CN101442991A - 缓释纳米颗粒组合物及其使用方法 - Google Patents

缓释纳米颗粒组合物及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101442991A
CN101442991A CNA2005800483203A CN200580048320A CN101442991A CN 101442991 A CN101442991 A CN 101442991A CN A2005800483203 A CNA2005800483203 A CN A2005800483203A CN 200580048320 A CN200580048320 A CN 200580048320A CN 101442991 A CN101442991 A CN 101442991A
Authority
CN
China
Prior art keywords
particle
nano
disease
rapamycin
waits
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2005800483203A
Other languages
English (en)
Inventor
V·D·拉布哈赛特瓦
S·K·萨霍
M·K·雷迪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Nebraska
Original Assignee
University of Nebraska
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Nebraska filed Critical University of Nebraska
Publication of CN101442991A publication Critical patent/CN101442991A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/5026—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1635—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4816—Wall or shell material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5192—Processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/70—Nanostructure
    • Y10S977/773—Nanoparticle, i.e. structure having three dimensions of 100 nm or less
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S977/00—Nanotechnology
    • Y10S977/902—Specified use of nanostructure
    • Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
    • Y10S977/906—Drug delivery

Abstract

本发明为一种组合物和使用其治疗或预防疾病或病症的方法，所述组合物包括包囊在N－烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇(PEG)共轭物的共聚物中的治疗剂。

Description

缓释纳米颗粒组合物及其使用方法
发明背景
再狭窄是一种复杂的过程，认为其是由用于减轻动脉阻塞的介入(例如血管成形术、经皮腔内斑块旋切术或支架)继发的血管壁损伤引起。导致再狭窄的机理包括弹性反冲、平滑肌细胞迁移和增殖、细胞外基质合成血管壁重塑增加和血栓形成(Haudenschild(1993)Am.J.Med.94：40S-44S；Lovqvist，等(1994)J.InterN.Med.233：215-226；Koster，等(1995)Angiology 46：99-106；Wilcox(1991)CirculatioN84：432-435；Wilcox(1993)Am.J.Cardiol.72：88E-95E；Wilcox and Blumenthal(1995)J.Nutr.125：631S-638S)。初期成功的动脉粥样硬化斑块血管成形术后的再狭窄仍然是人类中冠状血管成形术的主要限制。
预防再狭窄的治疗方法集中在介入早期事件或者预防晚期事件，所述早期事件比如血小板沉积或血栓形成，所述晚期事件即平滑肌细胞增生和基质形成。已经在动物试验研究中使用了某些类型的治疗剂。这些包括可以阻断再狭窄发病中早期事件的抗凝剂、抗炎剂、抗血小板剂和可以抑制其中晚期事件的抗增殖剂(Herrman，等(1993)Drugs 46：18-52；Marmur，等(1994)J.Am.Coll.Cardiol.24：1484-1491；Mathias(1991)SemiN.Thromb.Hemostat 17：14-20)。治疗再狭窄的其它方法包括使用反义寡核苷酸阻断某些细胞因子或原癌基因比如c-myc或c-myb的转录(Wilcox(1993)supra；Bennett，等(1994)J.CliN.Invest.93：820-828；Epstein，等(1993)CirculatioN88：1351-1353；Edelman，等(1995)Circ.Res.76：176-182)。也已经研究了基因治疗策略(Wilcox(1993)supra；Muller(1994)Br.Heart J.72：309-312；Nabel，等(1990)Science 249：1285-1288；Nabel(1995)Cardiovasc.Res.28：445-455；Bennett，等(1994)supra；Epstein，等(1993)supra；Edelman，等(1995)supra；FeldmaNand Isner(1995)J.Am.Coll.Cardiol.26：826-835)。
在临床情况中已经使用了通过常规药理学方法或机械方法(例如支架)来改善再狭窄进程(Wilensky，等(1993)Trends Cardiovasc.Med.3：163-170)。药物治疗剂包括抗血小板剂和抗凝剂、钙离子通道拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、皮质类固醇和鱼油饮食(Herrman，等.(1993)supra)。机械方法包括将金属或聚合物支架在动脉中展开以抑制弹性反冲，所述弹性反冲通常存在于血管成形术过程后数小时内，且导致动脉腔再狭窄(Herrman，等(1993)supra；De Scheerder，等(1995)Atherosclerosis 114：105-114；De Foley，等(1993)Am.Heart J.125：686-694；Kuntz，等(1993)J.Am.Coll.Cardiol.21：15-25；Lambert，等.(1994)CirculatioN90：1003-1011；Mitchel and McKay(1995)Cathet.Cardiovasc.DiagN.34：149-154；Buchwald，等(1993)J.Am.Coll.Cardiol.21：249-254)。其它的方法包括经皮腔内斑块旋切术、用激光、热能、β和γ放射线对介入过程后动脉损害的局部治疗(Buchwald，等(1992)Am.Heart J.123：878-885；Kouek，等(1992)CirculatioN86：1249-1256；Israel，等(1991)J.Am.Coll.Cardiol.18：1118-1119).
已经讨论了向动脉损害部位给药治疗剂优于全身性给药(Labhasetwar，等(1997)Adv.Drug Del.Rev.24：63-85)。已使用在再狭窄动物模型中的试验性研究来研究用于预防再狭窄的治疗剂的局部递送(Lambert，等(1994)supra，Garcia，等(1990)Surg.Gynecol.Obstet.171：201-205；Edelman，等(1990)Proc.Nat.Acad.Sci.USA87：3773-3777；Edelman，等(1993)Proc.Nat.Acad.Sci.USA90：1513-1517；EdelmaNand Karnovsky(1994)CirculatioN89：770-776；Nathan，等(1995)Proc.Nat.Acad.Sci.USA 92：8130-8134；Okada，等(1989)Neurosurgery25：892-898；Villa，等(1994)J.CliN.Invest.93：1243-1249；Villa，等(1995)Circ Res.76：505-513)。已经讨论了向外膜植入药物(Edelman，等(1990)supra；Villa，等(1994)supra；Simons，等(1992)Nature 359：67-70；Simons，等(1994)J.CliN.Invest.93：2351-2356)，stents(Lincoff，等(1994)J.Am.Coll.Cardiol.23：18A；Jeong，等(1994)CirculatioN92：137)和基于导管的递送系统(Steg，等.(1994)CirculatioN90：1648-1656；Fernandez，等(1994)CirculatioN89：1518-1522)。进一步，Lanza，等((2002)CirculatioN106：2842)教导了包含紫杉醇的靶向顺磁性纳米颗粒可用于预防血管成形术后的再狭窄。
序列号为09/847,945的美国专利申请教导了通过递送至少一种纳米颗粒形式和分散在生物相容性蛋白质中的药物来治疗受试者中增生的方法。该参考文献公开了使用作为适宜的候选药物的紫杉醇、雷帕霉素、类固醇等来抑制细胞增殖和迁移。该参考文献没有教导嵌段共聚物纳米颗粒。
美国专利No.6,322,817教导了异种紫杉醇的药物制剂，其中紫杉醇包囊在纳米颗粒中，所述纳米颗粒包括至少一种类型的通过加入交联剂的水溶液聚合的两亲性单体。该参考文献公开了一种在治疗细胞过度增殖引起的病理学病症比如类风湿性关节炎或癌症中有用的两亲性单体和单酯的优选组合，所述两亲性单体包括乙烯基吡咯烷酮、N-异丙基丙烯酰胺，所述单酯为聚乙二醇马来酸酐与双功能乙烯基衍生物比如N，N′-亚甲基双丙烯酰胺交联的单酯。
美国专利No.6,759431公开了一种通过向身体通路的外部部分递送治疗剂来治疗或预防与身体通路相关疾病的方法，所述治疗剂比如包囊在聚合物载体中的紫杉醇或其类似物或其衍生物。
静脉内或口服递送用于预防疾病或病症的药剂通常无效，因为这些途径的递送不能长时期地向靶向部位提供治疗剂量的药剂。因此，本领域存在位点特异性治疗剂的需要，其能够预防所选疾病或病症的局部病理生理学过程。本发明实现了这一长期需要。
发明概述
本发明为一种缓释纳米颗粒组合物，其由N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇共轭物的共聚物组成。在一个实施方案中，所述N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇共轭物的比例为70-90:9-20:1-10。在另一个实施方案中，所述N-烷基丙烯酰胺包括N-甲基-N-n-丙基丙烯酰胺、N-甲基-N-异丙基丙烯酰胺、N-丙基甲基丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、N，N-二乙基丙烯酰胺、N-异丙基甲基丙烯酰胺、N-环丙基丙烯酰胺、N-乙基甲基丙烯酰胺、N-甲基-N-乙基丙烯酰胺、N-环丙基甲基丙烯酰胺或N-乙基丙烯酰胺。在进一步的实施方案中，所述乙烯单体包括乙烯醇、乙烯醚、乙烯酯、乙烯基卤化物、醋酸乙烯酯或乙烯基吡咯烷酮。在进一步的实施方案中，所述聚乙二醇共轭物包括PEG基化的马来酸、PEG基化的乙烯砜(vinylsulfone)、PEG基化的碘乙酰胺或PEG基化的二硫化邻吡啶(orthopyridyl disulfide)。在特别的实施方案中，所述缓释纳米颗粒组合物进一步包含一种治疗剂，比如抗生素、抗再狭窄剂、抗增殖剂、抗肿瘤剂、化疗剂、心血管剂、抗炎剂、免疫抑制剂或抗组织损伤剂。这些纳米颗粒组合物通常具有的直径为20nm至100nm，且局部使用用于预防或治疗疾病或病症。
本发明也为一种使用缓释纳米颗粒组合物来预防或治疗疾病或病症的方法。所述方法包括向患有疾病或病症或有患有疾病或病症危险的患者局部给药有效量的缓释纳米颗粒组合物，从而预防或治疗所述患者中的疾病或病症。在特别的实施方案中，所述患者具有再狭窄的危险，即所述患者已经经受了血管成形术、经皮腔内斑块旋切术或支架。
发明详述
现在已经理解局部给药包囊在纳米颗粒中的由N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇(PEG)共轭物组成的治疗剂可有效地递送高浓度治疗剂。特别地，使用较高摩尔比率N-烷基丙烯酰胺组分的纳米颗粒可改善治疗剂进入纳米颗粒的负载效率。包囊在本文中公开的纳米颗粒中的治疗剂可缓慢地释放，如纳米颗粒分裂，从而提供缓的释药物释放特征。本发明的纳米颗粒起用于管腔内递送药物的有效药物载体的作用，因为与较大的药物载体系统比如微粒或脂质体相比，其纳米粒径范围可产生较好的药物摄取和对动脉壁的穿透。为了说明，制备特定的治疗剂-纳米颗粒组合物来证实其在再狭窄的大鼠颈动脉模型中的缓释、生物相容性、动脉定位、抑制细胞增殖的和预防增生。说明性的组合物由雷帕霉素和聚合物纳米颗粒组成，雷帕霉素为已知用于抑制血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的有效的大环内脂类抗菌素，聚合物纳米颗粒为使用N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)、乙烯基吡咯烷酮(VP)和PEG基化的马来酸(PEGMA)(80:15:5)的共聚物合成，所述纳米颗粒与N，N′-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)交联。当与不含PEG的纳米颗粒相比时，发现向纳米颗粒组合物中加入PEG可向纳米颗粒提供更大的稳定性、减少了聚集和增加了药物负载。以重量/重量计，不含PEG共轭物的纳米颗粒(即，包含NIPAM:VP，80:20)包括2.5％的雷帕霉素。相反，预形成的包含PEG共轭物(即，NIPAM:VP:PEGMA，80:15:5)的纳米颗粒包含至多4.5％的雷帕霉素。
在体外情况下，负载雷帕霉素的纳米颗粒显示出缓释释放负载药物。释放速率在初期高，随时间呈指数降低(表1)。
表1
 
