胞库(例如PDAC库)获得的。

在分离的胎盘细胞的上述实施方案的任一个中，所述分离的胎盘细胞在生长培养基即配制成促进增殖的培养基中在培养期间一般不分化，例如，在生长培养基中在增殖期间一般不分化。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞不需要饲养层来增殖。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞仅仅在饲养细胞层不存在时培养的培养物中不分化。

在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞是通过灌注产后胎盘获得的，该产后胎盘已排干血液并经灌注去掉残留血液；已排干血液但不灌注去掉残留血液；或者既不排干血液也不经灌注去掉残留血液。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是通过物理和/或酶促破坏胎盘组织获得的。

在下文第4.2节详细描述了可用于本文提供的方法中的胎盘细胞的细胞表面标记、分子标记和遗传标记。

在多个具体的实施方案中，要给予胎盘干细胞的所述个体另外还给予第二种疗法(例如第二种治疗剂)中的一种或多种，其中所述的第二种疗法(例如第二种治疗剂)包含抗炎药、类固醇药、免疫抑制药、抗生素、TNF-α抑制剂(例如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab))、PDE-4抑制剂(例如apremiliast)、IL-12抑制剂、IL-23抑制剂、阿肽地尔(aviptadil)、IFN-γ抑制剂或抗疟药(例如氯喹(chloroquine)或羟氯喹(hydroxychloroquine))。

可用于治疗结节病、或结节病相关疾病、障碍或病症的抗炎药的实例包括但不限于美沙拉嗪(mesalamine)、5-ASA(5-氨基水杨酸(5-aminosalicylic acid))类药(例如(美沙拉嗪(mesalamine)，缓释剂型)、DIPENTUM(奥沙拉嗪(Osalazine))、(美沙拉嗪(mesalamine)，控释剂型))、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)(5-ASA和磺胺吡啶(sulfapyridine)的组合)、抗炎抗体类药(例如英夫利昔单抗(infliximab)

)等。可用于治疗结节病、或结节病相关疾病、障碍或病症的类固醇药的实例包括但不限于可的松(cortisone)、氢化可的松(hydrocortisone)、泼尼松(predisone)、甲基泼尼松(methylprednisone)等。典型地，根据本领域的实践，类固醇药的剂量首先以相对大的剂量递送，然后随着炎症消退(inflammation subsides)而递送较小的剂量。可用于治疗结节病、或结节病相关疾病或障碍的免疫抑制药的实例包括但不限于环孢菌素A(cyclosporine A)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)或硫唑嘌呤(azathioprine)。任何抗生素类药都可以用于治疗克罗恩病(Crohn’s disease)，包括例如氨苄西林(ampicillin)、磺酰胺(sulfonamide)、头孢菌素(cephalosporin)、四环素(tetracycline)和/或甲硝唑(metronidazole)。在另一个具体的实施方案中，所述的第二种疗法是给予猪鞭虫(porcine whipworms)，例如猪鞭虫(Trichuris suis)的卵。

在另一个实施方案中，对于局部或系统施用，可以通过移植、植入(例如植入细胞本身或作为基质-细胞组合的组成部分的细胞)、注射(例如直接注射到疾病或病症部位，例如直接注射到肉芽肿)、输注、通过导管递送或用于提供细胞疗法的本领域已知的任何其它手段，完成将胎盘细胞(例如PDACs)或包含此类细胞的治疗组合物给予有需要的个体。在其它实施方案中，可以通过静脉内、动脉内、腹膜内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内、眼内、玻璃体内(例如在有眼受累的情况下)、大脑内、脑室内(例如在有神经或脑受累的情况下)、心脏内(例如在有心脏受累的情况下)、鞘内、骨内输注、膀胱内、和经皮、脑池内、硬膜外、皮下施用，将胎盘细胞(例如PDACs)或包含此类细胞的治疗组合物递送到某个个体。

在多个具体的实施方案中，将胎盘细胞局部地给予(例如直接给予)一个或多个由结节病引起的或与结节病有关的受损害组织内或其附近(例如在所述受损害组织的1-5cm以内)。在多个具体的实施方案中，将胎盘细胞病损内(intralesionally)给予(例如直接给予)一个或多个由结节病引起的或与结节病有关的病损或肉芽肿内或其附近(例如在所述病损或肉芽肿的1-5cm以内)。在某些实施方案中，将胎盘细胞与基质(例如可注射基质)组合给予。在某些其它的实施方案中，将胎盘细胞与固体基质(例如骨代用品)组合给予患有结节病相关疾病或障碍的个体，其中基质或骨代用品在下文第4.7.4节中有示例性描述。

在上述方法的另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是通过大剂量(bolus)注射给予的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是通过静脉内输注给予的。在一个具体的实施方案中，所述静脉内输注是静脉内输注约1至约8小时。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是给予颅内的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是给予腹膜内的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是给予动脉内的。在该治疗方法的另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是给予肌内、真皮内、皮下或眼内的。

在上述方法的另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是通过手术植入给予所述个体一种包含所述分离的胎盘细胞的物质组合物(composition of matter)。在一个具体的实施方案中，所述物质组合物是基质(matrix)或支架(scaffold)。在另一个具体的实施方案中，所述基质或支架是水凝胶。在另一个具体的实施方案中，所述基质或支架是去细胞化组织。在另一个具体的实施方案中，所述基质或支架是合成的生物可降解的组合物。在另一个具体的实施方案中，所述基质或支架是泡沫。

在上述方法的另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞给予所述个体一次。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞分两次或更多次独立用药给予所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括给予介于约1x10⁴和1x10⁵之间的分离的胎盘细胞，例如，胎盘细胞/千克所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括给予介于约1x10⁵和1x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括给予介于约1x10⁶和1x10⁷之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括给予介于约1x10⁷和1x10⁸之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体。在其它具体的实施方案中，所述给予包括给予介于约1x10⁶和约2x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约2x10⁶和约3x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约3x10⁶和约4x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约4x10⁶和约5x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约5x10⁶和约6x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约6x10⁶和约7x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约7x10⁶和约8x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；介于约8x10⁶和约9x10⁶之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体；或介于约9x10⁶和约1x10⁷之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将介于约1x10⁷和约2x10⁷之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体给予所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将介于约1.3x10⁷和约1.5x10⁷之间的分离的胎盘细胞/千克所述个体给予所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将高达约3x10⁷分离的胎盘细胞/千克所述个体给予所述个体。在一个具体的实施方案中，所述给予包括将介于约5x10⁶和约2x10⁷之间的分离的胎盘细胞给予所述个体。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将约20毫升溶液中的约150x10⁶分离的胎盘细胞给予所述个体。

在一个具体的实施方案中，所述给予包括将介于约5x10⁶和约2x10⁷之间的分离的胎盘细胞给予所述个体，其中所述细胞是含在包含10%右旋糖酐(例如右旋糖酐-40)、5%人血清白蛋白和任选的免疫抑制剂的溶液中。

在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将介于约5x10⁷和3x10⁹之间的分离的胎盘细胞给予静脉内。在多个具体的实施方案中，所述给予包括将约9x10⁸分离的胎盘细胞或约1.8x10⁹分离的胎盘细胞给予静脉内。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将介于约5x10⁷和1x10⁸之间的分离的胎盘细胞给予病灶内。在另一个具体的实施方案中，所述给予包括将约9x10⁷分离的胎盘细胞给予病灶内。

3.1.定义

本文所用的术语“约”，当指陈述的数值时，表示在所陈述数值的±10%以内的值。

本文所用的术语“SH2”是指结合细胞标记CD105上的表位的抗体。因此，被称作SH2⁺的细胞是CD105⁺。

本文所用的术语“SH3”和SH4”是指结合细胞标记CD73上存在的表位的抗体。因此，被称作SH3⁺和/或SH4⁺的细胞是CD73⁺。

胎盘具有在其里面发育的胎儿的基因型，但在妊娠期间也与母体组织有密切的物理接触。所以，本文所用的术语“胎儿基因型”意指胎儿的基因型，例如，与从中获得特殊的分离胎盘细胞(如本文所述的)的胎盘相关的胎儿的基因型，而不是怀胎儿的母亲的基因型。本文所用的术语“母体基因型”意指怀胎儿(例如与从中获得特殊的分离胎盘细胞(如本文所述的)的胎盘相关的胎儿)的母亲的基因型。

本文所用的术语“肉芽肿”是指由于炎症反应生成的免疫细胞的球状集合体，举例来说，当免疫系统试图消灭被视为外来的物质(例如感染性生物体例如细菌和真菌以及其它材料例如角蛋白、缝线碎片和植物颗粒)但无法将其消灭时。

本文所用的术语“分离的细胞”，例如“分离的胎盘细胞(isolatedplacental cell)”、“分离的胎盘干细胞(isolated placental stem cell)”等，意指基本上与从中获得干细胞的组织(例如胎盘)的其它不同细胞分离开的细胞。如果细胞，例如非干细胞(干细胞是与其天然缔合的)或展示不同标记概况(marker profile)的干细胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%，例如在干细胞的收集和/或培养期间从干细胞中取出，则这种细胞就是“分离的”。

本文所用的“多能的”，当提及细胞时，意指细胞具有分化成某些、但不一定是所有类型的体细胞，或者分化成具有某些、但不是具有所有类型的体细胞的特征的细胞，或者分化成具有三个胚层(three germlayers)的一层或多层的细胞的能力。在某些实施方案中，例如，分离的胎盘细胞(PDAC)，如下文第4.2节所描述的，其具有分化成具有神经生成细胞(neurogenic cell)、软骨生成细胞(chondrogenic cell)和/或骨生成细胞(osteogenic cell)的特征的能力，就是一种多能细胞。

本文所用的术语“分离的细胞群体”意指基本上与从中获得细胞群体的组织(例如胎盘)的其它细胞分离开的细胞群体。

本文所用的术语“胎盘细胞”是指从哺乳动物胎盘(例如，如下文第4.2节所描述的)分离出来的或从哺乳动物胎盘分离的细胞培养出来的干细胞或祖细胞，在本文中也称为“PDACs”，或者称为原代分离的细胞或培养的细胞，不论在原代培养之后的传代数如何。在某些实施方案中，然而，本文所用的术语“胎盘细胞”不是指滋养层细胞(trophoblasts)、细胞滋养层细胞(cytotrophoblasts)、合胞体滋养层细胞(syncitiotrophoblasts)、成血管细胞(angioblasts)、成血成血管细胞(hemangioblasts)、胚胎生殖细胞、胚胎干细胞、从囊胚细胞的内层细胞质中获得的细胞、或从晚期胚胎的性腺嵴中获得的细胞，例如胚胎生殖细胞；并且本文提供的方法中所用的胎盘细胞也不是以上提及的细胞。如果细胞显示出干细胞的属性，例如与一种或多种干细胞类型相关的标记或基因表达概况；在培养物中复制至少10-40次的能力，和分化成显示出三个胚层的一层或多层的分化细胞的特征的能力，那么这种细胞被视为“干细胞”。除非本文中另有说明，否则术语“胎盘的”包括脐带。本文所公开的分离的胎盘细胞，在某些实施方案中，在分化条件下能在体外(in vitro)分化，在体内(in vivo)分化，或者它们两者。

当特定标记超过背景是可检测的时候，本文所用的胎盘细胞对于该标记来说是“阳性的”。特定标记的检测，可以例如或者通过使用抗体、或者通过基于编码标记的基因或mRNA序列的寡核苷酸探针或引物来完成。例如，胎盘细胞对于例如CD73是阳性的，因为CD73在胎盘细胞上以可检测地大于背景(与例如同种型(isotype)对照相比较)的量是可检测的。当标记可用于将一种细胞与至少另一种细胞类型区别开，或者可用于选择或分离细胞(当标记存在或者由细胞表达时)时，则这种细胞对于该标记也是阳性的。在例如抗体介导的检测的情况下，“阳性”，作为特定细胞表面标记的指示存在时，意指使用对该标记有特异性的抗体例如荧光标记的抗体，该标记是可检测的，“阳性”也指以产生信号的量展示标记的细胞，例如在细胞计数器(cytometer)中，即超过背景是可检测的。举例来说，若细胞用对CD200有特异性的抗体可检测地标记，并且来自该抗体的信号可检测地高于对照(例如背景或同种型对照)的信号，那么该细胞就是“CD200⁺”。反过来说，在相同情况下中的“阴性”意指与对照(例如背景或同种型对照)相比，使用对细胞表面标记有特异性的抗体，该标记是不可检测的。举例来说，若细胞用对CD34有特异性且程度大于对照的抗体无法可再现可检测地标记，那么这种细胞就是“CD34^-”。使用合适的对照，使用抗体无法检测或无法可检测的标记，以同样的方式确定为是阳性还是阴性。举例来说，如果在来自细胞或细胞群体的RNA中检出的OCT-4 RNA量是可检测地大于背景，如例如通过RNA检测法例如RT-PCR、狭线印迹法(slot blot)等测定的，那么这种细胞或细胞群体可被确定是OCT-4⁺。除非本文中另有说明，否则使用抗体来检测分化簇(cluster of differentiation,“CD”)标记。在某些实施方案中，如果使用RT-PCR，OCT-4是可检测的，那么OCT-4被确定是存在的，且细胞是“OCT-4⁺”。

本文所用的表述语“低”，当涉及流式细胞术中可检测的标记表达时，意指标记表达少于被测细胞的10%，或者在例如流式细胞术中，归因于标记的荧光超过背景小于1log。

本文所用的“治疗”包括疾病、障碍或病症(例如sarcpodpsos)或其任何参数或症状的严重性得到缓解、改善、减轻，或者其时程缩短。

4.发明详述

4.1结节病或由结节病引起的或与结节病有关的疾病、障碍或病症的治疗

本文提供的是治疗结节病或由结节病引起的或与结节病有关的疾病或障碍的方法，包括给予有效量的组织培养塑料器具贴壁的胎盘干细胞，例如PDACs，正如下文第4.2节所描述的。下文详细论述了用于治疗此类个体和用于给予此类干细胞(单独或与其它疗法组合)的方法。

4.1.1结节病

结节病是一种多系统肉芽肿性炎症性疾病。该病是以多个器官中有小的、肉芽性的炎症病损或肉芽肿(例如非干酪性肉芽肿)的形成，和/或在受累的组织或器官中免疫应答的存在(例如CD4⁺T淋巴细胞和巨噬细胞的存在)为典型特征。肉芽肿性炎症可归因于单核细胞、巨噬细胞、明显Th1应答和活化T-淋巴细胞的累积，伴有TNF-α、IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-1、IL-6或IL-15的产生升高。

结节病可以是系统性的(例如系统性结节病)或局部的(例如局灶性类肉瘤样反应)。肉芽肿可在几乎任何器官中出现，但在肺或淋巴结中最为常见。其它的常见部位包括肝、脾、皮肤和眼。特定器官的受累在程度上可以是温和的或严重的、自限性的或慢性的、和限制的或广泛的。症状常常是逐渐出现的，但可突然偶发出现。结节病患者所经历的常见症状包括疲劳、呼吸短促、咳嗽不止、面部、手臂或小腿上的皮损或皮疹、眼的炎症、体重减轻、盗汗、呼吸困难、咳嗽、胸部不适、啰音(crackles)、倦怠、虚弱、厌食、体重减轻或发热。其它症状包括例如淋巴腺肿大(腋窝肿块)、肝肿大、脾肿大、口干或鼻出血。下文描述了不同类型结节病的症状。

临床病程一般变化较大。在有些实施方案中，结节病可以是无症状的。在其它的实施方案中，组织或器官可以仍然发炎或变成瘢痕性的或纤维化的，如果组织或器官中的一种或多种肉芽肿不愈合的话。在又一些实施方案中，结节病可引起致虚弱的慢性病，最终可导致死亡(例如不可逆的肺纤维化)。

因此，在一个方面，本文所提供的PDACs、此类细胞的群体和包含PDACs的细胞群体，都可用于治疗表现结节病、或由结节病引起的或与结节病有关的一种或多种疾病、障碍或病症的个体。在一个具体的实施方案中，本文提供的是治疗患有结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述结节病的一个或多个症状的可检测改善。在一个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少(例如可检测地减少)所述个体的一种或多种肉芽肿的数量或严重程度，或减少所述个体的一种或多种肉芽肿的数量或严重程度的增加速率。在另一个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少(例如可检测地减少)单核细胞、巨噬细胞或活化T-淋巴细胞的数量，或减少单核细胞、巨噬细胞或活化T-淋巴细胞的数量的增加速率。在另一个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少(例如可检测地减少)所述个体的一种或多种TNF-α、IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-1、IL-6、IL-15或Th1应答的水平，或减少其水平的增加速率。

在某些实施方案中，所述结节病是系统性结节病、皮肤结节病、氏综合征、神经结节病、肺结节病、心脏结节病、眼结节病、肝脏结节病、骨骼肌结节病、肾脏结节病或具有其它器官或组织受累的结节病中的一种或多种。

系统性结节病-是具有多器官受累的结节病。在一个实施方案中，本文提供的是治疗患有系统性结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述系统性结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述系统性结节病的一个或多个症状的可检测改善。在有些实施方案中，所述的系统性结节病的一个或多个症状包括非特异性全身症状，例如体重减轻、疲劳、食欲减退、发热、发冷、盗汗、肉芽肿的形成、疲劳、酸痛、疼痛或关节炎。

在其它的实施方案中，系统性结节病可与受累的特定器官有关的特异性症状同时出现(例如干眼症、膝关节肿胀、视力模糊、呼吸短促、咳嗽、皮肤病损(例如皮疹)等)。在多个具体的实施方案中，所述特异性症状是肺、肺淋巴、骨骼肌、肝脏、关节、血液、皮肤、眼、精神科、神经系统、肾脏、脾脏、神经、鼻窦、心脏、骨、口、胃、肠、内分泌系统、胸膜或生殖系统症状中的一种或多种。

皮肤结节病–是一种具有皮肤受累的结节病的并发症。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有皮肤结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述皮肤结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述皮肤结节病的一个或多个症状的可检测改善。在某些实施方案中，所述皮肤结节病包含环形结节病、红皮病型结节病、鱼鳞癣状结节病、色素沉着不足结节病、硬斑病状结节病、粘膜结节病、丘疹性结节病、瘢痕结节病、皮下结节病和溃疡性结节病。在有些实施方案中，所述的皮肤结节病的一个或多个症状包括多种皮肤病损或病症、或特异性或非特异性(例如类似于一些其它的皮肤病)。示例性的与皮肤结节病相关的皮肤病损或病症包含丘疹(例如肉芽肿性红斑痤疮、粉刺或良性皮肤附属器官肿瘤)、皮肤斑(例如银屑病、扁平苔藓、钱币状湿疹、盘状红斑狼疮、环形肉芽肿、皮肤T-细胞淋巴瘤、卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma)或第二期梅毒)、冻疮样狼疮(例如疮疤或盘状红斑狼疮)、结节性红斑(例如凸起、发红、松驰的皮肤疼痛、蜂窝织炎、疖病或其它炎症性脂膜炎)、斑丘疹、皮肤中更深部的结节性病损或旧疤痕的浸润。其它皮肤症状包括例如皮疹、旧疤痕变得更凸起、皮肤病损或脱发。

氏综合征-代表系统性结节病的一种急性表现，它以结节性红斑、双侧肺门淋巴结肿大和关节炎或关节疼痛三联症为典型特征。它也可以伴有发热。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有

氏综合征的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述

氏综合征的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述氏综合征的一个或多个症状的可检测改善。在多个具体的实施方案中，所述一个或多个症状包括结节性红斑、双侧肺门淋巴结肿大、关节炎、关节疼痛或发热。

神经结节病或神经类肉瘤–是指在脑、脊髓和神经系统的任何其它部位出现有炎症和异常沉积的结节病。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有神经结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述神经结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述神经结节病的一个或多个症状的可检测改善。神经结节病可累及神经系统的任何部位，例如面部肌肉的神经(颅神经VII)，其可导致面神经无力(例如面瘫)、眼部神经或控制味觉、嗅觉或听力的神经的症状。

在有些实施方案中，神经结节病的症状包括月经期中的变化、过度疲乏(例如疲劳)、头痛、视力变化、视网膜病变、神经根痛(radicularpain)、肠或膀胱控制的丧失、腕管综合征和/或截瘫、过度口渴或高尿输出。在其它的实施方案中，神经结节病的症状包括精神混乱、定向障碍、听力减退、痴呆或谵妄、头昏(dizziness)或眩晕(例如运动的异常感觉)、复视觉或其它视力问题、面瘫(虚弱、耷拉下垂)、头痛、嗅觉或味觉的丧失、异常味觉、精神困扰、癫痈发作或言语减退、肌肉无力或感觉丧失，或者在有些情况下，垂体功能减退。在多个具体的实施方案中，神经结节病的症状包括神经系统(例如脑、脊髓、或面神经和视神经)中肉芽肿的形成、头痛、精神混乱、不适或面部麻痹。

肺结节病–是指累及肺组织或器官(例如肺)的结节病。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有肺结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述肺结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述肺结节病的一个或多个症状的可检测改善。肺结节病的症状通常包括肺部和/或胸部症状，这些症状可通过例如肺镓(Ga)扫描、胸部X射线、肺功能试验、运动脉搏氧饱和度(exercise pulse oximetry)、胸部的CT扫描、PET扫描、CT指导的活检、纵隔镜检查术、开放肺活检或支气管镜检查法加活检来确定。

在某些实施方案中，肺结节病的症状包括肺泡隔、细支气管和支气管壁中的肉芽肿，呼吸短促、咳嗽、肺容积损失和异常的肺僵硬、肺功能异常或退化、肺容积减小、顺应性降低、肺组织的瘢痕形成或从肺组织出血。其它症状包括例如吸入肺部的空气量有限、高于正常呼气流速、肺活量减小(完全呼入到完全呼出)、FEV1/FVC比率增加、阻塞性肺变化(其可引起可呼出的空气量减少)或胸部淋巴结肿大(其可压迫气道)或当体内炎症或结节阻碍气流时出现的肺高压或肺衰竭。

虽然不受任何理论的束缚，但是Scadding标准是最常用于患有肺结节病的患者疾病分期的度量法。简而言之，各期的影像学证据可描述如下：I期：双侧肺门和/或纵隔淋巴结病变(淋巴结肿大)；II期：双侧肺门和/或纵隔淋巴结病变；肺浸润的证据；III期：实质组织中的改变；无淋巴结肿大；和IV期：肺纤维化的证据。因此，本文提供的是治疗患有肺结节病或由肺结节病引起的或与肺结节病有关的疾病、障碍或病症的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述肺结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述肺结节病的一个或多个症状的可检测改善，如通过Scadding标准确定的。

在有些实施方案中，肺结节病可发展成肺纤维化(例如不可逆的肺纤维化)，其可使肺的结构变形并且削弱呼吸或导致支气管扩张，支气管扩张是一种以大气道的破坏和加宽为特征的肺病。因此，在一个具体的实施方案中，所述疾病或障碍是肺纤维化或支气管扩张(bronchietasis)。在一个更具体的实施方案中，本文提供的是治疗患有由结节病引起的或与结节病有关的肺纤维化(例如不可逆的肺纤维化)的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述肺纤维化(例如不可逆的肺纤维化)的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述肺纤维化(例如不可逆的肺纤维化)的一个或多个症状的可检测改善。在另一个具体的实施方案中，本文提供的是治疗患有由结节病引起的或与结节病有关的支气管扩张的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述支气管扩张的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述支气管扩张的一个或多个症状的可检测改善。

在其它的实施方案中，结节病可累及肺淋巴系统例如肺门(hilar)或纵隔受累，通过胸部X射线确定的，并且与无触痛的外周或颈淋巴结病变的症状一同存在。

心脏结节病–是指具有心肌受累的结节病。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有心脏结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述心脏结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述心脏结节病的一个或多个症状的可检测改善。

在有些实施方案中，心脏结节病的一个或多个症状类似于循环系统疾病或障碍的症状，例如，心肌梗塞、心肌病、动脉瘤、心绞痛、主动脉狭窄、主动脉炎、心律失常、动脉硬化、动脉炎、非对称性心室间隔肥厚(ASH)、动脉粥样硬化、心房颤动和快速跳动、细菌性心内膜炎、巴洛综合征(Barlow’s Syndrome)(二尖瓣脱垂)、心动过缓、伯格病(Buerger’s Disease)(血栓闭塞性脉管炎)、心脏肥大、心脏炎、颈动脉疾病、主动脉缩窄、先天性心脏缺损、充血性心力衰竭、冠状动脉疾病、艾森门格尔综合征(Eisenmenger’s Syndrome)、栓塞、心内膜炎、红斑性肢痛病、颤动、肌纤维发育不良、心脏传导阻滞(heartblock)、心脏杂音、高血压、低血压、特发性婴儿动脉钙化、川崎病(Kawasaki Disease)(粘膜皮肤淋巴结综合征、粘膜皮肤淋巴结病、小儿多动脉炎)、代谢综合征、微血管心绞痛、心肌炎、发作性心房心动过速(PAT)、结节性周围动脉炎(多动脉炎、结节性多动脉炎)、心包炎、外周血管疾病、临界肢体缺血、静脉炎、肺瓣膜狭窄(肺动脉狭窄)、雷诺病(Raynaud’s Disease)、肾动脉狭窄、肾血管性高血压、风湿性心脏病、糖尿病性血管病变、间隔缺损、无症状心肌缺血(silentischemia)、X综合征、心动过速、Takayasu动脉炎、法洛四联症(Tetralogy of Fallot)、大血管移位、三尖瓣闭锁、永存动脉干(truncusarteriosus)、心瓣膜病、静脉曲张性溃疡、静脉曲张、脉管炎、心室间隔缺损、午夫-帕金森-怀特综合征(Wolff-Parkinson-WhiteSyndrome)、心内膜垫缺损、急性风湿性发热、急性风湿性心包炎、急性风湿性心内膜炎、急性风湿性心肌炎、慢性风湿性心脏病、二尖瓣的疾病、二尖瓣狭窄、风湿性二尖瓣不足、主动脉瓣的疾病、其它心内膜结构的疾病、缺血性心脏病(急性和亚急性)、心绞痛、急性肺心脏病、肺栓塞、慢性肺心脏病、脊柱后侧凸性心脏病、心肌炎、心内膜炎、心内膜心肌纤维化、心内膜纤维弹性组织增生、房室阻滞、心脏节律障碍、心肌变性、脑血管疾病、动脉、小动脉和毛细血管的疾病、或血管和淋巴管的疾病。因此，在某些实施方案中，患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体的改善可以通过所述结节病或所述结节病相关疾病或障碍的一个或多个症状的可检测改善来评价或证明，其中所述个体给予了本文提供的PDACs或治疗组合物。

在某些实施方案中，该方法包括将胎盘细胞按心脏功能的一个或多个指标足以达到可检测改善的用量和时间给予所述个体，其中所述的心脏功能的指标是胸部心脏输出(CO)、心脏指数(CI)、肺动脉楔压(PAWP)、心脏指数(CI)、%分数缩短(%FS)、射血分数(EF)、左心室射血分数(LVEF)；左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)、收缩率(dP/dt)、心房或心室功能降低、泵送效率增加、泵送效率的损失率减小、血液动力学功能的损失减小、或与心肌病变相关的并发症减少，正如与给予所述PDACs之前的个体相比较的。

在本文提供的治疗方法的多个具体的实施方案中，所述PDACs是与干细胞(即，不是PDACs的干细胞)、成肌细胞、肌细胞、成心肌细胞、心肌细胞、或成肌细胞、肌细胞、成心肌细胞和/或心肌细胞的祖细胞一起给予的。

在一个具体的实施方案中，本文提供的治疗方法包括将PDACs(例如包含所述细胞的治疗组合物)给予患有结节病或由结节病引起的或与结节病有关的疾病、障碍或病症的患者；并且评估患者心脏功能的改善情况，其中所述治疗用细胞组合物是作为基质-细胞复合物(matrix-cell complex)给予的。在某些实施方案中，所述基质是支架，优选生物可吸收的，至少包含所述细胞。

最后，本文进一步提供的是接触过刺激干细胞或祖细胞沿着心脏生成(cardiogenic)途径、血管生成(angiogenic)途径、造血细胞生成(hemangiogenic)途径或血管原性(vasculogenic)途径分化的一个或多个因子的PDACs的群体，例如在以上提及的一个或多个因子存在下孵育或培养的PDACs的群体。这样的因子包括但不限于诸如以下的因子：生长因子、趋化因子、细胞因子、细胞产物、去甲基化剂、和现在已知刺激分化或以后决定刺激分化的其它因子，例如干细胞以及心脏生成途径、血管生成途径、造血细胞生成途径或血管原性途径或谱系的因子。

在某些实施方案中，PDACs可以通过将所述细胞在包含去甲基化剂、BMP(骨形态发生蛋白)、FGF(成纤维细胞生长因子)、Wnt因子蛋白、Hedgehog蛋白和/或抗Wnt因子中的至少一个的因子存在下进行培养在体外沿着心脏生成途径、血管生成途径、造血细胞生成途径或血管原性途径或谱系分化。

PDACs和此类细胞的群体，可以治疗性地或预防性地提供给个体，例如，患有与结节病有关的心脏或循环系统的疾病、障碍或病症的个体、或累及与结节病有关的心脏或循环系统的个体。这样的疾病、障碍或病症可包括由于动脉粥样硬化所致的充血性心力衰竭、心肌病变或心脏损伤，例如缺血性损伤，例如来自心肌梗塞或创伤(急性或慢性)的。

眼结节病–是累及眼的结节病。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有眼结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述眼结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述眼结节病的一个或多个症状的可检测改善。在某些实施方案中，眼结节病的一个或多个症状包括眼色素层炎(例如肉芽肿性眼色素层炎)、眼色素层腮腺炎、视网膜炎症、视觉敏锐性丧失、红色盲、泪眼、虹膜小结、视网膜脉络膜炎、结膜炎、泪腺受累或突眼。

具有骨骼肌、肝脏、血液、精神科、肾脏、脾脏、鼻窦、口、胃或肠、内分泌系统、胸膜或生殖系统受累的结节病

在某些实施方案中，结节病可累及肌肉、肝脏、关节、血液、精神科、肾脏、脾脏、鼻窦、骨、口、胃或肠、内分泌系统、胸膜或生殖系统并且与相应的症状一同存在。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有具有骨骼肌、肝脏、关节、血液、精神科、肾脏、脾脏、鼻窦、口、胃或肠、内分泌系统、胸膜或生殖系统受累的结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述结节病的一个或多个症状的可检测改善。

在一个实施方案中，具有骨骼肌受累的结节病可以是无症状的，伴有或不伴有酶升高，或者与例如隐伏或急性肌病变伴有肌肉无力、关节炎(例如踝、膝、腕和肘的关节炎)、慢性关节炎伴有雅库畸形(Jaccoud’s deformities)或指炎、外周关节炎、关节痛、骨质溶解或胞囊病损、骨质减少或

氏综合征的症状一同存在。在另一个实施方案中，具有肝脏受累的结节病可以是无症状的，或者与一个或多个症状例如肝功能试验结果中的温和升高、用辐射不透明的染料在CT扫描上的低透亮病损(hypolucent lesions)、肝肿大、肝脏酶水平中的变化、肝病、发热、不适、疲劳、胆汁郁积、肝硬化或者与类似于肉芽肿性肝炎的症状一同存在。

在另一个实施方案中，罹患血液结节病的患者具有淋巴细胞减少症、慢性病的贫血、由于骨髓的肉芽肿性浸润所致贫血、全血细胞减少症、脾隔离(splenic sequestration)、血小板减少症或白细胞减少症的一个或多个症状。在另一个实施方案中，罹患结节病的患者可表现出精神科症状(例如抑郁症)。在另一个实施方案中，具有肾脏受累的结节病可与无症状的高钙尿症、间质性肾炎、由肾结石引起的慢性肾衰竭或肾钙质沉着症的症状一同存在。在另一个实施方案中，具有脾脏受累的结节病可以是无症状的，或者与疼痛、血小板减少症的症状一同存在，或如通过X射线或CT扫描测定的。在另一个实施方案中，具有鼻窦受累的结节病可以与窦粘膜的症状伴有类似于普通的变应性和感染性鼻窦炎、或冻疮样狼疮(upus pernio)的症状一同存在。在另一个实施方案中，具有口受累的结节病可以与无症状的腮腺肿胀、腮腺炎伴有口干症、黑福特综合征(Heerfordt's syndrome)、眼色素层炎、双侧腮腺肿胀、面瘫、慢性发热、口冻疮样狼疮、或变形的硬颚、脸颊、舌头和牙龈的症状一同存在。在另一个实施方案中，具有胃或肠、内分泌系统、胸膜或生殖系统受累的结节病的症状包括胃肉芽肿、肠系膜淋巴结病、腹痛、全垂体功能减退症、甲状腺浸润、继发性甲状旁腺功能减退、高钙血症或淋巴细胞渗出积液。

在另一个实施方案中，本文提供的是治疗罹患具有肺部组织或器官除外的一个或多个组织或器官受累的结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述结节病的一个或多个症状的可检测改善。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗罹患具有肺除外的一个或多个组织或器官受累的结节病的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述结节病的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述结节病的一个或多个症状的可检测改善。

其它的疾病、障碍或病症

在有些实施方案中，所述结节病相关疾病或障碍是癌症(例如已知在结节病中受累的器官中的癌症)。在另一个实施方案中，本文提供的是治疗患有结节病相关癌症的个体的方法，包括给予所述个体分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述给予导致所述结节病相关癌症的一个或多个症状的进程的可检测缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述结节病相关癌症的一个或多个症状的可检测改善。

虽然不受任何理论的束缚，但是罹患结节病的患者可具有癌症(例如肺癌或恶性淋巴瘤(lymphonas))的危险性增加。在某些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在有些实施方案中，所述癌症是原发性导管癌、白血病、急性T细胞白血病、慢性髓系淋巴瘤(CML)、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病(CML)、肺癌、结肠腺癌、组织细胞性淋巴瘤、结肠直肠癌、结肠直肠腺癌或视网膜母细胞瘤。在一个具体的实施方案中，所述癌症是毛细胞白血病、急性髓系白血病(急性髓细胞性白血病)或急性成髓细胞性白血病。

在其它的实施方案中，所述结节病相关疾病或障碍包含维生素D调节异常、高催乳素血症、甲状腺疾病(例如甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进和甲状腺自身免疫)、自身免疫障碍或结节病-淋巴瘤综合征和过敏(例如腹腔疾病、IV型过敏)。

典型地，在作出结节病最终诊断之前，对表现有结节病的一个或多个症状的个体评价结节病至少一次，例如，作为进行达到结节病诊断的试验组成部分。另外，典型地，在作出结节病的诊断之后，对被诊断出患有结节病的个体评价结节病的症状至少一次，通常超过一次，以判断该病的进程。这样一种评价可包含肺功能或症状的诊断，例如，胸部影像、胸部X射线、胸部的CT扫描、PET扫描、CT指导的活检、纵隔镜检查术、开放肺活检、支气管镜检查法与活检、支气管内超声或内镜超声与纵隔淋巴结的FNA；组织活检，例如，组织活检、血管紧张素转化酶血液；磁共振成像(MRI)，例如，以检测心脏、神经机能或肝脏受累，计算机断层摄影术(CT)扫描、正电子发射断层摄影术(PET)扫描、受累组织或器官的心电图；肝功能试验；眼检查；血液、电离和尿钙测定；血清磷测定；甲状腺功能试验；眼裂隙灯检查以检测眼色素层炎；或其它肉芽肿性障碍的排除。可以通过所述结节病症状中的任何一个或多个评价结节病治疗的有效性，例如给予胎盘细胞的有效性。也可以通过监测在给予所述胎盘细胞之前和之后，所述个体中受累器官的症状或功能的进程的缩短、恶化的可检测减轻、和/或所述个体中受累器官的症状或功能的可检测改善，对有效性进行评价。

在一个方面，本文提供的是治疗患有结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的患者的方法，包括将治疗用细胞组合物给予患有结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的患者，并且评估患者的结节病症状的改善情况，其中所述细胞组合物包含如本文所述的PDACs。

在一个实施方案中，所述方法可包括对以下的(1)到(4)中的一项或多项，在所述给予之前测定一次或多次，和/或在所述给予之后测定一次或多次：(1)所述个体中受累器官的数量和/或程度；(2)所述个体中症状的数量和/或程度；(3)肉芽肿的数量和/或程度；或(4)所述个体中炎症的程度。

在某些实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少(例如可检测地减少)的所述个体中所述一个或多个症状的数量或严重程度，或减少所述个体中所述一个或多个症状的数量或严重程度的增加速率，和/或导致结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的一个或多个症状的可检测改善。

在一个实施方案中，所述治疗有效量是导致所述结节病的或结节病相关疾病或障碍的至少一个症状可检测改善的量。在另一个实施方案中，所述治疗有效量是导致一种免疫细胞或多种免疫细胞的活性(例如增殖)被调节(例如抑制)的量。在一个具体的实施方案中，所述治疗有效量是导致炎症反应被抑制的量，如通过一种或多种炎症性标记(例如C-反应蛋白，IL-6)测定的或通过PLAC试验测定的。在一个具体的实施方案中，所述调节(例如抑制)是通过使免疫细胞与多个胎盘干细胞接触足以达到所述胎盘干细胞可检测地调节(例如抑制)免疫应答的时间来进行的。在另一个实施方案中，所述治疗有效量是当移植到所述个体中的受累组织或器官时允许在受累的组织或器官中形成集落形成单位的量。

在有些实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞导致(例如可检测地导致)肺功能恢复，例如，通过胸部影像、胸部X射线、胸部的CT扫描、PET扫描或CT指导的活检测定的。在其它的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞减少皮肤病损的数量和/或程度，例如通过切除活检测定的。在又一些实施方案中，当涉及癌症时，所述胎盘细胞减少癌细胞的数量与给予所述胎盘细胞之前所述细胞的数量相比达至少例如10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。

在另一个实施方案中，治疗包括用包含胎盘细胞(例如PDACs)的治疗用细胞组合物(或含或不含另一种细胞类型)治疗患有结节病或由结节病引起的或与结节病有关的疾病、障碍或病症的个体。在某些实施方案中，所述个体经历了来自该疗法的益处，例如来自所述细胞支持其它细胞生长的能力，包括心脏中存在的干细胞或祖细胞，来自组织向内生长或组织的血管化，和来自有益的细胞的因子(cellularfactors)、趋化因子、细胞因子(cytokines)等的存在，但是所述细胞不整合到所述个体中或在所述个体中繁殖。在另一个实施方案中，所述患者因用所述细胞治疗性治疗而受益，但是所述细胞在患者体内不存活延长的时期。在一个实施方案中，所述细胞逐渐地削减其数量、活力或生化活性，在其它的实施方案中，所述细胞的削减之前有一段活性时期，例如生长、分裂或生化活性。在其它的实施方案中，衰老了的、无活力的乃至死亡的细胞都不能够具有有益的治疗效果。

患有结节病或由结节病引起的或与结节病有关的疾病、障碍或病症的个体的改善可以通过所述结节病的或所述结节病相关疾病或障碍的一个或多个症状的可检测改善来评价或证明，其中所述个体给予了本文提供的PDACs或治疗组合物。

也可以通过患者主诉，例如个体关于他或她在施用之后健康状况的自我评价，来评价接受了本文提供的PDACs或包含PDACs的治疗组合物的个体的改善情况。

所述细胞给予的成功，在某些实施方案中，并不基于给予了PDACs的个体的生存。相反，成功是基于如上所述的结节病的一个或多个症状改善的一个或多个标准体系(metrics)。因此，所述细胞不需要整合到和打击患者的受累组织或器官。

4.1.2胎盘细胞的施用

在有些实施方案中，对于局部或系统施用，可以通过移植、植入(例如植入细胞本身或作为基质-细胞组合的组成部分的细胞)、注射(例如直接注射到所述疾病或病症的部位，例如直接注射到由结节病引起的或与结节病有关的一种或多种病损或肉芽肿)、输注、通过导管递送或用于提供细胞疗法的本领域已知的任何其它手段，完成将胎盘细胞(例如PDACs)或包含此类细胞的治疗组合物给予有需要的个体。在其它实施方案中，通过静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内、滑膜内和皮下施用，可以将胎盘细胞(例如PDACs)或包含此类细胞的治疗组合物递送到某个个体。

在一个实施方案中，所述治疗用细胞组合物例如通过注射到所述个体的一个或多个部位而提供给有需要的个体。在一个具体的实施方案中，当有心脏受累时，通过心脏内注射例如为心脏的缺血区域提供所述治疗用细胞组合物。在其它具体的实施方案中，将所述细胞注射在受累器官的表面、注射到相邻区域，乃至注射到更远的区域。在优选的实施方案中，所述细胞可位于患病或受伤的区域。

在多个具体的实施方案中，将胎盘细胞病灶内给予(例如直接给予)一个或多个由结节病引起的或与结节病有关的病损或肉芽肿内或其附近(例如在所述病损或肉芽肿的1-5cm以内)。在某些实施方案中，将胎盘细胞与基质(例如可注射基质)组合给予。在某些其它的实施方案中，将胎盘细胞与固体基质(例如骨代用品)组合给予患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体，其中基质或骨代用品在下文第

4.7.4节中有描述。

在某些其它的实施方案中，胎盘细胞静脉内给予所述个体。胎盘细胞可以来自任何容器并且通过医疗上适合递送液体(例如包含细胞的液体)的任何递送系统，给予某个个体。这样的容器可以是例如无菌的塑料袋、瓶、罐或其它容器，从中胎盘细胞群体可容易地分配。例如，所述容器可以是血袋或其它适合于将液体静脉内给予接受者的医学上可接受的塑料袋。

病损内或静脉内施用可包含例如约、至少、或不超过1x10⁵、5x10⁵、1x10⁶、5x10⁶、1x10⁷、5x10⁷、1x10⁸、5x10⁸、1x10⁹、5x10⁹、1x10¹⁰、5x10¹⁰、1x10¹¹或更多的分离的胎盘细胞(在单次剂量中)。在一个疗程中，所述分离的胎盘细胞可给予一次或超过一次。优选地，所给予的胎盘细胞包含50%活细胞或更多(即，群体中细胞的至少约50%是有功能的或有生命的)。优选地，群体中细胞的至少约60%是活的。更优选地，在所述药物组合物中，群体中细胞的至少约70%、80%、90%、95%或99%是活的。

在某些实施方案中，所述个体给予治疗有效量的PDACs，例如，在包含所述PDACs的细胞群体中。在一个具体的实施方案中，所述群体包含约50%PDACs。在另一个具体的实施方案中，所述群体是PDACs的基本均一群体。在其它实施方案中，所述群体包含至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%PDACs。

患有结节病或结节病相关疾病或病症的个体可以在所述细胞将是治疗上有益的任何时间给予PDACs。在某些实施方案中，例如，本发明的PDACs或治疗组合物在心肌梗塞的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天以内给予。在距心肌梗塞最近的时间，例如在1-3天或1-7天以内施用优于在心肌梗塞之后较远的时间例如3天或7天之后施用。在其它的实施方案中，本发明的细胞或治疗组合物在所述疾病或病症的首次诊断的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天以内给予。

在某些实施方案中，待治疗的个体是哺乳动物。在一个具体的实施方案中，待治疗的个体是任何年龄和/或在任何临床阶段或患有结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的人。在多个具体的实施方案中，所述个体是牲畜动物或驯养动物。在其它具体的实施方案中，待治疗的个体是马、羊、母牛或阉牛、猪、狗或猫。

4.1.2联合疗法

结节病或结节病相关疾病或障碍(例如系统性结节病)的治疗可包括将分离的胎盘细胞、特别是在下文第4.2节详细描述的分离的胎盘细胞(PDACs)结合第二种疗法(例如第二种治疗剂)中的一种或多种一起给予患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体。

本文提供的联合疗法没有限制给予受治疗者各疗法的顺序。例如，第一种疗法可以在将第二种疗法给予曾经患有、现在患有给定疾病或对给定疾病敏感的受治疗者之前(例如1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周)、同时、或之后(例如1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周)给予。任何另外的疗法可以按任何顺序与其它另外的疗法一起给予。

在某些实施方案中，第二种治疗剂包括TNF-α抑制剂(例如英夫利昔单抗(infliximab)或阿达木单抗(adalimumab))、抗疟药(例如氯喹或羟氯喹)、沙利度胺(thalidomide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、麦考酚酸酯(mycophenolate)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、甲氨蝶呤(methotrexate)、focalin、伊洛前列素(iloprost)、甲氨蝶呤(methotrexate)、尼古丁(nicotine)、沙利度胺(thalidomide)、安立生坦(ambrisentan)(例如letairis)、波生坦(bosentan)、阿托伐他汀(atorvastatin)、己酮可可碱(pentoxifylline)、阿达木单抗(adalimumab)、利妥昔单抗(rituximab)、stelara(例如ustekinumab)、阿肽地尔(aviptadil)、apremilast、remicade、humira、生长因子、趋化因子、细胞因子、细胞产物、去甲基化因子和现在已知的或以后确定刺激干细胞分化的其它因子、胰岛素样生长因子(IGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、白介素18(IL-8)、抗血栓生成剂(例如肝素、肝素衍生物、尿激酶或PPack(右旋苯丙氨酸/脯氨酸/精氨酸/氯甲基酮)、抗凝血酶化合物、血小板受体拮抗剂、抗凝血酶抗体、抗血小板受体抗体、阿司匹林(aspirin)、双嘧达莫(dipyridamole)、鱼精蛋白(protamine)、水蛭素(hirudin)、前列腺素抑制剂和/或血小板抑制剂)、抗凋亡剂(例如红细胞生成素(Epo)、Epo衍生物或类似物或它们的盐、促血小板生成素(Tpo)、IGF-I、IGF-II、肝细胞生长因子(HGF)、或半胱天冬蛋白酶(caspase)抑制剂)、抗炎药(例如p38MAP激酶抑制剂、他汀类药(statin)、IL-6抑制剂、IL-1抑制剂、吡嘧司特(Pemirolast)、曲尼司特(Tranilast)、Remicade、西罗莫司(Sirolimus)和/或非甾体抗炎化合物(例如乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid)、布洛芬(ibuprofen)、替泊沙林(Tepoxalin)、托美汀(Tolmetin)或舒洛芬(Suprofen)))、免疫抑制剂或免疫调节剂(例如钙调磷酸酶(calcineurin)抑制剂，例如环孢菌素(cyclosporine)、他克莫司(Tacrolimus)、mTOR抑制剂例如西罗莫司(Sirolimus)或依维莫司(Everolimus)；抗增殖药，例如硫唑嘌呤(azathioprine)和/或麦考酚酸吗乙酯(mycophenolate mofetil)；皮质类固醇，例如泼尼松、泼尼松龙(prednisolone)或氢化可的松；steroid-sparing agent，例如硫唑嘌呤和甲氨蝶呤；抗体，例如单克隆抗IL-2Rα受体抗体、巴利昔单抗(Basiliximab)、达克珠单抗(Daclizuma)、多克隆抗T-细胞抗体例如抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)和/或单克隆抗T细胞抗体OKT3或贴壁胎盘干细胞(如在美国专利第7,468,276号和美国专利申请公布第2007/0275362号中描述的，所述专利和专利申请中的每一个都通过引用其全部结合到本文中))和/或抗氧化剂(例如普罗布考(probucol)；维生素A、C和/或E、辅酶Q-10、谷胱甘肽、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸或任何上述物质的抗氧化剂衍生物、类似物或盐)。在某些实施方案中，包含所述PDACs的治疗组合物还包含一种或多种另外的细胞类型，例如，成体细胞(例如成纤维细胞或内胚层细胞)、干细胞和/或祖细胞。这样的治疗剂和/或一种或多种另外的细胞类型可以单独地或结合两种或更多种所述化合物或药剂给予有其需要的个体。

在一个实施方案中，所述的第二种治疗剂是抗炎药、类固醇药、免疫抑制药和/或抗生素。可用于治疗结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的抗炎药的实例包括但不限于美沙拉嗪、5-ASA(5-氨基水杨酸)类药(例如

(美沙拉嗪，缓释剂型)、DIPENTUM(奥沙拉嗪)、

(美沙拉嗪，控释剂型))、柳氮磺胺吡啶(5-ASA和磺胺吡啶的组合)、抗炎抗体类药(例如英夫利昔单抗)等。可用于治疗结节病或结节病相关疾病、障碍或病症的类固醇药的实例包括但不限于可的松、氢化可的松、泼尼松、甲基泼尼松等。典型地，根据本领域的实践，类固醇药的剂量首先以相对大的剂量递送，然后随着炎症消退而递送较小的剂量。可用于治疗结节病或结节病相关疾病的免疫抑制药的实例包括但不限于环孢菌素A、6-巯基嘌呤或硫唑嘌呤。任何抗生素都可以用于治疗克罗恩病，包括例如氨苄西林、磺酰胺、头孢菌素、四环素和/或甲硝唑。在另一个具体的实施方案中，所述的第二种疗法是给予猪鞭虫(porcinewhipworms)，例如猪鞭虫(Trichuris suis)的卵。

在另一个实施方案中，本文提供的第二种疗法是抗癌疗法，例如以治疗结节病相关癌症，例如，一种或多种化学疗法或化疗化合物。这样的其它抗癌疗法可以在所述给予胎盘细胞(例如PDACs)的同时、同一疗程期间给予所述个体，或者与所述给予胎盘细胞(例如PDACs)分开给予所述个体。在一个具体的实施方案中，给予所述其它抗癌疗法与给予所述胎盘细胞按顺序给予。在另一个具体的实施方案中，所述其它的一种抗癌疗法或多种抗癌疗法在给予所述胎盘细胞之前给予所述个体；例如，将这样的其它抗癌疗法的一个疗程给予个体，并且是在给予个体分离的胎盘细胞之前完成的。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞是在给予所述其它抗癌疗法之前给予个体的；例如，胎盘细胞的一个疗程是在给予所述其它抗癌疗法之前给予所述个体的，并且是在给予个体所述其它的一种抗癌疗法或多种抗癌疗法之前完成的。

在一个具体的实施方案中，所述抗癌药是美法仑(melphalan)(亦称L-苯丙氨酸氮芥或L-PAM；商品名Albertan)。因此，在一个实施方案中，治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法包括给予所述个体美法仑，例如治疗上有效的一剂或多剂美法仑。施用典型地是口服或静脉内用药。在另一个具体的实施方案中，所述抗癌药是沙利度胺。在另一个具体的实施方案中，所述抗癌药是氨基取代的沙利度胺类似物或氨基取代的咪唑。在另一个具体的实施方案中，所述抗癌药是pomalidomide(以商品名

销售)；来那度胺(lenalidomide)(以商品名销售)；或来那度胺与地塞米松的组合。在另一个具体的实施方案中，所述抗癌疗法是硼替佐米(bortezomib)

在另一个具体的实施方案中，所述抗癌药包含美法仑、泼尼松和沙利度胺的组合(分开或一同用药)。在另一个具体的实施方案中，所述抗癌药是硼替佐米、美法仑和泼尼松的组合(分开或一同用药)。