为了证实生物相容性，将血管平滑肌细胞暴露在各种浓度不含雷帕霉素的纳米颗粒中(0、10、50、100和1000μg/ml)48小时，使用标准的MTS试验测定细胞生存力。所述纳米颗粒以至多1000μg/ml的剂量没有显示出对体外血管平滑肌细胞有毒性效应。为了证实负载雷帕霉素的纳米颗粒对血管平滑肌细胞的抗增殖效果，用在溶液中(即，溶于甲醇中，且用细胞培养介质稀释)或装载在纳米颗粒中的多种浓度(1、10、100、1000ng/mL)的雷帕霉素培养培养细胞。使用MTS试验测定增殖。尽管在溶液中的雷帕霉素和负载雷帕霉素的纳米颗粒显示出对血管平滑肌细胞增殖的类似剂量相关性抑制，用负载雷帕霉素的纳米颗粒的抑制在较晚时间点明显地更大。例如，在第5天，在溶液中和在纳米颗粒中的雷帕霉素(1ng/mL)显示出类似的抑制；然而，在第8天，在纳米颗粒中的雷帕霉素证实比在溶液中的抑制多20％(表2)。因此，负载雷帕霉素的纳米颗粒证实可缓释抑制血管平滑肌细胞增殖。
表2
Figure A200580048320D00081
通过流式细胞仪分析血管平滑肌细胞中DNA来测定负载雷帕霉素的纳米颗粒对细胞周期的影响。流式细胞仪的数据证实雷帕霉素的抗增殖效果主要应归于抑制了细胞周期在G1检查点的进程；对负载雷帕霉素的纳米颗粒，细胞在G0-G1期的百分比为74.6％，与之相比，未处理组中的为62.7％。类似地，在处理组中增殖的S期的细胞百分数比在对照组中的低(13.5％ vs 24.25％)。(表3)。
表3
 
处理组 G0/G1 S G2/M ％细胞凋亡
培养基对照纳米颗粒负载雷帕霉素的纳米颗粒在溶液中的雷帕霉素 65.7067.9674.5673.48 21.2519.3513.5315.41 13.0512.6711.9111.12 0.070.120.060.06
负载雷帕霉素的纳米颗粒的功效为在再狭窄的大鼠颈动脉模型中证实的。动脉切片的形态测定分析证实，与对照纳米颗粒相比，局部递送负载雷帕霉素的纳米颗粒可显著地减少内膜与介质(I/M)的比例(I/M＝1.60±0.03 vs 3.15±0.10；P<.006)(表4)。与对照组相比，腹膜内给药相同剂量的负载雷帕霉素的纳米颗粒证实对抑制再狭窄有边缘效应(I/M＝2.8±0.11 vs 3.15±0.10；P<.006)，表明抑制效应主要应归于雷帕霉素的局部递送。与其它对照相比，局部递送负载胶束纳米系统而抑制增生导致内腔直径增大(局部给药负载雷帕霉素的纳米颗粒组，0.29±0.002mm2；腹膜内给药负载雷帕霉素的纳米颗粒组，0.14±0.009mm2；局部给药无药物空白纳米颗粒组，0.17±0.003mm2；P<.006)。
表4
 
处理组 内膜/介质比例(平均值±SEM) 内腔的横切片面积(mm2±SEM)
未损伤的动脉 -- 0.368±0.012
对照纳米颗粒 3.15±0.10 0.17±0.002
负载雷帕霉素的纳米颗粒(I.P) 2.87±0.11 0.14±0.009
负载雷帕霉素的纳米颗粒(局部) 1.60±0.03 0.29±0.002
使用抗α肌动蛋白的抗SM抗体(α-SMA)的免疫组织化学染色显示出在对照组动脉的新内膜和外膜中的SMA阳性细胞的表达比在雷帕霉素处理组中的多。使用抗PCNA抗体的免疫组织化学染色显示出在对照组新内膜和外膜中的PCNA阳性细胞的数量比在处理组中的显著地更多。这些结果表明雷帕霉素的递送抑制了VSMCs的增殖。在处理组中的动脉切片证实与对照相比，受损伤的动脉的再次内皮化(reendothelization)明显地更大(82％ vs 28％)。
进一步地，使用负载6-香豆素荧光染料的纳米颗粒和负载雷帕霉素的纳米颗粒进行纳米颗粒定位研究。在两个颈动脉中，仅仅一个动脉受损伤和输注纳米颗粒。发现负载雷帕霉素和负载染料的纳米颗粒定位于输注纳米颗粒的动脉的动脉壁，而不是对侧动脉。动脉切片的共聚焦显微镜分析证实在第1小时纳米颗粒定位于所有的层(内膜、介质和外膜)；然而，在第24小时，所有的荧光活性降低，但是在动脉壁的中层比在内膜层降低的更多。当定量时，在给药后1小时，每毫克的动脉存在1.5±0.06μg的雷帕霉素(表5)。在非损伤的对侧颈动脉中没有检测到雷帕霉素。因此，基于存在于动脉的10-15mm段(3.2至4mg的组织)中雷帕霉素的含量和给药药物量，当局部经由纳米颗粒递送时，在靶向动脉中摄取的雷帕霉素的效率为9.1％。
表5
 