其它的抗癌药是本领域众所周知的。因此，在其它具体的实施方案中，抗癌药包括但不限于：阿西维辛(acivicin)；阿柔比星(aclarubicin)；盐酸阿考达唑(acodazole hydrochloride)；阿克罗宁(acronine)；阿多来新(adozelesin)；阿地白介素(aldesleukin)；六甲蜜胺(altretamine)；安波霉素(ambomycin)；醋酸阿美蒽醌(ametantroneacetate)；安吖啶(amsacrine)；阿那曲唑(anastrozole)；安曲霉素(anthramycin)；天冬酰胺酶(asparaginase)；曲林菌素(asperlin)；阿扎胞苷(azacitidine)；阿扎替派(azetepa)；阿佐霉素(azotomycin)；巴马司他(batimastat)；苯佐替派(benzodepa)；比卡鲁胺(bicalutamide)；盐酸比生群(bisantrene hydrochloride)；二甲磺酸双奈法德(bisnafidedimesylate)；比折来新(bizelesin)；硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)；布喹那钠(brequinar sodium)；溴匹立明(bropirimine)；白消安(busulfan)；放线菌素C(cactinomycin)；卡鲁睾酮(calusterone)；卡醋胺(caracemide)；卡贝替姆(carbetimer)；卡铂(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine)；盐酸卡柔比星(carubicin hydrochloride)；卡折来新(carzelesin)；西地芬戈(cedefingol)；塞来考昔(celecoxib)(COX-2抑制剂)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；西罗霉素(cirolemycin)；顺铂(cisplatin)；克拉屈滨(cladribine)；甲磺酸克立那托(crisnatol mesylate)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；阿糖胞苷(cytarabine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；放线菌素D(dactinomycin)；盐酸柔红霉素(daunorubicinhydrochloride)；地西他滨(decitabine)；右奥马铂(dexormaplatin)；地扎呱宁(dezaguanine)；甲磺酸地扎呱宁(dezaguanine mesylate)；地吖醌(diaziquone)；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；盐酸多柔比星(doxorubicin hydrochloride)；屈洛昔芬(droloxifene)；柠檬酸屈洛昔芬(droloxifene citrate)；丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)；达佐霉素(duazomycin)；依达曲沙(edatrexate)；eflomithinehydrochloride；依沙芦星(elsamitrucin)；恩洛铂(enloplatin)；恩普氨酯(enpromate)；依匹哌啶(epipropidine)；盐酸表柔比星(epirubicinhydrochloride)；厄布洛唑(erbulozole)；盐酸依索比星(esorubicinhydrochloride)；雌莫司汀(estramustine)；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑(etanidazole)；依托泊苷(etoposide)；磷酸依托泊苷；氯苯乙嘧胺(etoprine)；盐酸法屈唑(fadrozole hydrochloride)；法扎拉滨(fazarabine)；芬维A胺(fenretinide)；氟尿苷(floxuridine)；磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；氟西他滨(flurocitabine)；磷喹酮(fosquidone)；福司曲星钠(fostriecin sodium)；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)；羟基脲(hydroxyurea)；盐酸伊达比星(idarubicin hydrochloride)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊莫福新(ilmofosine)；异丙铂(iproplatin)；伊立替康(irinotecan)；盐酸伊立替康(irinotecan hydrochloride)；醋酸兰瑞肽(lanreotide acetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙立德(leuprolide acetate)；盐酸利阿唑(liarozolehydrochloride)；洛美曲索钠(lometrexol sodium)；洛莫司汀(lomustine)；盐酸洛索蒽醌(losoxantrone hydrochloride)；马索罗酚(masoprocol)；美登素(maytansine)；盐酸双氯乙基甲胺(mechlorethamine hydrochloride)；醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)；醋酸美伦孕酮(melengestrol acetate)；美法仑(melphalan)；美诺立尔(menogaril)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氨蝶呤钠(methotrexate sodium)；氯苯氨啶(metoprine)；美妥替哌(meturedepa)；米丁度胺(mitindomide)；米托卡星(mitocarcin)；丝裂红素(mitocromin)；米托洁林(mitogillin)；米托马星(mitomalcin)；丝裂霉素(mitomycin)；米托司培(mitosper)；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌；麦考酚酸(mycophenolic acid)；诺考哒唑(nocodazole)；诺加霉素(nogalamycin)；奥马铂(ormaplatin)；奥昔舒仑(oxisuran)；紫杉醇(paclitaxel)；培门冬酶(pegaspargase)；培利霉素(peliomycin)；戊氮芥(pentamustine)；硫酸培洛霉素(peplomycinsulfate)；培磷酰胺(perfosfamide)；哌泊溴烷(pipobroman)；哌泊舒凡(piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(piroxantrone hydrochloride)；普卡霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；卟吩姆钠(porfimer sodium)；泊非霉素(porfiromycin)；泼尼莫司汀(prednimustine)；盐酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride)；嘌罗霉素(puromycin)；盐酸嘌罗霉素(puromycin hydrochloride)；吡唑呋林(pyrazofurin)；利波腺苷(riboprine)；沙芬戈(safingol)；盐酸沙芬戈(safingol hydrochloride)；司莫司汀(semustine)；辛曲秦(simtrazene)；磷乙酰天冬氨酸钠(sparfosatesodium)；司帕霉素(sparsomycin)；盐酸螺旋锗(spirogermaniumhydrochloride)；螺莫司汀(spiromustine)；螺铂(spiroplatin)；链黑菌素(streptonigrin)；链佐星(streptozocin)；磺氯苯脲(sulofenur)；他利霉素(talisomycin)；替可加兰钠(tecogalan sodium)；泰索帝(taxotere)；替加氟(tegafur)；盐酸替洛蒽醌(teloxantrone hydrochloride)；替莫泊芬(temoporfin)；替尼泊苷(teniposide)；替罗昔隆(teroxirone)；睾酮(testolactone)；硫咪嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；噻替派(thiotepa)；噻唑呋林(tiazofurin)；替拉扎明(tirapazamine)；枸橼酸托瑞米芬(toremifene citrate)；醋酸曲托龙(trestolone acetate)；磷酸曲西立滨(triciribine phosphate)；三甲曲沙(trimetrexate)；葡糖醛酸三甲曲沙(trimetrexate glucuronate)；曲普瑞林(triptorelin)；盐酸妥布氯唑(tubulozole hydrochloride)；尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；乌瑞替派(uredepa)；伐普肽(vapreotide)；维替泊芬(verteporfin)；硫酸长春碱(vinblastine sulfate)；硫酸长春新碱(vincristine sulfate)；长春地辛(vindesine)；硫酸长春地辛(vindesine sulfate)；硫酸长春匹定(vinepidinesulfate)；硫酸长春甘酯(vinglycinate sulfate)；硫酸长春罗辛(vinleurosine sulfate)；酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate)；硫酸长春罗定(vinrosidine sulfate)；硫酸长春利定(vinzolidine sulfate)；伏氯唑(vorozole)；折尼铂(zeniplatin)；净司他丁(zinostatin)；和盐酸佐柔比星(zorubicin hydrochloride)。

其它的抗癌药物包括但不限于：20-表-1,25-二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶(5-ethynyluracil)；阿比特龙(abiraterone)；阿柔比星(aclarubicin)；酰基夫文(acylfulvene)；adecypenol；阿多来新(adozelesin)；阿地白介素(aldesleukin)；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺(altretamine)；氨莫司汀(ambamustine)；amidox；氨磷汀(amifostine)；5-氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；氨柔比星(amrubicin)；安吖啶(amsacrine)；阿那格雷(anagrelide)；阿那曲唑(anastrozole)；穿心莲内酯(andrographolide)；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯(antarelix)；抗背部化形态发生蛋白-1；抗雄激素(antiandrogen)，前列腺癌；抗雌激素(antiestrogen)；抗肿瘤肽(antineoplaston)；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素(aphidicolinglycinate)；细胞凋亡基因调节剂；细胞凋亡调节剂；脱嘌呤核酸(apurinic acid)；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦(atamestane)；阿莫司汀(atrimustine)；axinastatin 1；axinastatin2；axinastatin 3；阿扎司琼(azasetron)；阿扎毒素(azatoxin)；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他(batimastat)；BCR/ABL拮抗剂；benzochlorins；苯甲酰星孢菌素(benzoylstaurosporine)；β内酰胺衍生物；β-alethine；亚阿克拉霉素(betaclamycin)B；桦木酸(betulinic acid)；bFGF抑制剂；比卡鲁胺(bicalutamide)；比生群(bisantrene)；bisaziridinylspermine；双奈法德(bisnafide)；bistratene A；比折来新(bizelesin)；breflate；溴匹立明(bropirimine)；布度钛(budotitane)；丁胱亚磺酰亚胺(buthioninesulfoximine)；卡泊三醇(calcipotriol)；calphostin C；喜树碱衍生物；卡培他滨(capecitabine)；羧酰胺-氨基-三唑；羧基酰氨基三唑；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新(carzelesin)；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗树精胺(castanospermine)；天蚕素B(cecropin B)；西曲瑞克(cetrorelix)；chlorlns；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素(cicaprost)；顺式-卟啉；克拉屈滨(cladribine)；氯米芬类似物；克霉唑(clotrimazole)；collismycin A；collismycin B；考布他汀A4(combretastatin A4)；考布他汀类似物；conagenin；crambescidin816；克立那托(crisnatol)；隐藻素8(cryptophycin 8)；隐藻素A(cryptophycin A)衍生物；库拉素A(curacin A)；cyclopentanthraquinones；cycloplatam；cypemycin；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐(cytarabine ocfosfate)；细胞溶解因子；细胞生长抑素(cytostatin)；达昔单抗(dacliximab)；地西他滨(decitabine)；脱氢膜海鞘素B(dehydrodidenmin B)；地洛瑞林(deslorelin)；地塞米松；右异环磷酰胺(dexifosfamide)；右雷佐生(dexrazoxane)；右维拉帕米(dexverapamil)；地吖醌(dezaguanine)；膜海鞘素B(didemnin B)；didox；二乙基正精胺(diethylnorspermine)；二氢-5-氮杂胞苷；9-二氢紫杉醇；dioxamycin；二苯基螺莫司汀；多西他赛(docetaxel)；二十二烷醇；多拉司琼(dolasetron)；去氧氟尿苷(doxifluridine)；多柔比星(doxorubicin)；屈洛昔芬(droloxifene)；屈大麻酚(dronabinol)；duocarmycin SA；依布硒(ebselen)；依考莫司汀(ecomustine)；依地福新(edelfosine)；依决洛单抗(edrecolomab)；依氟鸟氨酸(eflornithine)；榄香烯(elemene)；乙嘧替氟(emitefur)；表柔比星(epirubicin)；依立雄胺(epristeride)；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑(etanidazole)；磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)；依西美坦(exemestane)；法屈唑(fadrozole)；法扎拉滨(fazarabine)；芬维A胺(fenretinide)；非格司亭(filgrastim)；非那雄胺(finasteride)；黄酮吡多(flavopiridol)；氟卓斯汀(flezelastine)；fluasterone；氟达拉滨(fludarabine)；fluorodaunorunicin hydrochloride；福酚美克(forfenimex)；福美坦(formestane)；福司曲星(fostriecin)；福莫司汀(fotemustine)；钆替沙林(gadolinium texaphyrin)；硝酸镓；加洛他滨(galocitabine)；加尼瑞克(ganirelix)；明胶酶抑制剂；吉西他滨(gemcitabine)；谷胱甘肽抑制剂；庚二醇二氨基磺酸酯(hepsulfam)；heregulin；六甲撑双乙酰胺；金丝桃素(hypericin)；伊班膦酸(ibandronic acid)；伊达比星(idarubicin)；艾多昔芬(idoxifene)；伊决孟酮(idramantone)；伊莫福新(ilmofosine)；伊洛马司他(ilomastat)；伊马替尼(imatinib)(例如)、咪喹莫德(imiquimod)；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍(iobenguane)；碘多柔比星(iododoxorubicin)；4-依波米醇(4-ipomeanol)；伊罗普拉(iroplact)；伊索拉定(irsogladine)；isobengazole；异高软海绵素B(isohomohalicondrin B)；伊他司琼(itasetron)；jasplakinolide；海蛞蝓提取物F(kahalalide F)；三醋酸层状素-N(lamellarin-N triacetate)；兰瑞肽(lanreotide)；leinamycin；来格司亭(lenograstim)；硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)；leptolstatin；来曲唑(letrozole)；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙立德+雌激素+孕酮；亮丙瑞林(leuprorelin)；左旋咪唑(levamisole)；利阿唑(liarozole)；线性多胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂(lobaplatin)；蚯蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索(lometrexol)；氯尼达明(lonidamine)；洛索蒽醌(losoxantrone)；洛索立宾(loxoribine)；勒托替康(lurtotecan)；镥替沙林(lutetiumtexaphyrin)；lysofylline；裂解肽；美坦新(maitansine)；mannostatinA；马立马司他(marimastat)；马索罗酚(masoprocol)；maspin；基质溶解因子抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔(menogaril)；merbarone；美替瑞林(meterelin)；甲硫氨酸酶；甲氧氯普胺(metoclopramide)；MIF抑制剂；米非司酮(mifepristone)；米替福新(miltefosine)；米立司亭(mirimostim)；米托胍腙(mitoguazone)；二溴卫矛醇(mitolactol)；丝裂霉素类似物；米托萘胺(mitonafide)；mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素；米托蒽醌；莫法罗汀(mofarotene)；莫拉司亭(molgramostim)；爱必妥(Erbitux)，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰脂质A+分枝杆菌细胞壁sk；莫哌达醇(mopidamol)；氮芥类抗癌药；mycaperoxide B；分枝杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺类；那法瑞林(nafarelin)；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛(naloxone+pentazocine)；napavin；naphterpin；那托司亭(nartograstim)；奈达铂(nedaplatin)；奈莫柔比星(nemorubicin)；奈立膦酸(neridronic acid)；尼鲁米特(nilutamide)；nisamycin；一氧化氮调节剂；氮氧化物抗氧化剂；nitrullyn；奥利美生(oblimersen)

O⁶-苄基鸟氨酸(O⁶-benzylguanine)；奥曲肽(octreotide)；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮(onapristone)；昂丹司琼(ondansetron)；昂丹司琼(ondansetron)；oracin；口服细胞因子诱导剂；奥马铂(ormaplatin)；奥沙特隆(osaterone)；奥沙利铂(oxaliplatin)；oxaunomycin；紫杉醇(paclitaxel)；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；棕榈酰利索新(palmitoylrhizoxin)；帕米膦酸(pamidronic acid)；人参炔三醇(panaxytriol)；帕诺米芬(panomifene)；parabactin；帕折普汀(pazelliptine)；培门冬酶(pegaspargase)；培得星(peldesine)；戊聚硫钠(pentosan polysulfate sodium)；喷司他丁(pentostatin)；pentrozole；全氟溴烷(perflubron)；培磷酰胺(perfosfamide)；紫苏子醇(perillylalcohol)；phenazinomycin；醋酸苯酯；磷酸酯酶抑制剂；溶链菌制剂(picibanil)；盐酸毛果芸香碱(pilocarpine hydrochloride)；吡柔比星(pirarubicin)；吡曲克辛(piritrexim)；placetin A；placetin B；纤溶酶原激活物抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠(porfimer sodium)；泊非霉素(porfiromycin)；泼尼松；丙基双-吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂，微藻(microalgal)；蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；红紫素类(purpurins)；吡唑啉并吖啶(pyrazoloacridine)；吡啶氧基化(pyridoxylated)血红蛋白聚氧乙烯缀合物；raf拮抗剂；雷替曲塞(raltitrexed)；雷莫司琼(ramosetron)；ras法尼基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替普汀；Re 186依替膦酸铼；利索新(rhizoxin)；核酶；RII retinamide；rohitukine；罗莫肽(romurtide)；罗喹美克(roquinimex)；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈(safingol)；saintopin；SarCNU；sarcophytol A；沙格司亭(sargramostim)；Sdi 1模拟物；司莫司汀(semustine)；衰老衍生抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；西佐喃(sizofiran)；索布佐生(sobuzoxane)；硼卡钠(sodiumborocaptate)；苯基乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明(sonermin)；膦门冬酸(sparfosic acid)；spicamycin D；螺莫司汀(spiromustine)；splenopentin；海绵抑素1(spongistatin 1)；角鲨胺(squalamine)；stipiamide；基质溶素抑制剂；sulfinosine；强效的血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明(suramin)；苦马豆素(swainsonine)；他莫司汀(tallimustine)；甲碘化他莫昔芬(tamoxifen methiodide)；牛磺莫司汀(tauromustine)；他扎罗汀(tazarotene)；替可加兰钠(tecogalansodium)；替加氟(tegafur)；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬(temoporfin)；替尼泊苷(teniposide)；四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)；tetrazomine；thaliblastine；噻可拉林(thiocoraline)；促血小板生成素；促血小板生成素模拟物；胸腺法新(thymalfasin)；促胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南(thymotrinan)；促甲状腺激素；tin ethyl etiopurpurin；替拉扎明(tirapazamine)；二氯化二茂钛(titanocene bichloride)；topsentin；托瑞米芬(toremifene)；翻译抑制剂；维甲酸(tretinoin)；三乙酰尿苷；曲西立滨(triciribine)；三甲曲沙(trimetrexate)；曲普瑞林(triptorelin)；托烷司琼(tropisetron)；妥罗雄脲(turosteride)；酪氨酸激酶抑制剂；tyrphostins；UBC抑制剂；乌本美司(ubenimex)；泌尿生殖窦衍生生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽(vapreotide)；变曲霉素B(variolin B)；维拉雷琐(velaresol)；藜芦明(veramine)；verdins；维替泊芬(verteporfin)；长春瑞滨(vinorelbine)；vinxaltine；αVβ3人源化抗单抗(vitaxin)；伏氯唑(vorozole)；扎诺特隆(zanoterone)；折尼铂(zeniplatin)；亚苄维C(zilascorb)；和净司他丁斯酯(zilascorb stimalamer)。

在另一个实施方案中，所述联合疗法包括给予胎盘细胞与双膦酸盐的组合。在一个实施方案中，所述双膦酸盐是氯膦酸盐(clodronate)和/或帕米膦酸盐(pamidronate)。

在一个具体的实施方案中，本文提供的联合疗法包括给予胎盘细胞与一种或多种TNF-α抑制剂(例如英夫利昔单抗、阿达木单抗)、皮质类固醇(例如泼尼松)、PDE-4抑制剂(例如apremiliast)、IL-12抑制剂、IL-23抑制剂、阿肽地尔、IFN-γ抑制剂或抗疟药(例如氯喹或羟氯喹)的组合。

在一个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞任选与第二种疗法(例如第二种治疗剂)中的一种或多种的组合，减少(例如可检测地减少)所述个体的一种或多种肉芽肿的数量或严重程度，或者减少所述个体的一种或多种肉芽肿的数量或严重程度的增加速率。

在另一个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞任选与第二种疗法(例如第二种治疗剂)中的一种或多种的组合，减少(例如可检测地减少)单核细胞、巨噬细胞或活化T-淋巴细胞的数量，或减少单核细胞、巨噬细胞或活化T-淋巴细胞的数量的增加速率。在另一个具体的实施方案中，所述治疗有效量的胎盘细胞任选与第二种疗法(例如第二种治疗剂)中的一种或多种的组合，减少(例如可检测地减少)所述个体中一种或多种TNF-α、IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-1、IL-6、IL-15或Th1应答的水平，或减少所述个体中一种或多种TNF-α、IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-1、IL-6、IL-15或Th1应答的水平的增加速率。

4.2分离的胎盘细胞与分离的胎盘细胞群体

可用于治疗患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体的分离的胎盘细胞(例如PDACs)是可从胎盘或其部分获得的细胞，该细胞贴壁于组织培养基底并具有多能细胞或干细胞的特征，但不是滋养层细胞。在某些实施方案中，可用于本文所公开方法中的分离的胎盘细胞具有分化成非胎盘细胞类型的能力。

可用于本文所公开方法中的分离的胎盘细胞可以是来源于或者胎儿或者母体的(即，可分别具有或者胎儿或者母亲的基因型)。优选地，所述分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群体是来源于胎儿的。本文所用的短语“来源于胎儿的”或“非母体来源的”表示所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体得自脐带或与胎儿相关的胎盘结构，即具有胎儿基因型。本文所用的短语“母体来源的”表示所述细胞或细胞群体得自与母亲相关的胎盘结构，例如，其具有母体基因型。分离的胎盘细胞(例如PDACs)或包含所述分离的胎盘细胞的细胞群体，可包含单独来源于胎儿或母体的分离的胎盘细胞，或者可包含胎儿和母体二者来源混合的分离的胎盘细胞群体。所述分离的胎盘细胞和包含所述分离的胎盘细胞的细胞群体，可以通过下文论述的形态学特征、标记特征和培养物特征进行鉴定和选择。在某些实施方案中，任何胎盘细胞，例如本文所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞对接受者(例如患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体)来说都是自体的。在某些其它的实施方案中，任何胎盘细胞，例如本文所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞对接受者(例如患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体)来说都是异源的。

4.2.1物理和形态学特征

本文所述的分离的胎盘细胞(PDACs)，当在原代培养物中或在细胞培养物中培养时，贴壁于组织培养基底，例如组织培养容器表面(例如组织培养塑料器具)，或贴壁于用胞外基质或配体例如层粘连蛋白、胶原蛋白(例如天然的或变性的)、明胶、纤连蛋白、鸟氨酸、玻连蛋白和胞外膜蛋白(例如

(BD Discovery Labware,Bedford,Mass.))包被的组织培养表面。培养物中的分离的胎盘细胞呈现一般成纤维细胞样、星形外观，具有从中心细胞小体延伸的大量胞质突起。但是，这些细胞在形态上与在相同条件下培养的成纤维细胞有区别，因为该分离的胎盘细胞显现比成纤维细胞更大数量的胞质突起。从形态上看，分离的胎盘细胞也与造血干细胞有区别，造血干细胞在培养物中一般呈现更圆的形态或鹅卵石形态。

在某些实施方案中，可用于本文所公开方法中的分离的胎盘细胞，当在生长培养基中培养时，长出胚胎样小体。胚胎样小体是非连续的细胞团块，其可生长在增殖中的分离的胎盘细胞贴壁层顶部。使用术语“胚胎样(embryoid-like)”是因为细胞团块类似于胚胎样小体，细胞团块可从胚胎干细胞的培养物中生长。胚胎样小体可在分离的胎盘细胞的增殖培养物中长出的生长培养基包括含有例如以下成分的培养基：DMEM-LG(例如来自Gibco)；2%胎牛血清(例如来自HycloneLabs.)；1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)；1x亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10^-9M地塞米松(例如来自Sigma)；10^-4M抗坏血酸2-磷酸酯(例如来自Sigma)；10ng/mL表皮生长因子(例如来自R&DSystems)；和10ng/mL血小板衍生生长因子(PDGF-BB)(例如来自R&D Systems)。

4.2.2细胞表面标记、分子标记和遗传标记

可用于本文所公开方法(例如治疗结节病或结节病相关疾病或障碍的方法)中的分离的胎盘细胞，例如分离的多能胎盘细胞或分离的胎盘干细胞及此类分离的胎盘细胞群体，都是组织培养塑料器具贴壁的人胎盘细胞，具有多能细胞或干细胞的特征，并表达多种标记，这些标记可用于鉴定和/或分离所述细胞或细胞群体(包括干细胞)。在某些实施方案中，所述PDACs是生血管的，例如在体外(in vitro)或体内(in vivo)。本文所述的分离的胎盘细胞和胎盘细胞群体(即,两种或更多种分离的胎盘细胞)包括直接从胎盘或其任何部分(例如绒毛膜、胎盘绒毛叶等)获得的胎盘细胞和含胎盘细胞的细胞群体。分离的胎盘细胞群体也包括培养物中的分离的胎盘细胞群体(即,两种或更多种分离的胎盘细胞)和容器(例如袋)中的群体。本文所述的分离的胎盘细胞不是骨髓衍生的间充质细胞、脂肪衍生的间充质干细胞或从脐带血、胎盘血或外周血获得的间充质细胞。可用于本文所述的方法和组合物中的胎盘细胞(例如胎盘多能细胞和胎盘细胞)在本文中有描述并且描述于例如美国专利第7,311,904、7,311,905和7,468,276号；和描述于例如美国专利申请公布第2007/0275362号，所述专利和专利申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中。

在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞是分离的胎盘干细胞。在某些其它的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是分离的胎盘多能细胞。在一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞(例如PDACs)是通过流式细胞术检测CD34^–、CD10⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞具有分化成神经表型的细胞、骨生成细胞表型的细胞和/或软骨生成细胞表型的细胞的潜力。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD45^-或CD90⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD45^-和CD90⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺和CD45^–，也就是说，所述细胞是CD34^–、CD10⁺、CD45^–、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD45^–、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺细胞另外还是CD80^–和CD86^–。

在某些实施方案中，所述胎盘细胞通过流式细胞术检测是CD34^–、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺，以及CD38^–、CD45^–、CD80^–、CD86^–、CD133^–、HLA-DR,DP,DQ^–、SSEA3^–、SSEA4^–、CD29⁺、CD44⁺、CD73⁺、CD90⁺、CD105⁺、HLA-A,B,C⁺、PDL1⁺、ABC-p⁺和/或OCT-4⁺中的一种或多种。在其它的实施方案中，上述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺细胞中的任一种另外还是CD29⁺、CD38^–、CD44⁺、CD54⁺、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述细胞另外还是CD44⁺。在任何上述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞的另一个具体的实施方案中，所述细胞另外还是CD117^–、CD133^–、KDR^-(VEGFR2^–)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。