给药后时间 雷帕霉素(μg/mg组织)(±SEM)
1小时1天3天7天 1.5(±0.06)0.12(±0.01)0.06(±0.03)0.05(±0.01)
注意到包囊在纳米颗粒中的治疗剂用于局部递送和预防疾病比如再狭窄的用途，所述纳米颗粒由N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和PEG共轭物组成，本发明为一种缓释(即，超过2至3周)纳米颗粒组合物和使用其预防或治疗疾病或病症的方法。
考虑到改善负载效率与纳米颗粒中较高摩尔比率的N-烷基丙烯酰胺组分相关，本发明的一个实施方案包括摩尔比率分别为70-90:9-20:1-10的N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇共轭物。在另一个实施方案中，N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇共轭物的摩尔比率分别为75-85:12-18:2-8。在一个特别的实施方案中，N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇共轭物的摩尔比率理想地分别为80:15:5。
如本文使用的N-烷基丙烯酰胺为具有C3至C6烷基的疏水性单体。例如，N-烷基丙烯酰胺可以是N-甲基-N-N-丙基丙烯酰胺、N-甲基-N-异丙基丙烯酰胺、N-丙基甲基丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、N，N-二乙基丙烯酰胺、N-异丙基甲基丙烯酰胺、N-环丙基丙烯酰胺、N-乙基甲基丙烯酰胺、N-甲基-N-乙基丙烯酰胺、N-环丙基甲基丙烯酰胺、N-乙基丙烯酰胺等。
在本发明的上下文中使用的乙烯单体为具有相对高分子量(例如，约100,000至2,000,000，更典型地为约500,000至1,500,000)的亲水性单体。适宜的乙烯单体包括，但不限于乙烯醇、乙烯醚、乙烯酯、乙烯基卤化物、醋酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮或其共聚物。
聚乙二醇共轭物和其制备方法是本领域已知的(Roberts，等(2002)Adv.Drug Deliv.Rev.54：459-476)，其指任意适宜的共轭物都可用于本发明的纳米颗粒。通常，PEG共轭物的PEG部分为具有分子量为2,000至50,000的直链化合物。其指可使用任意适宜的PEG部分；然而，PEG部分的分子量直接影响得到的纳米颗粒的粒径(即，分子量越高，纳米颗粒的直径越大)。例如，发现与不含PEG共轭物的NIPAM/VP纳米颗粒的直径相比，将包含具有分子量为5000的PEG部分的PEG共轭物加入到由NIPAM和VP组成的纳米颗粒中会使得到的纳米颗粒的直径增大5-10nm。因此，在一个实施方案中，PEG共轭物的PEG部分具有的分子量为3,000至10,000。在另一个实施方案中，PEG共轭物的PEG部分具有的分子量为4,000至7,000。在一个特别的实施方案中，PEG共轭物的PEG部分具有的分子量为5,000。特别适宜的PEG共轭物包括，例如PEG基化的马来酸、乙烯砜(vinylsulfone)、碘乙酰胺或二硫化邻吡啶。
当使用选择的交联剂不重要时，在制备本发明的纳米颗粒中使用的适宜的交联剂包括，但不限于N，N′-亚甲基双-丙烯酰胺或N，N′-胱胺双丙烯酰胺。
本发明的可生物降解的纳米颗粒可以通过如下方法制备：在存在交联剂下混合在本文指出的单体，且通过利用引发剂(例如过硫酸铵、苯甲酰基过氧化物(benzoyl perozide)或AIBN(2，2′-偶氮二异丁腈))的自由基聚合来聚合所述混合物。得到的聚合链的疏水性部分保留埋入纳米颗粒内部，其有助于溶化药物，而亲水性部分延伸到纳米颗粒的表面外。这些可生物降解的纳米颗粒具有的平均直径为20nm至100nm，其特别适于局部递送治疗剂。
如本文使用的治疗剂指可以缓解、治愈、治疗或预防疾病或病症的药剂。特别想要的是治疗剂能够发挥其局部效应(即，在疾病或病症部位或其附近)。示例性的治疗剂包括，但不限于抗生素、抗再狭窄剂(antirestenotics)、抗增殖剂、抗肿瘤剂、化疗剂、心血管剂、消炎药、免疫抑制剂、抗细胞凋亡和抗组织损伤剂。
在本发明的上下文中，抗生素是指包括抗菌剂、抗微生剂、抗病毒剂、抗原生动物剂和抗真菌剂。这些药剂的代表性实例包括抗生素比如氨基糖苷类(例如链霉素、庆大霉素、妥布霉素)；第一代、第二代和第三代头孢菌素类(例如头孢菌素、头孢克洛、头孢噻肟、拉氧头孢、其它半合成的头孢菌素类比如头孢克肟)；青霉素类(例如，青霉素G、氨苄西林、阿莫西林)；喹诺酮(例如环丙沙星、萘啶酸、氧氟沙星、托氟沙星、洛美沙星)；磺酰胺(例如磺胺甲噻二唑、sufisoxazole、柳氮磺吡啶、甲氧苄氨嘧啶)；四环素类(例如多西环素、美他环素)；大环内酯类(例如红霉素)；单环β-内酰胺类(例如氨曲南、氯碳头孢)；及其它药剂比如新生霉素、利福平、博来霉素、氯霉素、克林霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、两性霉素B、多粘菌素E、制霉菌素、多粘菌素B、环丝氨酸、乌洛托品、甲硝唑、利福布丁、大观霉素、甲氧苄啶、杆菌肽、万古霉素、其它的β内酰胺抗生素。抗真菌剂包括氟胞嘧啶、氟康唑、灰黄霉素、酮康唑和咪康唑。抗病毒剂和抗AIDS剂包括阿昔洛韦、金刚烷胺、去羟肌苷(以前称为ddl)、灰黄霉素、氟胞嘧啶、膦甲酸钠(foscamet)、更昔洛韦、碘苷、咪康唑、克霉唑、乙胺嘧啶、利巴韦林、金刚烷乙胺、司他夫定(以前称为d4T)、曲氟尿苷、三磺嘧啶、伐昔洛韦、阿糖腺苷、扎西他滨(以前称为ddC)和齐多夫定(以前称为AZT)。抗原虫药的代表性的实例包括喷他脒羟乙基磺酸盐、奎宁、氯奎和甲氟喹。
再狭窄治疗剂的代表性的实例包括，例如抗血管生成剂，比如抗侵入性因子(Eisentein，等(1975)Am.J.Pathol.81：337-346；Langer，等(1976)Science 193：70-72；Horton，等(1978)Science199：1342-1345)、视黄酸及其改变了细胞外基质组分的代谢而抑制血管生成的衍生物、金属蛋白酶-1的组织抑制剂、金属蛋白酶-2的组织抑制剂、纤溶酶原活化因子抑制剂-1、纤溶酶原活化因子抑制剂-2和anginex(Griffioen，等(2001)Biochem.J.354(Pt2)：233-42)；编码c-myc或c-myb的核酸序列；生长因子抑制剂比如曲尼司特、曲匹地尔或血管肽素；抗氧剂比如普罗布考，抗血栓形成剂比如肝素或阿昔单抗，抗增殖剂比如AG-1295(Fishbein，等.(2000)Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.20：667)，酪氨酸磷酸化抑制剂(Banai，等(2005)Biomaterials26(4)：451-61)，紫杉醇或其它的紫杉烷类(Scheller，等(2004)CirculatioN110(7)：810-4)，异黄酮(Kanellakis，等(2004)Atherosclerosis176(1)：63-72)，雷帕霉素或其衍生物或其类似物(Schachner，等(2004)AnN.Thorac.Surg.77(5)：1580-5)，长春新碱、长春花碱、HMG-CoA还原酶抑制剂、阿霉素、秋水仙碱、放线菌素D、丝裂霉素C、环胞菌素或麦考酚酸；消炎剂比如地塞米松(Liu，等(2004)Expert Rev.Cardiovasc.Ther.2(5)：653-60)、甲泼尼龙或γ干扰素；及显示出抗再狭窄(antirestenotic)活性的其它物质。
根据本发明可使用的其它治疗剂包括能预防或治疗肿瘤的抗增殖剂型、抗肿瘤剂或化疗剂。这些药剂的代表性的实例包括雄激素抑制剂；抗雌激素药和激素(例如氟他胺、醋酸亮丙瑞林、他莫昔芬、雌二醇、雌氮芥、甲地孕酮、己烯雌酚、睾内酯、戈舍瑞林、甲羟基孕酮)；细胞毒素剂(例如六甲蜜胺、博来霉素、白消安、卡铂、卡氮芥(BiCNU)、顺铂、克拉屈滨、氮烯唑胺、更生霉素、柔红霉素、阿霉素、雌氮芥、依托泊苷、环己亚硝脲、环磷酰胺、阿糖胞苷、羟基脲、伊达比星、干扰素α-2a和-2b、异环磷酰胺、米托蒽醌、丝裂霉素、紫杉醇、链脲霉素、替尼泊苷、塞替派、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨)；抗代谢物和抗有丝分裂剂(例如氟尿嘧淀脱氧核苷、5-氟尿嘧啶、fluarabine、干扰素α-2a和-2b、亚叶酸、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、米托坦、普卡霉素、硫鸟嘌呤、秋水仙碱)；叶酸盐拮抗剂及其它抗代谢物；长春花生物碱；亚硝基脲；DNA烷基化剂；嘌呤拮抗剂及其类似物；嘧啶拮抗剂及其类似物；烷基磺酸盐；酶(例如门冬酰胺酶、培门冬酶)；及毒素(例如蓖麻毒、相思豆毒素、白喉毒素、霍乱菌毒素、白树毒素、美洲商陆抗病毒蛋白、麦芽凝集素、志贺氏杆菌毒素和假单胞菌属外毒素A)。
在本发明内可使用的其它治疗剂包括心血管剂比如抗高血压剂；肾上腺素阻滞剂和刺激剂(例如多沙唑嗪、胍那决尔、胍乙啶、酚苄明、特拉唑嗪、可乐宁、胍那苄)；α/β肾上腺素阻滞剂(例如柳胺苄心定)；血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如贝那普利、巯甲丙脯氨酸、赖诺普利、雷米普利)；ACE受体拮抗剂(例如氯沙坦)；β阻滞剂(例如醋丁洛尔、阿替洛尔、卡替洛尔、吲哚洛尔、心得安、喷布洛尔(penbatolol)、萘羟心安)；钙离子通道阻滞剂(例如阿米洛利、苄普地尔、硝苯吡啶、维拉帕米、尼莫地平)；抗心律不齐剂(antiarrythmics)，组I-IV(例如溴苄胺、利多卡因、美西律、奎尼丁、心得安、维拉帕米、地尔硫卓、三氯甲噻嗪、美托洛尔酒石酸盐、卡替洛尔盐酸化物)；及其它抗心律不齐剂和强心剂(例如腺苷、地高辛、咖啡因、多巴胺盐酸化物、洋地黄)。
根据本发明可使用的其它治疗剂包括抗炎剂。这些药剂的代表性的实例包括非甾体剂(NSAIDS)比如水杨酸盐、双氯芬酸、二氟尼柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、甲灭酸、萘丁美酮、萘普生、吡罗昔康、酮洛芬、酮咯酸、舒林酸、甲苯酰吡啶乙酸。其它抗炎药物包括甾体药剂比如倍氯米松、倍他米松、可的松、地塞米松、氟轻松、氟尼缩松、氢化可的松(hydorcortisone)、泼尼松龙和泼尼松。也包括免疫抑制剂(例如adenocorticosteroids、环孢菌素)。
其它治疗剂包括抗组织损伤剂。这些药剂的代表性的实例包括过氧化物歧化酶；免疫调节剂(例如淋巴因子、单核因子、干扰素α和β)；及生长调节剂(例如IL-2、肿瘤坏死因子、上皮生长因子人蛋氨生长素、粘连蛋白、GM-CSF、CSF、血小板衍生生长因子、生长激素、rG-CSF、表皮生长因子、IGF-I)。
在一个特别的实施方案中，所述治疗剂为抗再狭窄剂比如雷帕霉素(即西罗莫司)或其衍生物或类似物，比如依维莫司或他克莫司(Grube，等(2004)Circulation109(18)：2168-71；Grube and Buellesfeld(2004)Herz29(2)：162-6)。
在另一个实施方案中，所述治疗剂为抗细胞凋亡剂比如半乳凝素-3；(-)塞利吉林；单胺氧化酶抑制剂(MAO-I)比如司来吉兰和雷沙吉兰；雷帕霉素；或querceten。
通常，所述治疗剂可以在制备纳米颗粒的同时或在制备纳米颗粒之后加入。理想地，将所述治疗剂装入预形成的纳米颗粒，其含有向纳米颗粒中装入的至少3％w/w的药剂。通常，理想地为获得向纳米颗粒中装入至多10％w/w的治疗剂。
本发明进一步涉及利用在本文中公开的纳米颗粒预防或治疗疾病或病症的方法。所述方法包括向患有疾病或病症或有患有疾病或病症危险的患者局部给药有效量的组合物，从而预防或治疗所述患者中的疾病或病症，所述组合物包含包囊在由N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和PEG共轭物组成的纳米颗粒中的治疗剂。
患有疾病或病症的患者通常显示出一种或多种与所述疾病或病症相关的病征。有患有疾病或病症的危险的患者指包括具有所述疾病或病症家族史的患者或由于其它环境可倾向于发展为所述疾病或病症的患者。例如，有发展为再狭窄危险的患者将包括具有经历用于减轻动脉阻塞的介入(例如血管成形术、经皮腔内斑块旋切术或支架)的患者和可能发展为狭窄危险的患者。当局部递送(例如，在损伤部位或在肿瘤部位)时，本发明的组合物可以递送缓释治疗剂来预防或治疗选择性疾病或病症。通常，有效量被认为是与其中不存在药剂的另一种相同的情况相比，能引起与选择性疾病或病症相关的一种或多种病征或症状产生可测变化的量。例如，有效量的抗增殖剂将引起与未暴露于抗增殖剂的细胞相比增生或细胞增殖产生可测定的降低。进一步地，抗生素的有效量将导致有活力的细菌、霉菌或原生动物细胞数量抑制或降低。
本发明的纳米颗粒组合物可单独给药或与可药用或生理学可接受的载体、赋形剂或者稀释剂给药。通常，这些载体应当为在使用的剂量和浓度对容器无毒。通常，这些组合物的制备需要混合本发明的纳米颗粒组合物与缓冲剂、抗氧剂比如抗坏血酸、低分子量(少于约10个残基)多肽、蛋白质、氨基酸、糖类包括葡萄糖、蔗糖或糊精、螯合剂比如EDTA、谷胱甘肽及其它稳定剂和赋形剂。
如在本文中证实的，局部药物递送有助于以较低剂量延长保留高局部浓度的治疗剂，且具有降低的全身毒性。而且，也可以局部递送具有相对短半衰期的治疗剂比如重组体蛋白质和肽及其它生物学非稳定的生物分子比如核酸和寡核苷酸，其在靶细胞或组织摄取之前具有最小的治疗活性损失。而且，本发明的纳米颗粒组合物的疏水性内芯将用于包囊和递送高疏水性的治疗剂。而且，局部药物递送减少了患者与患者的药物药代动力学变异性，其通常与静脉内或口服途径给药药物有关。
可以制剂在本文中提供的纳米颗粒组合物以用于多种不同途径局部给药，包括例如在直视(例如在外科手术或经由内窥镜的过程)下直接给药至所述疾病或病症部位(例如损伤或肿瘤部位)或经由经皮药物递送至所述疾病或病症部位的外部(外膜)表面(例如血管周围的递送)。作为一种可替换方式，也可以实现经由导管或套管针递送小球。
血管周围的药物递送包括经由超声、计算断层分析、荧光镜、电子发射断层扫描、磁共振成象或内窥镜的指导利用针或导管经皮给药纳米颗粒组合物至所述疾病或病症的部位。另外，所述方法可以在直视下或用另外的成像指导于手术中进行。在再狭窄或其它心血管疾病的情况下，这些方法也可以在与血管内方法比如血管成形术、经皮腔内斑块旋切术或支架一起进行或与可操作的动脉方法比如动脉内膜切除术、血管或移植物修复或移植插入物一起进行。
例如，在患有股浅动脉变窄的患者中，气囊血管成形术将以常规方式(即，经由导线使气囊血管成形术导管流如动脉，且使球形物充气穿过损害部位)进行。在血管成形术之前、之时或之后，在超声、荧光镜或CT指导下将针插入穿过皮肤，且将治疗剂(例如包囊进入缓释纳米颗粒的雷帕霉素)以圆周方式通过针或导管渗透到动脉狭窄的区域。这可以在任意动脉、静脉或移植物周围进行，但用于该介入的典型地病症为颈动脉、冠状动脉、骼动脉、大腿总动脉、浅表大腿动脉和腘动脉的和在移植物接合部位的疾病。
合理的静脉部位包括其中嵌入留置导管的浸透周围的静脉。本领域普通技术人员可以容易地确定用于预防或治疗选择性疾病或病症的适宜治疗剂，并最佳化有效剂量和共同给药方案，如通过个体患者的良好医疗实践和临床病症来测定。与给药方式无关，应当理解在特定情况下活性剂的实际优选量将可以根据给药的特定制剂和方法改变。特定患者的特定剂量取决于年龄、体重、一般的健康状况、饮食、给药时间和途径、在组合中使用的药物和应用治疗剂的特定病症的严重性。给予受试者的剂量可利用常规需要考虑的事项来确定，例如，通过常规比较选择药剂和已知药剂的活性差异，比如利用适宜的常规药理学试验设计。本发明将通过下述非限定性实例进行更详细地描述。
实施例1：负载雷帕霉素的纳米颗粒的制备
N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)为购自Sigma Chemical Co(St.Louis，MO)，且在聚合前从正己烷中重结晶纯化。N-乙烯基吡咯烷酮(VP)为得自Fluka Chemie AG和RdH(LaborchemikalieNGmbH&Co.KG)，且在使用前蒸馏。N，N′-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)、硫酸亚铁铵(FAS)、过硫酸铵(APS)、
Figure A200580048320D00171
-80和雷帕霉素为购自Sigma(St.Louis，MO)。在制备缓冲剂中使用的盐来自Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)。所有的水溶液为用蒸馏水和去离子水(Water pro plus，Labconco，KansasCity，MO)制备。
纳米颗粒为通过任意的自由基聚合制备。总而言之，可以按多种摩尔比率使用水溶性的单体NIPAM、VP和PEG基化的马来酸酯，然后用MBA交联。使用FAS激活聚合反应。在一个典型的最佳试验设计中，将19μL新蒸馏的VP、80mg NIPAM和10mg PEG基化的马来酸酯溶于10ml水中。向该水溶液中加入28μLMBA(49mg/mL)，通入氮气穿过该溶液30分钟以除去溶解的氧。接着，加入50μL 10％ FAS和50μL饱和的APS溶液以启动聚合反应。在氮气下于30℃进行聚合反应24小时。利用SPECTRO
Figure A200580048320D00172
透析袋(分子量筛截12-kD，
Figure A200580048320D00173
Laguna Hills，CA)逆着水透析形成的纳米颗粒24小时，换水两次以除去未反应的单体和电解质。冻干(-80℃，<10μm汞柱压力，SENTRYTM，Virtis，Gardiner，NY)纳米颗粒的水分散体48小时，获得干粉末，随后将其用于负载药物。
对于负载雷帕霉素，通过涡流2分钟将20mg冻干的纳米颗粒分散在2mL蒸馏水中。向该分散体中加入250μL雷帕霉素的甲醇溶液(4mg/ml)，在磁搅拌平皿上恒定搅拌2小时。这使得雷帕霉素分配进入纳米颗粒的疏水性内芯。通过利用
Figure A200580048320D00174
透析袋(分子量筛截粒径12-kD)逆着1L的蒸馏水透析分散体过夜来分离游离的雷帕霉素。然后，如在本文中描述的冻干负载药物的纳米颗粒。对于定位动脉的纳米颗粒，所述制剂包含荧光染料、β-香豆素。将代替药物溶液的染料溶液(100μL，0.5mg/mL)加入胶束分散体中。定位所述染料，从而对所述纳米颗粒进行共聚焦显微镜检查。
得到的纳米颗粒以单体和聚合物的1H光谱表示，记录在VariaN500MHz分光光度计上。为了证实聚合是完全的，将纳米颗粒溶于D2O中。利用准弹性光散射设备(ZETAPLUSTM粒度分析器、BrookhaveNInstrument Corp，Holtsville，NY)和ZETAPLUSTM粒径软件(版本2.07))通过光子相关光谱学测定负载药物之前和之后纳米颗粒的粒径分布(平均直径和多分散性指数)。为了测定粒径，制备纳米颗粒在HEPES缓冲剂中的稀分散液(0.1mg/mL，0.001M pH7.0)。利用ZETAPLUSTM使用相同的样品来测定颗粒的ζ电势。也通过透射电子显微术(TEM)测定纳米颗粒的粒径。将一滴负载雷帕霉素的纳米颗粒水溶液置于涂层的铜载网上，接着作用2％(w/v)乙酸双氧铀溶液进行负染色。利用Philips201TEM显微镜(Philips/FEI Inc.，Briarcliff Manor，NY)观察颗粒。