在另一个实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD62E^–、CD62L^–、CD62P^–、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^–、CD144/VE-钙粘着蛋白^低、CD184/CXCR4^–、CD200⁺、CD133^–、OCT-4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^–或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。在一个其它的实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^-、CD44⁺、CD45^-、CD54/ICAM⁺、CD62E^-、CD62L^-、CD62P^-、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^-、CD86^-、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^-、CD144/VE-钙粘着蛋白^低、CD184/CXCR4^-、CD200⁺、CD133^-、OCT-4⁺、SSEA3^-、SSEA4^-、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^-和程序性死亡-1配体(PDL1)⁺。

在另一个具体的实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是ABC-p⁺(通过流式细胞术检测)或OCT-4⁺(POU5F1⁺)(通过RT-PCR测定)，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白(也称为乳癌抗性蛋白(BCRP)及称为米托蒽醌抗性蛋白(MXR))，而OCT-4是八聚体-4(Octamer-4)蛋白(POU5F1)。在另一个具体的实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是SSEA3^–或SSEA4^–，通过流式细胞术测定，其中SSEA3是阶段特异性胚胎抗原3，而SSEA4是阶段特异性胚胎抗原4。在另一个具体的实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是SSEA3^–和SSEA4^–。

在另一个具体的实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是MHC-I⁺(例如HLA-A,B,C⁺)、MHC-II^–(例如HLA-DP,DQ,DR^-)或HLA-G^–中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，本文所述的胎盘细胞中的任一种另外还是MHC-I⁺(例如HLA-A,B,C⁺)、MHC-II^–(例如HLA-DP,DQ,DR^-)和HLA-G^–中的一种或多种。

本文还提供的是分离的胎盘细胞群体、或包含例如富集了所述分离的胎盘细胞的细胞群体(例如胎盘细胞群体)，它们都可用于本文所公开的方法和组合物中。优选的是包含所述分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述细胞群体包含例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或98%分离的CD10⁺、CD105⁺和CD34^–胎盘细胞；即，在所述群体中细胞的至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或98%是分离的CD10⁺、CD105⁺和CD34^–胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺和CD45^-。在另一个具体的实施方案中，任何上述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD29⁺、CD38^-、CD44⁺、CD54⁺、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞或分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞，另外还是CD44⁺。在任何包含上述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞的细胞群体的一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^-、CD44⁺、CD45^-、CD54⁺、CD62E^-、CD62L^-、CD62P^-、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^–、CD144/VE-钙粘着蛋白^低、CD184/CXCR4^–、CD200⁺、CD133^–、OCT-4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^–或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54/ICAM⁺、CD62E^–、CD62L^–、CD62P^–、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^–、CD144/VE-钙粘着蛋白^低、CD184/CXCR4^–、CD200⁺、CD133^–、OCT-4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^–)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^–和程序性死亡-1配体(PDL1)⁺。

在某些实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、OCT-4⁺和ABC-p⁺中的一种或多种或其全部，其中所述分离的胎盘细胞是通过胎盘组织的物理和/或酶促破坏获得的。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和ABC-p⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和CD34^–，其中所述分离的胎盘细胞具有至少一个以下特征：CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–和SSEA4^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^–、CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–和SSEA4^–。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^–、SSEA3^–和SSEA4^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和CD34^-，并且是或者SH2⁺或者SH3⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^-、SH2⁺和SH3⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^-、SSEA3^-和SSEA4^-，并且是或者SH2⁺或者SH3⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和CD34^-，并且是或者SH2⁺或者SH3⁺，并且是CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^-、CD54⁺、CD90⁺、SSEA3^-或SSEA4^-中的至少一个。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^-、CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^-、CD54⁺、CD90⁺、SSEA3^-和SSEA4^-，并且是或者SH2⁺或者SH3⁺。

在另一个实施方案中，可用于本文所公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺和OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD54⁺、CD90⁺、CD34^–、CD45^–、SSEA3^–或SSEA4^–。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–和SSEA4^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–和SSEA4^--、CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD54⁺、CD90⁺、OCT-4⁺、CD34^–或CD45^–。

在另一个实施方案中，可用于本文所公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺和SH4⁺；其中所述分离的胎盘细胞另外还是OCT-4⁺、SSEA3^–或SSEA4^–中的一种或多种。

在某些实施方案中，可用于本文所公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD200⁺或HLA-G^–。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD200⁺和HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述干细胞是CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺或HLA-G^–胎盘细胞促进在包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中在允许胚胎样小体形成的条件下形成胚胎样小体。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是从不是干细胞或多能细胞的胎盘细胞中分离出来的(be isolated away from)。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了CD200⁺、HLA-G^-干细胞的细胞群体。在一个具体的实施方案中，所述群体是胎盘细胞群体。在各种不同的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%是分离的CD200⁺、HLA-G^-胎盘细胞。优选地，所述细胞群体中细胞的至少约70%是分离的CD200⁺、HLA-G^-胎盘细胞。更优选地，所述细胞的至少约90%、95%或99%是分离的CD200⁺、HLA-G^-胎盘细胞。在所述细胞群体的一个具体实施方案中，所述分离的CD200⁺、HLA-G^–胎盘细胞也是CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、HLA-G^–胎盘细胞也是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、HLA-G^–胎盘细胞也是CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD73⁺和CD105⁺。在另一个实施方案中，当在允许胚胎样小体形成的条件下培养时，所述细胞群体产生一个或多个胚胎样小体。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不是干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、HLA-G^–胎盘细胞是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD34^–、CD38^–、CD45^–和HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺胎盘细胞促进在包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体，当所述群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是从不是所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了分离的CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞的细胞群体。在各种不同的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%是分离的CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中所述细胞的至少约70%是分离的CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约90%、95%或99%是分离的CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞。在所述群体的一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是HLA-G^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD34^-、CD38^-或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD34^-、CD38^-和CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–、CD45^–和HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体当在允许胚胎样小体形成的条件下培养时产生一个或多个胚胎样小体。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞群体是从不是干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞群体是从不展示这些特征的胎盘细胞中分离出来的。

在某些其它的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、OCT-4⁺、HLA-G^–或ABC-p⁺中的一种或多种。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–和OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD54⁺、SH2⁺、SH3⁺和SH4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD54⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺和OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、HLA-G^–、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和ABC-p⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺和OCT-4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺、CD34^–、SSEA3^–和SSEA4^–。在一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺、CD34^–、SSEA3^–和SSEA4^–胎盘细胞另外还是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺和SH4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺和CD34^–，并且是或者SH3⁺或者SH4⁺。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD34^-并且是或者CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD54⁺、CD90⁺或者OCT-4⁺。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD200⁺和OCT-4⁺。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是HLA-G^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞是CD34^-、CD38^-或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞是CD34^-、CD38^-和CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞是CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞促进包含所述分离的细胞的胎盘细胞群体产生一个或多个胚胎样小体，当所述群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞是从不是干细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞是从不展示这些特征的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞的细胞群体。在各种不同的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%是分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞的至少约70%是所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约80%、90%、95%或99%是所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞。在所述分离的群体的一个具体实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞另外还是HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–、CD45^–、CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^–。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体当在允许胚胎样小体形成的条件下培养时产生一个或多个胚胎样小体。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不是分离的CD200⁺、OCT-4⁺胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^-胎盘细胞另外还是CD34^-、CD38^-或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^-胎盘细胞另外还是CD34^-、CD38^-和CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^-胎盘细胞另外还是OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–、CD45^–、OCT-4⁺和CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞促进在包含所述细胞的胎盘细胞群体中形成胚胎样小体，当所述群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞是从不是所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了分离的CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^–胎盘细胞的细胞群体。在各种不同的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%是分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约70%是分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约90%、95%或99%是分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞。在上述群体的一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞另外还是OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^-胎盘细胞另外还是CD34^-、CD38^-、CD45^-、OCT-4⁺和CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不是CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^-胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD73⁺和CD105⁺并且促进在包含所述CD73⁺、CD105⁺细胞的分离的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体，当所述群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是OCT-4⁺、CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞是从不是所述细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞是从不展示这些特征的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了是CD73⁺、CD105⁺的分离的胎盘细胞的细胞群体并且促进在包含所述细胞的分离的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体，当所述群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在各种不同的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%是所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约70%是所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约90%、95%或99%是所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞。在上述群体的一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是OCT-4⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD34^-、CD38^-、CD45^-、OCT-4⁺和CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不是所述分离的CD73⁺、CD105⁺胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是OCT-4⁺并且促进在包含所述细胞的分离的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体，当在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞是从不是OCT-4⁺胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞是从不展示这些特征的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了分离的胎盘细胞的细胞群体，所述分离的胎盘细胞是OCT-4⁺的并且促进在包含所述细胞的分离的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体，当所述群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时。在各种不同的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%是所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约70%是所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少约80%、90%、95%或99%是所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞。在上述群体的一个具体实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD73⁺和CD105⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4⁺胎盘细胞另外还是CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^–、CD38^–和CD45^–。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不是所述细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的HLA-A,B,C⁺、CD45^-、CD133^-和CD34^-胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述分离的细胞群体中细胞的至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%是分离的HLA-A,B,C⁺、CD45^-、CD133^-和CD34^-胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不是HLA-A,B,C⁺、CD45^–、CD133^–和CD34^–胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体基本上不含母体成分；例如，所述分离的胎盘细胞群体中所述细胞的至少约40%、45%、5-0%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母体来源的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的CD10⁺、CD13⁺、CD33⁺、CD45^–、CD117^–和CD133^–胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述细胞群体中细胞的至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%是分离的CD10⁺、CD13⁺、CD33⁺、CD45^–、CD117^–和CD133^–胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不是所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD10⁺、CD13⁺、CD33⁺、CD45^–、CD117^–和CD133^–胎盘细胞是非母体来源的，即，具有胎儿基因型。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体中所述细胞的至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不展示这些特征的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的CD10^–、CD33^–、CD44⁺、CD45^–和CD117^–胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述细胞群体中细胞的至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%是分离的CD10^-、CD33^-、CD44⁺、CD45^-和CD117^-胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不是所述细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体中所述细胞的至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的CD10^–、CD13^–、CD33^–、CD45^–和CD117^–胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含例如富集了分离的CD10^–、CD13^–、CD33^–、CD45^–和CD117^–胎盘细胞的细胞群体，其中所述群体中细胞的至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%是CD10^–、CD13^–、CD33^–、CD45^–和CD117^–胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不是所述细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体中所述细胞的至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不展示这些特征的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是HLA A,B,C⁺、CD45^–、CD34^–和CD133^–，并且另外还是CD10⁺、CD13⁺、CD38⁺、CD44⁺、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺和/或HLA-G^–和/或对CD117阴性的。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法中的细胞群体是包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述群体中细胞的至少约20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或约99%是分离的胎盘细胞，其是HLA A,B,C^–、CD45^–、CD34^–、CD133^–，并且另外还是对CD10、CD13、CD38、CD44、CD90、CD105、CD200阳性的和/或对CD117和/或HLA-G阴性的。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不是所述细胞的胎盘细胞中分离出来的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体中所述细胞的至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从不展示这些标记的胎盘细胞中分离出来的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是这样的分离的胎盘细胞：其是CD200⁺和CD10⁺(通过抗体结合测定)和CD117^–(通过抗体结合和RT-PCR二者测定)。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞等分离的胎盘细胞，其是CD10⁺、CD29^–、CD54⁺、CD200⁺、HLA-G^–、MHC I⁺类和β-2-微球蛋白⁺。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是这样的胎盘细胞，其中至少一种细胞标记的表达是比间充质干细胞(例如骨髓衍生间充质干细胞)高至少两倍。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体来源的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体中所述细胞的至少约40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、90%、85%、90%、95%、98%或99%是非母体来源的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞等分离的胎盘细胞，其是CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^–、CD54/ICAM⁺、CD62E^–、CD62L^–、CD62P^–、CD80^–、CD86^–、CD103^–、CD104^–、CD105⁺、CD106/VCAM⁺、CD144/VE-钙粘着蛋白^低、CD184/CXCR4^–、β2-微球蛋白^低、MHC-I^低、MHC-II^–、HLA-G^低和/或PDL1^低中的一种或多种。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少是CD29⁺和CD54⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少是CD44⁺和CD106⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少是CD29⁺。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体包含分离的胎盘细胞，并且所述细胞群体中细胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%是这样的分离的胎盘细胞：其是CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^-、CD54/ICAM⁺、CD62-E^-、CD62-L^-、CD62-P^-、CD80^-、CD86^-、CD103^-、CD104^-、CD105⁺、CD106/VCAM⁺、CD144/VE-钙粘着蛋白^dim、CD184/CXCR4^-、β2-微球蛋白^dim、HLA-I^dim、HLA-II^-、HLA-G^dim和/或PDL1^dim中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体中细胞的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%是CD10⁺、CD29⁺、CD44⁺、CD45^-、CD54/ICAM⁺、CD62-E^-、CD62-L^-、CD62-P^-、CD80^-、CD86^-、CD103^-、CD104^-、CD105⁺、CD106/VCAM⁺、CD144/VE-钙粘着蛋白^dim、CD184/CXCR4^-、β2-微球蛋白^dim、MHC-I^dim、MHC-II^–、HLA-G^dim和PDL1^dim。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是这样的分离的胎盘细胞：其是CD10⁺、CD29⁺、CD34^–、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54⁺、CD90⁺、SH2⁺、SH3⁺、SH4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、OCT-4⁺和ABC-p⁺中的一种或多种或全部，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白(也称为乳癌抗性蛋白(BCRP)及称为米托蒽醌抗性蛋白(MXR))，其中所述分离的胎盘细胞是通过哺乳动物(例如人)胎盘的灌注获得的，即将胎盘的脐带血排干后灌注以去除残血。

在任何上述特征的另一个具体实施方案中，细胞标记(例如分化簇或免疫原性标记)的表达是通过流式细胞术测定的；在另一个具体的实施方案中，所述标记的表达是通过RT-PCR测定的。

基因概况分析证实了分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群体与其它细胞，例如间充质干细胞，例如骨髓衍生间充质干细胞有区别。本文所述的分离的胎盘细胞在一个或多个基因的表达基础上与例如间充质干细胞有区别：与骨髓衍生间充质干细胞相比，其表达明显高于所述分离的胎盘细胞，或明显高于某些分离的脐带干细胞。具体地说，可用于本文提供的治疗方法中的分离的胎盘细胞在一个或多个基因的表达基础上与间充质干细胞有区别：其在所述分离的胎盘细胞中的表达明显高于(即至少高两倍)在同等数量的骨髓衍生间充质干细胞中的表达，其中所述的一个或多个基因是ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN、ZC3H12A或任何上述基因的组合，当所述细胞是在同等条件下生长时。参见例如，美国专利申请公布第2007/0275362号，所述专利申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中。在某些具体的实施方案中，所述一个或多个基因的所述表达是例如通过RT-PCR或微阵列分析测定的，例如使用U133-A微阵列(Affymetrix)。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞当培养到群体倍增的数量（例如，从约3到约35个群体倍增不等）时，，在包含以下成分的培养基中表达所述一个或多个基因：DMEM-LG(例如来自Gibco)；2%胎牛血清(例如来自HycloneLabs.)；1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)；1x亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10^-9M地塞米松(例如来自Sigma)；10^-4M抗坏血酸2-磷酸酯(例如来自Sigma)；10ng/mL表皮生长因子(例如来自R&DSystems)；和10ng/mL血小板衍生生长因子(PDGF-BB)(例如来自R&D Systems)。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞特异性基因或分离的脐带细胞特异性基因是CD200。

这些基因的具体序列可以在GenBank中按下列登录号查找到：NM_001615(ACTG2)、BC065545(ADARB1)、(NM_181847(AMIGO2)、AY358590(ARTS-1)、BC074884(B4GALT6)、BC008396(BCHE)、BC020196(C11orf9)、BC031103(CD200)、NM_001845(COL4A1)、NM_001846(COL4A2)、BC052289(CPA4)、BC094758(DMD)、AF293359(DSC3)、NM_001943(DSG2)、AF338241(ELOVL2)、AY336105(F2RL1)、NM_018215(FLJ10781)、AY416799(GATA6)、BC075798(GPR126)、NM_016235(GPRC5B)、AF340038(ICAM1)、BC000844(IER3)、BC066339(IGFBP7)、BC013142(IL1A)、BT019749(IL6)、BC007461(IL18)、(BC072017)KRT18、BC075839(KRT8)、BC060825(LIPG)、BC065240(LRAP)、BC010444(MATN2)、BC011908(MEST)、BC068455(NFE2L3)、NM_014840(NUAK1)、AB006755(PCDH7)、NM_014476(PDLIM3)、BC126199(PKP-2)、BC090862(RTN1)、BC002538(SERPINB9)、BC023312(ST3GAL6)、BC001201(ST6GALNAC5)、BC126160或BC065328(SLC12A8)、BC025697(TCF21)、BC096235(TGFB2)、BC005046(VTN)和BC005001(ZC3H12A)（至2008年3月）。

在某些具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞表达ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A中的每一个，其可检测水平高于同等数量的骨髓衍生间充质干细胞，当所述细胞是在同等条件下生长时。

在多个具体的实施方案中，所述胎盘细胞表达CD200和ARTS1(1型肿瘤坏死因子的氨肽酶调节物)；ARTS-1和LRAP(白细胞衍生精氨酸氨肽酶)；IL6(白介素-6)和TGFB2(转化生长因子,β2)；IL6和KRT18(角蛋白18)；IER3(立即早期应答3)、MEST(中胚层特异性转录物同系物)和TGFB2；CD200和IER3；CD200和IL6；CD200和KRT18；CD200和LRAP；CD200和MEST；CD200和NFE2L3(核因子(类红细胞衍生2)样3)；或CD200和TGFB2，其可检测水平高于同等数量的骨髓衍生间充质干细胞(BM-MSCs)，其中，所述骨髓衍生间充质干细胞在培养物中经历了同所述分离的胎盘细胞已经历的传代数相等的传代数。在其它具体的实施方案中、所述胎盘细胞表达ARTS-1、CD200、IL6和LRAP；ARTS-1、IL6、TGFB2、IER3、KRT18和MEST；CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3，和TGFB2；ARTS-1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3，和TGFB2；或IER3、MEST和TGFB2，其可检测水平高于同等数量的骨髓衍生间充质干细胞BM-MSCs，其中所述骨髓衍生间充质干细胞在培养物中经历了同所述分离的胎盘细胞已经历的传代数相等的传代数。

上述基因的表达可以通过标准技术来评价。例如，可以通过常规技术单独地选择和构建基于基因序列的探针。基因的表达可以例如在包含针对一个或多个基因的探针的微阵列上进行评价，例如Affymetrix

Human Genome U133A 2.0阵列或Affymetrix

Human Genome U133 Plus 2.0(Santa Clara,California)。即使特殊GenBank登录号的序列被修改，这些基因的表达也可以进行评价，因为对修改序列有特异性的探针可以很容易地使用众所周知的标准技术来产生。

这些基因的表达水平可用于证实分离的胎盘细胞群体的身份，鉴定细胞群体为包含至少多个分离的胎盘细胞，等等。其身份被证实的分离的胎盘细胞群体可以是克隆的，例如从单个分离的胎盘细胞扩充的分离的胎盘细胞群体，或是混合干细胞群体，例如只包含从多种分离的胎盘细胞扩充的分离的胎盘细胞的细胞群体，或是包含如本文所述的分离的胎盘细胞和至少一种其它细胞类型的细胞群体。

这些基因的表达水平可用于选择分离的胎盘细胞群体。举例来说，如果以上所列的一个或多个基因的表达在来自所述细胞群体的样品中比在同等的间充质干细胞群体中明显高一些，那么可以对细胞(例如克隆扩充细胞)的群体进行选择。这样的选择可以属于来自多个分离的胎盘细胞群体，即来自其身份不是已知的多个细胞群体的群体，等等。

分离的胎盘细胞可以基于一个或多个这样的基因的表达水平，通过与所述一个或多个基因在例如间充质干细胞对照中的表达水平，例如所述一个或多个基因在同等数量的骨髓衍生间充质干细胞中的表达水平相比进行选择。在一个实施方案中，使用所述一个或多个基因在包含同等数量的间充质干细胞的样品中的表达水平作为对照。在另一个实施方案中，用于在某些条件下测试的分离的胎盘细胞的对照，是代表所述一个或多个基因在间充质干细胞中在所述条件下的表达水平的某个数值。

本文所述的分离的胎盘细胞在原代培养物中或在包含例如以下成分的培养基中在增殖期间展示上述特征(例如细胞表面标记和/或基因表达概况的组合)：DMEM-LG(Gibco)、2%胎牛血清(FCS)(Hyclone Laboratories)、1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)、1x亚油酸(lenolenic-acid)-牛血清-白蛋白(LA-BSA)、10^-9M地塞米松(Sigma)、10^-4M抗坏血酸2-磷酸酯(Sigma)、10ng/ml表皮生长因子(EGF)(R&DSystems)、10ng/ml血小板衍生的生长因子(PDGF-BB)(R&D Systems)和100U青霉素/1000U链霉素。

在本文所公开的任何胎盘细胞的某些实施方案中，所述细胞是人的。在本文所公开的任何胎盘细胞的某些实施方案中，所述细胞标记特征或基因表达特征是人标记或人基因。

在所述分离的胎盘细胞或包含所述分离的胎盘细胞的细胞群体的另一个具体的实施方案中，所述细胞或群体已进行了扩充，例如已传代至少、约或不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次，或增殖至少、约或不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40个群体倍增。在所述分离的胎盘细胞或包含所述分离的胎盘细胞的细胞群体的另一个具体的实施方案中，所述细胞或群体是原代分离物。在本文所公开的分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群体的另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是来源于胎儿的(即具有胎儿基因型)。

在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞在培养期间在生长培养基即配制促进增殖的培养基中不分化，例如在增殖期间在生长培养基中不分化。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞不需要饲养层(feeder layer)以便增殖。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在培养物中在饲养层不存在时不分化，唯独因为缺少饲养细胞层。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞是分离的胎盘细胞，其中所述分离的胎盘细胞的多数对醛脱氢酶(ALDH)是阳性的(通过醛脱氢酶活性测定评价)。这样的测定是本领域已知的(参见例如，Bostian和Betts,Biochem.J.,173,787,(1978))。在一个具体的实施方案中，所述ALDH测定使用

(Aldagen,Inc.,Ashland,Oregon)作为醛脱氢酶活性的标记。在一个具体的实施方案中，所述多数是介于所述细胞群体中细胞的约3%和约25%之间。在另一个实施方案中，本文提供的是分离的脐带细胞群体，例如多能分离的脐带细胞，其中所述分离的脐带细胞的多数对醛脱氢酶是阳性的，通过醛脱氢酶活性测定评价，使用作为醛脱氢酶活性的指标。在一个具体的实施方案中，所述多数是介于所述细胞群体中细胞的约3%和约25%之间。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体或分离的脐带细胞显示，其ALDH活性比具有大致相同的细胞数量并在相同的条件下培养的骨髓衍生间充质干细胞群体高至少三倍或至少五倍。

在任何包含本文所述的分离的胎盘细胞的细胞群体的某些实施方案中，所述细胞群体中的胎盘细胞基本上不含具有母体基因型的细胞；例如，在所述群体中胎盘细胞的至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有胎儿基因型。在任何包含本文所述的分离的胎盘细胞的细胞群体的某些其它实施方案中，包含所述胎盘细胞的细胞群体基本上不含具有母体基因型的细胞；例如，在所述群体中的细胞的至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%具有胎儿基因型。

在任何上述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞的细胞群体的一个具体的实施方案中，细胞的染色体组型或所述群体中细胞的至少约95%或约99%是正常的。在任何上述胎盘细胞或细胞群体的另一个具体的实施方案中，所述细胞或所述细胞群体中的细胞是非母体来源的。

带有标记的任何上述组合的分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体可以按任何比率进行组合。上述分离的胎盘细胞群体的任意两种或更多种可以组合形成分离的胎盘细胞群体。例如，一个分离的胎盘细胞群体可包含由一种上述标记组合限定的第一个分离的胎盘细胞群体，及由另一种上述标记组合限定的第二个分离的胎盘细胞群体，其中所述的第一个和第二个群体是按约1:99、2:98、3:97、4:96、5:95、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2或约99:1的比率进行组合的。以同样的方式，任意三种(个)、四种(个)、五种(个)或更多种(个)上述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体可以进行组合。

可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞可以例如通过用或不用酶促消化(参见第4.3.3节)或灌注(参见第4.3.4节)破坏胎盘组织来获得。例如，分离的胎盘细胞群体可以按照包括下述方法在内的方法产生：灌注已排干脐带血并经灌注去掉残留血液的哺乳动物胎盘；用灌注溶液灌注所述胎盘；和收集所述灌注溶液，其中在灌注之后，所述灌注溶液包含胎盘细胞群体，包含分离的胎盘细胞；和分离来自所述细胞群体的多种所述分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述灌注溶液既通过了脐静脉又通过了脐动脉并在从胎盘流出之后收集起来。在另一个具体的实施方案中，使所述灌注溶液通过脐静脉并从脐动脉中收集起来或通过脐动脉并从脐静脉中收集起来。

在各种不同的实施方案中，从胎盘灌注中获得的、在所述细胞群体所含的分离的胎盘细胞是所述胎盘细胞群体的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%。在另一个具体的实施方案中，经由灌注收集的分离的胎盘细胞包含胎儿细胞和母体细胞。在另一个具体的实施方案中，经由灌注收集的分离的胎盘细胞是至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%胎儿细胞。

在另一个具体的实施方案中，本文提供的是包含经由灌注收集的如本文所述的分离的胎盘细胞群体的组合物，其中所述组合物包含至少一部分用于收集所述分离的胎盘细胞的灌注溶液。