共聚物的1H NMR光谱证实不存在单体的乙烯基端基质子，表明聚合是完全的。纳米颗粒的平均水动力学直径为～70nm，具有窄的粒径分布(多分散指数＝0.11)，且在pH7下ζ电势(表面电荷)为-8.45mV。负载药物后胶束纳米系统的粒径略微增加(平均直径-70-76nm)。所述纳米颗粒在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中形成胶态分散体。纳米颗粒的TEM证实近似球形的形状，具有的平均直径为61±7nm(平均值±SD；n＝20)。用TEM得到的粒径小于用激光散射测定的，因为后者测定了流体动力的直径，其包括了在纳米颗粒外层的PEG水合物。负载的药物为4.2％w/w(即100mg的制剂包含4.2mg的雷帕霉素)；具有的包囊效率为84％(即，84％加入的药物被俘获在纳米颗粒中)。
实施例2：纳米颗粒的药物释放
为了保持漏槽状态，雷帕霉素从体外纳米颗粒的释放为在包含0.1％w/v
Figure A200580048320D00182
-80的PBS(154mM，pH7.4)中测定的。每个池的供应室充满2.5mL纳米颗粒在缓冲剂中的分散液(2mg/mL)，接收室充满相同的缓冲剂。将具有0.1μm孔径大小的膜(MilliporeMillipore Co.，Bedford，MA)放置在两个室之间。将所述池放在搅拌器上，保持在37℃，以100rpm旋转(Lab Line，Melrose Park，IL)。在预定的时间间隔，完全除去来自接收器旁的溶液，用新的缓冲剂替换。在收集的样品中雷帕霉素的浓度为通过HPLC(ShimadzuScientific Instrument，Inc.，Columbia，MD)测定。流动相由甲醇:水(9:1v/v)组成，以0.4mL/分钟的流速递送(泵Model LC-IOAT)。用自动注射器(Model SIL-10A)注射20μL的样品，利用NOVA-
Figure A200580048320D00185
 C-8柱(2 x 150mm2，4μm粒径的填充物；Phenomenex，Torrance，CA)实现分离。通过UV检测来定量样品中雷帕霉素的水平(λ＝276nm，ModelSPD-10A VP，Shimadzu)。在相同的条件下制备雷帕霉素(0-50μg mL)的标准曲线图。
在体外条件下雷帕霉素从在本文中公开的纳米颗粒中的释放特征证实在初期具有相对快速的药物释放速率(在24小时中释放～20％)，之后较缓慢地释放(在28天中释放超过80％)。
实施例3：负载雷帕霉素的纳米颗粒的抗增殖效果
在37℃，在使湿润5％ CO2大气中，将人血管平滑肌细胞(CascadeBiologies，Portland，OR)置于补充有平滑肌生长添加剂(CascadeBiologies)的介质231上。典型地使用传代3至4次的细胞。
为了监测细胞增殖，将细胞接种在5,000细胞每孔密度的96孔平皿上，使其连接24小时。使用负载在纳米颗粒或在溶液(将溶于甲醇中的雷帕霉素稀释在介质中)中不同剂量的雷帕霉素雷帕霉素(1ng/mL至1,000ng/mL)。保持甲醇介质中的浓度为低于0.1％，以便其对细胞增殖没有影响。用空的纳米颗粒或介质处理的细胞起负载药物的纳米颗粒或在溶液中药物的相应对照。在第二天和在隔一天改变孔中的介质，其后没有进一步加入药物。利用MTS试验(CELLTITER 
Figure A200580048320D00191
 AQueOus，Promega，Madison，WI)监测药物的抗增殖活性八天的研究时间。将MTS试验试剂(20μL/孔)加入到每孔中，在细胞培养培养箱中于37℃培养所述平皿3小时。利用微板阅读器(Bio-Tek Instrument，Winooski，VT)测定在490nm的色彩强度。
对于细胞周期分析，将细胞接种在T-75培养瓶中，细胞密度为1 x106细胞/含有10mL生长培养基的烧瓶，使其连接过夜。用负载雷帕霉素的纳米颗粒在生长培养基中的分散体(雷帕霉素的剂量＝50ng/mL)替换每个烧瓶的介质。处理后两天，用PBS洗涤细胞单细胞层，通过胰蛋白酶消化分离细胞。通过用碘化丙啶染色细胞进行DNA分析，将荧光染料插入DNA碱基对之间。用70％乙醇固定细胞，培养1小时，将1mL Telford试剂加入到细胞悬浮液中。通过在Lysis II(BectoNDickinsoNImmunocytometry Systems，SaNJose，CA)下操作发荧光的活化的FACSTARPLUS(R)流式细胞仪来分析细胞的DNA成分。
实施例4：在大鼠颈动脉中的气球样损伤和局部递送
用腹膜内注射氯胺酮(麻醉药)(80mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)的混合物麻醉雄性Sprag-Dawley大鼠(240至260克；Charles RiverLaboratories，Wilmington，MA)。通过钝器解剖法穿过中线颈切口暴露左侧总颈动脉、颈外动脉和颈内动脉。将2F Fogarty气囊式导管(EdwardsLifeSciences，Irvine，CA)经由动脉切开术引入左侧颈外动脉，前进到左侧颈总动脉起始点。充气所述气球至足以产生轻微抗性，连续地撤回(withdrawn)三次至产生左侧颈总动脉全部长度的内皮剥蚀。一旦除去气囊式导管，将PE10导管插入左侧颈总动脉。暂时结扎左侧颈总动脉和左侧颈内动脉的中部和远侧部。在2个大气压下，经5分钟，将负载雷帕霉素的纳米颗粒的混悬液(200μL纳米颗粒，包含60μg雷帕霉素当量)输注到损伤的颈动脉(三分钟，在输注70μL的混悬液期间有一分钟，输注期间有一分钟)。在输注纳米颗粒后，除去结扎，恢复血流。在另一组动物中，腹膜内注射相同剂量的负载雷帕霉素的纳米颗粒纳米颗粒以证实雷帕霉素对再狭窄的抑制效果效果应归于局部药物递送。
实施例5：纳米颗粒的动脉定位
为了测定纳米颗粒在动脉壁层(内膜、中膜或外膜)的定位，特别地在输注后时，如描述的在气球样损伤后灌注包含6-香豆素的纳米颗粒的制剂。负载染料的纳米颗粒的物理性质(粒径和ζ电势)类似于负载药物的纳米颗粒。在输注纳米颗粒一小时和24小时后，移除动脉、漂洗并埋入O.C.T.化合物((Tissue-Tek，Sakura，Torrance，CA)，保存在-70℃阴暗处至组织学评价。利用转动切片机(AO820，AmericaNOptical，Del Mar，CA)切片冷冻块，用共焦显微镜观察。利用488-nm过滤器((Fluorescein)、568-nm filter(Rhodamine)和利用装有氩气-氪激光器的Zeiss共焦显微镜LSM410(Carl Zeiss Microimaging，Thornwood，NY)的鉴别干涉对比俘获图像。
为了测定动脉吸收和药物保留，在给药负载雷帕霉素的纳米颗粒后不同的时间点移除两侧的颈动脉，用生理盐水洗涤动脉，并利用吸水纸吸干。称重(湿重)每个动脉，用剪刀细细地切成小块，在2mL蒸馏水中利用组织匀浆器(Biospace Product Inc，Bartlesville，OK)以1,000rpm均质化两分钟，冻干匀浆48小时。通过在37℃，利用ENVIRON(R)定轨振荡器以150rpm振摇包含1mL甲醇的每个样品48小时来提取每个干组织中的药物。为了除去细胞碎片，以14,000rpm离心样品10分钟(EPPENDORF(R)Microcentrifuge，5417R，BrinkmanNInstruments，Westbury，NY)。如本文描述的，通过HPLC分析上层清液确定雷帕霉素含量。利用从没有接受雷帕霉素的动物中收集的动脉制备标准曲线图，以确定药物回收率。
实施例6：再狭窄的抑制
三周后，用腹膜内注射氯胺酮(80mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kg)的混合物麻醉大鼠。在清洁血管内系统后，通过经5分钟灌注10％甲醛溶液将压力固定在120mm Hg。收回左颈动脉，浸入相同的固定剂中直至切片。从近端至末端将动脉切成每3mm的片。将这些动脉片埋入用于切片的石蜡中，用苏木精-伊红染色双份载玻片。用计算机化的数字图像分析系统测定中层和内膜区域及内腔区域。
对于免疫组织化学分析，用I-VIEW抑制剂培养样品以阻止内源性过氧化物酶活动过氧化物酶活动。在PBS中洗涤后，在室温下用一级抗体培养切片一小时。使用下述一级抗体：能识别α-SM肌动蛋白的单克隆小鼠1A4抗体(neat，DAKO，Carpenter，CA)和用于鉴定PCNA的单克隆小鼠PClO抗体(1:25稀释，DAKO，Carpenter，CA)和用于内皮染色的CD31抗体(1:100稀释，DAKO，Carpenter，CA)、抗切割半胱天冬酶-3(1:200稀释，CellSignaling Technology，Beverly，MA)凋亡细胞，所述凋亡细胞为通过利用TUNEL系统试剂盒(Promega，Madison，WI)的末端转脱氧核苷酰转移酶(TdT)介导的dUTP切口末端标记(TUNEL)法获得。接着，用I-VIEW生物素和I-VIEW抗生蛋白链菌素-辣根过氧化酶培养切片。利用DAB色原体显影切片，利用利用I-VIEW铜复染色。以放大400X计算PCNA和α-SM肌动蛋白染色的阳性细胞数。如用CD31阳性细胞细胞覆盖的内腔表面和总内腔表面之间的比例计算内皮化(Endothelization)。
所有数据都以平均值±SEM表示。未处理组和处理组之间差异的统计学显著性通过单向ANOVA确定。如果p<0.005，则认为差异是显著性的。

Claims (3)

1.一种缓释纳米颗粒组合物，其包括N-烷基丙烯酰胺、乙烯单体和聚乙二醇共轭物的共聚物。
2.权利要求1的缓释纳米颗粒组合物，其进一步包括治疗剂。
3.一种预防或治疗疾病或病症的方法，其包括向患有疾病或病症或有患有疾病或病症危险的患者局部给药有效量的权利要求2的组合物，从而预防或治疗所述患者中的疾病或病症。
CNA2005800483203A 2004-12-21 2005-12-12 缓释纳米颗粒组合物及其使用方法 Pending CN101442991A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/018,456 2004-12-21
US11/018,456 US7727554B2 (en) 2004-12-21 2004-12-21 Sustained-release nanoparticle compositions and methods for using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101442991A true CN101442991A (zh) 2009-05-27

Family

ID=36596119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800483203A Pending CN101442991A (zh) 2004-12-21 2005-12-12 缓释纳米颗粒组合物及其使用方法

Country Status (6)

Country Link
US (6) US7727554B2 (zh)
EP (1) EP1827389A4 (zh)
CN (1) CN101442991A (zh)
AU (1) AU2005319495B2 (zh)
CA (1) CA2594215C (zh)
WO (1) WO2006068877A2 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103648521A (zh) * 2011-04-28 2014-03-19 阿布拉科斯生物科学有限公司 纳米颗粒组合物的血管内递送及其应用
CN104257633A (zh) * 2014-08-27 2015-01-07 珠海健帆生物科技股份有限公司 抗凝缓释胶囊及其制备方法、功能性抗凝缓释器

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8312836B2 (en) * 2004-09-28 2012-11-20 Atrium Medical Corporation Method and apparatus for application of a fresh coating on a medical device
US20060067976A1 (en) 2004-09-28 2006-03-30 Atrium Medical Corporation Formation of barrier layer
US8367099B2 (en) 2004-09-28 2013-02-05 Atrium Medical Corporation Perforated fatty acid films
US9000040B2 (en) 2004-09-28 2015-04-07 Atrium Medical Corporation Cross-linked fatty acid-based biomaterials
US8263102B2 (en) 2004-09-28 2012-09-11 Atrium Medical Corporation Drug delivery coating for use with a stent
US9801982B2 (en) 2004-09-28 2017-10-31 Atrium Medical Corporation Implantable barrier device
US9012506B2 (en) 2004-09-28 2015-04-21 Atrium Medical Corporation Cross-linked fatty acid-based biomaterials
US8124127B2 (en) 2005-10-15 2012-02-28 Atrium Medical Corporation Hydrophobic cross-linked gels for bioabsorbable drug carrier coatings
US7727554B2 (en) 2004-12-21 2010-06-01 Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center Sustained-release nanoparticle compositions and methods for using the same
US9278161B2 (en) * 2005-09-28 2016-03-08 Atrium Medical Corporation Tissue-separating fatty acid adhesion barrier
US9427423B2 (en) * 2009-03-10 2016-08-30 Atrium Medical Corporation Fatty-acid based particles
BRPI0600285C1 (pt) * 2006-01-13 2011-10-11 Brz Biotecnologia Ltda compostos farmacêuticos contendo nanopartìculas úteis para tratamento de lesões reestenóticas
US9492596B2 (en) 2006-11-06 2016-11-15 Atrium Medical Corporation Barrier layer with underlying medical device and one or more reinforcing support structures
EP2083875B1 (en) 2006-11-06 2013-03-27 Atrium Medical Corporation Coated surgical mesh
RU2473331C2 (ru) * 2007-04-13 2013-01-27 Юниверсити Оф Норс Техас Хэлс Саенс Сентер Эт Форт Ворс Состав активированных наночастиц plga, загруженных активным средством, для целенаправленной нанотерапии рака
US20100290982A1 (en) * 2007-04-13 2010-11-18 University Of North Texas Health Science Center At Fort Worth Solid in oil/water emulsion-diffusion-evaporation formulation for preparing curcumin-loaded plga nanoparticles
WO2009002386A2 (en) * 2007-05-24 2008-12-31 The Regents Of The University Of Californina Size-dependent biological effect of nanoparticles
WO2009020865A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Surface-modified nanoparticles for intracellular delivery of therapeutic agents and composition for making same
US20110038910A1 (en) 2009-08-11 2011-02-17 Atrium Medical Corporation Anti-infective antimicrobial-containing biomaterials
WO2012009707A2 (en) 2010-07-16 2012-01-19 Atrium Medical Corporation Composition and methods for altering the rate of hydrolysis of cured oil-based materials
AU2011337139B2 (en) 2010-08-30 2015-11-12 President And Fellows Of Harvard College Shear controlled release for stenotic lesions and thrombolytic therapies
EP2696887A4 (en) * 2011-04-15 2015-01-07 Univ California POLYMER REDOX REACTION NANOCAPSULES FOR PROTEIN RELEASE
US9867880B2 (en) 2012-06-13 2018-01-16 Atrium Medical Corporation Cured oil-hydrogel biomaterial compositions for controlled drug delivery
US20140100182A1 (en) 2012-10-05 2014-04-10 The Cleveland Clinic Foundation Nanogel-Mediated Drug Delivery
US11439690B2 (en) 2013-02-07 2022-09-13 The Cleveland Clinic Foundation Methods of treating spinal cord injury
JP2017502950A (ja) 2013-12-11 2017-01-26 ユニバーシティー オブ マサチューセッツＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ サルモネラＴ３ＳＳエフェクタータンパク質（ＳｉｐＡ）を使用した疾患を治療するための組成物および方法
US10517934B2 (en) 2014-08-25 2019-12-31 ProTransit Nanotherapy, LLC Compositions and methods for the treatment of photoaging and other conditions
US10016488B2 (en) 2015-04-13 2018-07-10 The Cleveland Clinic Foundation Nitric oxide synthase nanoparticles for treatment of vascular disease
CN110201242A (zh) 2016-02-08 2019-09-06 祥丰医疗私人有限公司 一种医疗装置
US10792477B2 (en) 2016-02-08 2020-10-06 Orbusneich Medical Pte. Ltd. Drug eluting balloon
CN108771656A (zh) * 2018-07-10 2018-11-09 白晓春 雷帕霉素缓释剂型及制备方法、雷帕霉素缓释注射剂及应用
US11471412B1 (en) 2019-05-10 2022-10-18 University Of South Florida Nanoparticles and nanogel drug compositions for treatment of age-related macular degeneration
CN111973813A (zh) * 2020-09-07 2020-11-24 乐普（北京）医疗器械股份有限公司 一种用于多孔球囊血管成形术的雷帕霉素纳米粒
CA3194232A1 (en) 2020-09-29 2022-04-07 Daniel Beard Stroke treatment
WO2022192361A2 (en) * 2021-03-09 2022-09-15 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Microparticle compositions and methods use thereof
CN115517991B (zh) * 2022-01-25 2024-03-22 西南医科大学 一种三剂型安全无毒染发剂及其制备方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997045105A1 (en) 1996-05-24 1997-12-04 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating or preventing diseases of body passageways
US20030199425A1 (en) 1997-06-27 2003-10-23 Desai Neil P. Compositions and methods for treatment of hyperplasia
IN191203B (zh) 1999-02-17 2003-10-04 Amarnath Prof Maitra
WO2001087227A2 (en) * 2000-05-17 2001-11-22 Labopharm, Inc. Drug containing polymeric micelles
US6579519B2 (en) * 2000-09-18 2003-06-17 Registrar, University Of Delhi Sustained release and long residing ophthalmic formulation and the process of preparing the same
US6939564B2 (en) * 2001-06-08 2005-09-06 Labopharm, Inc. Water-soluble stabilized self-assembled polyelectrolytes
US20030054042A1 (en) * 2001-09-14 2003-03-20 Elaine Liversidge Stabilization of chemical compounds using nanoparticulate formulations
US7727554B2 (en) * 2004-12-21 2010-06-01 Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center Sustained-release nanoparticle compositions and methods for using the same