本文所述的分离的胎盘细胞的分离群体可以如下产生：用破坏组织的酶消化胎盘组织以获得包含所述细胞的胎盘细胞群体，和从所述胎盘细胞的剩余物中分离或基本上分离所述胎盘细胞的多数。整个胎盘或其任何部分可以经过消化以获得本文所述的分离的胎盘细胞。在多个具体的实施方案中，例如，所述胎盘组织可以是整个胎盘、羊膜、绒毛膜、羊膜和绒毛膜的组合、或任何上述物质的组合。在其它具体的实施方案中，所述破坏组织的酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶。在各种不同的实施方案中，在从消化胎盘获得的细胞群体中所含有的分离的胎盘细胞是所述胎盘细胞群体的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%。

上述胎盘细胞的分离群体和分离的胎盘细胞的群体一般可包含约、至少或不超过1x10⁵、5x10⁵、1x10⁶、5x10⁶、1x10⁷、5x10⁷、1x10⁸、5x10⁸、1x10⁹、5x10⁹、1x10¹⁰、5x10¹⁰、1x10¹¹或以上的分离的胎盘细胞。可用于本文所述的治疗方法中的分离的胎盘细胞群体包含至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%活的分离的胎盘细胞，例如，如通过例如锥虫蓝排除法测定的。

4.2.3培养物中的生长

就任何哺乳动物细胞来说，本文第4.4.2节描述的分离的胎盘细胞的生长部分地取决于为生长选择的特殊培养基。在最佳条件下，所述分离的胎盘细胞典型地在约1天以内数量翻倍。在培养期间，本文所述的分离的胎盘细胞贴壁于培养物中的基底，例如组织培养容器的表面(例如组织培养皿塑料器具，纤连蛋白包被的塑料器具等)并形成单层。

包含本文所述的分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体，当在适宜条件下培养时，可形成胚胎样小体，即在贴壁细胞层顶上长出的三维细胞簇。胚胎样小体里面的细胞可表达与极早期干细胞相关的标记，例如OCT-4、Nanog、SSEA3和SSEA4。胚胎样小体里面的细胞典型地不贴壁于培养基底上，而贴壁于培养基底的是本文所述的分离的胎盘细胞，但是在培养期间往往保留吸附在贴壁细胞上。对于活力，胚胎样小体细胞依赖于贴壁的分离的胎盘细胞，因为在贴壁的分离的胎盘细胞不存在时，胚胎样小体不形成。因此，贴壁的分离的胎盘细胞促进在包含贴壁的分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中生长一个或多个胚胎样小体。虽然不希望受理论的束缚，但是胚胎样小体的细胞被认为在贴壁的分离的胎盘细胞上生长很像胚胎干细胞在细胞的饲养层上生长。

4.3获得分离的胎盘细胞的方法

4.3.1干细胞收集组合物

本文进一步提供的是收集和分离胎盘细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的分离的胎盘细胞的方法。一般而言，这样的细胞是使用生理上可接受的溶液(例如细胞收集组合物)从哺乳动物胎盘获得的。一种示例性的细胞收集组合物详细描述于有关的美国专利申请公布第2007/0190042号，题目为“Improved Medium for Collecting PlacentalStem Cells and Preserving Organs(用于收集胎盘干细胞和保存器官的改良培养基)”，所述专利申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中。

所述细胞收集组合物可包含适合于收集和/或培养细胞(例如本文所述的分离的胎盘细胞)的任何生理上可接受的溶液，例如盐水溶液(例如磷酸缓冲盐溶液、Kreb氏溶液、改良的Kreb氏溶液、Eagle氏溶液、0.9%NaCl等)、培养基(例如DMEM,H.DMEM等)等。

所述细胞收集组合物可包含倾向于保存分离的胎盘细胞的一种或多种组分，即防止所述分离的胎盘细胞死亡或延迟所述分离的胎盘细胞的死亡，减少细胞群体中分离的胎盘细胞从收集时间到培养时间期间的死亡数量，等。这样的组分可以是例如细胞凋亡抑制剂(例如半胱天冬酶(caspase)抑制剂或JNK抑制剂)；血管扩张药(例如硫酸镁、抗高血压药、心房钠尿肽(ANP)、促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素释放激素、硝普钠(sodium nitroprusside)、肼屈嗪(hydralazine)、三磷酸腺苷、腺苷、吲哚美辛(indomethacin)或硫酸镁、磷酸二酯酶抑制剂等)；坏死抑制剂(例如2-(1H-吲哚-3-基)-3-戊基氨基-马来酰亚胺、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯或氯硝西泮(clonazepam))；TNF-α抑制剂；和/或携氧的全氟化碳(例如全氟辛基溴化物(perfluorooctyl bromide)、全氟癸基溴化物(perfluorodecyl bromide)等)。

所述细胞收集组合物可包含一种或多种降解组织的酶，例如金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNase或DNase等。这样的酶包括但不限于胶原蛋白酶(例如胶原蛋白酶I、II、III或IV，来自溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)的胶原蛋白酶等)；分散酶(dispase)、嗜热菌蛋白酶(thermolysin)、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、释放酶(LIBERASE)、透明质酸酶等。

所述细胞收集组合物可包含杀细菌或抑细菌有效量的抗生素。在某些非限制性实施方案中，所述抗生素是大环内酯类(例如妥布霉素(tobramycin))、头孢菌素类(例如头孢氨苄(cephalexin)、头孢拉定(cephradine)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢齐尔(cefprozil)、头孢克洛(cefaclor)、头孢克肟(cefixime)或头孢羟氨苄(cefadroxil))、克拉霉素(clarithromycin)、红霉素(erythromycin)、青霉素(例如青霉素V)或喹诺酮类(例如氧氟沙星(ofloxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)或诺氟沙星(norfloxacin))、四环素(tetracycline)、链霉素等。在一个具体的实施方案中，所述抗生素是针对革兰氏阳性菌(+)和/或革兰氏阴性菌(–)(例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等)的活性剂。在一个实施方案中，所述抗生素是庆大霉素，例如在培养基中约0.005%至约0.01%(w/v)。

所述细胞收集组合物也可包含下列化合物中的一种或多种：腺苷(约1mM至约50mM)；D-葡萄糖(约20mM至约100mM)；镁离子(约1mM至约50mM)；分子量大于20,000道尔顿的大分子，在一个实施方案中，以足以维持内皮完整性和细胞活力的量存在的大分子(例如以约25g/L至约100g/L或约40g/L至约60g/L存在的合成的或天然存在的胶体、多糖(例如葡聚糖)或聚乙二醇)；抗氧化剂(例如以约25μM至约100μM存在的丁羟茴醚、丁羟甲苯、谷胱甘肽、维生素C或维生素E)；还原剂(例如以约0.1mM至约5mM存在的N-乙酰半胱氨酸)；防止钙进入细胞的药剂(例如以约2μM至约25μM存在的维拉帕米(verapamil))；硝酸甘油(例如约0.05g/L至约0.2g/L)；抗凝剂，在一个实施方案中，以足以有助于防止残留血液凝固的量存在的抗凝剂(例如以约1000单位/L至约100,000单位/L的浓度存在的肝素或水蛭素(hirudin)；或含有阿米洛利(amiloride)的化合物(例如以约1.0μM至约5μM存在的阿米洛利、乙基异丙基阿米洛利、六亚甲基阿米洛利、二甲基阿米洛利或异丁基阿米洛利)。

4.3.2胎盘的收集和处理

一般而言，人胎盘是在分娩后在其娩出后立即回收的。在一个优选的实施方案中，胎盘是在患者知情同意之后并在获取患者的完全医学病史并与胎盘相关之后回收的。优选地，医学病史在生产后持续。这样的医学病史可用于协调胎盘或从其收获的分离的胎盘细胞的后续应用。例如，根据医学病史，分离的人胎盘细胞可用于与胎盘相关的婴儿的个性化医疗，或用于婴儿的父母、兄弟姐妹或其它亲属的个性化医疗。

在分离的胎盘细胞的回收之前，优选去掉脐带血和胎盘血。在某些实施方案中，在分娩后，回收胎盘中的脐带血。胎盘可以经受住常规的脐带血回收过程。典型地，使用针或套管，借助重力，来放掉胎盘的血(参见例如，Anderson,美国专利第5,372,581号；Hessel等人,美国专利第5,415,665号)。针或套管通常置于脐静脉内并且可对胎盘轻轻地按摩以有助于从胎盘中排干脐带血。这样的脐带血回收可以在商业上进行，例如LifeBank USA,Cedar Knolls,N.J.。优选地，胎盘借助重力排干而不需要进一步操作，以便在脐带血回收期间使组织破坏减到最小。

典型地，把胎盘从产房运到另一地点(例如实验室)用于通过例如灌注或组织分离进行脐带血的回收和干细胞的收集。胎盘优选放在无菌的热绝缘的运输装置(维持胎盘的温度在20-28°C之间)中运输，例如将带有被钳住近端脐带的胎盘放在无菌的自封(zip-lock)塑料袋里面，然后放入绝缘容器中。在另一个实施方案中，胎盘放在大致如待审的美国专利第7,147,626号中描述的脐带血收集试剂盒中运输，所述待审专利的公开内容通过引用结合到本文中。优选地，胎盘在娩出后4-24小时送到实验室。在某些实施方案中，近端脐带被钳住，优选在脐带血回收之前在插进胎盘托盘中4-5cm(厘米)以内。在其它的实施方案中，近端脐带是在脐带血回收之后但在胎盘进一步加工处理之前被钳住的。

在细胞收集之前，胎盘可以保存在无菌条件下和在室温或在5°C~25°C的温度下。在进行胎盘灌注以去掉任何残留的脐带血之前，胎盘可保存4-24小时、长达48小时或长于48小时的时期。在一个实施方案中，在娩出后从约零小时到约2小时之间收获胎盘。胎盘优选保存在抗凝剂溶液中，温度为5°C~25°C。合适的抗凝剂溶液是本领域众所周知的。例如，可以使用肝素或华法林钠(warfarin sodium)的溶液。在一个优选的实施方案中，所述抗凝剂溶液包含肝素溶液(例如1%w/w的1:1000溶液)。在收集胎盘细胞之前，放血后的胎盘优选保存不超过36小时。

哺乳动物胎盘或其部分一旦一般如上所述收集和准备后，就可以按任何本领域已知的方式进行处理，例如可以进行灌注或破坏，例如用一种或多种破坏组织的酶进行消化以获得分离的胎盘细胞。

4.3.3胎盘组织的物理破坏和酶促消化

在一个实施方案中，干细胞是从哺乳动物胎盘中通过物理破坏该器官的一部分或其全部而收集的。例如，胎盘或其部分可以经过压碎、剪碎、绞碎、切碎、斩碎、浸渍等处理。然后，可以对组织进行培养以获得分离的胎盘细胞群体。典型地，胎盘组织用例如培养基、盐水溶液或干细胞收集组合物进行破坏(参见第4.5.1节和下文)。

胎盘可以在物理破坏和/或酶促消化和干细胞回收之前进行解剖成为各组分。分离的胎盘细胞可以从羊膜、绒毛膜、脐带、胎盘绒毛叶、或其任何组合中的全部或其中的一部分获得，包括从整个胎盘获得。优选地，分离的胎盘细胞是从包含羊膜和绒毛膜的胎盘组织中获得的，典型地，分离的胎盘细胞可以通过破坏一小块胎盘组织来获得，例如，一块胎盘组织的体积约为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或约1000立方毫米。可以使用任何物理破坏方法，只要该破坏方法留下所述器官中细胞的多数、更优选绝大多数和更优选至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%是活的，如通过例如锥虫蓝排除法测定的。

分离的贴壁胎盘细胞一般可以在娩出后前约3天内的任何时间，但优选在娩出后约8小时和约18小时之间从胎盘或其部分中收集。

在一个具体的实施方案中，将经破坏的组织在适合于分离的胎盘细胞增殖的组织培养基中进行培养(参见例如，下文第4.6节,描述了胎盘细胞例如PDACs的培养)。

在另一个具体的实施方案中，通过物理破坏胎盘组织来收集分离的胎盘细胞，其中物理破坏包括酶促消化，酶促消化可通过使用一种或多种消化组织的酶来完成。胎盘或其部分也可以通过物理破坏和用一种或多种酶消化，然后将所得材料浸入或混入细胞收集组合物中。

优选的细胞收集组合物包含一种或多种破坏组织的酶。可用于破坏胎盘的酶包括木瓜蛋白酶、脱氧核糖核酸酶、丝氨酸蛋白酶例如胰蛋白酶、糜蛋白酶、胶原蛋白酶、分散酶或弹性蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以被血清中的α2微球蛋白抑制，因此用于消化的培养基通常是无血清的。EDTA和DNase常用于酶消化程序以增加细胞回收的效率。消化物(digestate)优选进行稀释以避免捕获粘稠消化物里面的细胞。

可以使用组织消化酶的任何组合。使用胰蛋白酶进行消化的典型浓度包括0.1%至约2%胰蛋白酶，例如约0.25%胰蛋白酶。蛋白酶可以组合使用，即在同一消化反应中有两种或更多种蛋白酶，或者可以依次使用以便释放胎盘细胞，例如胎盘干细胞和胎盘多能细胞。例如，在一个实施方案中，胎盘或其部分首先用适量的胶原蛋白酶I(约1至约2mg/ml)消化例如30分钟，然后用浓度为约0.25%的胰蛋白酶于37°C消化例如10分钟。在使用其它酶后，优选连续使用丝氨酸蛋白酶。

在另一个实施方案中，通过加入螯合剂来进一步破坏组织，例如，将乙二醇双(2-氨基乙基醚)-N,N,N'N'-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)加入到包含干细胞的干细胞收集组合物中，或者加入到其中在分离干细胞之前用该干细胞收集组合物破坏和/或消化组织的溶液中。

消化后，洗涤消化物，例如用培养基洗涤三次，把洗涤后的细胞接种到培养瓶。细胞通过差别粘附进行分离，并表征例如活力、细胞表面标记、分化等。

人们将会认识到，若完整胎盘或胎盘部分既包含胎儿细胞又包含母体细胞(例如，其中胎盘部分包含绒毛膜或绒毛叶)，那么所分离的胎盘细胞可包含从胎儿和母体二者来源获得的混合胎盘细胞。若胎盘部分没有包含或包含可忽略的母体细胞(例如羊膜)，从中分离的胎盘细胞将几乎只包括胎儿胎盘细胞(即具有胎儿基因型的胎盘细胞)。

胎盘细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的胎盘细胞可以通过下述方法从经破坏的胎盘组织中分离出来：进行差别胰蛋白酶消化(参见下文第4.3.5节)，然后放在一个或多个新的培养容器中的新鲜增殖培养基里面培养，然后任选进行第二个差别胰蛋白酶消化步骤。

4.3.4胎盘灌注

胎盘细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的胎盘细胞也可通过灌注哺乳动物胎盘来获得。灌注哺乳动物胎盘以获得胎盘细胞的方法公开于例如Hariri的美国专利第7,045,148和7,255,729号、美国专利申请公布第2007/0275362和2007/0190042号，所述专利和专利申请中的每一个都通过引用其全部结合到本文中。

胎盘细胞可以通过灌注来收集，例如通过胎盘血管系统，使用例如细胞收集组合物作为灌注溶液。在一个实施方案中，通过将灌注溶液灌注到脐动脉和脐静脉中的任何一个或它们两者来进行哺乳动物胎盘灌注。使用例如重力流入胎盘中，可以完成灌注溶液通过胎盘的流入。优选地，使用泵，例如蠕动泵，迫使灌注溶液通过胎盘。脐静脉可例如用套管(例如

或塑料套管)进行插管，即连上无菌的连接器，例如无菌的管子。无菌的连接器与灌注歧管相连。

在准备灌注时，胎盘优选以脐动脉和脐静脉位于胎盘的最高点的方式定向(例如悬浮)。可以通过使灌注液通过胎盘血管系统和周围组织来对胎盘进行灌注。也可以使灌注液流进脐静脉并从脐动脉收集或使灌注液流进脐静脉并从脐动脉收集，来对胎盘进行灌注。

在一个实施方案中，例如，将脐动脉和脐静脉同时连接例如移液器，移液器通过柔性连接器与灌注溶液贮库相连。使灌注溶液通过脐静脉和脐动脉。使灌注溶液通过血管壁流进胎盘的周围组织来流出和/或灌入，然后从在妊娠期间与母亲子宫相连的胎盘表面收集在合适的开口容器中。灌注溶液可通过脐带开口处引入并让其流动或在与母亲子宫壁交界的胎盘壁中的开口处渗滤出来。通过此方法收集的胎盘细胞，其可称为“盘(pan)”方法，典型地是胎儿细胞和母体细胞的混合物。

在另一个实施方案中，所述灌注溶液通过了脐静脉灌入并从脐动脉收集起来，或者通过脐动脉灌入并从脐静脉收集起来。通过此方法（其可称为“闭路(closed circuit)”方法）收集的胎盘细胞典型地几乎完全是胎儿的。

人们将会认识到，使用“盘”方法的灌注，即其灌注流出液(perfusate)是在其从胎盘的母体一侧流出后收集的，导致产生胎儿细胞和母体细胞的混合物。结果，通过此方法收集的细胞可包含混合的胎盘细胞群体，例如胎儿和母体二者来源的胎盘干细胞或胎盘多能细胞。相比之下，在闭路方法中仅通过胎盘血管系统的灌注，若灌注液通过一个或两个胎盘血管灌入并只通过剩下的血管收集，导致收集到几乎完全是胎儿来源的胎盘细胞群体。

在一个实施方案中，所述闭路灌注方法可以如下进行。在分娩后约48小时以内获得产后胎盘。钳住脐带并在钳子上方切断。脐带可以弃去或可处理后回收例如脐带干细胞，和/或加工脐带膜以生产生物材料。羊膜可以在灌注期间留下来或可与绒毛膜分离开，例如用手指进行钝法解剖。如果在灌注之前将羊膜与绒毛膜分离开，那可以将其弃去或可处理后例如获得通过酶促消化的干细胞或生产羊膜生物材料，例如美国申请公布第2004/0048796号中描述的生物材料，所述申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中。例如在用无菌纱布清洁所有的可见血块和残留血液的胎盘之后，暴露出脐带血管，例如通过部分切割脐带膜以暴露脐带的横截面。通过各血管的切割末端，例如用闭合的鳄鱼钳进行确认和开口。然后将该连接器，例如与灌注装置或蠕动泵相连的塑料管插入胎盘动脉的每一个中。泵可以是适合于此目的的任何泵，例如蠕动泵。然后可以将连接无菌收集贮库(例如血袋，例如250mL收集袋)的塑料管插入胎盘静脉。或者，可以将连接该泵的管子插入胎盘静脉，而将连接收集贮库的管子插入胎盘动脉的一条或两条中。然后用一定体积的灌注溶液(例如约750ml的灌注溶液)灌注胎盘。然后，例如通过离心收集灌注流出液中的细胞。在某些实施方案中，胎盘用灌注溶液(例如100-300mL灌注溶液)进行灌注以去掉残留血液，然后灌注以收集胎盘细胞，例如胎盘干细胞和/或胎盘多能细胞。在另一个实施方案中，胎盘不用灌注溶液进行灌注去掉残留血液，然后灌注以收集胎盘细胞。

在一个实施方案中，在灌注期间将近端脐带钳住，且更优选在脐带插入胎盘的盘里面4-5cm(厘米)以内钳住。

在放血过程期间首先从哺乳动物胎盘中收集的灌注液一般用脐带血和/或胎盘血的残留红血细胞显色。随着灌注进行，灌注液变成更接近无色，残留脐带血细胞被从胎盘中洗出来。一般来说，30~100ml(毫升)的灌注液对于初步放出胎盘血已足够，但根据所观察的结果，可以采用更多或更少的灌注液。

用于分离胎盘细胞的灌注液体积可以变化，取决于待收集的细胞数量、胎盘的大小、从单个胎盘制备的收集物数量，等等。在各种不同的实施方案中，灌注液的体积可以是50mL~5000mL、50mL~4000mL、50mL~3000mL、100mL~2000mL、250mL~2000mL、500mL~2000mL或750mL~2000mL。典型地，在放血后，胎盘用700-800mL的灌注液进行灌注。

在几小时或几天的时程内，胎盘可进行多次灌注。在胎盘要进行多次灌注的情况下，胎盘可放在容器或其它合适管中在无菌条件下维持或培养，并用细胞收集组合物或标准灌注溶液(例如正常的盐水溶液，例如磷缓冲盐溶液(“PBS”))加或不加抗凝剂(例如肝素、华法林钠、香豆素、双羟基香豆素)和/或加或不加抗微生物剂(例如β-巯基乙醇(0.1mM)；抗生素，例如链霉素(例如在40-100μg/ml)、青霉素(例如在40U/ml)、两性霉素B(例如在0.5μg/ml)进行灌注。在一个实施方案中，将分离的胎盘维持或培养一段时间而不收集灌注流出液，使得在灌注和灌注流出液收集之前，胎盘维持或培养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，或2天或3天或更多天。经灌注的胎盘可维持一个或多个额外时间，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24小时或更长时间，再用例如700-800mL灌注液进行第二次灌注。胎盘可以进行1、2、3、4、5次或更多次灌注，例如每1、2、3、4、5或6小时一次。在一个优选的实施方案中，重复进行胎盘的灌注和灌注溶液(例如细胞收集组合物)的收集直到所回收的有核细胞数量下降到100个细胞/ml以下。在不同时间点的灌注流出液可以单独地进一步加工以回收时间依赖性细胞群体，例如干细胞。可以将来自不同时间点的灌注流出液进行合并。在一个优选的实施方案中，胎盘细胞是在娩出后在约8小时和约18小时之间一次或多次收集的。

与不用所述溶液灌注或不另外处理以获得胎盘细胞(例如通过组织破坏，例如酶促消化)的哺乳动物胎盘获得的胎盘细胞数量相比，灌注优选导致收集到明显更多的胎盘细胞。在本文中，“明显更多的”是指至少多10%。与例如从胎盘或其部分在其中培养的培养基中分离的胎盘细胞数量相比，灌注得到明显更多的胎盘细胞。

通过用包含一种或多种蛋白酶或其它破坏组织的酶的溶液进行灌注，可从胎盘中分离出胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，胎盘或其部分(例如羊膜的膜、羊膜和绒毛膜、胎盘小叶或子叶、脐带或上述任何部分的组合)置于25-37°C，并与一种或多种破坏组织的酶一起在200mL的培养基中孵育30分钟。从灌注流出液中收集细胞，置于4°C，并用冷的包含5mM EDTA、2mM二硫苏糖醇和2mMβ-巯基乙醇的抑制剂混合物洗涤。在几分钟后，胎盘细胞用冷的(例如4°C)干细胞收集组合物洗涤。

4.3.5胎盘细胞的分离、分选和表征

分离的胎盘细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的细胞，无论是通过灌注还是物理破坏(例如通过酶促消化)获得的，最初都可以通过Ficoll梯度离心从其它细胞中纯化出来(即分离出来)。这样的离心可以遵循离心速度等的任何标准方案。在一个实施方案中，例如，通过在室温下，以5000x g离心15分钟，从灌注流出液中回收自胎盘收集的细胞，离心可使细胞与例如污染碎片和血小板分离开。在另一个实施方案中，胎盘灌注流出液被浓缩至约200ml，在Ficoll上轻轻分层，并在22°C以约1100x g离心20分钟，然后收集低密度界面层用于进一步加工处理。

可将细胞沉淀物重新悬浮于新鲜的干细胞收集组合物或适合于细胞维持(例如干细胞维持)的培养基(例如含有2U/ml肝素和2mMEDTA的IMDM无血清培养基(GibcoBRL,NY))中。可以利用Lymphoprep(Nycomed Pharma,Oslo,Norway)，按照生产商推荐的程序，分离出总的单核细胞级分。

使用例如0.05%胰蛋白酶与0.2%EDTA(Sigma,St.Louis MO)的溶液，通过差别胰蛋白酶消化，可以例如进一步或初步分离通过灌注或消化获得的胎盘细胞。差别胰蛋白酶消化是可行的，因为分离的胎盘细胞，其是组织培养塑料器具贴壁的，通常在约五分钟以内从塑料表面脱落，而其它的贴壁群体通常需要超过20-30分钟孵育。脱落的胎盘细胞可以在胰蛋白酶消化和胰蛋白酶中和(使用例如胰蛋白酶中和溶液(TNS,Cambrex))后收获。在贴壁细胞分离的一个实施方案中，将例如约5-10x10⁶个细胞的等分试样置于几个T-75瓶、优选纤连蛋白包被的T75瓶的每一个中。在这样一个实施方案中，该细胞可以用市售的间充质干细胞生长培养基(MSCGM)(Cambrex)进行培养，并置于组织培养箱(37°C,5%CO₂)中。10-15天后，用PBS洗涤来除去瓶中的非贴壁细胞。然后将PBS更换为MSCGM。优选每天检查各瓶中各种贴壁细胞类型的存在情况和特别是成纤维细胞样细胞簇的鉴定和扩充情况。

从哺乳动物胎盘中收集的细胞数量和类型可以用下述方法进行监测：例如，通过利用标准细胞检测技术，例如流式细胞术、细胞分选术、免疫细胞化学(例如用组织特异性或细胞标记特异性抗体染色)荧光激活细胞分选术(FACS)、磁活化的细胞分选术(MACS)来测量形态和细胞表面标记的变化，通过使用光学或共聚焦显微镜术来检查细胞的形态，和/或通过使用本领域众所周知的技术(例如PCR和基因表达概况分析)来测量基因表达的变化。这些技术也可用于鉴定对一种或多种特定标记呈阳性的细胞。例如，使用抗CD34的抗体，人们可以使用上述技术来确定细胞是否包含可检测量的CD34；如果有的话，则这种细胞就是CD34⁺。同样，如果细胞产生足够的OCT-4 RNA可被RT-PCR检测，或者明显比成体细胞更多的OCT-4 RNA，则这种细胞就是OCT-4⁺。抗细胞表面标记(例如CD标记，例如CD34)的抗体和干细胞特异性基因(例如OCT-4)的序列是本领域众所周知的。

胎盘细胞、特别是已通过Ficoll分离、差别粘附或二者的组合分离的细胞，可以使用荧光激活细胞分选仪(FACS)进行分选。荧光激活细胞分选术(FACS)是基于颗粒的荧光特性来分离颗粒(包括细胞)的众所周知的方法(Kamarch,1987,Methods Enzymol,151:150-165)。个体颗粒中荧光部分的激光激发导致产生小电荷，允许来自混合物的阳性和阴性颗粒的电磁分离。在一个实施方案中，细胞表面标记特异性抗体或配体用不同的荧光标记进行标记。细胞通过细胞分选仪进行处理，允许细胞基于其结合所用抗体的能力进行分离。经FACS分选的颗粒可以直接沉积在96孔板或384孔板的各孔中以促进分离和克隆。

在一个分选方案中，来自胎盘的细胞，例如PDACs，可基于标记CD34、CD38、CD44、CD45、CD73、CD105、OCT-4和/或HLA-G中的一种或多种的表达进行分选。这可以结合基于此类细胞在培养物中的粘附特性选择它们的程序来完成。例如，组织培养塑料器具粘附选择可以在基于标记表达进行分选之前或之后完成。在一个实施方案中，例如，细胞首先基于其表达CD34进行分选；CD34^–细胞留下，而另外还是CD200⁺和HLA-G^–的CD34^–细胞与所有的其它CD34^–细胞分离开。在另一个实施方案中，来自胎盘的细胞基于其表达标记CD200和/或HLA-G进行分选；例如分离出展示CD200和缺乏HLA-G的细胞供进一步使用。表达例如CD200和/或缺乏例如HLA-G的细胞可以在一个具体的实施方案中基于其表达CD73和/或CD105、或由抗体SH2、SH3或SH4识别的表位、或缺乏表达CD34、CD38或CD45进行进一步分选。例如，在另一个实施方案中，胎盘细胞通过表达或缺乏CD200、HLA-G、CD73、CD105、CD34、CD38和CD45进行分选，并从其它胎盘细胞中分离出是CD200⁺、HLA-G^–、CD73⁺、CD105⁺、CD34^–、CD38^–和CD45^–的胎盘细胞供进一步使用。

在分选的胎盘细胞的任何上述实施方案的多个具体实施方案中，在分选之后剩下的细胞群体中细胞的至少50%、60%、70%、80%、90%或95%是所述分离的胎盘细胞。胎盘细胞可以通过在以上第4.2.2节中描述的任何标记的一种或多种进行分选。

在一个具体的实施方案中，例如，(1)附着在上组织培养塑料器具上和(2)是CD10⁺、CD34^-和CD105⁺的胎盘细胞从其它胎盘细胞中分选(即分离)出来。在另一个具体的实施方案中，(1)附着在上组织培养塑料器具和(2)是CD10⁺、CD34^-、CD105⁺和CD200⁺的其它胎盘细胞从其它胎盘细胞中分选(即分离)出来。在另一个具体的实施方案中，(1)附着在上组织培养塑料器具和(2)是CD10⁺、CD34^-、CD45^-、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺的胎盘细胞从其它胎盘细胞中分选(即分离)出来。

关于胎盘细胞的基于核苷酸序列的检测，本文所列标记的序列是很容易在公共数据库(例如GenBank或EMBL)中获取的。

关于胎盘细胞(例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞)的抗体介导的检测和分选，可以使用对特定标记有特异性的任何抗体，并结合适合于细胞检测和分选(例如荧光激活细胞分选术)的任何荧光团或其它标记。抗特异性标记的抗体/荧光团组合包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)缀合的单克隆抗体，其针对HLA-G的(可得自Serotec,Raleigh,North Carolina)、CD10(可得自BD免疫cytometry Systems,San Jose,California)、CD44(可得自BD Biosciences Pharmingen,San Jose,California)和CD105(可得自R&D Systems Inc.,Minneapolis,Minnesota)；藻红蛋白(PE)缀合的单克隆抗体，其针对CD44、CD200、CD117和CD13(BD Biosciences Pharmingen)；藻红蛋白-Cy7(PE Cy7)缀合的单克隆抗体，其针对CD33和CD10(BD BiosciencesPharmingen)；别藻蓝蛋白(APC)缀合的链霉亲和素和单克隆抗体，其针对CD38(BD Biosciences Pharmingen)；和生物素化CD90(BDBiosciences Pharmingen)。可使用的其它抗体包括但不限于CD133-APC(Miltenyi)、KDR-生物素(CD309,Abcam)、细胞角蛋白K-Fitc(Sigma或Dako)、HLA ABC-Fitc(BD)、HLA DR,DQ,DP-PE(BD)、β-2-微球蛋白-PE(BD)、CD80-PE(BD)和CD86-APC(BD)。可使用的其它抗体/标记组合包括但不限于CD45-PerCP(peridin叶绿素蛋白)；CD44-PE；CD19-PE；CD10-F(荧光素)；HLA-G-F和7-氨基-放线菌素-D(7-AAD)；HLA-ABC-F；等等。该一览表并不是穷举的，来自其它供应商的其它抗体也是市售的。

使用例如针对CD117或CD133的藻红蛋白-Cy5(PE Cy5)缀合的链霉亲和素和生物素缀合的单克隆抗体，对本文提供的分离的胎盘细胞可以测定其CD117或CD133；然而，使用该系统，所述细胞分别对CD117或CD133可能似乎呈阳性，这是因为相对高的背景。

所述分离的胎盘细胞可以用抗单个标记的抗体进行标记并进行检测和/分选。胎盘细胞也可同时用抗不同标记的多个抗体进行标记。

在另一个实施方案中，可用磁珠分离细胞。使用磁激活细胞分选(MACS)技术，即一种基于颗粒结合磁珠(直径0.5-100μm)的能力分离颗粒的方法，对细胞进行分选。可以对磁性微球进行各式各样的有用的修饰，包括以共价键添加特异性识别特定细胞表面分子或半抗原的抗体。然后将磁珠与细胞混合以允许结合。然后使细胞通过磁场以分离出具有特异性细胞表面标记的细胞。在一个实施方案中，这些细胞可以分离后与偶联有抗另外细胞表面标记的磁珠重新混合。然后使细胞再次通过磁场，从而分离出结合有两种抗体的细胞。然后，这样的细胞稀释到独立的培养皿(例如微量滴定培养皿)中供克隆分离用。

分离的胎盘细胞也可以基于细胞形态和生长特征进行表征和/或分选。例如，分离的胎盘细胞可以表征为在培养物中具有例如成纤维细胞样外观和/或基于该外观进行选择。分离的胎盘细胞也可以表征为具有形成胚胎样小体的能力和/或基于该能力进行选择。在一个实施方案中，例如，将形状为成纤维细胞样、表达CD73和CD105并在培养物中产生一个或多个胚胎样小体的胎盘细胞从其它胎盘细胞中分离出来。在另一个实施方案中，将在培养物中产生一个或多个胚胎样小体的OCT-4⁺胎盘细胞从其它胎盘细胞中分离出来。

在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞可通过集落形成单位测定来鉴定和表征。集落形成单位测定是本领域公知的，例如MESENCULT^TM培养基(Stem Cell Technologies,Inc.,VancouverBritish Columbia)。

使用本领域已知的标准技术，例如锥虫蓝排除法测定法、二乙酸荧光素摄取测定法、碘化丙锭摄取测定法(以评价活力)和胸苷摄取测定法、MTT(溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓)细胞增殖测定法(以评价增殖)，可评价分离的胎盘细胞的活力、增殖潜力和寿命。寿命可以通过本领域众所周知的方法来确定，例如通过测定在延长的培养物中的最大群体倍增数。

使用本领域已知的其它技术，例如所需细胞的选择性生长(正选择)、不需要细胞的选择性破坏(负选择)；基于混合群体中差别细胞凝集能力例如用大豆凝集素进行分离；冻融法；过滤；常规和区带离心；离心淘析法(逆流离心)；单位重力分离；逆流分布法；电泳；等等，分离的胎盘细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的分离的胎盘细胞，也可以从其它胎盘细胞中分离出来。

4.4分离的胎盘细胞的培养

4.4.1培养基

分离的胎盘细胞、或分离的胎盘细胞群体、或从胎盘细胞长出的细胞或胎盘组织，都可以用于启动或接种细胞培养物。一般将细胞转移到或不用或用胞外基质或配体例如层粘连蛋白、胶原蛋白(例如天然的或变性的)、明胶、纤连蛋白、鸟氨酸、玻连蛋白和胞外膜蛋白(例如

(BD Discovery Labware,Bedford,Mass.))包被的无菌组织培养容器中。

分离的胎盘细胞可以在任何培养基中和在任何条件下进行培养，这些都是被本领域认为对于培养细胞(例如干细胞)是可接受的。优选地，培养基包含血清。分离的胎盘细胞可以在诸如以下的培养基中进行培养：DMEM-LG(Dulbecco氏改良的必需培养基，低葡萄糖)/MCDB 201(鸡成纤维细胞基础培养基)，含有ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒)、LA+BSA(亚油酸-牛血清白蛋白)、地塞米松L-抗坏血酸、PDGF、EGF、IGF-1和青霉素/链霉素；DMEM-HG(高葡萄糖)，包含10%胎牛血清(FBS)；DMEM-HG，包含15%FBS；IMDM(Iscove氏改良的Dulbecco氏培养基)，包含10%FBS、10%马血清和氢化可的松；M199，包含1%~20%FBS、EGF和肝素；α-MEM(最小必需培养基)，包含10%FBS、GLUTAMAX^TM和庆大霉素；DMEM，包含10%FBS、GLUTAMAX^TM和庆大霉素，等等。

可用于培养胎盘细胞的其它培养基包括DMEM(高或低葡萄糖)、Eagle氏基础培养基、Ham氏F10培养基(F10)、Ham氏F-12培养基(F12)、Iscove氏改良的Dulbecco氏培养基、间充质干细胞生长培养基(MSCGM)、Liebovitz氏L-15培养基、MCDB、DMEM/F12、RPMI 1640、高级DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201(Sigma)和CELL-GRO FREE。

培养基中可以补充一种或多种组分，包括例如血清(例如胎牛血清(FBS)，优选约2-15%(v/v)；马的(马)血清(ES)；人血清(HS))；β-巯基乙醇(BME)，优选约0.001%(v/v)；一种或多种生长因子，例如血小板衍生生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、白血病抑制因子(LIF)、血管内皮生长因子(VEGF)和红细胞生成素(EPO)；氨基酸，包括L-缬氨酸；和一种或多种抗生素和/或抗真菌剂以控制微生物的污染，例如青霉素G、硫酸链霉素、两性霉素B、庆大霉素和制霉菌素，或者单独的或它们的组合。

分离的胎盘细胞可以在标准组织培养条件下，例如在组织培养皿或多孔板中进行培养。分离的胎盘细胞也可以使用悬滴法进行培养。在该方法中，将分离的胎盘细胞以约1x10⁴细胞/mL悬浮于约5mL培养基中，再将一滴或多滴培养基置于组织培养容器(例如100mL培养皿)的盖子里面，悬滴可以是来自例如多道移液器的例如单悬滴或多悬滴。盖子小心地翻过来并置于培养皿底部的顶部，该培养皿装有一定体积的液体，例如足以维持培养皿气氛中的含水量的无菌PBS，并培养干细胞。

在一个实施方案中，分离的胎盘细胞是在其作用是维持分离的胎盘细胞中的未分化表型的化合物存在下进行培养。在一个具体的实施方案中，所述化合物是取代的3,4-二氢嘧啶并[4,5-d]嘧啶。在另一个具体的实施方案中，所述化合物是具有下列化学结构的化合物：

所述化合物可以与分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体在介于约1μM至约10μM之间的浓度下进行接触。

4.4.2胎盘细胞的扩充和增殖

一旦分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体(例如从至少50%的胎盘细胞中分离的胎盘细胞或胎盘细胞群体，其中干细胞或干细胞群体正常地在体内与其缔合)，该细胞或细胞群体就可以在体外增殖和扩充。例如，分离的胎盘细胞群体可以在组织培养容器例如培养皿、培养瓶、多孔板等中培养足够的时间使细胞增殖到70-90%汇合，也就是说，直到细胞及其子代占据组织培养容器的培养表面积的70-90%。

可以将分离的胎盘细胞按允许细胞生长的密度接种到培养容器中。例如，细胞可以按低密度(例如约1,000至约5,000细胞/cm²)到高密度(例如约50,000以上细胞/cm²)进行接种。在一个优选的实施方案中，细胞在空气中存在约0至约5%(体积)CO₂的情况下进行培养。在有些优选的实施方案中，细胞在空气中含约2%至约25%O₂、优选在空气中含约5%至约20%O₂的情况下进行培养。细胞优选在约25°C至约40°C、优选37°C下进行培养。细胞优选在培养箱中进行培养。培养基可以是静态或搅拌的，例如使用生物反应器。胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，优选在低的氧化应激(例如其中添加了谷胱甘肽、抗坏血酸、过氧化氢酶、生育酚、N-乙酰半胱氨酸等)下生长。

一旦获得了小于100%、例如70%~90%的汇合，细胞就可以进行传代。例如，采用本领域众所周知的技术，用酶、例如用胰蛋白酶处理细胞以将它们与组织培养表面分离开。在用移液器吸出细胞并计数后，取约约10,000-100,000细胞/cm²传代到一个装有新鲜培养基的新培养容器中。典型地，该新鲜培养基是从中取出分离的胎盘细胞的同类型培养基。分离的胎盘细胞可以传代约、至少或不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20次或更多次。

4.4.3分离的胎盘细胞群体

本文还提供的是分离的胎盘细胞、例如在以上第4.2.2节中描述的分离的胎盘细胞的群体，其可用于本文所述的方法和组合物中。分离的胎盘细胞群体可以直接从一个或多个胎盘中分离出来；也就是说，细胞群体可以是包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞的群体，其中分离的胎盘细胞得自灌注流出液或含在其里面，或者得自经破坏的胎盘组织(例如胎盘组织消化物(即，通过酶促消化胎盘或其部分获得的细胞集合体))或含在其里面。本文所述的分离的胎盘细胞也可以培养和扩充至产生分离的胎盘细胞群体。包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞的群体也可以培养和扩充至产生胎盘细胞群体。

可用于本文提供的治疗方法中的胎盘细胞群体包含分离的胎盘细胞，例如在本文第4.4.2节中描述的分离的胎盘细胞。在各种不同的实施方案中，胎盘细胞群体中细胞的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%是分离的胎盘细胞。也就是说，分离的胎盘细胞群体可包含例如多达1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%细胞不是分离的胎盘细胞。

可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞群体可以通过例如选择分离的胎盘细胞来产生，无论是来源于酶促消化还是灌注的，并表达特定标记和/或特定培养特征或形态学特征。在一个实施方案中，例如，本文提供的是产生细胞群体的方法，即通过选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD200和缺乏HLA-G的表达；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达CD200和缺乏HLA-G的表达；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD73、CD105和CD200；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：鉴定表达CD73、CD105和CD200的胎盘细胞，和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD200和OCT-4；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择表达CD200和OCT-4的胎盘细胞；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，(b)表达CD73和CD105，和(c)当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达CD73和CD105，并且当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD73和CD105，和缺乏HLA-G的表达；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达CD73和CD105和缺乏HLA-G的表达，和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，产生细胞群体的方法包括选择这样的胎盘细胞，其(a)贴壁于基底，(b)表达OCT-4，和(c)当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体，；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达OCT-4，并且当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。

在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD10和CD105但不表达CD34；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达CD10和CD105，但不表达CD34；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD10、CD105和CD200，但不表达CD34；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达CD10、CD105和CD200，但不表达CD34；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个具体的实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其(a)贴壁于基底，和(b)表达CD10、CD90、CD105和CD200，但不表达CD34和CD45；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。在另一个具体的实施方案中，细胞群体通过以下方法产生：选择这样的胎盘细胞：其表达CD10、CD90、CD105和CD200，但不表达CD34和CD45；和从其它细胞中分离出所述细胞以形成细胞群体。

选择的细胞群体，其包含胎盘细胞、具有在以上第4.2.2节中描述的任何标记组合，可以按类似的方式分离或获得，

在任何上述实施方案中，分离的细胞群体的选择可另外还包括选择表达ABC-p(一种胎盘特异性ABC转运蛋白；参见例如，Allikmets等人,Cancer Res.58(23):5337-9(1998))的胎盘细胞。该方法还可包括选择表现出对例如间充质干细胞有特异性的至少一个特征的细胞，例如CD44的表达、CD90的表达或上述标记组合的表达。

在上述实施方案中，基底可以是任何表面，在其上可以完成细胞(例如分离的胎盘细胞)的培养和/或选择。典型地，基底是塑料的，例如塑料的组织培养皿或多孔塑料板。组织培养塑料器具可以用生物分子(例如层粘连蛋白或纤连蛋白)包被。

通过细胞选择领域已知的任何手段，可以根据胎盘细胞群体来选择细胞，例如分离的胎盘细胞。例如，在流式细胞术或FACS中，使用抗一种或多种细胞表面标记的一种抗体或多种抗体，可对细胞进行选择。可采用抗体并结合磁珠来完成选择。对某些干细胞相关标记有特异性的抗体是本领域已知的。例如，抗OCT-4(Abcam,Cambridge,MA)、CD200(Abcam)、HLA-G(Abcam)、CD73(BD BiosciencesPharmingen,San Diego,CA)、CD105(Abcam；BioDesign International,Saco,ME)等的抗体。抗其它标记的抗体也是市售的，例如，CD34、CD38和CD45可得自例如StemCell Technologies公司或BioDesignInternational公司。

分离的胎盘细胞群体可包含不是干细胞的胎盘细胞或不是胎盘细胞的细胞。

本文提供的分离的胎盘细胞群体可以与非干细胞或非胎盘细胞的一个或多个群体组合。例如，分离的胎盘细胞群体可以与血液(例如胎盘血或脐带血)、血液衍生干细胞(例如衍生自胎盘血或脐带血的干细胞)、脐带干细胞、血液衍生有核细胞的群体、骨髓衍生间充质细胞、骨衍生干细胞群体、粗制骨髓、成体(体)干细胞、组织里面所含的干细胞群体、培养干细胞、完全分化细胞(例如软骨细胞、成纤维细胞、羊膜细胞、成骨细胞、肌肉细胞、心脏细胞等)的群体等组合。在一个具体的实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体包含分离的胎盘细胞和分离的脐带细胞。分离的胎盘细胞群体中的细胞可以与另一种类型的多个细胞按以下比率进行组合：约100,000,000:1、50,000,000:1、20,000,000:1、10,000,000:1、5,000,000:1、2,000,000:1、1,000,000:1、500,000:1、200,000:1、100,000:1、50,000:1、20,000:1、10,000:1、5,000:1、2,000:1、1,000:1、500:1、200:1、100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1；1:2；1:5；1:10；1:100；1:200；1:500；1:1,000；1:2,000；1:5,000；1:10,000；1:20,000；1:50,000；1:100,000；1:500,000；1:1,000,000；1:2,000,000；1:5,000,000；1:10,000,000；1:20,000,000；1:50,000,000；或约1:100,000,000；比较各群体中总有核细胞的数量。分离的胎盘细胞群体中的细胞也可以与多个细胞类型的多种细胞进行组合。

在一个实施方案中，分离的胎盘细胞群体与多个造血干细胞组合。这样的造血干细胞可以是例如含在未加工的胎盘、脐带血或外周血中；在来自胎盘血、脐带血或外周血的总的有核细胞中；在来自胎盘血、脐带血或外周血的分离的CD34⁺细胞群体中；在未加工的骨髓中；在来自骨髓的总的有核细胞中；在来自骨髓的分离的CD34⁺细胞群体中；等等。

在其它的实施方案中，本文所述的胎盘细胞(例如在以上第4.2.2节中描述的PDACs)的群体与生骨的胎盘贴壁细胞(OPACs)(例如在于2009年8月24日提交的专利申请第12/546,556号中描述的OPACs，该申请的题目是“Methods and Compositions for Treatment ofBone Defects With Placental Stem Cells(用胎盘干细胞治疗骨缺损的方法和组合物)”，该申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中)组合。

4.5胎盘细胞库的产生

来自产后胎盘的分离的细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的分离的胎盘细胞，可以按多种不同的方式培养以产生批次集合(a set oflots)，例如，其中一个批次是分离的胎盘细胞的可个性化给予的剂量集合。这样的批次可以例如从来自胎盘灌注流出液的细胞或来自经酶消化的胎盘组织的细胞中获得。从多个胎盘中获得的胎盘细胞的多批次集合(Sets of lots)可以排列成分离的胎盘细胞库，用于例如长期储存。一般而言，组织培养塑料器具贴壁的胎盘细胞得自胎盘材料的初始培养物以形成种子培养物，该种子培养物在受控制条件下扩充以形成来自大致同等数目的倍增物的细胞群体。批次优选衍生自单个胎盘的组织，但也可以衍生自多个胎盘的组织。

在一个实施方案中，胎盘细胞批次如下获得。首先例如通过捣碎、用合适的酶(例如胰蛋白酶或胶原蛋白酶消化)，将胎盘组织破坏(参见以上第4.3.3节)。胎盘组织优选包含例如来自单个胎盘的整个羊膜、整个绒毛膜或它们二者，但也可以仅包含或羊膜或绒毛膜的一部分。将经消化的组织培养例如约1-3周、优选约2周。在去除非贴壁细胞后，例如通过胰蛋白酶消化将所形成的高-密度集落收集起来。这些细胞收集后重新悬浮于常规体积的培养基中，然后用于接种扩充培养物。扩充培养物可以是任何排列的独立细胞培养器，例如NUNC^TM的Cell Factory。把细胞分成任何稀释度以用例如1x10³、2x10³、3x10³、4x10³、5x10³、6x10³、7x10³、8x10³、9x10³、1x10⁴、1x10⁴、2x10⁴、3x10⁴、4x10⁴、5x10⁴、6x10⁴、7x10⁴、8x10⁴、9x10⁴或10x10⁴细胞/cm²接种扩充培养物。优选地，用约1x10³至约1x10⁴细胞/cm²接种各扩充培养物。扩充培养物的数量可更多或更少，在数量上这取决于从中获得细胞的特定胎盘。

让扩充培养物生长直到培养物中的细胞密度达到某一数值，例如约1x10⁵细胞/cm²。细胞在该点时可以或者收集后冷藏保存，或者如上所述传代至新鲜扩充培养物中。在使用前，细胞可以传代例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。在扩充培养期间，优选维持群体倍增累积数的记录。来自培养物的细胞可以扩充2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40个倍增或多达60个倍增。优选地，然而，在将细胞群体分成各个剂量之前的群体倍增数是约15至约30。细胞可以通过扩充过程进行连续培养，或者可以在扩充期间在一个或多个点上冷冻。

可以将待用于各个剂量的细胞冷冻(例如冷藏保存)供后来使用。各个剂量可包含例如每毫升约1x10⁶细胞至约50x10⁶细胞，并且可包含总细胞介于约10⁶和约10¹⁰之间。

在一个实施方案中，因此，可以通过包括以下步骤的方法制备胎盘细胞库：扩充来自人的产后胎盘的原代培养胎盘细胞，用于第一个复数群体倍增；将所述胎盘细胞冷藏保存以形成母细胞库(Master CellBank)；扩充来自母细胞库的多个胎盘细胞，用于第二个复数群体倍增；将所述胎盘细胞冷藏保存以形成工作细胞库(Working Cell Bank)；扩充来自工作细胞库的多个胎盘细胞，用于第三个复数群体倍增；和将所述胎盘细胞按各个剂量冷藏保存，其中所述各个剂量共同地构成胎盘细胞库。任选地，来自所述第三个复数群体倍增的多个胎盘细胞可以扩充，用于第四个复数群体倍增并按各个剂量冷藏保存，其中所述各个剂量共同地构成胎盘细胞库。

在另一个具体的实施方案中，所述原代培养胎盘细胞包含来自胎盘灌注流出液的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述原代培养胎盘细胞包含来自消化的胎盘组织的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述原代培养胎盘细胞包含来自胎盘灌注流出液和来自消化的胎盘组织的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞原代培养物中所有的所述胎盘细胞都来自同一个胎盘。在另一个具体的实施方案中，所述方法还包括从所述工作细胞库中选择来自所述胎盘细胞的所述多个CD200⁺或HLA-G^-胎盘细胞以形成各个剂量的步骤。在另一个具体的实施方案中，所述各个剂量包含约10⁴至约10⁵个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述各个剂量包含约10⁵至约10⁶个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述各个剂量包含约10⁶至约10⁷个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述各个剂量包含约10⁷至约10⁸个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述各个剂量包含约10⁸至约10⁹个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述各个剂量包含约10⁹至约10¹⁰个胎盘细胞。

在一个优选的实施方案中，对从中获取胎盘的供体(例如母亲)检验了至少一种病原体。如果母亲对被测病原体试验呈阳性，那么来自该胎盘的全部批次都废弃。在任何时间，在胎盘细胞各批次的产生期间，例如在扩充培养期间，都可以进行这样的测试。检验有存在的病原体可包括但不限于甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒(I型和II型)、巨细胞病毒、疱疹病毒等。