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103648521A (zh) * 2011-04-28 2014-03-19 阿布拉科斯生物科学有限公司 纳米颗粒组合物的血管内递送及其应用
US9061014B2 (en) 2011-04-28 2015-06-23 Abraxis Bioscience, Llc Intravascular delivery of nanoparticle compositions and uses thereof
US9884013B2 (en) 2011-04-28 2018-02-06 Abraxis Bioscience, Llc Intravascular delivery of nanoparticle compositions and uses thereof
US10258565B2 (en) 2011-04-28 2019-04-16 Abraxis Bioscience, Llc Intravascular delivery of nanoparticle compositions and uses thereof
CN104257633A (zh) * 2014-08-27 2015-01-07 珠海健帆生物科技股份有限公司 抗凝缓释胶囊及其制备方法、功能性抗凝缓释器
CN104257633B (zh) * 2014-08-27 2017-10-03 珠海健帆生物科技股份有限公司 抗凝缓释胶囊及其制备方法、功能性抗凝缓释器

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006068877A2 (en) 2006-06-29
CA2594215C (en) 2011-11-08
US9138416B2 (en) 2015-09-22
US20140050798A1 (en) 2014-02-20
EP1827389A2 (en) 2007-09-05
US20060134209A1 (en) 2006-06-22
WO2006068877A3 (en) 2009-03-19
CA2594215A1 (en) 2006-06-29
US20100203153A1 (en) 2010-08-12
EP1827389A4 (en) 2012-09-12
AU2005319495B2 (en) 2010-06-03
US20160030402A1 (en) 2016-02-04
US20130089616A1 (en) 2013-04-11
AU2005319495A1 (en) 2006-06-29
US7727554B2 (en) 2010-06-01
US20170000742A1 (en) 2017-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101442991A (zh) 缓释纳米颗粒组合物及其使用方法
Huang et al. Tumortropic monocyte-mediated delivery of echogenic polymer bubbles and therapeutic vesicles for chemotherapy of tumor hypoxia
CN100525830C (zh) 采用环糊精、脂质体和生物降解性聚合物和/或其混合物及其制品制备肽血管紧张素-(1-7)和类似物、激动剂和拮抗剂制剂的方法
Athar et al. Therapeutic nanoparticles: State-of-the-art of nanomedicine
CN104136012B (zh) 制备装载有活性物质的纳米颗粒的方法
Tang et al. Immunosuppressive activity of size-controlled PEG-PLGA nanoparticles containing encapsulated cyclosporine A
CA2371912A1 (en) Protein stabilized pharmacologically active agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
Zhang et al. Autocatalytic Delivery of Brain Tumor–Targeting, Size‐Shrinkable Nanoparticles for Treatment of Breast Cancer Brain Metastases
CN106102714B (zh) 空化诱导的聚合物纳米颗粒
JP2000511161A (ja) 身体通路の疾患を処置または予防するための組成物および方法
Grazia Cascone et al. Poly (vinyl alcohol) hydrogels as hydrophilic matrices for the release of lipophilic drugs loaded in PLGA nanoparticles
Charelli et al. Polymeric nanoparticles as therapeutic agents against coronavirus disease
Yin et al. Supramolecular hydrogel based on high-solid-content mPECT nanoparticles and cyclodextrins for local and sustained drug delivery
MXPA03011593A (es) Composiciones farmaceuticas y de diagnostico que contienen nanoparticulas utilies para tratar tejidos y celulas blanco.
Yemisci et al. Treatment of malignant gliomas with mitoxantrone-loaded poly (lactide-co-glycolide) microspheres
US20030008015A1 (en) Polymer controlled delivery of a therapeutic agent
Ahad et al. A review on enzyme activated drug delivery system
WO2017084522A1 (zh) 一种新型抗癌药物纳米制剂及其制备方法
US20120121510A1 (en) Localized therapy following breast cancer surgery
Song et al. Imidazolium-based ionic liquid-assisted preparation of nano-spheres loaded with bio-active peptides to decrease inflammation in an osteoarthritis model: ex vivo evaluations
Rudra et al. Poly [D, L-lactide-co-glycolide] microspheres as a delivery system of protein ovalbumin used as a model protein drug
Ateeq et al. Role of inorganic nanocomposite materials in drug delivery systems
Tazhbayev et al. Nanoparticles on the basis of polylactic acid and polylactic-co-glycolic acids loaded with drugs
Rodriguez-Córdova et al. Preparation of PLGA Nanoparticles Loaded with Oxytetracycline Hydrochloride for its Possible Application Against Brucellosis Infection
Chouhan Design and Development of Lipid Polymer Hybrid Nanoparticles for Combinatorial Drug Delivery

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20090527