4.6胎盘细胞的保存

分离的胎盘细胞，例如在以上第4.3.2节中描述的分离的胎盘细胞可以进行保存，也就是说，置于允许长期储存的条件下，或置于抑制因例如凋亡或坏死所致细胞死亡的条件下。

胎盘细胞可以使用例如包含细胞凋亡抑制剂、坏死抑制剂和/或携氧的全氟化碳的组合物进行保存，如在相关的美国申请公布第2007/0190042号所描述的，所述专利申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中。在一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的保存细胞群体的方法，包括使所述细胞群体接触包含细胞凋亡抑制剂和携氧的全氟化碳的细胞收集组合物，其中与细胞群体不接触细胞凋亡抑制剂相比，所述细胞凋亡抑制剂是以足以减少或防止细胞群体中的细胞凋亡的量和时间存在。在一个具体的实施方案中，所述细胞凋亡抑制剂是半胱天冬酶(caspase)抑制剂。在另一个具体的实施方案中，所述细胞凋亡抑制剂是JNK抑制剂。在另一个具体的实施方案中，所述JNK抑制剂不调节所述细胞的分化或增殖。在另一个实施方案中，所述细胞收集组合物包含在独立各相中的所述细胞凋亡抑制剂和所述携氧的全氟化碳。在另一个实施方案中，所述细胞收集组合物包含在乳液中的所述细胞凋亡抑制剂和所述携氧的全氟化碳。在另一个实施方案中，所述细胞收集组合物另外还包含乳化剂，例如卵磷脂。在另一个实施方案中，在接触所述细胞的时间，所述细胞凋亡抑制剂和所述全氟化碳是介于约0°C和约25°C之间。在另一个具体的实施方案中，在接触所述细胞的时间，所述细胞凋亡抑制剂和所述全氟化碳是介于约2°C和10°C之间或介于约2°C和约5°C之间。在另一个具体的实施方案中，所述接触是在所述细胞群体的运输期间进行的。在另一个具体的实施方案中，所述接触是在所述细胞群体的冷冻和解冻期间进行的。

胎盘细胞群体可以通过包括使所述细胞群体接触细胞凋亡抑制剂和器官保存化合物的方法进行保存，其中与细胞群体不接触细胞凋亡抑制剂相比，所述细胞凋亡抑制剂是以足以减少或防止细胞群体中的细胞凋亡的量和时间存在。在一个具体的实施方案中，所述器官保存化合物是UW溶液(描述于美国专利第4,798,824号；也称为ViaSpan；另外参见Southard等人,Transplantation 49(2):251-257(1990))或描述于Stern等人的美国专利第5,552,267号中的溶液，所述文献的公开内容通过引用其全部结合到本文中。在另一个实施方案中，所述器官保存化合物是羟基乙基淀粉、乳糖酸、棉子糖或其组合。在另一个实施方案中，所述细胞收集组合物另外还包含携氧的全氟化碳，或者在两相中或者作为乳液剂。

在该方法的另一个实施方案中，使胎盘细胞在灌注期间接触包含细胞凋亡抑制剂和携氧的全氟化碳、器官保存化合物或其组合的细胞收集组合物。在另一个实施方案中，所述细胞是在组织破坏(例如酶促消化)的过程期间接触的。在另一个实施方案中，使胎盘细胞在通过灌注来收集之后或者在通过组织破坏(例如酶促消化)来收集之后接触所述细胞收集化合物。

典型地，在胎盘细胞收集、富集和分离期间，最好将由于低氧和机械应力所致的细胞应激减至最低或消除。在该方法的另一个实施方案中，因此，在收集、富集或分离期间，在所述保存期间，使细胞或细胞群体暴露在低氧条件下少于6小时，其中低氧条件是小于正常血氧浓度的氧浓度。在另一个具体的实施方案中，在所述保存期间，使所述细胞群体暴露在所述低氧条件下少于2小时。在另一个具体的实施方案中，在收集、富集或分离期间，使所述细胞群体暴露在所述低氧条件下少于1小时或少于30分钟，或者不暴露在低氧条件下。在另一个具体的实施方案中，在收集、富集或分离期间，使所述细胞群体不暴露在剪切应力下。

胎盘细胞可以在小容器(例如安瓿)中进行冷藏保存例如在冷藏保存培养基(cryopreservation medium)中。合适的冷藏保存培养基包括但不限于这样的培养基：包括例如生长培养基或细胞冷冻培养基，例如市售的细胞冷冻培养基，例如C2695、C2639或C6039(Sigma)等。冷藏保存培养基优选包含DMSO(二甲亚砜)，浓度为约2%至约15%(v/v)，例如约10%(v/v)。冷藏保存培养基可包含另外的物质，例如甲基纤维素和/或甘油。在冷藏保存期间，胎盘细胞优选以约1°C/min冷却。优选的冷藏保存温度为约-80°C至约-180°C，优选约-125°C至约-140°C。冷藏保存的细胞可以在解冻之前转移到液氮中备用。在有些实施方案中，例如，一旦安瓿达到了约-90°C，就将它们转移到液氮储藏所。也可以使用控速冰箱进行冷藏保存。冷藏保存的细胞优选在约25°C至约40°C的温度、优选约37°C的温度下解冻。

4.7包含分离的胎盘细胞的组合物

本文(例如在第4.4.2节)所述的胎盘细胞可以与任何生理上可接受的或医学上可接受的化合物、组合物或装置组合用于本文所述的方法和组合物。可用于本文提供的治疗方法的组合物可包含本文所述的胎盘细胞中任何一种或多种(参见以上第4.4.2节)。在某些实施方案中，所述组合物是药学上可接受的组合物，例如包含胎盘细胞及药学上可接受的载体的组合物。参见以下第4.9.2节。

在某些实施方案中，包含所述分离的胎盘细胞的组合物另外还包含基质，例如去细胞化基质或合成的基质。在另一个具体的实施方案中，所述基质是三维支架。在另一个具体的实施方案中，所述基质包含胶原蛋白、明胶、层粘连蛋白、纤连蛋白、果胶、鸟氨酸或玻连蛋白。在另一个更具体的实施方案中，所述基质是羊膜或羊膜衍生生物材料。在另一个具体的实施方案中，所述基质包含胞外膜蛋白。在另一个具体的实施方案中，所述基质包含合成的化合物。在另一个具体的实施方案中，所述基质包含生物活性化合物。在另一个具体的实施方案中，所述生物活性化合物是生长因子、细胞因子、抗体或小于5,000道尔顿的有机分子。

在另一个实施方案中，可用于本文提供的治疗方法中的组合物包含以任何上述胎盘细胞或任何上述胎盘细胞群体条件化培养基。

4.7.1冷藏保存的分离的胎盘细胞

可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞群体可以保存(例如冷藏保存)备用。细胞(例如干细胞)的冷藏保存方法是本领域众所周知的。分离的胎盘细胞群体可以制成容易给予个体的形式，例如装在容器中的分离的胎盘细胞群体适合于医用。这样一种容器可以是例如注射器、无菌塑料袋、瓶、罐或所述分离的胎盘细胞群体可容易分配的其它容器。例如，所述容器可以是血袋或适合于将液体静脉内给予接受者的其它医学上可接受的塑料袋。所述容器优选是允许混合细胞群体冷藏保存的容器。

冷藏保存的分离的胎盘细胞群体可包含来源于一个供体或来源于多个供体的分离的胎盘细胞。分离的胎盘细胞群体可以是与预定接受者完全HLA匹配的，或者是部分或完全HLA不匹配的。

因此，在一个实施方案中，分离的胎盘细胞可以以在容器中包含组织培养塑料器具贴壁的胎盘细胞群体的组合物的形式用于本文所述的方法中。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是冷藏保存的。在另一个具体的实施方案中，所述容器是袋、瓶或罐。在另一个具体的实施方案中，所述袋是无菌塑料袋。在另一个具体的实施方案中，所述袋是适合于、允许或便于所述分离的胎盘细胞群体的静脉内给予，例如通过静脉内输注。所述袋可包含允许将分离的胎盘细胞和一种或多种其它溶液(例如药物)在施用前或施用期间混合的互相连接的多个腔或区室。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含有利于混合细胞群体冷藏保存的一种或多种化合物。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体含在生理上可接受的含水溶液中。在另一个具体的实施方案中，所述生理上可接受的含水溶液是0.9%NaCl溶液。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体包含与所述细胞群体的接受者HLA匹配的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述混合细胞群体包含至少部分地与所述细胞群体的接受者HLA不匹配的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是来源于多个供体。

在某些实施方案中，所述容器中的所述分离的胎盘细胞是分离的CD10⁺、CD34^–、CD105⁺胎盘细胞，其中所述细胞已进行了冷藏保存并且装在容器中。在一个具体的实施方案中，所述CD10⁺、CD34^–、CD105⁺胎盘细胞也是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞也是CD45^–或CD90⁺。在另一个具体的实施方案中，所述CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞也是CD45^-和CD90⁺。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^-、CD44⁺、CD45^-、CD54⁺、CD62E^-、CD62L^-、CD62P^-、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^-、CD86^-、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^-、CD144/VE-钙粘着蛋白^dim、CD184/CXCR4^-、CD200⁺、CD133^-、OCT-4⁺、SSEA3^-、SSEA4^-、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^-或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD13⁺、CD29⁺、CD33⁺、CD38^–、CD44⁺、CD45^–、CD54/ICAM⁺、CD62E^–、CD62L^–、CD62P^–、SH3⁺(CD73⁺)、SH4⁺(CD73⁺)、CD80^–、CD86^–、CD90⁺、SH2⁺(CD105⁺)、CD106/VCAM⁺、CD117^–、CD144/VE-钙粘着蛋白^dim、CD184/CXCR4^–、CD200⁺、CD133^–、OCT-4⁺、SSEA3^–、SSEA4^–、ABC-p⁺、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-、HLA-G^–和程序性死亡-1配体(PDL1)⁺。

在某些其它的实施方案中，以上提及的分离的胎盘细胞是分离的CD200⁺、HLA-G^–胎盘细胞，其中所述细胞已进行了冷藏保存并且装在容器中。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是经过了冷藏保存并且装在容器中的CD73⁺、CD105⁺、CD200⁺细胞。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是经过了冷藏保存并且装在容器中的CD200⁺、OCT-4⁺干细胞。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是经过了冷藏保存并且装在容器中的CD73⁺、CD105⁺细胞，并且其中所述分离的胎盘细胞促进在允许胚胎样小体形成的条件下用胎盘细胞群体培养时形成一个或多个胚胎样小体。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是经过了冷藏保存并且装在容器中的CD73⁺、CD105⁺、HLA-G^–细胞。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞是经过了冷藏保存并且装在容器中的OCT-4⁺胎盘细胞，并且其中所述细胞促进在允许胚胎样小体形成的条件下用胎盘细胞群体培养时形成一个或多个胚胎样小体。

在另一个具体的实施方案中，以上提及的分离的胎盘细胞是作为通过流式细胞术检测为CD34^–、CD10⁺和CD105⁺的胎盘干细胞或胎盘多能细胞(例如PDACs)。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞具有分化成神经表型的细胞、骨生成细胞表型的细胞或软骨生成细胞表型的细胞的潜力。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外还是CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD34^-、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^-、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺或CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^-、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺细胞通过流式细胞术检测另外还是CD90⁺和CD45^-。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD90⁺、CD45^–细胞通过流式细胞术检测另外还是CD80^–和CD86^–。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD105⁺细胞另外还是CD29⁺、CD38^–、CD44⁺、CD54⁺、CD80^–、CD86^–、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，所述细胞另外还是CD44⁺。在任何上述分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞的一个具体的实施方案中，所述细胞另外还是CD117^–、CD133^–、KDR^-(VEGFR2^–)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-和/或PDL1⁺中的一种或多种。

在任何上述冷藏保存的分离的胎盘细胞的一个具体的实施方案中，所述容器是袋。在各种不同的具体的实施方案中，所述容器包含约、至少或至多1x10⁶个所述分离的胎盘细胞、5x10⁶个所述分离的胎盘细胞、1x10⁷个所述分离的胎盘细胞、5x10⁷个所述分离的胎盘细胞、1x10⁸个所述分离的胎盘细胞、5x10⁸个所述分离的胎盘细胞、1x10⁹个所述分离的胎盘细胞、5x10⁹个所述分离的胎盘细胞、1x10¹⁰个所述分离的胎盘细胞或1x10¹⁰个所述分离的胎盘细胞。在任何上述冷藏保存的群体的其它具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞已经传代了约、至少或不超过5次，不超过10次，不超过15次或不超过20次。在任何上述冷藏保存的分离的胎盘细胞的另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞已在所述容器中进行了扩充。

4.7.2基因工程胎盘细胞

本文进一步提供的是胎盘细胞，例如在以上第4.2.2节中描述的任何胎盘多能细胞或胎盘细胞，或包含这样的胎盘细胞的药物组合物，其中所述胎盘细胞已经进行了基因工程改造以产生重组或外源细胞因子。

可以使用基因工程改造细胞的方法，例如用逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、聚乙二醇或本领域技术人员已知的其它方法。这些包括使用在细胞中转运并表达核酸分子的表达载体。(参见Geoddel；Gene Expression Technology：Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,Calif.(1990))。可通过常规的转化或转染技术将载体DNA导入原核细胞或真核细胞中。用于转化或转染宿主细胞的合适方法可以在Sambrook等人,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,第二版,Cold Spring Harbor Laboratory press(1989)及其它实验室教科书中找到。

胎盘细胞，例如在以上第4.2节中描述的PDACs可以如下进行遗传修饰：将DNA或RNA(例如编码目标蛋白的DNA或RNA)导入细胞中，方法包括病毒转移，包括使用DNA或RNA病毒载体，例如逆转录病毒(包括慢病毒)、猴病毒40(Simian virus 40,SV40)、腺病毒、辛德毕斯病毒(Sindbis virus)和牛乳头瘤病毒等；化学转移，包括磷酸钙转染和DEAE-葡聚糖转染方法；膜融合转移，使用DNA负载的膜囊泡，例如脂质体(liposomes)、红血细胞血影(red blood cell ghosts)和原生质体等；或物理转移技术，例如微注射、电穿孔或裸DNA转移。通过插入外源DNA，或者通过用外源DNA取代细胞基因组某一区段，可以在遗传上改变胎盘细胞。例如，通过同源重组或者通过将病毒整合到宿主细胞基因组中，或者通过将DNA掺入到细胞中、特别是掺入到其核中，使用质粒表达载体和核定位序列，可以完成外源DNA序列的插入。所述DNA可包含一个或多个启动子，该启动子允许使用某些化学物质/药物(例如四环素)来正或负诱导目标蛋白的表达；在其它的实施方案中，所述启动子可以是组成型的。

磷酸钙转染可用于将例如含有编码目标蛋白的多核苷酸序列的质粒DNA导入细胞中。在某些实施方案中，将DNA与氯化钙溶液混合，然后加到磷酸缓冲盐溶液中。一旦有沉淀形成，就将溶液直接加到培养细胞中。用DMSO或甘油处理可用于提高转染效率，并且可以使用双羟基乙基氨基乙烷磺酸盐(BES)来提高稳定转染子的水平。磷酸钙转染系统都是市售的(例如

Promega Corp.,Madison,Wis.)。也可以使用DEAE-葡聚糖转染法。

也可以通过微注射对分离的胎盘细胞进行基因工程改造。在某些实施方案中，玻璃微量移液管指导在细胞的核中在光学显微镜下注射DNA或RNA。

也可以使用电穿孔对胎盘细胞进行遗传修饰。在某些实施方案中，将DNA或RNA加入到培养细胞悬液中，再将DNA/RNA-细胞悬液置于两个电极之间并施加电脉冲，引起细胞外膜中的瞬时通透性，其表现为跨膜的孔外观。

使用阳离子脂质体，任选包括二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)或二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)，例如

(LifeTechnologies,Inc.)，可以进行通过脂质体递送DNA或RNA以遗传修饰细胞。其它市售的递送系统包括EFFECTENE^TM(Qiagen)、DOTAP(Roche Molecular Biochemicals)、FUGENE 6^TM.(Roche MolecularBiochemicals)和

(Promega)。

通过将例如靶基因、多核苷酸、反义分子或核酶序列递送到细胞中，病毒载体可用于在遗传上改变胎盘细胞。逆转录病毒载体对转导快速分裂的细胞是有效的，虽然也已开发出大量的逆转录病毒载体来将DNA有效地转移到不分裂的细胞中。用于逆转录病毒载体的包装细胞系对本领域技术人员来说是已知的。在某些实施方案中，逆转录病毒DNA载体含有两个逆转录病毒LTR，使得第一个LTR位于SV40启动子的5'，SV40启动子与克隆到多克隆位点的靶基因序列操作性连接，后接3'第二个LTR。一旦形成，就如以前所述使用磷酸钙介导的转染法将逆转录病毒DNA载体转移到包装细胞系中。在病毒产生的大约48小时后，收获现含有靶基因序列的病毒载体。使用慢病毒载体、重组疱疹病毒、腺病毒载体或甲病毒载体转染细胞的方法都是本领域已知的。

在本领域技术人员已知的技术当中，靶细胞的成功转染或转导可以用遗传标记来证明。例如，已经表明，维多利亚水母(Aequoreavictoria)的绿色荧光蛋白是用于鉴定和跟踪遗传修饰的造血细胞的有效标记。可供选择的选择标记包括β-Gal基因、截短的神经生长因子受体或药物选择标记(包括但不限于NEO、MTX或潮霉素)。

4.7.3药物组合物

分离的胎盘细胞(例如PDACs)的群体或包含所述分离的胎盘细胞的细胞群体可以配制成药物组合物供体内使用，例如用于本文提供的治疗方法中。这样的药物组合物包含分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体，及药学上可接受的载体，例如盐水溶液或用于体内施用的其它可接受的生理上可接受的溶液。包含本文所述的分离的胎盘细胞的药物组合物可包含本文别的地方描述的分离的胎盘细胞群体或分离的胎盘细胞中的任一个或其任何组合。所述药物组合物可包含胎儿、母体或胎儿和母体二者的分离的胎盘细胞。本文提供的药物组合物还可包含从一个个体或胎盘或从多个个体或胎盘获得的分离的胎盘细胞。

本文提供的药物组合物可包含任何数量的分离的胎盘细胞。例如，在各种不同的实施方案中，分离的胎盘细胞的一个单位剂量可包含约、至少或不超过1x10⁵、5x10⁵、1x10⁶、5x10⁶、1x10⁷、5x10⁷、1x10⁸、5x10⁸、1x10⁹、5x10⁹、1x10¹⁰、5x10¹⁰、1x10¹¹或更多个分离的胎盘细胞。

本文提供的药物组合物包含含50%活细胞或更多(即，所述群体中细胞的至少50%是有功能的或有生命的)的细胞群体。优选地，所述群体中细胞的至少60%是活的。更优选地，在所述药物组合物中，所述群体中细胞的至少70%、80%、90%、95%或99%是活的。

本文提供的药物组合物可包含一种或多种化合物，例如有利于移植物移入的化合物(例如抗T-细胞受体抗体、免疫抑制剂等)；稳定剂，例如白蛋白、右旋糖酐40、明胶、羟基乙基淀粉、plasmalyte等。

当配制成注射液时，在一个实施方案中，所述药物组合物包含约1%~1.5%HSA和约2.5%右旋糖酐。在一个优选的实施方案中，所述药物组合物包含约5x10⁶细胞/毫升至约2x10⁷细胞/毫升的溶液，该溶液还包含5%HSA和10%右旋糖酐，任选包含免疫抑制剂(例如环孢菌素A)，例如10mg/kg。

在其它的实施方案中，所述药物组合物(例如溶液剂)包含大量细胞，例如分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，其中所述药物组合物包含介于约1.0±0.3x10⁶细胞/毫升至约5.0±1.5x10⁶细胞/毫升之间。在其它的实施方案中，所述药物组合物包含介于约1.5x10⁶细胞/毫升至约3.75x10⁶细胞/毫升之间。在其它的实施方案中，所述药物组合物包含介于约1x10⁶细胞/mL至约50x10⁶细胞/mL、约1x10⁶细胞/mL至约40x10⁶细胞/mL、约1x10⁶细胞/mL至约30x10⁶细胞/mL、约1x10⁶细胞/mL至约20x10⁶细胞/mL、约1x10⁶细胞/mL至约15x10⁶细胞/mL或约1x10⁶细胞/mL至约10x10⁶细胞/mL之间。在某些实施方案中，所述药物组合物不包含看得见的细胞团块(即没有大的细胞团块)或基本上不包含这种看得见的团块。本文所用的“大的细胞团块”意指不需要经过放大就看得见的细胞聚集体，例如肉眼可见的细胞聚集体，并且一般是指大于约150微米的细胞聚集体。在有些实施方案中，所述药物组合物包含约2.5%、3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%、6.0%、6.5%、7.0%、7.5%、8.0%、8.5%、9.0%、9.5%或10%右旋糖酐，例如右旋糖酐-40。在一个具体的实施方案中，所述组合物包含约7.5%至约9%右旋糖酐-40。在一个具体的实施方案中，所述组合物包含约5.5%右旋糖酐-40。在某些实施方案中，所述药物组合物包含约1%至约15%人血清白蛋白(HSA)。在多个具体的实施方案中，所述药物组合物包含约1%、2%、3%、4%、5%、65%、75%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%HSA。在一个具体的实施方案中，所述细胞经过了冷藏保存和解冻。在另一个具体的实施方案中，所述细胞经过了通过70μM~100μM过滤器过滤。在另一个具体的实施方案中，所述组合物不包含看得见的细胞团块。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含每106细胞少于约200个细胞团块，其中所述细胞团块是只有在显微镜(例如光学显微镜)下才看得见的。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含每106细胞少于约150个细胞团块，其中所述细胞团块是只有在显微镜(例如光学显微镜)下才看得见的。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含每106细胞少于约100个细胞团块，其中所述细胞团块是只有在显微镜(例如光学显微镜)下才看得见的。

在一个具体的实施方案中，所述药物组合物包含每毫升约1.0±0.3x10⁶细胞、约5.5%右旋糖酐-40(w/v)、约10%HSA(w/v)和约5%DMSO(v/v)。

在其它的实施方案中，所述药物组合物包含在包含10%右旋糖酐-40的溶液中的大量细胞，例如大量的分离的胎盘细胞，其中所述药物组合物包含介于约1.0±0.3x10⁶细胞/毫升至约5.0±1.5x10⁶细胞/毫升之间，并且其中所述组合物不包含用肉眼看得见的细胞团块(即不包含大的细胞团块)。在有些实施方案中，所述药物组合物包含介于约1.5x10⁶细胞/毫升至约3.75x10⁶细胞/毫升之间。在一个具体的实施方案中，所述细胞经过了冷藏保存和解冻。在另一个具体的实施方案中，所述细胞经过了通过70μM~100μM过滤器过滤。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含每10⁶细胞少于约200个微小细胞团块(即只有经过了放大才看得见的细胞团块)。在另一个具体的实施方案中，所述药物组合物包含每10⁶细胞少于约150个微小细胞团块。在另一个具体的实施方案中，所述药物组合物包含每10⁶细胞少于约100个微小细胞团块。在另一个具体的实施方案中，所述药物组合物包含小于15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%或2%DMSO或小于1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或0.1%DMSO。

本文进一步提供的是包含细胞的组合物，其中所述组合物是通过本文所公开方法之一制备的。例如，在一个实施方案中，所述药物组合物包含细胞，其中所述药物组合物是通过下述方制备的：包括将包含胎盘细胞(例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞)的溶液过滤，以形成过滤的含细胞溶液；该过滤的含细胞溶液用第一个溶液稀释至每毫升约1-50x10⁶、1-40x10⁶、1-30x10⁶、1-20x10⁶、1-15x10⁶或1-10x10⁶个细胞，例如在冷藏保存之前；和所得过滤的含细胞溶液用包含右旋糖酐、但不包含人血清白蛋白(HSA)的第二个溶液稀释以制备所述组合物。在某些实施方案中，所述稀释是稀释至每毫升不超过约15x10⁶个细胞。在某些实施方案中，所述稀释是稀释至每毫升不超过约10±3x10⁶个细胞。在某些实施方案中，所述稀释是稀释至每毫升不超过约7.5x10⁶个细胞。在其它某些实施方案中，如果所述过滤的含细胞溶液在稀释之前包含每毫升少于约15x10⁶个细胞，那么过滤是任选的。在其它某些实施方案中，如果所述过滤的含细胞溶液在稀释之前包含每毫升少于约10±3x10⁶个细胞，那么过滤是任选的。在其它某些实施方案中，如果所述过滤的含细胞溶液在稀释之前包含每毫升少于约7.5x10⁶个细胞，那么过滤是任选的。

在一个具体的实施方案中，所述细胞在所述用第一个稀释溶液稀释和所述用所述第二个稀释溶液稀释之间是冷藏保存的。在另一个具体的实施方案中，第一个稀释溶液包含右旋糖酐和HSA。第一个稀释溶液或第二个稀释溶液中的右旋糖酐可以是任何分子量的右旋糖酐，例如具有分子量为约10kDa至约150kDa的右旋糖酐。在有些实施方案中，所述第一个稀释溶液或所述第二个溶液中的所述右旋糖酐是约2.5%、3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%、5.5%、6.0%、6.5%、7.0%、7.5%、8.0%、8.5%、9.0%、9.5%或10%右旋糖酐。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液或所述第二个稀释溶液中的所述右旋糖酐是右旋糖酐-40。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液和所述第二个稀释溶液中的所述右旋糖酐是右旋糖酐-40。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液中的所述右旋糖酐-40是5.0%右旋糖酐-40。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液中的所述右旋糖酐-40是5.5%右旋糖酐-40。在另一个具体的实施方案中，所述第二个稀释溶液中的所述右旋糖酐-40是10%右旋糖酐-40。在另一个具体的实施方案中，所述包含HAS的溶液中的所述HAS是1-15%HSA。在另一个具体的实施方案中，所述包含HSA的溶液中的所述HAS是约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%HSA。在另一个具体的实施方案中，所述包含HSA的溶液中的所述HAS是10%HSA。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液包含HSA。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液中的所述HSA是10%HSA。在另一个具体的实施方案中，所述第一个稀释溶液包含冷冻保护剂。在另一个具体的实施方案中，所述冷冻保护剂是DMSO。在另一个具体的实施方案中，所述第二个稀释溶液中的所述右旋糖酐-40是约10%右旋糖酐-40。在另一个具体的实施方案中，所述包含细胞的组合物包含约7.5%至约9%右旋糖酐。在另一个具体的实施方案中，所述药物组合物包含每毫升约1.0±0.3x10⁶细胞至每毫升约5.0±1.5x10⁶细胞。在另一个具体的实施方案中，所述药物组合物包含每毫升约1.5x10⁶细胞至每毫升约3.75x10⁶细胞。

在另一个实施方案中，所述药物组合物通过下述方法制备：包括(a)将包含胎盘细胞(例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞)的含细胞溶液在冷藏保存之前过滤以制备过滤的含细胞溶液；(b)将过滤的含细胞溶液中的细胞按每毫升约1-50x10⁶、1-40x10⁶、1-30x10⁶、1-20x10⁶、1-15x10⁶或1-10x10⁶细胞进行冷藏保存；(c)将所述细胞解冻；和(d)所述过滤的含细胞溶液用右旋糖酐-40溶液进行约1:1至约1:11(v/v)稀释。在某些实施方案中，如果在步骤(a)之前，细胞的数量是每毫升少于约10±3x10⁶细胞，那么过滤是任选的。在另一个具体的实施方案中，步骤(b)中的细胞按每毫升约10±3x10⁶细胞进行冷藏保存。在另一个具体的实施方案中，步骤(b)中的细胞在包含约5%至约10%右旋糖酐-40和HAS的溶液中进行冷藏保存。在某些实施方案中，步骤(b)中的所述稀释是稀释至每毫升不超过约15x10⁶细胞。

在另一个实施方案中，所述药物组合物通过下述方法制备：包括：(a)将胎盘细胞(例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞)悬浮于包含10%HAS的5.5%右旋糖酐-40溶液中以形成含细胞溶液；(b)使所述含细胞溶液通过70μM过滤器过滤；(c)所述含细胞溶液用包含5.5%右旋糖酐-40、10%HSA和5%DMSO的溶液稀释至每毫升约1-50x10⁶、1-40x10⁶、1-30x10⁶、1-20x10⁶、1-15x10⁶或1-10x10⁶细胞；(d)将所述细胞进行冷藏保存；(e)将所述细胞解冻；和(f)所述含细胞溶液用10%右旋糖酐-40进行1:1~1:11(v/v)稀释。在某些实施方案中，步骤(c)中的所述稀释是稀释至每毫升不超过约15x10⁶细胞。在某些实施方案中，步骤(c)中的所述稀释是稀释至不超过约10±3x10⁶细胞/mL。在某些实施方案中，步骤(c)中的所述稀释是稀释至不超过约7.5x10⁶细胞/mL。

在另一个实施方案中，所述包含细胞的组合物通过下述方法制备：包括：(a)将大量细胞离心以收集细胞；(b)将细胞重悬于5.5%右旋糖酐-40中；(c)将细胞离心以收集细胞；(d)将细胞重悬于包含10%HAS的5.5%右旋糖酐-40溶液中；(e)使细胞通过70μM过滤器过滤；(f)将细胞在5.5%右旋糖酐-40、10%HSA和5%DMSO中稀释至每毫升约1-50x10⁶、1-40x10⁶、1-30x10⁶、1-20x10⁶、1-15x10⁶或1-10x10⁶细胞；(g)将细胞进行冷藏保存；(h)将细胞解冻；和(i)细胞用10%右旋糖酐-40进行1:1~1:11(v/v)稀释。在某些实施方案中，步骤(f)中的所述稀释是稀释至每毫升不超过约15x10⁶细胞。在某些实施方案中，步骤(f)中的所述稀释是稀释至不超过约10±3x10⁶细胞/mL。在某些实施方案中，步骤(f)中的所述稀释是稀释至不超过约7.5x10⁶细胞/mL。在其它某些实施方案中，如果细胞的数量是每毫升少于约10±3x10⁶细胞，那么过滤是任选的。

所述组合物，例如包含本文所述的分离的胎盘细胞的药物组合物可包含任何本文所述的分离的胎盘细胞。

可以使用适合于细胞制品用药的其它注射制剂。

在一个实施方案中，所述药物组合物包含分离的胎盘细胞，所述分离的胎盘细胞基本上或完全是非母体来源的，也就是说，具有胎儿基因型；例如，至少约90%、95%、98%、99%或约100%是非母体来源的。例如，在一个实施方案中，药物组合物包含分离的胎盘细胞群体，其是CD200⁺和HLA-G^–；CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺；CD200⁺和OCT-4⁺；CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^–；CD73⁺和CD105⁺并且当包含所述分离的胎盘细胞群体的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体；或OCT-4⁺并且当包含所述分离的胎盘细胞群体的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体；或上述情况的组合，其中所述分离的胎盘细胞的至少70%、80%、90%、95%或99%是非母体来源的。在另一个实施方案中，药物组合物包含分离的胎盘细胞群体，其是CD10⁺、CD105⁺和CD34^-；CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺和CD34^-；CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^-、和CD90⁺或CD45^-中的至少一个；CD10⁺、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^-和CD45^-；CD10⁺、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^-和CD45^-；CD200⁺和HLA-G^-；CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺；CD200⁺和OCT-4⁺；CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^-；CD73⁺和CD105⁺并且当包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体；OCT-4⁺并且当包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述胎盘细胞群体中形成一个或多个胚胎样小体；或CD117^–、CD133^–、KDR^-、CD80^–、CD86^–、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^-和/或PDL1⁺中的一种或多种；或上述情况的组合，其中所述分离的胎盘细胞的至少70%、80%、90%、95%或99%是非母体来源的。在一个具体的实施方案中，所述药物组合物另外还包含不是从胎盘中获得的干细胞。

本文提供的组合物(例如药物组合物)中的分离的胎盘细胞可包含从一个供体或从多个供体获得的胎盘细胞。所述分离的胎盘细胞可以是与预定接受者完全HLA匹配的，或者是部分或完全HLA不匹配的。

4.7.3包含分离的胎盘细胞的基质

本文进一步提供的是包含胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体的组合物，包括基质、水凝胶、支架等。这样的组合物可以用于替代液体混悬剂中的细胞，或者除液体混悬剂中的细胞之外还可以使用这样的组合物。

本文所述的分离的胎盘细胞可以接种到天然基质(例如胎盘生物材料，例如羊膜材料)上。这样一种羊膜材料可以是例如直接从哺乳动物胎盘中解剖获得的羊膜；固定或热处理的羊膜、基本上干的(即，<20%H₂O)羊膜、绒毛膜、基本上干的绒毛膜、基本上干的羊膜和绒毛膜等。其上可接种分离的胎盘细胞的优选胎盘生物材料描述于Hariri的美国申请公布第2004/0048796号，所述专利申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中。

可将本文所述的分离的胎盘细胞悬浮于适合于例如注射的水凝胶溶液中。用于此类组合物的合适水凝胶包括自我装配的肽，例如RAD16。在一个实施方案中，可以使包含所述细胞的水凝胶溶液变硬，例如在模子中，以形成具有细胞分配在其中的基质，用于植入。在这样一种基质中的分离的胎盘细胞也可以进行培养，使得所述细胞在植入之前经有丝分裂扩充。水凝胶是例如通过共价键、离子键或氢键交联形成三维开式晶格(open-lattice)结构的有机聚合物(天然的或合成的)，这种三维开式晶格结构能诱捕水分子形成凝胶。形成水凝胶的材料包括多糖(例如海藻酸和海藻酸盐)、肽、聚膦腈(polyphosphazines)和聚丙烯酸酯(其是通过离子键交联的)或嵌段聚合物(例如聚环氧乙烷-聚丙二醇嵌段共聚物(其分别是通过温度或pH交联的))。在有些实施方案中，所述水凝胶或基质是生物可降解的。

在有些实施方案中，所述制剂包含可原位聚合的凝胶(参见例如，美国专利申请公布2002/0022676，所述专利申请的公开内容通过引用其全部结合到本文中；Anseth等人,J.Control Release,78(1-3):199-209(2002)；Wang等人,Biomaterials,24(22):3969-80(2003)。

在有些实施方案中，所述聚合物在水溶液(例如水)、缓冲盐溶液或含水的醇溶液中是至少部分溶解的，其具有带电荷的侧基或其单价离子盐。具有可与阳离子起反应的酸性侧基的聚合物实例是聚(磷腈)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚(乙酸乙烯酯)和磺酸化聚合物，例如磺酸化聚苯乙烯。也可以使用具有通过丙烯酸或甲基丙烯酸和乙烯基醚单体或聚合物的反应形成的酸性侧基的共聚物。酸性基团的实例有羧酸基团、磺酸基团、卤化(优选氟化)醇基团、酚型OH基团和酸性OH基团。

可将本文所述的分离的胎盘细胞或其共培养物接种在三维构架(framework)或支架上，再植入体内。这样一种构架可以结合任何一种或多种生长因子、细胞、药物或例如刺激组织形成的其它组分一起植入。

可使用的支架的实例包括非织造毡、多孔泡沫或自我装配的肽。使用由合成的可吸收的羟基乙酸和乳酸共聚物(例如PGA/PLA)(VICRYL,Ethicon,Inc.,Somerville,N.J.)构成的纤维可形成非织造毡。也可以使用由通过冷冻-干燥或冻干等方法形成的例如聚(ε-己内酯)/聚(羟基乙酸)(PCL/PGA)共聚物组成的泡沫(参见例如美国专利第6,355,699号)，作为支架。

在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞可接种在毡制品上或接触毡制品，毡制品可以例如由复丝纱组成，复丝纱是由生物可吸收的材料例如PGA、PLA、PCL共聚物或掺混物或透明质酸制得的。

在另一个实施方案中，本文提供的分离的胎盘细胞可接种在泡沫支架上，泡沫支架可以是复合结构。这样的泡沫支架可以模制成为有用的形状，例如具有在待修复、置换或扩张的机体中特定结构的一部分。在有些实施方案中，构架例如用0.1M乙酸处理，然后在聚赖氨酸、PBS和/或胶原蛋白中孵育，然后接种细胞以便增强细胞附着力。基质的外表面可以改性以改善细胞的附着或生长和组织的分化，例如借助血浆包被的基质或添加一种或多种蛋白质(例如胶原蛋白、弹性纤维、网状纤维)、糖蛋白、糖胺聚糖(例如硫酸肝素、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角蛋白等)、细胞基质和/或其它材料，例如但不限于明胶、海藻酸盐、琼脂、琼脂糖和植物胶等。

在有些实施方案中，所述支架包含使其不形成血栓的材料或用这种材料处理。这些处理物和材料也可促进和支持内皮生长、迁移和胞外基质沉积。这些材料和处理物的实例包括但不限于天然材料，例如基底膜蛋白(例如层粘连蛋白和IV型胶原蛋白)、合成材料(例如EPTFE)和链段聚氨酯脲硅氧烷(例如PURSPAN^TM)(The PolyerTechnology Group,Inc.,Berkeley,Calif.))。支架也可包含抗血栓形成药，例如肝素；支架也可经过处理以改变表面电荷(例如用等离子体(plasma)包被)，然后再用分离的胎盘细胞接种。

本文提供的胎盘细胞(例如PDACs)也可接种在生理上可接受的陶瓷材料或与其接触，陶瓷材料包括但不限于磷酸一钙、磷酸二钙、磷酸三钙、α-磷酸三钙、β-磷酸三钙、磷酸四钙、羟基磷灰石、氟磷灰石、硫酸钙、氟化钙、氧化钙、碳酸钙、磷酸镁钙、生物活性玻璃(例如

)和它们的混合物。目前市场上可获得的多孔的生物相容性陶瓷材料包括

(CanMedica Corp.,Canada),

(Merck Biomaterial France,France),

(Mathys,AG,Bettlach,Switzerland)和矿化胶原蛋白骨移植产品(例如HEALOS^TM(DePuy,Inc.,Raynham,MA)和

RHAKOSS^TM和(Orthovita,Malvern,Pa.))。构架可以是天然和/或合成材料的混合物、掺混物或复合物。

在一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞按约0.5x10⁶至约8x10⁶细胞/mL接种到合适的支架上或与其接触。

4.8无限增殖化胎盘细胞系

哺乳动物胎盘细胞(例如PDACs)可以被有条件地无限增殖化，即通过用任何合适的载体转染，该载体含有促生长基因即编码在适宜条件下促进转染细胞生长的蛋白的基因，使得促生长蛋白的产生和/或活性可被外部因子调节。在一个优选的实施方案中，促生长基因是一种癌基因，例如但不限于v-myc、N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤的大T抗原、E1a腺病毒或人乳头瘤病毒的E7蛋白。

通过将促生长基因置于外部可调节的启动子的控制之下，例如其活性可被控制的启动子，例如通过与细胞接触时改变转染细胞的温度或培养基组成，可以实现促生长蛋白的外部调节。在一个实施方案中，可以使用四环素(tet)控制的基因表达系统(参见Gossen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:5547-5551,1992；Hoshimaru等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:1518-1523,1996)。在不存在tet的情况下，该载体里面的tet控制的反式激活物(tTA)强烈激活从

(一种来自人巨细胞病毒并与tet操纵基因序列融合的最小启动子)的转录。tTA是一种大肠杆菌(Escherichia coli)的转座子-10衍生tet抗性操纵子的阻遏蛋白(tetR)和单纯疱疹病毒的VP16的酸性结构域的融合蛋白。tet的无毒低浓度(例如0.01-1.0μg/mL)几乎完全废除了tTA的反式激活作用。

在一个实施方案中，所述载体还含有编码选择标记(例如赋予抗药性的蛋白质)的基因。细菌新霉素抗性基因(neo^R)是一种这样的标记，在本发明方法中可以使用。携带neo^R的细胞可通过本领域普通技术人员已知的方法进行选择，例如在生长培养基中添加例如100-200μg/mL G418。

可通过本领域普通技术人员已知的众多方法中的任一个，包括但不限于逆转录病毒感染，可以实现转染。一般而言，细胞培养物通过与从载体的生产者细胞系收集的条件化培养基和含有N2补充物的DMEM/F12的混合物一起孵育而被转染。例如，按如上所述方法制备的胎盘细胞培养物可通过在1体积的条件化培养基和2体积的含有N2补充物的DMEM/F12中孵育约20小时而在体外在例如5天后被感染。

转染后，将培养物在允许增殖的表面进行传代，例如允许至少30%的细胞在24小时的时期内数量翻倍。优选地，基底是聚鸟氨酸/层粘连蛋白基底，由用聚鸟氨酸(10μg/mL)和/或层粘连蛋白(10μg/mL)包被的组织培养塑料器具组成；聚赖氨酸/层粘连蛋白基底；或用纤连蛋白处理的表面。培养物每3-4天用生长培养基饲养，该生长培养基可以补充或不补充一种或多种提高增殖的因子。当培养物是小于50%汇合时，可以向生长培养基中加入提高增殖的因子。

条件无限增殖化胎盘细胞系可以使用标准技术，例如当达到80-95%汇合时通过胰蛋白酶消化进行传代。在有些实施方案中，最多到大约第20代，对维持选择是有益的(通过例如对含有新霉素抗性基因的细胞加入G418)。细胞可以放在液氮中冷冻用于长期储存。

可以从如上所述制备的条件无限增殖化人胎盘细胞系中分离出克隆细胞系。一般而言，这样的克隆细胞系可以使用标准技术，例如通过有限稀释或使用克隆环分离出来，然后进行扩充。克隆细胞系一般可按如上所述方法进行饲养和传代。

通过在促进分化的培养条件下，抑制促生长蛋白的产生和/或活性，条件无限增殖化人胎盘细胞系(其可能是克隆的、但不一定是克隆的)一般可被诱导至分化。例如，如果编码促生长蛋白的基因是处于外部可调节的启动子控制之下，那么可以改变培养基的温度或组成以抑制促生长基因的转录。对于以上论述的四环素控制的基因表达系统，通过加入四环素以抑制促生长基因的转录，可以实现分化。一般而言，1μg/mL四环素持续4-5天就足以启动分化。为了促进进一步分化，在生长培养基中可包括另外的试剂。

4.9试剂盒

在另一个方面，本文提供的是适合于治疗患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体的试剂盒，包括在一个独立于试剂盒内其余内含物的容器中的组织培养塑料器具贴壁的多能胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，例如在以上第4.2节中描述的细胞(PDACs)；和使用说明书。理想的是，试剂盒可用于不同领域，例如用在医生办公室，或者由急救护理提供者用到被诊断为具有结节病或结节病相关疾病或障碍的患者身上。优选地，胎盘细胞是在药学上可接受的溶液(例如适合于病损内施用的溶液或适合于静脉内施用的溶液)中提供的。在某些实施方案中，胎盘干细胞或胎盘多能细胞是本文所述的CD10⁺、CD34^–、CD105⁺胎盘细胞中的任意一个，例如CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞或CD10⁺、CD34^–、CD45^–、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞。

在某些实施方案中，试剂盒包含一种或多种便于将胎盘细胞递送到个体的组件。例如，在某些实施方案中，试剂盒包含便于将胎盘细胞病损内递送到个体的组件。在这样的实施方案中，试剂盒可包含例如适合于将细胞递送到个体的注射器和针头等。在这样的实施方案中，胎盘细胞可以装在试剂盒中的袋里面或者装在一个或多个管形瓶(vial)中。在某些其它的实施方案中，试剂盒包含便于将胎盘细胞静脉内或动脉内递送到个体的组件。在这样的实施方案中，胎盘细胞可以装在瓶子或袋(例如血袋或能够盛装多达约1.5L含细胞溶液的类似袋)，并且试剂盒另外还包含适合于将细胞递送到个体的管子和针头。

另外，试剂盒可包含一种或多种减轻个体疼痛或炎症的化合物(例如镇痛化合物、类固醇或非类固醇抗炎化合物等)。试剂盒也可包含抗细菌或抗病毒化合物(例如一种或多种抗生素)、减轻个体焦虑的化合物(例如alaprazolam)、减少个体免疫应答的化合物(例如环孢菌素A)、抗组胺药(苯海拉明(diphenhydramine)、氯雷他定(loratadine)、地氯雷他定(desloratadine)、喹硫平(quetiapine)、非索非那定(fexofenadine)、西替利嗪(cetirizine)、异丙嗪(promethazine)、chlorepheniramine、左西替立利嗪(levocetirizine)、西咪替丁(cimetidine)、法莫替丁(famotidine)、雷尼替丁(ranitidine)、尼扎替丁(nizatidine)、罗沙替丁(roxatidine)、拉呋替丁(lafutidine)等)。

另外，试剂盒可包含一次性物品，例如无菌擦拭巾、一次性纸制品、手套等，这些一次性物品有利于个体递送的准备工作或者减少个体由于胎盘细胞施用造成的感染的可能性。

5.实施例

5.1实施例1：使用胎盘干细胞治疗系统性结节病

一名男性患者，中等体型，40岁左右，主诉虚弱、呼吸短促、劳动性呼吸困难、胸痛、中度发热和踝关节和膝关节不适等症状，并已做了身体检查。胸部X射线和CT扫描揭示出双侧肺门和纵隔淋巴结病变、右肺中有实质病损和大量结节。诊断为系统性结节病和感染性关节炎。该个体静脉内给予450mL 0.9%盐水中的1x10⁹~5x10⁹CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺PDACs，并且在以后的三个月中，两周一次地监测。如果在监测期期间，任何上述症状有改善，那么确定治疗有效性。

5.2实施例2：使用胎盘干细胞治疗心脏结节病

个体表现为呼吸急促、双腿和踝关节肿胀、和心跳不规则。在排除其它原因并做了证实性心电图后，做出心脏结节病的诊断。在用硝酸甘油和链激酶使个体病情稳定后，给予该个体0.9%盐水中的1x10⁸~5x10⁸CD10⁺、CD34^-、CD105⁺、CD200⁺PDACs，使用心脏注射器在局麻下直接注射到受累部位。在以后的72小时中，在急诊基础上监测该个体。在治疗后的三个月中，通过心电图和/或染料目测技术进一步监测该个体。如果在监测期期间，任何上述症状有改善，那么确定治疗有效性。

5.3实施例3：使用胎盘干细胞治疗皮肤结节病

个体表现为抱怨发生在双小腿的结节。进行了刮开活检，组织学检查揭示出肉芽肿性炎症与可极化的外来物。在排除其它原因后，做出皮肤结节病的诊断。给予该个体0.9%盐水中的1x10⁸~5x10⁸CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺ PDACs，直接给到皮肤病损部位。在以后的三个月中，监测该个体的皮肤结节中的变化。如果在监测期期间，这些征兆中任何一个显示出改善，那么对该个体确定治疗有效性。

5.4实施例4：使用胎盘干细胞治疗神经结节病

一名50岁个体表现出腿麻木和肌肉无力的症状。影像学方法显示在脊髓中有不规则轮廓和丸块(mass)样病损。活检揭示出在脊髓中有纤维化和非干酪性肉芽肿。做出神经结节病的诊断。该个体鞘内给予450mL 0.9%盐水中的1x10⁹~5x10⁹ CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺ PDACs，并且在以后的三个月中，两周一次地监测。如果在监测期期间，任何上述症状有改善，那么确定治疗有效性。

等同实施方案：

本公开并不局限于由本文所述的具体实施方案限定的范围。事实上，根据以上说明书和附图，本文所提供的主题的各种修改，除了所描述的以外，对本领域技术人员来说都变得显而易见。这样的修改欲意落入附上的权利要求书的范围之内。

本文中引用了各种出版物、专利和专利申请，其公开内容都通过引用其全部结合到本文中。

Claims

1.治疗患有结节病或结节病相关疾病或障碍的个体的方法，包括给予所述个体治疗有效量的胎盘干细胞或胎盘干细胞条件化培养基，其中所述治疗有效量是足以引起所述结节病或所述疾病或障碍的一个或多个症状的可检测改善的量。

2.权利要求1的方法，其中所述胎盘干细胞是CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述胎盘干细胞另外还是CD45^–或CD90⁺。

4.权利要求2的方法，其中所述胎盘干细胞另外还是CD38^–、CD45^–、CD80^–、CD86^–、CD133^–、HLA-DR,DP,DQ^–、SSEA3^–、SSEA4^–、CD29⁺、CD44⁺、CD73⁺、CD90⁺、CD105⁺、HLA-A,B,C⁺、PDL1⁺、ABC-p⁺或OCT-4⁺中的一种或多种。

5.权利要求2的方法，其中所述胎盘干细胞另外还是CD29⁺、CD38^–、CD44⁺、CD54⁺、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。

6.权利要求2的方法，其中所述胎盘干细胞另外还是CD44⁺。

7.权利要求1的方法，其中所述胎盘干细胞表达CD200但不表达HLA-G，或表达CD73、CD105和CD200，或表达CD200和OCT-4，或表达CD73和CD105但不表达HLA-G，或表达CD73和CD105并且当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体，或表达OCT-4并且当包含所述干细胞的胎盘细胞群体是在允许胚胎样小体形成的条件下培养时促进在所述群体中形成一个或多个胚胎样小体。

8.权利要求1的方法，其中所述结节病是系统性结节病。

9.权利要求8的方法，其中所述症状是肉芽肿的形成、疲劳、体重减轻、发热、酸痛、疼痛、关节炎、干眼症、膝关节肿胀、视力模糊、呼吸短促、咳嗽和皮肤病损中的一种或多种。

10.权利要求1的方法，其中所述结节病是皮肤结节病。

11.权利要求10的方法，其中所述皮肤结节病包括环形结节病、红皮病型结节病、鱼鳞癣状结节病、色素沉着不足结节病、硬斑病状结节病、粘膜结节病、丘疹性结节病、瘢痕结节病、皮下结节病或溃疡性结节病。

12.权利要求11的方法，其中所述症状是皮肤病损。

13.权利要求12的方法，其中所述皮肤病损是结节性红斑、钱币状湿疹、多形性红斑、皮肤钙质沉着症和瘙痒症、冻疮样狼疮、皮肤斑、斑丘疹、皮肤中更深部的结节性病损或旧疤痕的浸润中的一种或多种。

14.权利要求1的方法，其中所述结节病是

氏综合征。

15.权利要求14的方法，其中所述症状是结节性红斑、双侧肺门淋巴结肿大、关节炎、关节疼痛或发热中的一种或多种。

16.权利要求1的方法，其中所述结节病是神经结节病。

17.权利要求16的方法，其中所述症状是神经系统中肉芽肿的形成、头痛、精神混乱、不适或面部麻痹中的一种或多种。

18.权利要求1的方法，其中所述结节病是肺结节病。

19.权利要求18的方法，其中所述症状是咳嗽、呼吸短促、胸痛、胸闷感、声音嘶哑、鼻塞和反复或持久的鼻窦炎中的一种或多种。

20.权利要求1的方法，其中所述结节病是心脏结节病。

21.权利要求20的方法，其中所述症状是胸痛、心悸、充血性心力衰竭、心包炎或乳头肌功能紊乱、呼吸短促、踝关节肿胀、不规则心跳或猝死中的一种或多种。

22.权利要求1的方法，其中所述结节病是眼结节病。

23.权利要求22的方法，其中所述症状是红眼或泪眼、肉芽肿性眼色素层炎、虹膜小结、视网膜脉络膜炎、结膜炎、泪腺受累或突眼中的一种或多种。

24.权利要求1-23中任一项的方法，该方法包括给予所述个体第二种治疗剂。

25.权利要求24的方法，其中所述的第二种治疗剂是抗炎药、类固醇药、免疫抑制化合物或抗生素。